Name: a step by step protocol for subretinal surgery in rabbits
Uploaded: 2016-09-13T12:30:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits at JoVE.com

بدعم من منح مؤسسة روديغر في عام 2008 و 2010 (BVS)، BONFOR / Gerok للمنح الدراسية O-137.0015 (BVS)، BONFOR / Gerok للمنح الدراسية O-137.0019 (FT)، الألمانية للبحوث / DFG (BVS) STA 1135 / 2-1، والصينية مجلس المنح الدراسية رقم 2008627116 (ZL) ومنحة غير مقيدة Geuder AG، هايدلبرغ (الشكل 2). أعضاء المختبر H. Skottman، ولقد تم الاعتراف جامعة تامبيري فنلندا بامتنان لتوفير حس المستمدة RPE هو مبين في الشكل 2.

وقد رفعت RB، BVS، ZL، NE وGeuder AG طلب البراءة الأوروبي على مطلق النار. ملحوظة: هو موظف من Geuder AG. تم دفع رسوم النشر لهذا الفيديو المقال الذي Geuder AG.

باستخدام نموذج أرنب، وتقدم طريقة آمنة وقابلة للتكرار للتسليم transvitreal من RPE مثقف على حاملات خلية في الفضاء تحت الشبكية بأداة مطلق النار مصمم خصيصا. يقدم الطريقة الموصوفة تقنية جراحية قصيرة / الأمثل للتعلم سهلة، لأنها تنطوي على التقنيات القياسية في استئصال الزجاجية مع المناورات تحت الشبكية. ومما يسهل النتيجة إلى حد كبير واجهة الشبكية والجسم الزجاجي نظيفة، وحقن داخل العين أن تتجنب الاضطرابات السوائل اكثر من موقع الزرع، الأمر الذي أدى فقاعة انفصال الشبكية (BRD) في IOP منخفضة، ومنع شبكية العين وتلف الصلبة من خلال جفاف، وتحديد المواقع المناسبة للأرنب. نحذر لكن، وكما العديد من المضاعفات داخل المنطوق قد تحدث في أي وقت، مما يعوق نجاح زرع، على سبيل المثال داخل النزيف العين، والتخدير يتلاشى من خلال خطوات حيوية مثل زرع، وانهيار من BRD بسبب التلاعب أداة أو نقص الضغط في العين، صوفاة abbit المناسب لجرعات زائدة من التخدير، وانخفاض ضغط الدم خلال عملية طويلة يسبب تلف في الدماغ ميتة، أو ارتفاع الحرارة. بعد هذه المضاعفات انخفاض مع مرور الوقت حيث يتم معالجتها بسرعة أنها وحلها عن طريق زيادة خبرة الفريق الجراحي. يمكن تخفيض بعض المضاعفات من خلال اتباع بعض بسيطة، لكنها حاسمة الخطوات. زيوت التشحيم وينبغي أن يضاف كل 5-10 دقيقة لمنع القرنية وتلف الصلبة والملتحمة خلال العملية، والحفاظ على وسائل الاعلام داخل العين واضحة، والمجففة / الصلبة اسودت قد يكون سبب تفزر الجرح، وهذا بدوره يؤدي إلى نقص الضغط في العين و / أو تسرب أثناء العملية من sclerotomies. وينبغي أن يضاف الهيبارين لمنع تشكيل الفيلم الفيبرين أن يجعل غرس تحت الشبكية بشكل خاص تحديا واضاف في وقت واحد ادرينالين للحد من نزيف تحت الهيبارين 16. مرات الهيبارين طويلة جدا / ادرينالين التعرض (&gt; 1 ساعة) وينبغي تجنب لمنع إيدي القرنيةأماه من قبل المعاوضة البطانية 33، أزمة ارتفاع ضغط الدم أو الوفيات أثناء العملية. يجب أن يتم تنفيذ إزالة زجاجي دقيق في الصك (دخول) الميناء لتجنب شبكية العين و / أو مفارز المشيمية. وينبغي الإشارة الأدوات داخل العين باتجاه القطب الخلفي لتجنب عدسة اتصال (يسبب تشكيل الساد علاجي المنشأ) أو (دخول موقع) الضرر في شبكية العين. وينبغي أن تستخدم على الجانب الميناء ضخ قنية داخل العين، كما أنه خفف من التيار النفاث في جميع أنحاء منطقة الزرع، وبالتالي منع تمزيق غير المنضبط للretinotomy، وانهيار