Name: measurement of calcium fluctuations within the sarcoplasmic reticulum of cultured smooth muscle cells using fret-based confocal imaging
Uploaded: 2016-06-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging at JoVE.com

Bu çalışma [CVB &amp; ME MOP-1112666] Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri fon tarafından desteklenmiştir.

Etik deyimi: Bütün deneyler ve prosedürler British Columbia, Vancouver, Kanada Üniversitesi Laboratuvar Biyogüvenlik kurallarına anlaşma yapılmıştır. FRET tabanlı Konfokal Mikroskopi için 35 mm Cam-bottom Kültür Yemekleri hazırlanması 1. <ol><li> Aşağıdaki yordam 36-48 saat önce deneyler kullanarak tabak hazırlayın. </li><li> C depolama ° -20 seçilen jelatinimsi protein karışımı ve% 0.25 tripsin-EDTA Al ve kullanıma kadar mobil buz banyosu içinde saklayın. NOT: Kaplama pr...

<ol>
	<li>Hennings, H., Michael, D., Cheng, C., Steinert, P., Holbrook, K., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+growth+and+differentiation+of+mouse+epidermal+cells+in+culture.">Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture.</a> Cell. 19 (1), 245-254 (1980).</li><li>Whitfield, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+roles+of+calcium+and+cyclic+AMP+in+cell+proliferation.">The roles of calcium and cyclic AMP in cell proliferation.</a> Ann N Y Acad Sci. 339 (1), 216-240 (1980).</li><li>Nicotera, P., Orrenius, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+calcium+in+apoptosis.">The role of calcium in apoptosis.</a> Cell Calcium. 23 (2-3), 173-180 (1998).</li><li>Wei, C., Wang, X., Chen, M., Ouyang, K., Song, L. S., Cheng, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+flickers+steer+cell+migration.">Calcium flickers steer cell migration.</a> Nature. 457 (7231), 901-905 (2009).</li><li>Ashby, M. C., Tepikin, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+calcium+and+the+functions+of+intracellular+organelles.">ER calcium and the functions of intracellular organelles.</a> Sem Cell Dev Biol. 12 (1), 11-17 (2001).</li><li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+calcium+and+Alzheimer's+disease:+in+a+state+of+flux.">ER calcium and Alzheimer's disease: in a state of flux.</a> Sci signal. 3 (114), (2010).</li><li>Rutkowski, D. T., Kaufman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+trip+to+the+ER:+coping+with+stress.">A trip to the ER: coping with stress.</a> Trends Cell Biol. 14 (1), (2004).</li><li>Schroder, M., Kaufman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+stress+and+the+unfolded+protein+response.">ER stress and the unfolded protein response.</a> Mutat Res. 569 (1-2), 29-63 (2005).</li><li>Palmer, A. E., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+calcium+signaling+using+genetically+targetable+fluorescent+indicators.">Measuring calcium signaling using genetically targetable fluorescent indicators.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1057-1065 (2006).</li><li>Poburko, D., Liao, C. H., van Breemen, C., Demaurex, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+regulation+of+sarcoplasmic+reticulum+Ca2++content+in+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitochondrial regulation of sarcoplasmic reticulum Ca2+ content in vascular smooth muscle cells.</a> Circ Res. 104 (1), 104-112 (2009).</li><li>Esfandiarei, M., Fameli, N., Choi, Y. Y., Tehrani, A. Y., Hoskins, J. G., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Waves+of+calcium+depletion+in+the+sarcoplasmic+reticulum+of+vascular+smooth+muscle+cells:+an+inside+view+of+spatiotemporal+Ca2++regulation.">Waves of calcium depletion in the sarcoplasmic reticulum of vascular smooth muscle cells: an inside view of spatiotemporal Ca2+ regulation.</a> PloS one. 8 (2), e55333 (2013).</li><li>Cobbold, P. H., Rink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+and+bioluminescence+measurement+of+cytoplasmic+free+calcium.">Fluorescence and bioluminescence measurement of cytoplasmic free calcium.</a> Biochem J. 248 (2), 313-328 (1987).</li><li>Park, M. K., Ashby, M. C., Erdemli, G., Petersen, O. H., Tepikin, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinuclear,+perigranular+and+sub-plasmalemmal+mitochondria+have+distinct+functions+in+the+regulation+of+cellular+calcium+transport.">Perinuclear, perigranular and sub-plasmalemmal mitochondria have distinct functions in the regulation of cellular calcium transport.</a> The EMBO journal. 20 (8), 1863-1874 (2001).</li><li>Lovett, J. L., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+stores+in+Toxoplasma+gondii+govern+invasion+of+host+cells.">Intracellular calcium stores in Toxoplasma gondii govern invasion of host cells.</a> J Cell Sci. 116 (14), 3009-3016 (2003).</li><li>Kleinman, H. K., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+basement+membrane+matrix+with+biological+activity.">Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.</a> Semin Cancer Biol. 15 (5), 378-386 (2005).</li><li>Palmer, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++indicators+based+on+computationally+redesigned+calmodulin-peptide+pairs.">Ca2+ indicators based on computationally redesigned calmodulin-peptide pairs.</a> Chem Biol. 13 (5), 521-530 (2006).</li></ol>

