Name: a rapid method for blood processing to increase the yield of plasma peptide levels in human blood
Uploaded: 2016-04-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood at JoVE.com

Este trabalho foi financiado pela Fundação Alemã de Pesquisa STE 1765 / 3-1 (AS) e do Ministério Alemão de Educação e Pesquisa 03IPT614A (CG). Agradecemos Reinhard Lommel e Petra Busse por sua excelente suporte técnico, bem como Karin Johansson e Christina Hentzschel para obter ajuda com a organização e execução de medidas antropométricas

O protocolo foi aprovado pelo comitê de ética local para a investigação humana (número de protocolo EA1 / 114/10). Processamento 1. Sangue <ol><li> Coletar sangue venoso 07:00-8h00 após jejum nocturno de uma veia do antebraço e do processo de acordo com o procedimento padrão ou o método RAPID. Instrua os assuntos a não exercer ou fumar antes da retirada de sangue. </li><li> Para o processamento padrão, recolher o sangue em tubos contendo EDTA e centrífuga refrigerada dentro de 10 min a 3000 xg dura...

<ol>
	<li>Finucane, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National,+regional,+and+global+trends+in+body-mass+index+since+1980:+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+960+country-years+and+9.1+million+participants.">National, regional, and global trends in body-mass index since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 960 country-years and 9.1 million participants.</a> Lancet. 377 (9765), 557-567 (2011).</li><li>James, W. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+food+intake+by+the+gut-brain+axis:+implications+for+obesity.">The regulation of food intake by the gut-brain axis: implications for obesity.</a> Int J Obes (Lond). 37 (5), 625-633 (2013).</li><li>Hosoda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimum+collection+and+storage+conditions+for+ghrelin+measurements:+octanoyl+modification+of+ghrelin+is+rapidly+hydrolyzed+to+desacyl+ghrelin+in+blood+samples).">Optimum collection and storage conditions for ghrelin measurements: octanoyl modification of ghrelin is rapidly hydrolyzed to desacyl ghrelin in blood samples).</a> Clin Chem. 50 (6), 1077-1080 (2004).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RAPID+method+for+blood+processing+yields+new+insight+in+plasma+concentrations+and+molecular+forms+of+circulating+gut+peptides.">The RAPID method for blood processing yields new insight in plasma concentrations and molecular forms of circulating gut peptides.</a> Endocrinology. 150 (11), 5113-5118 (2009).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+differentially+decreases+plasma+acyl+and+desacyl+ghrelin+levels+in+rats:+Potential+role+of+the+circulating+ghrelin-acylating+enzyme+GOAT.">Lipopolysaccharide differentially decreases plasma acyl and desacyl ghrelin levels in rats: Potential role of the circulating ghrelin-acylating enzyme GOAT.</a> Peptides. 31 (9), 1689-1696 (2010).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+ambient+temperature+reverses+abdominal+surgery-induced+delayed+gastric+emptying+and+decreased+plasma+ghrelin+levels+in+rats.">Cold ambient temperature reverses abdominal surgery-induced delayed gastric emptying and decreased plasma ghrelin levels in rats.</a> Peptides. 31, 2229-2235 (2010).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+administration+of+pan-somatostatin+agonist+ODT8-SST+prevents+abdominal+surgery-induced+inhibition+of+circulating+ghrelin,+food+intake+and+gastric+emptying+in+rats.">Central administration of pan-somatostatin agonist ODT8-SST prevents abdominal surgery-induced inhibition of circulating ghrelin, food intake and gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol Motil. 23 (7), e294-e308 (2011).</li><li>Stengel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+surgery+inhibits+circulating+acyl+ghrelin+and+ghrelin-O-acyltransferase+levels+in+rats:+role+of+the+somatostatin+receptor+subtype+2.">Abdominal surgery inhibits circulating acyl ghrelin and ghrelin-O-acyltransferase levels in rats: role of the somatostatin receptor subtype 2.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301, G239-G248 (2011).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+injection+of+urocortin+1+induces+a+CRF2+mediated+increase+in+circulating+ghrelin+and+glucose+levels+through+distinct+mechanisms+in+rats.">Intravenous injection of urocortin 1 induces a CRF2 mediated increase in circulating ghrelin and glucose levels through distinct mechanisms in rats.