BRD. BRD الاستقراء في خط الوسط (محور عمودي من العصب البصري) أو بالقرب من الألياف البصرية medullar ينبغي تجنبها لمنع انفصال الشبكية علاجي المنشأ واسعة النطاق. وأخيرا، أخيرا وليس آخرا يجب أن يكون ذلك حافزا BRD في IOP منخفضة، لتجنب حقن BSS تحت الشبكية باستخدام معدلات تدفق المفرطة التي قد تؤدي إلى تلف شبكية العين (على سبيل المثال، التي تمتد). العديد من المتغيرات دراسة مثل كاري خليةالمتغيرات ص، الجنين، الكبار أو الخلايا الجذعية المستمدة مصادر الخلايا RPE، والخيارات للمناعة، وما إلى ذلك، يمكن استكشاف 14،26،27،34. مزيد من التحسين مثل أساليب الثقافة RPE خالية من المصل، توصيف xenoRPE في الفضاء تحت الشبكية، وإزالة طبقة RPE المضيف 14 أو استراتيجيات لمرسى زرع والعمل الحالي في التقدم. حتى الآن تم استخدام الأساليب المذكورة في 5 سلالات الأرانب مختلفة، بما في ذلك نذل شينشيلا، شينشيلا نذل / الهجينة KBL، نيوزيلندا الأبيض / الصليب الأحمر، نيوزيلندا الأبيض (البيضاء) والهولندية مربوط. وتعمل كل من ذكور وإناث الأرانب على، مع الأرانب لا يقل عن 1.5 كجم أو 2 أشهر من العمر (اعتمادا على الأنواع). وكانت معظم العمليات الجراحية على الأرانب المصطبغة (شينشيلا شرعي أو غير شرعي الهجينة شينشيلا) مع الأوزان بين 2،5-3 كغ. يبدو كل من سلالات الأرانب وقد أتيحت لنا الفرصة للعمل مع الحصول على بعض الخصوصيات. ونظرا لexclusإيف توافر الأرانب المصطبغة من سلالة شينشيلا شرعي في ألمانيا في 2009-13، قمنا بجمع أكثر خبرة مع هذه الحيوانات. ومما يؤسف له أنه لم يعد متوفرا، منذ أن تم التوقف عن تربية، ولكن يقارن بشكل جيد للغاية لنيوزيلندا الأبيض / الصليب الأحمر باستثناء الصلبة سمكا أكثر فائدة وأحجام العين أكبر في هذه الأخيرة. شينشيلا الهجينة نذل لها تشكيل الليفين أثناء العملية هامة وتتطلب استخدام الهيبارين / ادرينالين على النحو المبين أعلاه لضمان المناورات تحت الشبكية ناجحة. كما تم تنفيذ هذا البروتوكول في الأرانب البيضاء غير الصباغية (نيوزيلندا الأبيض)، وخلق ولكن BRD بشكل خاص، وغرس تحت الشبكية هو أكثر تحديا نظرا انخفاض تقدير التباين. لم جدوى الأمر الذي أدى إلى انفصال الجسم الزجاجي الخلفي لا يبدو أرنب سلالة تعتمد في أيدينا. ومن المرجح تسليم تحت الشبكية Transvitreal الاستراتيجية الجراحية في المستقبل الاختيار نظرا لأنه هو الأكثر بالاتصالات<html> على الطريق في الوقت الحاضر سريريا للوصول إلى شبكية العين. ونتيجة لذلك تعرض العديد من المجموعات الأخرى مثل هذه التقنيات لRPE مثقف على الناقل يدعم في 11،15،23،35 العمل الحيوان. Aramant وآخرون. 36 يكون أداة، الأمر الذي يضع بدلا من يدفع مغلفة هيدروجيل زرع بهم لينة إلى الموقع المستهدف تحت الشبكية. تصميم تومان وآخرون. ويستخدم ملعقة جوفاء، الذي يطلق الكسب غير المشروع التي تدعمها الناقل من خلال تعويم تشغيله من خلال حقن السوائل 19. تتطلب كلا من الاستراتيجيات السابقة الإدراج تحت الشبكية من الصك، الذي من وجهة نظرنا هو أكثر عرضة للمضاعفات، بالمقارنة مع أداة appositioned epiretinally. وصف مونتيزوما وآخرون. 