Bu protokol SR lümeninde Ca 2 + kavkıdaki D1SR adenovirüs ile VSMC&#39;Ierin aktarıldığı açıklanmaktadır. Bu yöntem, doğrudan bu organel olan Ca2 + ölçümü hem de değişik kalsiyum hareket eden maddelerin uygulanmasının bir sonucu olarak SR üzerinden içindeki hareketinin / sağlar. Bu yöntem SR ve sitoplazmik Ca 2 + düzeyleri değişiklikleri genel hücresel sağlığını etkiler ve nasıl bu değişiklikler birbiriyle ilişkili nasıl kapsamlı bir anlayış doğr...

Ca 2 + vücuttaki her hücre içinde bolca bulunan çok önemli bir iyon olduğunu. Bu büyüme, çoğalma, göç ve apoptosis 1-4 dahil olmak üzere birçok farklı hücresel fonksiyonları, önemli rolleri vardır. İyi Ca 2 + hem doğrudan hem de dolaylı eylemlerle bu süreçleri etkileyebilir olduğunun tespit edilmesi ve bu nedenle, bu iyonun normal hücre içi konsantrasyonları değişiklikleri kolayca etkilenen hücreler için olumsuz sonuçlara neden olabilir. SR hücresinin 5 içinde en büyük hücre içi Ca 2 + mağaza olarak kabul edilir. SR ve sitoplazma hem de Ca 2+ kararlı durum düzeyleri normal içine ve bu organel Ca 2+ -transporting kanalları dışında sürekli bir akış yoluyla korunur. Nedeniyle yaralanma ya da hastalık herhangi bir biçimde hücrelere dayatılan stresli koşullar genellikle onun üzerinde uzun süreli etkilere sahip gitmek SR Ca önemli değişiklikler 2+ ile ilişkiliHücrenin alth. Olguların çoğunda şiddetli, stresli bir hücrenin yetersizlik kurtarmak için ve kararlı durum SR Ca korumak 2+ seviyeleri bile apoptozis 6-8 ölümle sonuçlanacak olabilir. Hücresel Ca 2 + dinamikleri güncel araştırma az sayıda çalışma testi Ca 2+ mağaza içeriği doğrudan 9-11 organel gerçeği ile sınırlıdır. En yaygın uygulama yerine SR Ca 2 + içerik 12-14 değişikliklerin dolaylı ölçümleri gibi sitoplazmik Ca 2 + düzeyleri ölçümü içerir. Bu deneylerde, Ca 2 + yaygın organel en azalmasına neden farmakolojik ajanların (örn thapsigargin) kullanılarak SR serbest bırakılmasını indüklenir. Sonuçlar daha sonra sitoplazmik Ca 2 + konsantrasyonları dalgalanmalara göre SR Ca 2+ değişiklikler ile ilgili çizilir. dolambaçlı ma böyle sonuçlara varmak için araştırmacılar için kalan yeteneğine rağmennner, SR Ca 2+ ölçüm bu yöntem toplanan verilerin yorumlanması ile ilgili birçok sınırlamalar bu bilgileri, toplamak için dolaylı yoldan açıkça. Bu açık kısıtlama atlamak için, SR lümen ağ içinde doğrudan bulundu Ca 2+ miktarını ölçmek için gereklidir. Doğrudan intraluminal SR Ca 2 + rekor seviyelere edememek nihai sonucu açısından hayati hücre kültürü araçları ve kullanılan Ca 2 + göstergesidir. Mevcut yazıda referans veriler için, kullanılan VSMC donmuş hücre hattından gelen dikkat etmek önemlidir. Hücreler,% 5 CO2 kaynağı ile sabit bir 37 ° C &#39;de kuluçkaya yatırılır Dulbecco Modifiye Eagle ortamı (DMEM) + belirtilen deneyler için geçitlerin 22-26 fazla% 10 yeni doğmuş buzağı serumu (NCS), kültürlenmiştir. Mevcut yöntem kullanılarak, örneğin, hücreler, çok başarılı bir şekilde ekstrasel- simüle eden bir protein karışımı ile yetiştirilendokuda 15, birçok farklı türde çevre. SR Ca ven boyunca başarısı için önemli 2+ araştırma kullanılan protein karışımı türüdür; Bu durumda, düşük büyüme faktörü çeşitli normal Ca2 + sinyali etkileyen hareketleri sürekli olarak test edilen hücreler içinde meydana gelen bu aracın bileşenlerini önlemek için gerekliydi. Test hücrelerinin başarılı büyümenin ardından, Ca 2 + göstergesi de etkin bir şekilde bu kültür hücreleri devreye sokulmalıdır. Bu SR-yerleşik Ca 2+ göstergesi D1SR taşıyan adenoviral bir vektör ile mümkün hale gelmiştir. Yüksek bir transfeksiyon verimliliği elde etmek için, hücreler önce, görüntüleme için en