Name: a rapid method for blood processing to increase the yield of plasma peptide levels in human blood
Uploaded: 2016-04-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione tedesca per la ricerca STE 1765 / 3-1 (AS) e Ministero tedesco dell&#39;Istruzione e della ricerca 03IPT614A (CG). Ringraziamo Reinhard Lommel e Petra Buße per la loro eccellente supporto tecnico, così come Karin Johansson e Christina Hentzschel aiuto per l&#39;organizzazione e l&#39;esecuzione di misure antropometriche

Il protocollo è stato approvato dal comitato etico locale per la ricerca umana (numero di protocollo EA1 / 114/10). Processing 1. Sangue <ol><li> Raccogliere il sangue venoso 7:00-08:00 al mattino a digiuno da una vena e il processo avambraccio in base alla procedura standard o il metodo rapido. Istruire i soggetti di non esercitare o di fumo prima di prelievo di sangue. </li><li> Per l&#39;elaborazione di serie, raccogliere il sangue in provette EDTA contenenti refrigerati e centrifugare entro 10 min a 3.000...

<ol>
	<li>Finucane, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National,+regional,+and+global+trends+in+body-mass+index+since+1980:+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+960+country-years+and+9.1+million+participants.">National, regional, and global trends in body-mass index since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 960 country-years and 9.1 million participants.</a> Lancet. 377 (9765), 557-567 (2011).</li><li>James, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+obesity:+the+size+of+the+problem.">The epidemiology of obesity: the size of the problem.</a> J Intern Med. 263 (4), 336-352 (2008).</li><li>Stengel, A., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastric+peptides+and+their+regulation+of+hunger+and+satiety.">Gastric peptides and their regulation of hunger and satiety.</a> Curr Gastroenterol Rep. 14 (6), 480-488 (2012).</li><li>Hussain, S. S., Bloom, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+food+intake+by+the+gut-brain+axis:+implications+for+obesity.">The regulation of food intake by the gut-brain axis: implications for obesity.</a> Int J Obes (Lond). 37 (5), 625-633 (2013).</li><li>Hosoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimum+collection+and+storage+conditions+for+ghrelin+measurements:+octanoyl+modification+of+ghrelin+is+rapidly+hydrolyzed+to+desacyl+ghrelin+in+blood+samples).">Optimum collection and storage conditions for ghrelin measurements: octanoyl modification of ghrelin is rapidly hydrolyzed to desacyl ghrelin in blood samples).</a> Clin Chem. 50 (6), 1077-1080 (2004).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RAPID+method+for+blood+processing+yields+new+insight+in+plasma+concentrations+and+molecular+forms+of+circulating+gut+peptides.">The RAPID method for blood processing yields new insight in plasma concentrations and molecular forms of circulating gut peptides.</a> Endocrinology. 150 (11), 5113-5118 (2009).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+differentially+decreases+plasma+acyl+and+desacyl+ghrelin+levels+in+rats:+Potential+role+of+the+circulating+ghrelin-acylating+enzyme+GOAT.">Lipopolysaccharide differentially decreases plasma acyl and desacyl ghrelin levels in rats: Potential role of the circulating ghrelin-acylating enzyme GOAT.</a> Peptides. 31 (9), 1689-1696 (2010).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+ambient+temperature+reverses+abdominal+surgery-induced+delayed+gastric+emptying+and+decreased+plasma+ghrelin+levels+in+rats.">Cold ambient temperature reverses abdominal surgery-induced delayed gastric emptying and decreased plasma ghrelin levels in rats.</a> Peptides. 31, 2229-2235 (2010).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+administration+of+pan-somatostatin+agonist+ODT8-SST+prevents+abdominal+surgery-induced+inhibition+of+circulating+ghrelin,+food+intake+and+gastric+emptying+in+rats.">Central administration of pan-somatostatin agonist ODT8-SST prevents abdominal surgery-induced inhibition of circulating ghrelin, food intake and gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol Motil. 23 (7), e294-e308 (2011).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+surgery+inhibits+circulating+acyl+ghrelin+and+ghrelin-O-acyltransferase+levels+in+rats:+role+of+the+somatostatin+receptor+subtype+2.">Abdominal surgery inhibits circulating acyl ghrelin and ghrelin-O-acyltransferase levels in rats: role of the somatostatin receptor subtype 2.