</a> Peptides. 39, 164-170 (2013).</li><li>Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Wang, L., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orexigenic+response+to+tail+pinch:+role+of+brain+NPY(1)+and+corticotropin+releasing+factor+receptors.">Orexigenic response to tail pinch: role of brain NPY(1) and corticotropin releasing factor receptors.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 306 (3), R164-R174 (2014).</li><li>Goebel, M., Stengel, A., Wang, L., Reeve, J., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+increases+plasma+levels+of+corticotropin-releasing+hormone+in+rats.">Lipopolysaccharide increases plasma levels of corticotropin-releasing hormone in rats.</a> Neuroendocrinology. 93 (3), 165-173 (2011).</li><li>Banfi, G., Salvagno, G. L., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+ethylenediamine+tetraacetic+acid+(EDTA)+as+in+vitro+anticoagulant+for+diagnostic+purposes.">The role of ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) as in vitro anticoagulant for diagnostic purposes.</a> Clin Chem Lab Med. 45 (5), 565-576 (2007).</li><li>Stengel, A., Wang, L., Goebel-Stengel, M., Tach&#233;, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrally+injected+kisspeptin+reduces+food+intake+by+increasing+meal+intervals+in+mice.">Centrally injected kisspeptin reduces food intake by increasing meal intervals in mice.</a> Neuroreport. 22 (5), 253-257 (2011).</li><li>De Bond, J. A., Smith, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kisspeptin+and+energy+balance+in+reproduction.">Kisspeptin and energy balance in reproduction.</a> Reproduction. 147 (3), R53-R63 (2014).</li><li>Wren, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+enhances+appetite+and+increases+food+intake+in+humans.">Ghrelin enhances appetite and increases food intake in humans.</a> J Clin Endocrinol Metab. 86 (12), 5992 (2001).</li><li>Schulman, J. L., Carleton, J. L., Whitney, G., Whitehorn, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+glucagon+on+food+intake+and+body+weight+in+man.">Effect of glucagon on food intake and body weight in man.</a> J Appl Physiol. 11 (3), 419-421 (1957).</li><li>Steinert, R. E., Poller, B., Castelli, M. C., Drewe, J., Beglinger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+administration+of+glucagon-like+peptide+1+or+peptide+YY+3-36+affects+food+intake+in+healthy+male+subjects.">Oral administration of glucagon-like peptide 1 or peptide YY 3-36 affects food intake in healthy male subjects.</a> Am J Clin Nutr. 92 (4), 810-817 (2010).</li><li>Dewan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+insulin-induced+hypoglycaemia+on+energy+intake+and+food+choice+at+a+subsequent+test+meal.">Effects of insulin-induced hypoglycaemia on energy intake and food choice at a subsequent test meal.</a> Diabetes Metab Res Rev. 20 (5), 405-410 (2004).</li><li>Schlogl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+24-hour+ad+libitum+food+intake+is+associated+with+lower+plasma+irisin+concentrations+the+following+morning+in+adult+humans.">Increased 24-hour ad libitum food intake is associated with lower plasma irisin concentrations the following morning in adult humans.</a> Appetite. 90, 154-159 (2015).</li><li>Heymsfield, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+leptin+for+weight+loss+in+obese+and+lean+adults:+a+randomized,+controlled,+dose-escalation+trial.">Recombinant leptin for weight loss in obese and lean adults: a randomized, controlled, dose-escalation trial.</a> JAMA. 282 (16), 1568-1575 (1999).</li><li>Shimizu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+administration+of+nesfatin-1+reduces+food+intake+in+mice:+the+leptin-independent+mechanism.">Peripheral administration of nesfatin-1 reduces food intake in mice: the leptin-independent mechanism.</a> Endocrinology. 150, 662-671 (2009).</li><li>Batterham, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+food+intake+in+obese+subjects+by+peptide+YY3-36.">Inhibition of food intake in obese subjects by peptide YY3-36.</a> N Engl J Med. 349 (10), 941-948 (2003).