Name: murine model of intestinal ischemia-reperfusion injury
Uploaded: 2016-05-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de Russische Science Foundation, verlenen geen. 14-50-00060 en LLC RUSCHEMBIO. Dit werk werd ook gesteund door de Crohn en Colitis Foundation of America verlenen 294.083 (naar AVT), en door het NIH-subsidie ​​RO1 DK47700 (CJ).

Animal studies werden uitgevoerd in overeenstemming met de National Institute of Health richtlijnen en werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Trudeau Institute. 8-12 weken oude C57BL / 6 muizen werden gebruikt voor de studie. 1. Voorbereiding voor Heelkunde <ol><li> Voor te bereiden en steriliseren chirurgische instrumenten. </li><li> Bereid-isofluraan gebaseerde anesthesie-systeem met neuskegel, en verwarmde pad. Zorg ervoor dat verwarmd pad is niet ...

De ontwikkeling van muizen met IR intestinale schade sterk verbeterd begrip van de mechanismen van weefselschade en geholpen bij de ontwikkeling van mogelijke therapeutische strategieën om weefselschade 7,9,11,34 minimaliseren. De kritische stappen van dit protocol zijn de juiste positionering van de microvasculaire clips, de juiste timing van de ischemie en de juiste histologische evaluatie van IR letsel. De duur van ischemie is essentieel voor daaropvolgende beschadiging van he...

De darm is zeer gevoelig voor onderbreking van de bloedtoevoer die ischemie en epitheliale schade veroorzaakt. Reperfusie na ischemie biedt opnieuw oxygenatie van het weefsel, en kan verder bevorderen pathologie. Daarom is intestinale ischemie en reperfusieletsel geassocieerd met een breed scala aan aandoeningen, zoals necrotiserende enterocolitis, allograft afstoting bij transplantatie dunne darm, complicaties van abdominale aorta aneurysma chirurgie, cardiopulmonale bypass, en ontstekingsdarmziekte 1,2. Intestinale IR blessure, in het bijzonder acute mesenteriale ischemie, is een levensbedreigende aandoening resulteert in morbiditeit en mortaliteit 3. Hoewel slecht begrepen, is intestinale ischemie-reperfusie (IR) schade waarschijnlijk samenhangen met veranderingen in de darmflora en de productie van reactieve zuurstofdeeltjes en inflammatoire cytokines en chemokines 1,4-6. Dit leidt tot activatie van zowel innate en adaptieve immuunsysteem mechanismen die ontstekingen en weefselschade 1,7,8 te promoten. Diermodellen zijn cruciaal voor het begrijpen van de mechanismen van IR schade mocht eenvoudig gain en loss-of-function genetische experimenten mogelijk. Verschillende diermodellen van IR ontwikkeld die volledige vasculaire occlusie, ischemie lage stroom omvatten en gesegmenteerde vasculaire occlusie (samengevat in een recente algemene beoordeling 9). Intestinale ischemie veroorzaakt door volledige vasculaire occlusie van mesenterica superior (SMA) is een eenvoudige en veel gebruikte model van IR in grote dieren en knaagdieren 9-11. Echter, verschillende gebieden van de darm verschillende gevoeligheid voor schade. Daarnaast is de brede waaier van anesthetica, analgetica, slagader occlusie technieken, evenals inconsistentie in de duur van ischemische schade en herstel leiden tot een variabele mate van letsel verwarren ons begrip van de biologie van IR over meerdere studies. Tabel 1 toont deze inconsistenties in muizen IR studies. Het grootste nadeel van het gebruik van kortere ischemische tijd (30-45 min) richt het raam van herstel waarop waarneembare verschillen tussen patiënten en controles worden waargenomen. Milde verwonding aan het epitheel kan worden opgelost uur na reperfusie derhalve gespecialiseerd pathologische metrics nodig zijn om verschillen in epitheliale restitutie vinden. Daarentegen sterke beschadiging, zoals gezien door 100 min van ischemisch letsel kan resulteren in een totale denudement van het epitheel, mocht teruggave niet meer mogelijk, waardoor het sterftecijfer en hersteltijd. Daarom hier beschrijven we de gedetailleerde procedure van intestinale IR bij muizen, wat resulteert in reproduceerbare letsel zonder sterfte aan de standaardisatie van deze techniek in ons gebied aan te moedigen. Dit model van intestinale schade IR kan worden gebruikt om de cellulaire en moleculaire mechanismen van schade en regeneratie te bestuderen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1160">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Heated Pad</td>
			<td style="width:191px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:249px;">E12107-819</td>
			<td style="width:379px;">Alternative: Braintree Scientific heated pad</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table top research anesthesia Machine</td>
			<td>Vasco</td>
			<td>UCAP 0001-0000171</td>
			<td>Alternative: Parkland Scientific, V3000PS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nose Cone</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>ARES500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scavenger canister and replacement cartridge</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>80000, 80120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Induction Chamber</td>
			<td>Surgivet</td>
			<td>V711802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>NDC 66794-013-10</td>
			<td>Controlled substance, contact IACUC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Animal clipper&#160;</td>
			<td>Oster&#160;</td>
			<td>Oster Golden A5 078005-050-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ophthalmic ointment</td>
			<td>Webster</td>
			<td>8804604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenorphine</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>562766</td>
			<td>Controlled substance,contact IACUC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketaset (Ketamine HCl)</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>NADA 45-290</td>
			<td>Controlled substance, contact IACUC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cotton tips</td>
			<td>Puritan medical products</td>
			<td>806-WC</td>
			<td>Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td>Purdue Products</td>
			<td>67618-150-17</td>
			<td>10% Povidone-Iodine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile saline solution</td>
			<td>Aspen</td>
			<td>46066-807-60</td>
			<td>Adjust to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile cotton gauze pad</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22-415-468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-adherent pad prepack</td>
			<td>Telfa</td>
			<td>1238</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IR rodent thermometer</td>
			<td>BIOSEB</td>
			<td>BIO-IRB153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro vascular clips, 70g</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS5424, RS5435</td>
			<td>Alternative: WPI 14121, for SMA occlusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro vascular clips, 40g</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS6472</td>
			<td>Alternative:WPI 14120, for collateral vessels occlusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clip applying forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14189</td>
			<td>Alternative: Roboz #RS-5410 or&#160; #RS-5440</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gill&#39;s 3 hematoxylin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>14-390-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical staples, Reflex 9 mm</td>
			<td>Cell Point Scientific</td>
			<td>201-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Autoclip applier</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>427630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Byopsy foam pad</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M476-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>15182701A</td>
			<td>Histosette II combination lid and base</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>245-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical iris scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501263-G SC</td>
			<td>Alternative: Roboz RS6816</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501219-G</td>
			<td>Alternative: Roboz RS6814</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dressing forceps</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS-5228, RS-8122</td>
			<td>Alternative: World Precision Instruments 1519-G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heparin, endotoxin free, 300 USP units/vial, 50mg</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>2106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:343px;">Reflex wound clip removing forceps</td>
			<td>Roboz Surgical&#160;</td>
			<td>RS-9263</td>
			<td>Alternative: World Precision Instruments: 500347</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mice C57BL/6J mice&#160;</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>Stock No 0664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Telfa non-adherent dressings, 3x4, sterile</td>
			<td>Coviden</td>
			<td>1050</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model of intestinal ischemia-reperfusion injury