22 صكا الواضع تحت الشبكية لتوصيل زرع رقاقة تحت الشبكية في الخنازير ولكن لم تنشر أية أعمال أخرى منذ ذلك الحين إلى حد علمنا. لقد كنا قادرين على تمديد تقنية وصفها مع بعض التعديل لخنزير. jove_content &quot;&gt; لدينا شركات الخليوي المفضلة هي 10 ميكرون سميكة البوليستر تيريفثاليت (PET) الأغشية. ومن وجهة النظر الجراحية، وهذه المواد لها المعلمات صلابة ومرونة مواتية، بالإضافة إلى تنوعها واسع خلال تجارب زراعة الخلايا. لقد وجدنا تجارب مماثلة مع tetrafluoroethylene موسع (EPTFE) 37 أو ألياف نانوية الأغشية electrospun من PET، بولي حامض اللبنيك / capronolactic (PLCL) أو بولي - اللبنيك-ك-حمض الجليكوليك (PLGA)، وكذلك ألياف نانوية مركب (PLGA أو PET) وسامسونج PET 26 عندما وتستخدم الأغشية PET مع شركائنا المعدنية أداة مطلق النار، لديهم ميل عرضي لعرض تهمة الكهربائي، الذي يتحدى قذف بهم من مطلق النار (27). ويمكن في أيدينا لا يكون مزروع سامسونج الأغشية بوليميد في الفضاء تحت الشبكية مع البروتوكول المشار إليها أعلاه ( مخطوطة في الإعداد). MARMOR وآخرون. وقد درس منهجي قرار يتخذ العفويrption من السوائل تحت الشبكية في علاجي المنشأ مفارز شبكية محلية 38-41. حتى بعد التلاعب في الفضاء تحت الشبكية وجدت هذه لاستيعابها بعد يوم بعد العملية الجراحية 4 في العمليات الجراحية هادئ. لم يتم تنفيذ الليزر تثبيت الشبكية لتأمين حواف retinotomy. على الرغم من الحدس بالمقارنة مع الجراحة الإنسان، ليس مطلوبا دكاك الهواء / الغاز. ما لم يمكن تحقيقه إزالة دقيقة من زجاجي الطرفية، وخاصة في الربع متفوقة، وهذا قد يؤدي في الواقع في البكاء في شبكية العين العملاقة الناشئة من موقع retinotomy. ينصح فقط من أداء تبادل الهواء السائل مع لاحقا 20٪ SF6 دكاك الغاز لإنقاذ أثناء العملية مفارز شبكية العين علاجي المنشأ أو في حال يحتاج إلى موقف زرع خاص لتأمينها. على الرغم من أن الاجتثاث التي يسببها ميكانيكيا من العصبية في الشبكية يمكن أن يسبب RPE ومستقبلة للضوء الضرر في الأرانب 42،43، مداه يختلف إلى حد كبير (حتى مع BSS العادية) ديمعلقة على عوامل مثل نوع IOP، حقنة المستخدمة، حجم الحقن مع شبكية العين مما يتسبب تمتد، وما إلى ذلك. لقد اختبرنا أيضا في كثير من الأحيان أوصى كا / المغنيسيوم خالية BSS سهلت مفرزة 42-44، ولكن وجدت أنه يتسبب في أثناء العملية عتامة عدسة (وخاصة مع درجة حرارة مرتفعة)، وبشكل ملحوظ يؤخر أو حتى يضعف الشبكية إعادة المرفق 27. لذلك يوصى حجم 30 ميكرولتر من BSS منتظمة مع حقنة 100 ميكرولتر - حقن تحت الشبكية بطء 20؛ يجب أن تكون الحركات حقن إبرة ضئيل جدا الأختام retinotomy من حوله، ومنع الضرر غشاء بروك. يمكن حل بعض الضرر علاجي المنشأ من قبل RPE التئام الجروح، والحفاظ النسبي لوحظ من سمك ONL بعد إعادة المرتكز، تشير إلى أن RPE / مبصرة مجمع يمكن أن يتسامح مع هذا الانخفاض، كما هو موضح أيضا من قبل الآخرين 45. العلاجات المستندة إلى الخلايا أو الأطراف الصناعية الشبكية تتطلب أنيما قبل السريريةل اختبار قبل موافقة الجهات التنظيمية وتبدأ دراسات سلامة الإنسان. تختلف السابق من بلد إلى بلد. نموذج الأرنب هو موضح هنا قد يكون بمثابة منصة فعالة من حيث التكلفة وأقل تحديا لإقامة أو حتى تنفيذ جميع متطلبات الجهات الرقابية. وعلاوة على ذلك، قد تكون في وقت لاحق لتدريب الجراحين في التجارب السريرية متعددة المراكز في نهاية المطاف أو إدخال مزيد من التحسينات التقنية على طول الطريق.