</li><li>Shibasaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+effect+of+somatostatin+on+corticotropin-releasing+factor-induced+anorexia+in+the+rat.">Antagonistic effect of somatostatin on corticotropin-releasing factor-induced anorexia in the rat.</a> Life Sci. 42 (3), 329-334 (1988).</li><li>Goebel-Stengel, M., Stengel, A., Tach&#233;, Y., Reeve, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+using+the+optimal+plasticware+and+glassware+in+studies+involving+peptides.">The importance of using the optimal plasticware and glassware in studies involving peptides.</a> Anal Biochem. 414 (1), 38-46 (2011).</li><li>Smets, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+plasma+levels+of+metastin+in+early+pregnancy+are+associated+with+small+for+gestational+age+neonates.">Decreased plasma levels of metastin in early pregnancy are associated with small for gestational age neonates.</a> Prenat Diagn. 28 (4), 299-303 (2008).</li><li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+is+a+growth-hormone-releasing+acylated+peptide+from+stomach.">Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach.</a> Nature. 402 (6762), 656-660 (1999).</li><li>Stengel, A., Yin Tach&#233;, Y., Yang, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=the+Gastric+X/A-like+Cell+as+Possible+Dual+Regulator+of+Food+Intake.">the Gastric X/A-like Cell as Possible Dual Regulator of Food Intake.</a> J Neurogastroenterol Motil. 18 (2), 138-149 (2012).</li><li>Inhoff, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desacyl+ghrelin+inhibits+the+orexigenic+effect+of+peripherally+injected+ghrelin+in+rats.">Desacyl ghrelin inhibits the orexigenic effect of peripherally injected ghrelin in rats.</a> Peptides. 29, 2159-2168 (2008).</li><li>Hirayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+effects+of+ghrelin+and+des-acyl+ghrelin+on+the+lumbo-sacral+defecation+center+and+regulation+of+colorectal+motility+in+rats.">Contrasting effects of ghrelin and des-acyl ghrelin on the lumbo-sacral defecation center and regulation of colorectal motility in rats.</a> Neurogastroenterol Motil. 22 (10), 1124-1131 (2011).</li><li>Horikoshi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+elevation+of+plasma+metastin+concentrations+in+human+pregnancy:+metastin+as+a+novel+placenta-derived+hormone+in+humans.">Dramatic elevation of plasma metastin concentrations in human pregnancy: metastin as a novel placenta-derived hormone in humans.</a> J Clin Endocrinol Metab. 88 (2), 914-919 (2003).</li><li>Yang, Y. U., Xiong, X. Y., Yang, L. I., Xie, L., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+of+kisspeptin+levels+in+girls+with+idiopathic+central+precocious+puberty+and+its+significance.">Testing of kisspeptin levels in girls with idiopathic central precocious puberty and its significance.</a> Exp Ther Med. 9 (6), 2369-2373 (2015).</li><li>Hosoda, H., Kojima, M., Matsuo, H., Kangawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+and+des-acyl+ghrelin:+two+major+forms+of+rat+ghrelin+peptide+in+gastrointestinal+tissue.">Ghrelin and des-acyl ghrelin: two major forms of rat ghrelin peptide in gastrointestinal tissue.</a> Biochem Biophys Res Commun. 279 (3), 909-913 (2000).</li><li>Raff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+and+active+ghrelin+in+developing+rats+during+hypoxia.">Total and active ghrelin in developing rats during hypoxia.</a> Endocrine. 21 (2), 159-161 (2003).</li><li>Evans, M. J., Livesey, J. H., Ellis, M. J., Yandle, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+anticoagulants+and+storage+temperatures+on+stability+of+plasma+and+serum+hormones.">Effect of anticoagulants and storage temperatures on stability of plasma and serum hormones.</a> Clin Biochem. 34 (2), 107-112 (2001).</li><li>Nabuchi, Y., Fujiwara, E., Kuboniwa, H., Asoh, Y., Ushio, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability+and+degradation+pathway+of+recombinant+human+parathyroid+hormone:+deamidation+of+asparaginyl+residue+and+peptide+bond+cleavage+at+aspartyl+and+asparaginyl+residues.">The stability and degradation pathway of recombinant human parathyroid hormone: deamidation of asparaginyl residue and peptide bond cleavage at aspartyl and asparaginyl residues.</a> Pharm Res. 14 (12), 1685-1690 (1997).</li><li>White, A., Handler, P., Smith, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Biochemistry. , (1973).</li></ol>

