Name: a step by step protocol for subretinal surgery in rabbits
Uploaded: 2016-09-13T12:30:00
Duration: 12 min 31 s
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2008 और 2010 (BVS), BONFOR / Gerok छात्रवृत्ति हे 137.0015 (BVS), BONFOR / Gerok छात्रवृत्ति हे 137.0019 (एफटी), ड्यूश Forschungsgemeinschaft / DFG (BVS) एसटीए 1135 / 2-1, चीनी में Rüdiger फाउंडेशन अनुदान द्वारा समर्थित छात्रवृत्ति परिषद नं 2008627116 (zł) और Geuder एजी, हीडलबर्ग (छवि। 2) द्वारा एक अप्रतिबंधित अनुदान। एच Skottman की प्रयोगशाला के सदस्य, टाम्परे फिनलैंड के विश्वविद्यालय कृतज्ञता ली गई 2 छवि में दिखाया गया है RPE जब HES उपलब्ध कराने के लिए स्वीकार कर रहे हैं।

आरबी, BVS, ZL, पूर्वोत्तर और Geuder एजी शूटर पर एक यूरोपीय पेटेंट आवेदन दायर किया है। एनबी Geuder एजी के एक कर्मचारी है। इस वीडियो लेख के लिए प्रकाशन फीस Geuder एजी द्वारा भुगतान किया गया।