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301, G239-G248 (2011).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injection+of+urocortin+1+induces+a+CRF2+mediated+increase+in+circulating+ghrelin+and+glucose+levels+through+distinct+mechanisms+in+rats.">Intravenous injection of urocortin 1 induces a CRF2 mediated increase in circulating ghrelin and glucose levels through distinct mechanisms in rats.</a> Peptides. 39, 164-170 (2013).</li><li>Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Wang, L., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orexigenic+response+to+tail+pinch:+role+of+brain+NPY(1)+and+corticotropin+releasing+factor+receptors.">Orexigenic response to tail pinch: role of brain NPY(1) and corticotropin releasing factor receptors.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 306 (3), R164-R174 (2014).</li><li>Goebel, M., Stengel, A., Wang, L., Reeve, J., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+increases+plasma+levels+of+corticotropin-releasing+hormone+in+rats.">Lipopolysaccharide increases plasma levels of corticotropin-releasing hormone in rats.</a> Neuroendocrinology. 93 (3), 165-173 (2011).</li><li>Banfi, G., Salvagno, G. L., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+ethylenediamine+tetraacetic+acid+(EDTA)+as+in+vitro+anticoagulant+for+diagnostic+purposes.">The role of ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) as in vitro anticoagulant for diagnostic purposes.</a> Clin Chem Lab Med. 45 (5), 565-576 (2007).</li><li>Stengel, A., Wang, L., Goebel-Stengel, M., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrally+injected+kisspeptin+reduces+food+intake+by+increasing+meal+intervals+in+mice.">Centrally injected kisspeptin reduces food intake by increasing meal intervals in mice.</a> Neuroreport. 22 (5), 253-257 (2011).</li><li>De Bond, J. A., Smith, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kisspeptin+and+energy+balance+in+reproduction.">Kisspeptin and energy balance in reproduction.</a> Reproduction. 147 (3), R53-R63 (2014).</li><li>Wren, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+enhances+appetite+and+increases+food+intake+in+humans.">Ghrelin enhances appetite and increases food intake in humans.</a> J Clin Endocrinol Metab. 86 (12), 5992 (2001).</li><li>Schulman, J. L., Carleton, J. L., Whitney, G., Whitehorn, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+glucagon+on+food+intake+and+body+weight+in+man.">Effect of glucagon on food intake and body weight in man.</a> J Appl Physiol. 11 (3), 419-421 (1957).</li><li>Steinert, R. E., Poller, B., Castelli, M. C., Drewe, J., Beglinger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+administration+of+glucagon-like+peptide+1+or+peptide+YY+3-36+affects+food+intake+in+healthy+male+subjects.">Oral administration of glucagon-like peptide 1 or peptide YY 3-36 affects food intake in healthy male subjects.</a> Am J Clin Nutr. 92 (4), 810-817 (2010).</li><li>Dewan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+insulin-induced+hypoglycaemia+on+energy+intake+and+food+choice+at+a+subsequent+test+meal.">Effects of insulin-induced hypoglycaemia on energy intake and food choice at a subsequent test meal.</a> Diabetes Metab Res Rev. 20 (5), 405-410 (2004).</li><li>Schlogl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+24-hour+ad+libitum+food+intake+is+associated+with+lower+plasma+irisin+concentrations+the+following+morning+in+adult+humans.">Increased 24-hour ad libitum food intake is associated with lower plasma irisin concentrations the following morning in adult humans.</a> Appetite. 90, 154-159 (2015).</li><li>Heymsfield, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+leptin+for+weight+loss+in+obese+and+lean+adults:+a+randomized,+controlled,+dose-escalation+trial.">Recombinant leptin for weight loss in obese and lean adults: a randomized, controlled, dose-escalation trial.</a> JAMA. 282 (16), 1568-1575 (1999).</li><li>Shimizu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+administration+of+nesfatin-1+reduces+food+intake+in+mice:+the+leptin-independent+mechanism.">Peripheral administration of nesfatin-1 reduces food intake in mice: the leptin-independent mechanism.</a> Endocrinology. 150, 662-671 (2009).</li><li>Batterham, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+food+intake+in+obese+subjects+by+peptide+YY3-36.">Inhibition of food intake in obese subjects by peptide YY3-36.