Nós relatado anteriormente que o método rápido para processamento de sangue melhorou a recuperação para 11/12 peptídeos em comparação com o processamento de sangue padrão em ratos 6. No presente estudo demonstrámos que este método é também adequado para a utilização em seres humanos. Na sequência de um tratamento rápido, a recuperação para 9 de 9 125 peptídeos I-rotulados testado foi melhorado em comparação com o processamento de sangue padrão (sangue EDTA em gelo). A melhori...

À luz da crescente prevalência de obesidade em todo o mundo 1,2, a pesquisa no campo da regulação da ingestão de alimentos está a ganhar importância. Embora até agora apenas um péptido é conhecido que está perifericamente produzido e actuando centralmente para estimular a ingestão de alimentos, ou seja, a grelina 3, dentro das últimas décadas, uma ampla variedade de péptidos foi identificado e reduzir a ingestão de alimentos, por exemplo. leptina, péptido YY (PYY) e também glucagon-like peptide-1 (GLP-1) e insulina 4, portanto, em estudos investigando os mecanismos de regulação dos níveis de fome e de péptidos saciedade são frequentemente avaliada e, ao mesmo tempo, é assumido que o péptido estudado seja estável e recuperados em rendimentos elevados durante a formação do plasma. No entanto, muitas vezes não é este o caso, devido à rápida desagregação endógena como mostrado anteriormente por ex. grelina que é degradada a partir de acilo para desacil grelina 5. Por isso, recentemente descreveu o método rápido para proces sanguecantar em ratos empregando temperaturas R educed, A cidification, P rotease inibição, eu sotopic controles exógenas e D ilution 6. Este método melhorou a recuperação para 11 dos 12 péptidos testados e permitidos para a determinação da forma molecular circulando correcta em relação ao padrão de processamento de sangue (sangue com EDTA em gelo) 6. Este método tem sido utilizado em vários estudos subsequentes 7-12 para a detecção de grelina de circulação, bem como o factor de libertação da corticotropina 13. Por isso, o método tem-se revelado útil para a pesquisa de péptidos em roedores. No entanto, uma vez que estudos com roedores não são sempre traduzível a outra espécie animal, o método deve ser estabelecida para o uso no sangue humano bem. O objetivo do presente estudo foi testar o método rápido para processamento de sangue em seres humanos em comparação com o processamento de sangue padrão, o sangue EDTA em gelo, que é amplamente recomendada 14 e frequentemente used no, bem como ambiente de pesquisa clínica. Testamos a recuperação de uma selecção de 125 péptidos I-rotulados envolvidas na regulação da ingestão de alimentos, incluindo péptidos estabelecidos, bem como novos candidatos recentemente sugerido para desempenhar um papel na alimentação de regulação (efeitos sobre o consumo de alimentos são mostrados na Tabela 1) após tratamento com ambos os métodos. As hormonas também foram escolhidos para representar péptidos de comprimento e carga (Tabela 2) diferente. Além disso, para a grelina foi investigada a forma (s) molecular seguindo o método padrão e RAPID. Por fim, avaliamos grelina endógena (acil e grelina desacil), bem como os níveis de kisspeptin, um peptídeo também sugeriu recentemente a desempenhar um papel na regulação da ingestão de alimentos 15,16 seguinte processamento rápido ou padrão. Além disso, também foi investigado estes níveis de péptido numa população de indivíduos com uma vasta gama de índice de massa corporal (variando 10,2-67,6 kg / m 2) para estudar podiferenças le relacionados ao peso corporal cronicamente alterado. <img alt="tabela 1" src="/files/ftp_upload/53959/53959table1.jpg" /><img alt="mesa 2" src="/files/ftp_upload/53959/53959table2.jpg" /> Diagnóstico, Avaliação e plano: Os participantes do estudo Todos os participantes do estudo foram pacientes recentemente hospitalizados (inclusão estava dentro de dois dias de admissão ao hospital) da Divisão de Medicina Psicossomática na Charité-Universitätsmedizin Berlim e deu consentimento informado por escrito. Para evitar qualquer impacto do gênero só foram incluídos pacientes do sexo feminino. Um total de 42 sujeitos participaram neste estudo e foram divididos em três grupos: peso normal (IMC 18,5-25 kg / m 2, n = 12), anorexia nervosa (IMC &lt;17,5 kg / m 2, n = 15) e obesidade (IMC&gt; 30 kg / m 2, n = 15). Anoréxica e pacientes obesos eramdiagnosticados de acordo com a Classificação Internacional de Doenças-10 e hospitalizado por ganho de peso (anorexia nervosa) ou redução do peso (obesidade), respectivamente. Todos os pacientes com peso normal foram hospitalizados exclusivamente devido a sintomas somatoformes sem perturbações somáticas relevantes. Foram excluídos pacientes com sintomas somatoformes gastrointestinais ou história de cirurgia gastrointestinal. Os critérios de exclusão também engloba uma idade &lt;18 anos, gravidez atual e doenças psicóticas não tratados. A colheita de sangue foi efectuada no dia 2 ou 3 após a admissão hospitalar antes de receber o tratamento dietético, a fim de aumentar ou reduzir o peso corporal, respectivamente. parâmetros antropométricos foram avaliados no mesmo dia.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1268">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">diprotin A</td>
			<td style="width:351px;">Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IDP-4132</td>
			<td style="width:456px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E-64-d</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IED-4321-v</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">antipain</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">IAP-4062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">leupeptin</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">ILP-4041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chymostatin</td>
			<td>Peptides International, Louisville, KY, USA</td>
			<td style="width:119px;">ICY-4063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sep-Pak C18 cartridges</td>
			<td>Waters Corporation, Milford, MA, USA</td>
			<td>WAT051910</td>
			<td>360 mg, 55-105 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acyl-ghrelin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9088-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GLP-1</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9035-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glucagon</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9030</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">insulin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9011S</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">leptin</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td style="width:119px;">9081-HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">kisspeptin-10</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-048-56</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nesfatin-1</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-003-26</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">PYY3-36</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-059-02&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">somatostatin-28</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">T-060-16&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ZORBAX Rapid Resolution HT SB-C18 column</td>
			<td>Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">822700-902</td>
			<td>2.1 x 50 mm, 1.8 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agilent 1200 LC&#160;</td>
			<td>Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>HPLC, several components, therefore no single catalog number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kisspeptin&#160; RIA</td>
			<td>Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA</td>
			<td># RK-048-56</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Total ghrelin RIA</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td># GHRT-89HK&#160;</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Active ghrelin RIA</td>
			<td>Millipore, Billerica, MA, USA</td>
			<td># GHRA-88HK</td>
			<td>Radioactive</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:343px;">SigmaStat 3.1</td>
			<td>Systat Software, San Jose, CA, USA</td>
			<td style="width:119px;">online download</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid method for blood processing to increase the yield of plasma peptide levels in human blood