Darmischemie is een levensbedreigende aandoening geassocieerd met een breed scala aan klinische aandoeningen waaronder atherosclerose, trombose, hypotensie, necrotiserende enterocolitis, darm transplantatie, trauma en chronische ontsteking. Intestinale ischemie-reperfusie (IR) letsel het gevolg is van acute mesenterische ischemie, veroorzaakt door onvoldoende bloedstroom door de mesenterische vaten, waardoor schade aan de ingewanden. Reperfusie na ischemie kan verder verergeren beschadiging van de darm. De mechanismen van IR letsel zijn complex en slecht begrepen. Daarom experimentele kleine diermodellen zijn cruciaal voor het begrip van de pathofysiologie van IR letsel en de ontwikkeling van nieuwe therapieën. Hier beschrijven we een muismodel van acute intestinale IR verwonding die reproduceerbaar letsel van de dunne darm verschaft zonder sterfte. Dit wordt bereikt door het induceren van ischemie in het gebied van het distale ileum door tijdelijk occludinG de perifere en terminale collaterale takken van de mesenterica superior gedurende 60 min met behulp van microvasculaire clips. Reperfusie gedurende 1 uur of 2 uur na het ongeval leidt tot reproduceerbare letsel van de darm onderzocht door histologische analyse. De juiste positie van de microvasculaire clips is van cruciaal belang voor de procedure. Dus de videoclip verschaft een nauwkeurig visueel stap-voor-stap beschrijving van deze techniek. Dit model van intestinale schade IR kan worden gebruikt om de cellulaire en moleculaire mechanismen van schade en regeneratie te bestuderen.

We geoptimaliseerde het experimentele protocol van de IR-operatie om reproduceerbare IR geïnduceerd letsel van het ileum in muizen te verkrijgen. Representatieve resultaten worden getoond in deze sectie. Figuur 1 toont voorbeelden van microvasculaire klemmen positie ischemie van het ileum induceren. Zwarte pijlen geven positie van de belangrijkste clips het afsluiten van de eerste orde takken van mesenterica ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury at JoVE.com

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

Hier beschrijven we de gedetailleerde procedure van intestinale ischemie-reperfusie bij muizen waardoor reproduceerbaar letsel zonder sterfte aan de standaardisatie van deze techniek in het veld bevorderen. Dit model van intestinale ischemie-reperfusieschade kan worden gebruikt om de cellulaire en moleculaire mechanismen van schade en regeneratie te bestuderen.

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normotherme hartstilstand en cardiopulmonale reanimatie: een muismodel van ischemie-reperfusie schade

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transversale rectusabdominis myocutane Flap: een rat model van myocutane ischemiereperfusieletsel

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemie-reperfusie model van Acute Kidney Injury en Post Letsel Fibrosis in Muizen

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Een muismodel van retinale ischemie-reperfusie letsel door misbruik van intra-oculaire druk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluatie van coronaire stroom reserve na myocardiale ischemie reperfusie bij ratten

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Een pre-klinische rat model voor de studie van ischemie-reperfusie letsel in reconstructieve microchirurgie

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Vertraagde intramyocardial levering van stamcellen na Ischemie Reperfusie Letsel in een Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orgaan Ischemia-Reperfusie Letsel door het simuleren van hemodynamische veranderingen in rat levertransplantatie model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

Een rattenlongtransplantatiemodel van warme ischemie / reperfusieletsel: optimalisaties om de resultaten te verbeteren

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...