Name: intra-tracheal administration of haemophilus influenzae in mouse models to study airway inflammation
Uploaded: 2016-03-02T15:00:00
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We thank Dr. Carson Harrod for critical reading of the manuscript. We also thank Mr. Minghui Zeng and Drs. Mahesh Kathania and Prashant Khare for their contributions. This work was supported by grants from the American Cancer Society (Research Scholar grant, 122713-RSG-12-260-01-LIB) and the Sammons Cancer Center (Pilot Project grant) to K. Venuprasad.

सभी प्रयोगों संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) Baylor अनुसंधान संस्थान के दिशा निर्देशों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया। 1. संवर्धन गैर typeable हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा (NTHi) और Inoculum तैयारी <ol><li>...

<ol>
	<li>Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+physiological+roles+of+inflammation.">Origin and physiological roles of inflammation.</a> Nature. 454, 428-435 (2008).</li><li>Grivennikov, S. I., Greten, F. R., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity,+inflammation,+and+cancer.">Immunity, inflammation, and cancer.</a> Cell. 140, 883-899 (2010).</li><li>Barnes, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+asthma+and+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Immunology of asthma and chronic obstructive pulmonary disease.</a> Nat Rev Immunol. 8, 183-192 (2008).</li><li>Sethi, S., Murphy, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+in+the+pathogenesis+and+course+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Infection in the pathogenesis and course of chronic obstructive pulmonary disease.</a> N Engl J Med. 359, 2355-2365 (2008).</li><li>King, P. T., Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lung+Immune+Response+to+Nontypeable+Haemophilus+influenzae+(Lung+Immunity+to+NTHi).">The Lung Immune Response to Nontypeable Haemophilus influenzae (Lung Immunity to NTHi).</a> J Immunol Res. 2015, 706376 (2015).</li><li>Kapur, N., Grimwood, K., Masters, I. B., Morris, P. S., Chang, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lower+airway+microbiology+and+cellularity+in+children+with+newly+diagnosed+non-CF+bronchiectasis.">Lower airway microbiology and cellularity in children with newly diagnosed non-CF bronchiectasis.</a> Pediatr Pulmonol. 47, 300-307 (2012).</li><li>King, P. T., Holdsworth, S. R., Freezer, N. J., Villanueva, E., Holmes, P. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+lysate+induces+aspects+of+the+chronic+obstructive+pulmonary+disease+phenotype.">Haemophilus influenzae lysate induces aspects of the chronic obstructive pulmonary disease phenotype.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 38, 629-638 (2008).</li><li>Rajagopalan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+exposure+to+bacterial+superantigens+induces+airway+inflammation+in+HLA+class+II+transgenic+mice.">Intranasal exposure to bacterial superantigens induces airway inflammation in HLA class II transgenic mice.</a> Infect Immun. 74, 1284-1296 (2006).</li><li>Ganesan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastase/LPS-exposed+mice+exhibit+impaired+innate+immune+responses+to+bacterial+challenge:+role+of+scavenger+receptor+A.">Elastase/LPS-exposed mice exhibit impaired innate immune responses to bacterial challenge: role of scavenger receptor A.</a> Am J Pathol. 180, 61-72 (2012).</li><li>Hogner, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-expressed+IFN-beta+contributes+to+apoptotic+alveolar+epithelial+cell+injury+in+severe+influenza+virus+pneumonia.">Macrophage-expressed IFN-beta contributes to apoptotic alveolar epithelial cell injury in severe influenza virus pneumonia.</a> PLoS Pathog. 9, e1003188 (2013).</li><li>Karisola, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+Natural+Killer+T+Cells+Play+a+Role+in+Chemotaxis,+Complement+Activation+and+Mucus+Production+in+a+Mouse+Model+of+Airway+Hyperreactivity+and+Inflammation.">Invariant Natural Killer T Cells Play a Role in Chemotaxis, Complement Activation and Mucus Production in a Mouse Model of Airway Hyperreactivity and Inflammation.</a> PloS one. 10, e0129446 (2015).</li><li>Theivanthiran, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+E3+ubiquitin+ligase+Itch+inhibits+p38alpha+signaling+and+skin+inflammation+through+the+ubiquitylation+of+Tab1.">The E3 ubiquitin ligase Itch inhibits p38alpha signaling and skin inflammation through the ubiquitylation of Tab1.</a> Sci Signal. 8, 22 (2015).</li><li>Venuprasad, K., Zeng, M., Baughan, S. L., Massoumi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifaceted+role+of+the+ubiquitin+ligase+Itch+in+immune+regulation.">Multifaceted role of the ubiquitin ligase Itch in immune regulation.</a> Immunol Cell Biol. , (2015).</li><li>Decramer, M., Janssens, W., Miravitlles, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Chronic obstructive pulmonary disease.</a> Lancet. 379, 1341-1351 (2012).</li></ol>