، الضمور البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو السبب الأكثر شيوعا لضعف البصر لدى البالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 50 أو كبار السن في الدول المتقدمة صناعيا، لأنه يسبب فقدان الرؤية المركزية. حوالي 15٪ من هؤلاء المرضى يعانون من شكل &quot;الرطب&quot; من هذا المرض، والتي تنبع من اتساع الأوعية الدموية المشيمية ويعطل وظيفة شبكية العين 1. هذا البديل يمكن علاجها عن طريق العلاج فعال للغاية مع تكرار الحقن داخل الزجاجية المخدرات antiangiogenic 2. ومع ذلك، فإن الغالبية العظمى من المرضى (~ 85٪) يعانون من شكل جاف، التي تتميز الودائع خارج الخلية (على سبيل المثال، براريق شفافة) تحت الظهارة الصبغية الشبكية (RPE). هذه الودائع تسبب ضعف RPE يؤدي إلى ضمور الشبكية في البقعة. ونظرا لعدم وجود أي خيارات علاجية العلاجية، تطورت AMD في حقل الأبحاث بشكل مكثف النامية، حيث يتم اختبار العديد من الطرق العلاجية العلاجية المختلفة. الجراحية استبدال RPE هوواحدة إمكانية المستقبل جذابة لهزيمة هذا المرض الموهن 3. ذاتي زرع RPE تحت الشبكية محل RPE مختلة أو فقدت في البقعة، ولديه القدرة على استعادة وظيفة فسيولوجية لها 4-9. وكان لهذه التقنية الجراحية انفراجة مع وضع بروتوكولات RPE التمايز من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (HESC) والتي يسببها الخلايا الجذعية المحفزة (IPSC)، مما يتيح للعالم مصدر خلية غير محدود من RPE لزرع 10. ومن المسلم زرع RPE الآن كتطبيق جذابة الأول في الإنسان عن الخلايا الجذعية المستمدة العلاجات. تقدم العين الوصول جراحية ممتازة ومتطورة في أدوات الرصد الجسم الحي 11-13. لزرع RPE، طريقة واحدة هي مع التسليم مينيملي يستخدم تعليق الخلية، بدلا من ذلك، للحفاظ على أفضل الخصائص RPE وظيفة زرع، فاي آرتي SUBSTR CIAL الناقلويجري النظر آتش (السقالات) لاستبدال RPE 4،14،15. مطلوبة نماذج حيوانية كبيرة من أجل التحقق من قبل السريرية، بعد معلومات تقنية مفصلة على التعامل مع الحيوانات وتقنية جراحية مفقود حتى الآن 16-23. نحن وغيرنا 11،24 على الرغم من بعض الأدلة التي تثبت العكس 25، يقترح استخدام الركيزة الناقل بعد مرنة جامدة لأنها توفر معالجة أكثر أمانا، ويحافظ على سلامة أحادي الطبقة وظيفة. مع مرور الوقت اختبرناها عدة أدوات مصممة خصيصا والتقنيات المساعدة لزرع الخلايا حاملة زرع RPE تدعمها في الفضاء تحت الشبكية (SRS). نحن استخدمت تسجيلات الفيديو أثناء العملية، في الجسم الحي تنظير العين المسح بالليزر جنبا إلى جنب مع نطاق طيفي التصوير المقطعي التماسك البصري (سلوفاكيا / SD-أكتوبر)، والأنسجة لتقييم مدى نجاح زرع 14،26،27. هنا نقدم توصية الحالية لدينا لزراعة RPE تحت الشبكية في الأرانب،والتي تم اختبارها في 5 سلالات الأرانب مختلفة، 7 المواد الناقل خلية ومصادر خلية 4 RPE في أكثر من 150 إجراءات.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>s30 ultrasonic cleaning unit</td>
			<td>Elmasonic</td>
			<td>100 4631</td>
			<td>2.75L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DE-23&#160; autoclave</td>
			<td>Systec</td>
			<td>C 2209</td>
			<td>23L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>300013 
			300995&#160; 
			301285 
			300294 
			300330&#160;</td>
			<td>1ml x3 
			2ml x3 
			5ml x1 
			10ml x1 
			20ml x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196 
			305136</td>
			<td>18G x 1&#160; 
			27G x5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>2975#20</td>
			<td>blade#20 x3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>HARTMANN 
			LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>277 502 
			25 440</td>
			<td>60x40 cm x2 
			12x17 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular sticks</td>
			<td>LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>16 516</td>
			<td>66x5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Twister gauze sponges</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>481 274</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closure strips</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>540 686</td>
			<td>x4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi Visu CS Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/a</td>
			<td>incl. fundus imaging system BIOM II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chandelier endoillumination</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03503 + 
			G-S03504</td>
			<td>25G incl. trocar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-26033</td>
			<td>Xenotron III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60000</td>
			<td>MegaTRON S4 S4/ HPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrector</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-46301</td>
			<td>MACH2 vitreous cutter 23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venturi cassette&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sideport-infusion cannula</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom&#160;</td>
			<td>1x23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>V546G</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19135</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19777</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sclerotomie blade</td>
			<td>Ziemer</td>
			<td>21-2301</td>
			<td>1x23G 
			1x20G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>EH6162H</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32320</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18910</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colibri forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18950</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendible subretinal injection needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1270.EXT</td>
			<td>41G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VR scissor</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-36542</td>
			<td>25G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grieshaber forceps holder</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>712.00.41</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissor forceps tips</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>723.52</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Implant loading station</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358-1004</td>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt oval implant trephine&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom-made&#160;</td>
			<td>2.4 x 1.1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter dummy</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32227</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03443</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flute needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1281.SD</td>
			<td>20G (Vacuum)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>24535</td>
			<td>100&#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>&#160;664160</td>
			<td>100 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis Multi-Modality 
			Imaging System</td>
			<td>Heidelberg 
			Engineering</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Spectralis HRA 
			&#160;+ OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Drugs and solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Active agent</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucadont-IS</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>virucidal instrument disinfectant&#160;</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucocit&#160;T</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>Aldehyde-free instrument disinfectant</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin 10%</td>
			<td>WDT</td>
			<td>Ketamine&#160;</td>
			<td>10ml (100mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Medetomidine hydrochloride</td>
			<td>10ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisedan</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neosynephrin POS 10%</td>
			<td>URSAPHARM</td>
			<td>Phenylephrine HCl</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mydriacyl</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Tropicamid</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methocel 2%</td>
			<td>Omni Vision</td>
			<td>hydroxypropyl methylcellulose</td>
			<td>10g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PURI CLEAR</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Balance salt solution (BSS)&#160;</td>
			<td>500ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose 5%&#160;&#160;</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>Glucose 5%&#160; solution</td>
			<td>100ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin-Natrium-25 000</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>Heparin</td>
			<td>5ml (2500 unit/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suprarenin</td>
			<td>SANOFI</td>
			<td>Epinephrine</td>
			<td>1ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triamcinolone</td>
			<td>University of Bonn pharmacy</td>
			<td>preservative-free Triamcinolone&#160;</td>
			<td>1ml (40mg/ml)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoptomax eye ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>dexamethasone 1 mg/g 
			neomycin sulfate 3,500 IU/g 
			polymyxin B sulfate 6,000 IU/g</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betaisodona</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td>Povidon-Iod</td>
			<td>30ml (1g/10ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optive</td>
			<td>ALLERGAN</td>
			<td>sodium carboxymethylcellulose glycerol</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step by step protocol for subretinal surgery in rabbits