के रूप में यह केंद्रीय दृष्टि की हानि का कारण बनता है उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी), औद्योगिक रूप से विकसित देशों में 50 वर्ष की आयु या पुराने वयस्कों में दृश्य हानि का सबसे आम कारण है। इन रोगियों के बारे में 15% की बीमारी की &quot;गीले&quot; फार्म, जिसमें neovascularization रंजित से निकलती है और रेटिना समारोह 1 बाधित से पीड़ित हैं। इस प्रकार antiangiogenic दवाओं 2 के दोहराया इंट्रा-vitreal इंजेक्शन के साथ एक अत्यधिक प्रभावी चिकित्सा द्वारा इलाज किया जा सकता है। हालांकि, रोगियों (~ 85%) के विशाल बहुमत सूखी रूप है, जो बाह्य जमा (जैसे, drusen) रेटिना वर्णक उपकला (RPE) के तहत की विशेषता है से पीड़ित हैं। ये जमा मैक्युला में रेटिना शोष के लिए अग्रणी RPE शिथिलता के कारण। किसी भी उपचारात्मक चिकित्सीय विकल्पों की कमी को देखते हुए, एएमडी एक अधिकता के विकास अनुसंधान के क्षेत्र में, जहां कई अलग अलग उपचारात्मक चिकित्सकीय दृष्टिकोण का परीक्षण किया जा रहा है में विकसित हुआ। सर्जिकल RPE प्रतिस्थापन हैएक आकर्षक भविष्य संभावना इस दुर्बल करने वाली बीमारी को हराने के लिए 3। ऑटोलॉगस subretinal RPE प्रत्यारोपण मैक्युला में बेकार या खो RPE की जगह है, और संभावित अपनी शारीरिक समारोह 4-9 बहाल करने के लिए है। इस शल्य चिकित्सा तकनीक मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) और प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (IPSC) से RPE भेदभाव प्रोटोकॉल के विकास के साथ एक सफलता थी, प्रत्यारोपण के लिए 10 वैज्ञानिक RPE के एक असीमित स्रोत सेल दे रही है। RPE प्रत्यारोपण अब स्टेम सेल व्युत्पन्न चिकित्सा विज्ञान के लिए एक आकर्षक प्रथम मानव आवेदन के रूप में मान्यता प्राप्त है। आंख उत्कृष्ट शल्य चिकित्सा का उपयोग और इन विवो निगरानी उपकरण 11-13 में परिष्कृत प्रदान करता है। RPE प्रत्यारोपण के लिए, एक ही रास्ता एक न्यूनतम इनवेसिव वितरण के लिए एक सेल निलंबन, आरती फाई सामाजिक वाहक substr का उपयोग कर, वैकल्पिक रूप से, बेहतर RPE विशेषताओं और प्रत्यारोपण समारोह को संरक्षित करने के साथ हैAtes (scaffolds) RPE प्रतिस्थापन के लिए 4,14,15 माना जा रहा है। बड़े पशु मॉडल preclinical सत्यापन, अभी तक जानवर से निपटने और सर्जिकल तकनीक तिथि 16-23 के लिए याद आ रही है पर विस्तृत तकनीकी जानकारी के लिए आवश्यक हैं। हम और दूसरों 11,24 विपरीत 25 के लिए कुछ सबूत होने के बावजूद, एक कठोर अभी तक लोचदार वाहक सब्सट्रेट के उपयोग का सुझाव के रूप में यह सुरक्षित हैंडलिंग प्रदान करता है, monolayer अखंडता और कार्यक्षमता को बरकरार रखता है। समय के साथ हम subretinal अंतरिक्ष (एसआरएस) में सेल वाहक समर्थित RPE प्रत्यारोपण के आरोपण के लिए कई कस्टम डिजाइन उपकरणों और सहायक तकनीकों का परीक्षण किया है। हम intraoperative वीडियो रिकॉर्डिंग उपयोग किया, विवो स्कैनिंग लेजर आरोपण सफलता 14,26,27 का मूल्यांकन करने के वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (SLO / SD अक्टूबर), और ऊतक विज्ञान के साथ संयुक्त ophthalmoscopy में। यहाँ हम खरगोशों में subretinal RPE प्रत्यारोपण के लिए हमारे वर्तमान सिफारिश प्रदान करते हैंजो 150 से अधिक प्रक्रियाओं में 5 अलग अलग खरगोश तनाव, 7 सेल वाहक सामग्री और 4 RPE सेल स्रोतों में परीक्षण किया गया।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>s30 ultrasonic cleaning unit</td>
			<td>Elmasonic</td>
			<td>100 4631</td>
			<td>2.75L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DE-23&#160; autoclave</td>
			<td>Systec</td>
			<td>C 2209</td>
			<td>23L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>300013 
			300995&#160; 
			301285 
			300294 
			300330&#160;</td>
			<td>1ml x3 
			2ml x3 
			5ml x1 
			10ml x1 
			20ml x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196 
			305136</td>
			<td>18G x 1&#160; 
			27G x5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>2975#20</td>
			<td>blade#20 x3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>HARTMANN 
			LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>277 502 
			25 440</td>
			<td>60x40 cm x2 
			12x17 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular sticks</td>
			<td>LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>16 516</td>
			<td>66x5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Twister gauze sponges</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>481 274</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closure strips</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>540 686</td>
			<td>x4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi Visu CS Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/a</td>
			<td>incl. fundus imaging system BIOM II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chandelier endoillumination</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03503 + 
			G-S03504</td>
			<td>25G incl. trocar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-26033</td>
			<td>Xenotron III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60000</td>
			<td>MegaTRON S4 S4/ HPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrector</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-46301</td>
			<td>MACH2 vitreous cutter 23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venturi cassette&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sideport-infusion cannula</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom&#160;</td>
			<td>1x23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>V546G</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19135</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19777</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sclerotomie blade</td>
			<td>Ziemer</td>
			<td>21-2301</td>
			<td>1x23G 
			1x20G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>EH6162H</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32320</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18910</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colibri forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18950</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendible subretinal injection needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1270.EXT</td>
			<td>41G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VR scissor</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-36542</td>
			<td>25G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grieshaber forceps holder</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>712.00.41</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissor forceps tips</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>723.52</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Implant loading station</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358-1004</td>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt oval implant trephine&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom-made&#160;</td>
			<td>2.4 x 1.1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter dummy</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32227</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03443</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flute needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1281.SD</td>
			<td>20G (Vacuum)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>24535</td>
			<td>100&#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>&#160;664160</td>
			<td>100 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis Multi-Modality 
			Imaging System</td>
			<td>Heidelberg 
			Engineering</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Spectralis HRA 
			&#160;+ OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Drugs and solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Active agent</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucadont-IS</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>virucidal instrument disinfectant&#160;</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucocit&#160;T</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>Aldehyde-free instrument disinfectant</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin 10%</td>
			<td>WDT</td>
			<td>Ketamine&#160;</td>
			<td>10ml (100mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Medetomidine hydrochloride</td>
			<td>10ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisedan</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neosynephrin POS 10%</td>
			<td>URSAPHARM</td>
			<td>Phenylephrine HCl</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mydriacyl</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Tropicamid</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methocel 2%</td>
			<td>Omni Vision</td>
			<td>hydroxypropyl methylcellulose</td>
			<td>10g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PURI CLEAR</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Balance salt solution (BSS)&#160;</td>
			<td>500ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose 5%&#160;&#160;</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>Glucose 5%&#160; solution</td>
			<td>100ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin-Natrium-25 000</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>Heparin</td>
			<td>5ml (2500 unit/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suprarenin</td>
			<td>SANOFI</td>
			<td>Epinephrine</td>
			<td>1ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triamcinolone</td>
			<td>University of Bonn pharmacy</td>
			<td>preservative-free Triamcinolone&#160;</td>
			<td>1ml (40mg/ml)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoptomax eye ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>dexamethasone 1 mg/g 
			neomycin sulfate 3,500 IU/g 
			polymyxin B sulfate 6,000 IU/g</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betaisodona</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td>Povidon-Iod</td>
			<td>30ml (1g/10ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optive</td>
			<td>ALLERGAN</td>
			<td>sodium carboxymethylcellulose glycerol</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step by step protocol for subretinal surgery in rabbits

उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी), रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा और अन्य RPE संबंधित रोगों औद्योगिक रूप से विकसित देशों में वयस्कों में दृष्टि के अपरिवर्तनीय नुकसान के लिए सबसे आम कारण होते हैं। RPE प्रत्यारोपण, एक होनहार चिकित्सा के रूप में के रूप में यह, बेकार RPE की जगह ले सकती अपने कार्य, और इस तरह दृष्टि बहाल प्रकट होता है। यहाँ हम खरगोश की subretinal अंतरिक्ष (एसआरएस) में एक पाड़ पर एक सुसंस्कृत RPE monolayer रोपाई के लिए एक विधि का वर्णन है। बाद vitrectomy xenotransplants एक कस्टम मेड एक polytetrafluoroethylene (PTFE) लेपित सवार के साथ एक 20 गेज धातु नोक से मिलकर शूटर का उपयोग एसआरएस में कर दिया गया था। मौजूदा तकनीक 6 वर्ष से अधिक 150 से अधिक खरगोश सर्जरी में विकसित हुआ। पोस्ट ऑपरेटिव अनुवर्ती ऐसे वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी अक्टूबर) छिड़काव तय ऊतक विज्ञान के द्वारा पीछा के रूप में गैर-आक्रामक और vivo इमेजिंग में दोहराव का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है। गुई विधि आसान सीखने और उच्च सफलता दर के लिए अच्छी तरह से परिभाषित कदम है। खरगोश एक बड़ी आंख पशु मॉडल नैदानिक ​​अनुवाद के लिए preclinical अध्ययन में उपयोगी माना जाता है। इस संदर्भ में खरगोश अन्य बड़े आंख पशु मॉडल के लिए एक लागत प्रभावी और शायद सुविधाजनक विकल्प हैं।