</a> N Engl J Med. 349 (10), 941-948 (2003).</li><li>Shibasaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+effect+of+somatostatin+on+corticotropin-releasing+factor-induced+anorexia+in+the+rat.">Antagonistic effect of somatostatin on corticotropin-releasing factor-induced anorexia in the rat.</a> Life Sci. 42 (3), 329-334 (1988).</li><li>Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Tach&#233;, Y., Reeve, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+using+the+optimal+plasticware+and+glassware+in+studies+involving+peptides.">The importance of using the optimal plasticware and glassware in studies involving peptides.</a> Anal Biochem. 414 (1), 38-46 (2011).</li><li>Smets, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+plasma+levels+of+metastin+in+early+pregnancy+are+associated+with+small+for+gestational+age+neonates.">Decreased plasma levels of metastin in early pregnancy are associated with small for gestational age neonates.</a> Prenat Diagn. 28 (4), 299-303 (2008).</li><li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+is+a+growth-hormone-releasing+acylated+peptide+from+stomach.">Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach.</a> Nature. 402 (6762), 656-660 (1999).</li><li>Stengel, A., Yin Tach&#233;, Y., Yang, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=the+Gastric+X/A-like+Cell+as+Possible+Dual+Regulator+of+Food+Intake.">the Gastric X/A-like Cell as Possible Dual Regulator of Food Intake.</a> J Neurogastroenterol Motil. 18 (2), 138-149 (2012).</li><li>Inhoff, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desacyl+ghrelin+inhibits+the+orexigenic+effect+of+peripherally+injected+ghrelin+in+rats.">Desacyl ghrelin inhibits the orexigenic effect of peripherally injected ghrelin in rats.</a> Peptides. 29, 2159-2168 (2008).</li><li>Hirayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+effects+of+ghrelin+and+des-acyl+ghrelin+on+the+lumbo-sacral+defecation+center+and+regulation+of+colorectal+motility+in+rats.">Contrasting effects of ghrelin and des-acyl ghrelin on the lumbo-sacral defecation center and regulation of colorectal motility in rats.</a> Neurogastroenterol Motil. 22 (10), 1124-1131 (2011).</li><li>Horikoshi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+elevation+of+plasma+metastin+concentrations+in+human+pregnancy:+metastin+as+a+novel+placenta-derived+hormone+in+humans.">Dramatic elevation of plasma metastin concentrations in human pregnancy: metastin as a novel placenta-derived hormone in humans.</a> J Clin Endocrinol Metab. 88 (2), 914-919 (2003).</li><li>Yang, Y. U., Xiong, X. Y., Yang, L. I., Xie, L., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+of+kisspeptin+levels+in+girls+with+idiopathic+central+precocious+puberty+and+its+significance.">Testing of kisspeptin levels in girls with idiopathic central precocious puberty and its significance.</a> Exp Ther Med. 9 (6), 2369-2373 (2015).</li><li>Hosoda, H., Kojima, M., Matsuo, H., Kangawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+and+des-acyl+ghrelin:+two+major+forms+of+rat+ghrelin+peptide+in+gastrointestinal+tissue.">Ghrelin and des-acyl ghrelin: two major forms of rat ghrelin peptide in gastrointestinal tissue.</a> Biochem Biophys Res Commun. 279 (3), 909-913 (2000).</li><li>Raff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+and+active+ghrelin+in+developing+rats+during+hypoxia.">Total and active ghrelin in developing rats during hypoxia.</a> Endocrine. 21 (2), 159-161 (2003).</li><li>Evans, M. J., Livesey, J. H., Ellis, M. J., Yandle, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+anticoagulants+and+storage+temperatures+on+stability+of+plasma+and+serum+hormones.">Effect of anticoagulants and storage temperatures on stability of plasma and serum hormones.</a> Clin Biochem. 34 (2), 107-112 (2001).</li><li>Nabuchi, Y., Fujiwara, E., Kuboniwa, H., Asoh, Y., Ushio, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability+and+degradation+pathway+of+recombinant+human+parathyroid+hormone:+deamidation+of+asparaginyl+residue+and+peptide+bond+cleavage+at+aspartyl+and+asparaginyl+residues.">The stability and degradation pathway of recombinant human parathyroid hormone: deamidation of asparaginyl residue and peptide bond cleavage at aspartyl and asparaginyl residues.</a> Pharm Res. 14 (12), 1685-1690 (1997).</li><li>White, A., Handler, P., Smith, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Biochemistry. , (1973).</li></ol>