عمر بتحلل البقعة الصفراء (AMD)، والتهاب الشبكية الصباغي، وغيرها من الأمراض ذات الصلة RPE هي الأسباب الأكثر شيوعا لفقدان لا رجعة فيها البصر عند البالغين في البلدان المتقدمة صناعيا. يبدو RPE زرع أن يكون العلاج واعد، لأنها قد تحل محل RPE مختلة وظيفيا، واستعادة وظيفتها، وبالتالي الرؤية. نحن هنا تصف طريقة لزرع أحادي الطبقة RPE مثقف على سقالة في الفضاء تحت الشبكية (SRS) من الأرانب. بعد أن تم تسليم xenotransplants استئصال الزجاجية في SRS باستخدام مطلق النار حسب الطلب تتألف من فوهة معدنية 20 عيار مع المكبس المغلفة تترافلوروإيثيلين (PTFE). هذه التقنية الحالية تطورت في أكثر من 150 عملية جراحية أرنب أكثر من 6 سنوات. بعد الجراحة المتابعة يمكن الحصول عليها باستخدام غير الغازية ومتكررة في مجال التصوير فيفو مثل مجال الطيفي الضوئي المقطعي التماسك (SD-أكتوبر) تليها الأنسجة الثابتة الارواء. عشرطريقة البريد لديها خطوات واضحة المعالم لسهولة التعلم وارتفاع معدل النجاح. تعتبر الأرانب العين نموذج حيواني فائدة كبيرة في الدراسات قبل السريرية للترجمة السريرية. في هذا السياق الأرانب هي بديل فعالة من حيث التكلفة وربما مريحة لنماذج حيوانية عين الكبيرة الأخرى.