A investigação no domínio da regulação da ingestão de alimentos está a ganhar importância. Isso muitas vezes inclui a medição de péptidos que regulam a ingestão de alimentos. Para a determinação correcta da concentração de um péptido, que deve ser estável durante o processamento do sangue. No entanto, este não é o caso de vários péptidos que são rapidamente degradadas por peptidases endógenas. Recentemente, foi desenvolvido um método de processamento de sangue empregando temperaturas R educed, A cidification, P rotease inibição, eu sotopic controles exógenas e D ilution (RAPID) para o uso em ratos. Aqui, nós estabelecemos esta técnica para o uso em humanos e investigados recuperação, forma molecular e circulando concentração de hormônios reguladores ingestão de alimentos. O método rápido melhorou significativamente a recuperação de 125 a somatostatina-28 (+ 39%) marcado com I, glucagon-like peptide-1 (+ 35%), grelina acilo e glucagon (+ 32%), a insulina e kisspeptin (+ 29% ), nesfatin-1 (+ 28%), a leptina(+ 21%) e péptido YY 3-36 (+ 19%) em comparação com o processamento padrão (sangue com EDTA em gelo, p &lt;0,001). cromatografia líquida de alta eficiência mostrou a eluição de grelina acil endógena na posição esperada após o processamento rápido, ao passo que após o processamento padrão de 62% da grelina acil foram degradados, resultando em um pico mais cedo provavelmente representando desacil grelina. Após o processamento RAPID a razão grelina acil / desacil no sangue de indivíduos com peso normal foi de 1: 3 em comparação com 01:23 seguimento de um tratamento padrão (p = 0,03). Também os níveis endógenos kisspeptin foram superiores após RAPID em comparação com o processamento padrão (+ 99%, p = 0,02). O método de transformação rápida de sangue pode ser usado em seres humanos, produz níveis mais elevados de péptidos e permite a avaliação da forma molecular correcto.