az 36-48 saat boyunca viral vektörler ile inkübe edilmesi gerekir. Bu hazırlık ca yüksek doğruluk ve tekrarlanabilirlik SR lümeninde 2+ geçişlerini ölçmek için güvenilir bir araç sağlar. Bu protokolde kullanılan D1SR gösterge D1ER Ca değiştirilmiş çeşididir 2+ iBaşlangıçta California Üniversitesi&#39;nden Dr. Roger Y. Tsien laboratuarında, San Diego, ABD 9,16 tarafından oluşturulan ndicator. Orijinal D1ER önceki Ca 2 + göstergelere 9,16 oranla çok daha geniş aralık (0,5-160 uM) üzerinden Ca 2+ hassasiyetleri göstermek cameleons denilen genetik olarak kodlanmış Ca 2 + göstergeleri ikinci nesil aittir. Yeni varyant D1SR Dr. Wayne Chen (Alberta, Kanada Üniversitesi&#39;nden) bir tür hediye, ancak, bir mutant calsequestrin dizisi (yerine orijinal D1ER gibi bir kalretikülinden dizisi) taşır. Mutant calsequestrin bir 11 lümen SR içinde Ca 2 + bağlayıcı endojen calsequestrin rekabet sorununu ortadan kaldıran Ca 2+ bağlanma azalttı. D1SR göstergesi kesik geliştirilmiş siyan floresan proteini (OBP) ve sarı floresan protein (YFP) modifiye kalmodulin (CaM) ve M13 içeren bir bağlayıcı protein tarafından bağlanan (t taşırCaM) dizilerine bağlanan miyozin hafif zincir kinaz o 26-kalıntı peptit. CaM-M13 sekansı, endojen kalmodulin bağlanmasını M13 önlemek için modifiye edilmiştir. Ayrıca, SR tutulmasını sağlamak için, calsequestrin sekansı CFP 11 5 &#39;ucunda eklenmiştir. Ca2 + bağlandığında, Eksantrik M13 alan FRET sinyal yoğunluğunda bir artış olarak kaydedilir yan CFP ve YFP arasında enerji transferi bir artışa neden şekilsel değişiklik geçer. 2 + SR lümen Ca konsantrasyonu düştüğünde Öte yandan, Eksantrik M13 alan komşu CFP ve YFP ve FRET sinyal yoğunluğunda belirgin bir düşüş arasındaki enerji transferinde bir azalma ile sonuçlanır ters şekilsel değişiklik geçer .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (high glucose, pyruvate)</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>11995-065</td>
			<td>Warm in 37&#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Basement Membrane Matrix Growth Factor Reduced, 5mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356230</td>
			<td>Keep at -20&#176;C until right before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Newborn Calf Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Keep at -20&#176;C until right before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35mm glass-bottomed plates</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>P35G-1.5-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mL 0.2 &#956;M vented blue plug seal cap flask</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA Solution</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>25200056</td>
			<td>Keep at -20&#176;C until right before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D1SR</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Gift</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo 4-AM</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>F-23917</td>
			<td>Keep at -20&#176;C until right before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Black Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>Argos Technologies</td>
			<td>T7100BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP5 confocal microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite 2.6.3 (with FRET SE Wizard application)</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 5.0</td>
			<td>GraphPad Software, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of calcium fluctuations within the sarcoplasmic reticulum of cultured smooth muscle cells using fret-based confocal imaging