وتظهر النتائج من الطريقة الموصوفة لزرع تحت الشبكية في الجدول رقم 2. Engraftment يقضي بأن الشبكية نسبة نجاح كاليفورنيا 61٪ عندما تم إجراء استئصال الزجاجية الأساسية وارتفعت إلى 76٪، عندما كان المستحث انفصال الجسم الزجاجي الخلفي. وتشمل هذه الأرقام كاليفورنيا 21٪ من الحيوانات الذين لقوا حتفهم إما اثناء العمليات القيصرية أو في أول 3 أيام بعد الجراحة. هذه التقنية يمكن استخدامها لزرع اثنين من السقالات في المناطق الشبكية المختلفة في عين واحدة في وقت واحد. خضعت الأرانب بعد العملية الجراحية المجراة متابعة باستخدام SD-أكتوبر ومعالجة نسيجية كما وصفها ستانزيل وآخرون. 27 (الشكل 2). الشكل. يظهر 2A المسح منظار ليزر صورة انعكاس الأشعة تحت الحمراء من RPE مثقف زرعها على غشاء البوليستر (PET) بعد زرع غير معقدة. الهالة حول زرع يتوافق مع مبصرة ضمور الشكل. يظهر 2B المقابل SD-أكتوبر، لاحظ شبكية العين، طبقة النووية أساسا الخارجي (ONL) رقيق، الفرقة عاكسة المفرط على SD-أكتوبر فوق الزرع، في حين أن الشبكية العصبية المجاورة لزرع معارض شبه طبيعية العصابات التفكير. وتشير هذه النتائج إلى تسليم ارضحي الشكل. يظهر 2C Hematoxiline / يوزين (H / E) وصمة عار للزرع الذي يظهر ندبات تحت الشبكية وضمور ONL حول الموقع retinotomy المرجح نتيجة التلاعب علاجي المنشأ، طبقة الصباغية بعد عدم انتظام المجاورة خلال PET. ظهر غشاء بروك تحت الزرع أيضا لتكون متجاورة، والمشيماء الشعيرية يحتوي على بعض الكريات الحمراء المتناثرة. هذه نتيجة المورفولوجي قابلة للمقارنة إلى SD-أكتوبر وتعزز فرضية تسليم ارضحي. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig1.jpg" /> تين<html> لدى عودتهم 1: تحميل مطلق النار مع الإنسان IPSC-RPE مثقف على PET الناقل الخلية. أ) ويبين اللكم زرع باستخدام العرف إبرة. ب) على شكل فول-زرع قطع من زراعة الخلايا. C) لتحديد المواقع من الزرع قبل التحميل. D) تحميل من مطلق النار مع الزرع. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم .</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig2.jpg" /> الشكل 2: مثقف الإنسان [هس-RPE على PET الناقل خلية 4 أسابيع في الأرنب تحت الشبكية الفضاء. أ) يظهر سلوفاكيا صورة انعكاس الأشعة تحت الحمراء، والخط الأخضر ترسم المقطع العرضي هو مبين في الشكل. 2B. ب) الموافق SD-أكتوبر C) وصمة عار H / E، انظر النص أو 26،27 لمزيد من التفاصيل.ove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig2large.jpg &quot;الهدف =&quot; _ فارغة &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:97px;"> معامل </td><td style="width:131px;"> ضبط مستعملة </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> استئصال الزجاجية </td><td> 6000 تخفيضات / دقيقة </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> مكنسة كهرباء </td><td> 200 مم زئبق </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> وقت الشروق </td><td> 1 ثانية </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> هواء </td><td> 24 مم زئبق </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> ري </td><td> 24 شركة بيت إدارة المال 2 O </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Diathermy </td><td> 30٪ </td></tr></tbody></table> الجدول 1: إعداد معلمة للآلة استئصال الزجاجية. <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> استئصال الزجاجية </td><td> زرع </td><td> الأرانب تعمل </td><td> زرع ناجحة </td><td> زرع فشلت </td><td> الموت </td><td> معدل النجاح٪ </td></tr><tr><td> استئصال الزجاجية الأساسي </td><td> حيوان اليف </td><td> 30 </td><td> 19 </td><td> 4 </td><td> 7 </td><td> 63.33 </td></tr><tr><td></td><td> PET + RPE </td><td> 70 </td><td> 42 </td><td> 12 </td><td> 16 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> PVD، ± بلازمين ث / PPV </td><td> حيوان اليف </td><td> 28 </td><td> 21 </td><td> 2 </td><td> 5 </td><td> 75 </td></tr><tr><td></td><td> PET + RPه </td><td> 22 </td><td> 17 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 77.27 </td></tr></tbody></table> الجدول 2: موجز عن آخر 150 عمليات بما في ذلك طريقة وزراعة نوع.