Subretinal आरोपण के लिए वर्णित विधि से परिणाम तालिका 2 engraftment में दिखाया जाता है के तहत रेटिना जब एक कोर vitrectomy प्रदर्शन किया गया था सीए की सफलता दर 61% थी और 76%, जब पीछे कांच का टुकड़ी प्रेरित किया गया था करने के लिए गुलाब। इन नंबरों को जानवरों, जो या तो intraoperatively या पहले 3 दिनों पश्चात में मारे गए 21% सीए शामिल हैं। इस तकनीक को एक साथ एक आंख में विभिन्न क्षेत्रों रेटिना पर दो मचानों प्रत्यारोपण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। खरगोश के रूप में Stanzel एट अल द्वारा वर्णित विवो में पश्चात एसडी अक्टूबर और histologic प्रसंस्करण ऊपर का पालन कराना पड़ा। 27 (चित्रा 2)। अंजीर। 2A एक सीधी प्रत्यारोपण के बाद एक पॉलिएस्टर झिल्ली (पीईटी) पर प्रत्यारोपित सुसंस्कृत RPE की स्कैनिंग लेजर नेत्रदर्शक अवरक्त reflectance छवि को दर्शाता है।प्रत्यारोपण के आसपास प्रभामंडल शोष फोटोरिसेप्टर से मेल खाती है। अंजीर। 2 बी, इसी एसडी अक्टूबर, सूचना रेटिना, मुख्य रूप से बाहरी परमाणु परत (ONL) thinning, पर प्रत्यारोपण ऊपर एसडी अक्टूबर हाइपर चिंतनशील बैंड से पता चलता है, जबकि तंत्रिका रेटिना प्रत्यारोपण से सटे लगभग सामान्य प्रतिबिंब बैंड से पता चलता है। इन परिणामों के एक atraumatic वितरण सुझाव देते हैं। अंजीर। -2 सी चलता Hematoxiline / eosin (एच / ई) प्रत्यारोपण जो subretinal scarring और retinotomy साइट चिकित्सकजनित हेरफेर का एक परिणाम के रूप में की संभावना के आसपास ONL शोष चलता का दाग, पीईटी के ऊपर एक सन्निहित अभी तक अनियमित pigmented परत। प्रत्यारोपण के नीचे Bruch झिल्ली भी सन्निहित हो दिखाई दिया, और रंजितपटलकोशिका कुछ बिखरे एरिथ्रोसाइट्स में शामिल है। ये शब्द के भागों परिणाम एसडी अक्टूबर को तुलना कर रहे हैं और एक atraumatic वितरण की थीसिस को मजबूत। <img alt="आकृति 1" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig1.jpg" /> अंजीर<html> Ure 1: पीईटी सेल वाहक पर मानव IPSC-RPE संवर्धित के साथ निशानेबाज लोड हो रहा है। ए) एक प्रत्यारोपण कस्टम मेड सुई। बी) सेल संस्कृति से काट बीन के आकार का प्रत्यारोपण का उपयोग कर बाहर छिद्रण दिखाता है। सी) प्रत्यारोपण की स्थिति पहले से लोड हो। डी) प्रत्यारोपण के साथ शूटर लोड हो रहा है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig1large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।</a> <img alt="चित्र 2" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig2.jpg" /> चित्रा 2: सभ्य मानव जब HES-RPE पालतू पर सेल वाहक खरगोश subretinal अंतरिक्ष में 4 सप्ताह। ए) शो SLO अवरक्त reflectance छवि, हरे रंग की लाइन पार अनुभाग छवि में दिखाया गया demarcates। 2 बी। बी) इसी एसडी अक्टूबर। सी) एच / ई दाग, पाठ या 26,27 जानकारी के लिए देखते हैं।ove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig2large.jpg &quot;लक्ष्य =&quot; _blank &quot;&gt; यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें। <table fo:keep-together.within-page="1"><colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:97px;"> पैरामीटर </td><td style="width:131px;"> खेतों में सेटिंग्स </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> vitrectomy </td><td> 6000 में कटौती / मिनट </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> शून्य स्थान </td><td> 200 एमएमएचजी </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> उठने का समय </td><td> 1 सेकंड </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> वायु </td><td> 24 एमएमएचजी </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> सिंचाई </td><td> 24 CMH 2 हे </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> DiathErmy </td><td> 30% </td></tr></tbody></table> तालिका 1: vitrectomy मशीन के पैरामीटर सेटअप। <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> vitrectomy </td><td> प्रत्यारोपण </td><td> खरगोश संचालित </td><td> सफल प्रत्यारोपण </td><td> विफल प्रत्यारोपण </td><td> मौत </td><td> सफलता दर% </td></tr><tr><td> कोर vitrectomy </td><td> पीईटी </td><td> 30 </td><td> 19 </td><td> 4 </td><td> 7 </td><td> 63.33 </td></tr><tr><td></td><td> पालतू + RPE </td><td> 70 </td><td> 42 </td><td> 12 </td><td> 16 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> पीवीडी, w / पीपीवी plasmin ± </td><td> पीईटी </td><td> 28 </td><td> 21 </td><td> 2 </td><td> 5 </td><td> 75 </td></tr><tr><td></td><td> पालतू + आर.पी.ए </td><td> 22 </td><td> 17 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 77.27 </td></tr></tbody></table> तालिका 2: पिछले 150 विधि और प्रत्यारोपण प्रकार सहित संचालन का सारांश।

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A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

रेटिना वर्णक उपकला (RPE) प्रतिस्थापन रणनीतियों और जीन आधारित चिकित्सा कई रेटिना अपक्षयी स्थितियों के लिए माना जाता है। नैदानिक ​​अनुवाद के लिए, बड़े आंख पशु मॉडल शल्य चिकित्सा रोगियों में लागू तकनीकों का अध्ययन करने के लिए आवश्यक हैं। यहाँ हम RPE प्रत्यारोपण, जो बहुमुखी और लागत प्रभावी है की दिशा में सक्षम subretinal सर्जरी के लिए एक खरगोश मॉडल प्रस्तुत करते हैं।

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