Processamento de sangue RAPID aumenta o rendimento de 125 peptídeos I-radiomarcados no sangue humano em relação ao processamento de sangue padrão. Após o processamento padrão de sangue (sangue com EDTA em gelo), a recuperação dos péptidos radiomarcados foi de ~ 60% em 9/9 péptidos (variando 48-68%, Figura 1A - K). Um rápido processamento melhorado o rendimento em todos os 125 péptidos I-rotulados, nomeadamente na ...

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A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Um método rápido para processamento de sangue para aumentar o rendimento dos níveis plasmáticos de peptídeos no sangue humano

O método de transformação rápida de sangue pode ser usado em seres humanos e produz níveis mais elevados de péptidos, bem como permite a avaliação da forma molecular correcto. Portanto, este método vai ser uma ferramenta valiosa na investigação peptídeo.

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Esgotamento das populações de células específicas de Esgotamento Complemento

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Imunologia e Infecção

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolamento de células de camundongo Peritoneal Cavity

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

Purificação da população de células específicas de separação de células de fluorescência Ativado (FACS)

Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Apresentando tensão de cisalhamento em o Estudo da adesão bacteriana

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Alta capacidade método de detecção de vírus Influenza

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

Antígenos funcionais protegidos glóbulos vermelhos pela membrana enxerto de compactos Poligliceróis hiper

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Rápida identificação de bactérias gram-negativas de Sangue Cultura Caldo Usando MALDI-TOF Espectrometria de Massa

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

Cultura de macrófagos macrófagos Colony estimulante fator diferenciado Humano monócitos derivados

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

A Fluxo Simples Citometria método para medir glicose Captação e expressão de transportadores de glicose para monócitos subpopulações em sangue total

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...