Watch this Scientific Journal Video about A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits at JoVE.com

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

في شبكية العين الظهارة الصبغية (RPE) تعتبر بديلا الاستراتيجيات والعلاج الجيني لعدة ظروف التنكسية الشبكية. للترجمة السريرية، يطلب من النماذج الحيوانية عين الكبيرة لدراسة التقنيات الجراحية المطبقة في المرضى. هنا نقدم نموذجا أرنب لعملية جراحية تحت الشبكية الموجهة نحو زرع RPE، التي هي متعددة وفعالة من حيث التكلفة.

خطوة بالبروتوكول الخطوة لجراحة تحت الشبكية في الأرانب

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Detection and Genogrouping of Noroviruses from Children's Stools By Taqman One-step RT-PCR

كشف وGenogrouping من Noroviruses من براز الأطفال وذلك في خطوة واحدة Taqman RT-PCR

Noroviruses (NoVs) are the leading cause of outbreaks of sporadic acute gastroenteritis worldwide in humans of all ages. They are important cause of ...

How to Measure Cortical Folding from MR Images: a Step-by-Step Tutorial to Compute Local Gyrification Index

كيفية قياس الطي القشرية من صور MR : برنامج تعليمي خطوة بخطوة لحساب الرقم القياسي المحلي Gyrification

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will ...

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

قياس هشاشة في الأفراد المصابين بعدوى فيروس الإيدز. تحديد المرضى ضعيف هو الخطوة الأولى لتحسين حال وعكس هشاشة

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

أداء تحت الشبكية الحقن في القوارض لتسليم خلايا الظهارة الصبغية الشبكية في تعليق

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Step By Step: Microsurgical training method combining two nonliving animal models

خطوة بخطوة: أسلوب التدريب المجهرية الجمع بين اثنين من النماذج الحيوانية غير الحية

The learning of microsurgical techniques and the maintenance of microsurgical skills have been traditionally based on the use of living animals, mainly ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

منتبذ الكلوي الزرع الذاتي في لحم الخنزير نموذج: بروتوكول خطوة بخطوة

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

Discovering Middle Ear Anatomy by Transcanal Endoscopic Ear Surgery: A Dissection Manual

اكتشاف تشريح الإذن الوسطى بجراحه الإذن بالمنظار ترانسكانال: دليل تشريح

The middle ear is located in the center of the temporal bone and bears a highly complex anatomy. The recently introduced exclusively endoscopic transcanal ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

اتخاذ الخطوة التالية: تقويم العظام العصبية هند نموذج لزرع الأطراف لتعظيم الانتعاش الوظيفي في الفئران

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

استخدام خزعة كيميائية لتقييم جودة الكسب غير المشروع

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...