Abbiamo segnalato in precedenza che il metodo rapido per il trattamento del sangue migliorato il recupero per 11/12 peptidi rispetto al trattamento del sangue standard per ratti 6. Nel presente studio abbiamo dimostrato che questo metodo è anche adatto per l&#39;uso nell&#39;uomo. Dopo l&#39;elaborazione RAPID, il recupero per 9 di 9 125 peptidi marcati I-testato è stato migliorato rispetto al trattamento del sangue standard (EDTA di sangue sul ghiaccio). Il miglioramento osservato variava 19-39%...

Alla luce della crescente diffusione in tutto il mondo di obesità 1,2, la ricerca nel campo della regolazione dell&#39;assunzione di cibo sta guadagnando importanza. Mentre finora solo un peptide noto che perifericamente prodotta e azione centrale per stimolare l&#39;assunzione di cibo, cioè grelina 3, negli ultimi decenni, una vasta gamma di peptidi è stato identificato che riducono l&#39;assunzione di cibo, ad es. leptina, peptide YY (PYY) ed anche glucagone-like peptide-1 (GLP-1) e insulina 4, Pertanto, negli studi in meccanismi regolatori di livelli di fame e sazietà peptidici sono spesso valutata e, allo stesso tempo, si presume che il peptide studiato è stabile e recuperato con rese elevate durante la formazione del plasma. Spesso, tuttavia, questo non è il caso a causa della rapida composizione endogena come indicato in precedenza per es. grelina che viene degradata da acile a desacyl grelina 5. Pertanto, abbiamo recentemente descritto il metodo rapido per proces sanguecantare in ratti che impiegano temperature R educed, A cidification, P rotease inibizione, ho sotopic controlli esogeni e D ilution 6. Questo metodo migliorato recupero per 6 11 di 12 peptidi testati e consentiti per la determinazione della forma molecolare circolante corretta rispetto al trattamento del sangue standard (sangue EDTA su ghiaccio). Questo metodo è stato utilizzato in diversi studi successivi 7-12 per la rilevazione di grelina circolante e dal fattore di rilascio della corticotropina 13. Pertanto, il metodo si è dimostrato utile per la ricerca peptide nei roditori. Tuttavia, dal momento che studi su roditori non sono sempre traducibili ad un&#39;altra specie, il metodo deve essere stabilito per l&#39;uso nel sangue umano pure. Lo scopo del presente studio è stato quello di testare il metodo rapido per il trattamento del sangue negli esseri umani rispetto al trattamento del sangue normale, il sangue EDTA sul ghiaccio, che è ampiamente consigliata 14 e frequentemente used nel così come ambiente di ricerca clinica. Abbiamo testato il recupero di una selezione di 125 peptidi I-etichettati coinvolti nella regolazione dell&#39;assunzione di cibo tra cui peptidi stabiliti così come nuovi candidati recentemente suggerito di svolgere un ruolo nell&#39;alimentare regolamento (effetti sulla assunzione di cibo sono riportati nella tabella 1) dopo la trasformazione con entrambi i metodi. Ormoni stati scelti anche rappresentare peptidi di lunghezza e di carica (Tabella 2) differente. Inoltre, per grelina abbiamo studiato la forma molecolare (s) seguendo il metodo standard e RAPID. Infine, abbiamo valutato la grelina endogena (acil e desacyl grelina), così come i livelli di kisspeptin, un peptide anche recentemente suggerito di svolgere un ruolo nella regolazione dell&#39;assunzione di cibo 15,16 seguente trasformazione RAPID o standard. Inoltre, abbiamo anche studiato questi livelli di peptide in una popolazione di soggetti con una vasta gamma di indice di massa corporea (che vanno 10,2-67,6 kg / m 2) per studiare possibLe differenze relative al peso corporeo cronicamente alterato. <img alt="Tabella 1" src="/files/ftp_upload/53959/53959table1.jpg" /><img alt="Tabella 2" src="/files/ftp_upload/53959/53959table2.jpg" /> La diagnosi, valutazione, e Piano: I partecipanti allo studio Tutti i partecipanti allo studio sono stati recentemente pazienti ricoverati (inclusione era entro due giorni di ricovero in ospedale) della Divisione di Medicina Psicosomatica a Charité-Universitätsmedizin Berlino e ha dato consenso informato scritto. Per evitare qualsiasi impatto del genere solo pazienti di sesso femminile sono stati inclusi. Un totale di 42 soggetti hanno partecipato a questo studio e sono