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall health. A significant portion of intracellular Ca2+ content is found within the SR stores in VSMCs. As the only intracellular organelle with a close association to the surrounding extracellular space through plasma membrane-SR junctions, the SR can be considered to constitute the first line of response to any irregularity in Ca2+ transients, or stress experienced by the cell. Among its many functions, one of the most important is its role in the transmission of Ca2+-regulated signals throughout the cell to induce further cell-wide reactions downstream. The more common use of cytoplasmic Ca2+ indicators in this regard is overall insufficient for research into the highly dynamic changes to the intraluminal SR Ca2+ store that have yet to be fully characterized. Here, we provide a detailed protocol for the direct and clear measurement of luminal SR Ca2+. This tool is useful for investigation into the nuanced changes in SR Ca2+ that have significant subsequent effects on the normal function and health of the cell. Fluctuations in SR Ca2+ content specifically can provide us with a significant amount of information pertaining to cellular responses to disease or stress conditions experienced by the cell. In this method, a modified version of a SR-targeted Ca2+ indicator, D1SR, is used to detect Ca2+ fluctuations in response to the introduction of agents to cultured rat aortic smooth muscle cells (SMCs). Following incubation with the D1SR indicator, confocal fluorescence microscopy and fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based imaging are used to directly observe changes to intraluminal SR Ca2+ levels under control conditions and with the addition of agonist agents that function to induce intracellular Ca2+ movement.

Bu bölüm, dolaylı sitoplazmik Ca dalgalanmaları gözlemleyerek Ca 2 + deposu konsantrasyonları organele değişiklikleri ölçmek yaygın olarak kullanılan şekilde göre SR lümen Ca2 + konsantrasyonu verilerini yakalamak için tarif edilen yöntem kullanılarak elde edilebilir sonuçlarının örneklerini içerir 2+ . Şekil 1A YFP kanal (514 nm uyarma / 535 nm emisyon)...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging at JoVE.com

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

Currently, most available calcium indicators are used to quantify cytoplasmic calcium transients as indirect measures of calcium released from the sarcoplasmic reticulum in cultured smooth muscle cells. This protocol describes the use of a specific FRET-based indicator that allows direct measurement of calcium signals within the sarcoplasmic reticulum lumen.

Kullanımı Kültür düz kas hücrelerinin sarkoplazmik retikulum içinde Kalsiyum Değişiminin Ölçülmesi FRET tabanlı Konfokal Görüntüleme

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

İnsan Umblikal Arter düz kas hücrelerinin izolasyonu (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Canlı hücreler Mağaza çalışan Kalsiyum Giriş Floresans tabanlı Ölçümü: Kültür Kanseri Hücre gelen İskelet Kası Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Yenidoğan fareler ile Pulmoner Arter Düz Kas Hücre İzolasyonu

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Kalsiyum değerlendirilmesi Bozulmamış İskelet kas liflerinin içinde Sparks

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells

Kültür Hücrelerinin retikulum Subdomain&#39;ler Görselleştirme

The lipids and proteins in eukaryotic cells are continuously exchanged between cell compartments, although these retain their distinctive composition and ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

Farmakoloji Araştırma İzole Doku Banyo-uygulamalarda Düz Kas Fonksiyon Ölçümü

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Intra-Sarkoplazmik Retikulum Ca Optik Haritalama<sup&gt; 2+</sup&gt; Ve Langendorff-perfüze Tavşan Heart Transmembran Potansiyeli

Sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+ handling plays a key role in normal excitation-contraction coupling and aberrant SR Ca2+ handling is known to play a ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Bir kullanılması Endoplazmik retikulum kalsiyum dengesi İzleme<em&gt; Gaussia</em&gt; Lusiferaz SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Murin Koroner Damar düz kas hücrelerinin izolasyonu

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Measuring Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells Using Click Chemistry

Click Kimya kullanarak Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Çoğalmasını Ölçme

The ability of a cell to proliferate is integral to the normal function of most cells, and dysregulation of proliferation is at the heart of many disease ...