stati divisi in tre gruppi: peso normale (BMI 18,5-25 kg / m 2, n = 12), anoressia nervosa (BMI &lt;17,5 kg / m 2, n = 15) e obesità (BMI&gt; 30 kg / m 2, n = 15). pazienti obesi Anorexic e sono statidiagnosticata secondo la classificazione internazionale delle malattie-10 e ricoverati in ospedale per l&#39;aumento di peso (anoressia nervosa) o la riduzione del peso (obesità), rispettivamente. Tutti i pazienti di peso normale sono stati ricoverati esclusivamente a causa di sintomi somatoformi senza rilevanti disturbi somatici. Sono stati esclusi i pazienti con sintomi somatoformi gastrointestinali o una storia di chirurgia gastrointestinale. I criteri di esclusione comprendevano anche un&#39;età &lt;18 anni, gravidanza in corso e le malattie psicotiche non trattati. Il prelievo di sangue è stata eseguita il giorno 2 o 3 dopo il ricovero in ospedale prima del trattamento dietetico per aumentare o ridurre il peso corporeo, rispettivamente. parametri antropometrici sono stati valutati nello stesso giorno.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1268">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">diprotin A</td>
			<td style="width:351px;">Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IDP-4132</td>
			<td style="width:456px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E-64-d</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IED-4321-v</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">antipain</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IAP-4062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">leupeptin</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">ILP-4041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chymostatin</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">ICY-4063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sep-Pak C18 cartridges</td>
			<td>Waters Corporation, Milford, MA, USA</td>
			<td>WAT051910</td>
			<td>360 mg, 55-105 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acyl-ghrelin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9088-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GLP-1</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9035-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glucagon</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9030</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">insulin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9011S</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">leptin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9081-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kisspeptin-10</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-048-56</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nesfatin-1</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-003-26</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">PYY3-36</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-059-02&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">somatostatin-28</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-060-16&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ZORBAX Rapid Resolution HT SB-C18 column</td>
			<td>Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">822700-902</td>
			<td>2.1 x 50 mm, 1.8 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agilent 1200 LC&#160;</td>
			<td>Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>HPLC, several components, therefore no single catalog number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kisspeptin&#160; RIA</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td># RK-048-56</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Total ghrelin RIA</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td># GHRT-89HK&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Active ghrelin RIA</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td># GHRA-88HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:343px;">SigmaStat 3.1</td>
			<td>Systat Software, San Jose, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">online download</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid method for blood processing to increase the yield of plasma peptide levels in human blood

La ricerca nel campo della regolazione dell&#39;assunzione di cibo sta guadagnando importanza. Questo spesso include la misurazione dei peptidi che regolano l&#39;assunzione di cibo. Per la corretta determinazione della concentrazione di un peptide, dovrebbe essere stabile durante il trattamento del sangue. Tuttavia, questo non è il caso di diversi peptidi che vengono rapidamente degradati da peptidasi endogene. Recentemente, abbiamo sviluppato un metodo di trattamento del sangue che impiegano temperature R educed, A cidification, P rotease inibizione, ho sotopic controlli esogeni e D ilution (RAPID) per l&#39;utilizzo nei ratti. Qui, abbiamo stabilito questa tecnica per l&#39;uso nell&#39;uomo e indagato recupero, forma molecolare e circolanti concentrazione di cibo ormoni regolatori. Il metodo RAPID ha migliorato significativamente il recupero per 125 I-marcato somatostatina-28 (+ 39%), glucagone-like peptide-1 (+ 35%), acile grelina e glucagone (+ 32%), l&#39;insulina e kisspeptin (+ 29% ), nesfatin-1 (+ 28%), la leptina(+ 21%) e peptide YY 3-36 (+ 19%) rispetto al trattamento standard (sangue EDTA su ghiaccio, p &lt;0.001). cromatografia liquida ad alte prestazioni ha mostrato l&#39;eluizione di endogena grelina acile nella posizione prevista dopo l&#39;elaborazione RAPID, mentre dopo il trattamento standard di 62% di acil grelina sono stati degradato con conseguente un picco precedente probabile che rappresenta desacyl grelina. Dopo l&#39;elaborazione del rapporto RAPID grelina acil / desacyl nel sangue di soggetti normali di peso è stato di 1: 3 rispetto al 01:23 dopo trattamento standard (p = 0,03). Anche i livelli endogeni Kisspeptin erano più alti dopo RAPID rispetto al trattamento standard (+ 99%, p = 0,02). Il metodo di trattamento del sangue RAPID può essere utilizzato negli esseri umani, produce peptide superiori e permette di valutare la forma molecolare corretta.

Trattamento del sangue RAPID aumenta il rendimento di 125 peptidi I-radiomarcato nel sangue umano rispetto al trattamento del sangue standard. Dopo il trattamento del sangue standard (sangue EDTA su ghiaccio), il recupero dei peptidi radiomarcati era ~ 60% in 9/9 peptidi (che vanno dal 48-68%, Figura 1A - K). Trattamento rapido migliore la resa in tutte le 125 peptidi I-etichettati, vale a dire la somatostatina-28 (+ 39%, <st...

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A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Un metodo rapido per la lavorazione del sangue per aumentare la resa dei livelli plasmatici del peptide nel sangue umano

Il metodo di trattamento del sangue RAPID può essere utilizzato negli esseri umani e produce livelli di peptide superiori e consente la valutazione della forma molecolare corretta. Pertanto, questo metodo sarà uno strumento prezioso nella ricerca del peptide.

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Research

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Immunology and Infection

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L&#39;esaurimento delle popolazioni di cellule specifiche da deplezione del complemento

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Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

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Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

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