इस के साथ साथ, हम एक जीवाणु फेफड़ों रोगज़नक़ के साथ चूहों के फेफड़ों टीका लगाना लिए एक अनूठा और न्यूनतम इनवेसिव प्रक्रिया का वर्णन है। हम जानते हैं कि इस प्रक्रिया चूहों कि भड़काऊ संकेत दे रास्ते के जी?...

सूजन संक्रामक एजेंटों के खिलाफ रक्षा की एक मौलिक प्रतिरक्षा तंत्र है। यह रोगज़नक़ उन्मूलन और क्षतिग्रस्त ऊतकों की मरम्मत को बढ़ावा देता है। यह भी एक सामान्य स्वस्थ राज्य के लिए 1 वसूली की सुविधा। हालांकि, dysregulated सूजन अक्सर पुराने भड़काऊ रोगों 2 की ओर जाता है। Airway सूजन क्रोनिक प्रतिरोधी फेफड़े के रोग (सीओपीडी), अस्थमा और फेफड़े फाइब्रोसिस 3 के रूप में अलग अलग फेफड़े के रोगों के लिए एक प्रारंभिक ट्रिगर है। गैर typeable (unencapsulated) हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा (NTHi) पुरानी ऊपरी और निचले फेफड़ों भड़काऊ रोगों 4,5 के साथ जुड़ा हुआ है। यह क्रोनिक प्रतिरोधी फेफड़े के रोग 4,6,7 के साथ बच्चों और वयस्कों के निचले वायुमार्ग से पृथक प्रमुख प्रजातियों है। NTHi संक्रमण के बाद भड़काऊ प्रतिक्रिया (जैसे TNF और आईएल 1β के रूप में) proinflammatory साइटोकिन्स के अपरेगुलेशन के द्वारा होती है, और यह ख मध्यस्थता हैY माइटोजन सक्रिय प्रोटीन काइनेज (MAPK) और परमाणु कारक-κB (एनएफ-κB) टोल की तरह रिसेप्टर्स के माध्यम से (TLRs) 8। माउस मॉडल क्योंकि अलग अलग जीन की कमी लाइनों की उपलब्धता के फेफड़ों की सूजन की बीमारी अंतर्निहित विकृति का विश्लेषण करने के लिए बहुत उपयोगी उपकरण हैं। कई तरीकों को लाइव / तनु बैक्टीरिया और intranasal टपकाना और aerosolized साँस लेना 9,10 सहित बैक्टीरियल उत्पादों, टीका लगाना करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। यहाँ, हम इंट्रा-सांस की नली टपकाना प्रदर्शित करता है। हालांकि कम अक्सर इस्तेमाल किया, इस दृष्टिकोण और अधिक कुशल और अत्यधिक कम श्वसन तंत्र के लिए inoculum के प्रत्यक्ष वितरण की वजह से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="705">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Chocolate agar plate</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">CAS50-99-7</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Dextrose Anhydrous</td>
			<td style="width:127px;">Themo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">R01300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Heparin</td>
			<td style="width:127px;">Hospira,Inc</td>
			<td style="width:119px;">RL-3010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Deft quick solution</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td>GS500-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:293px;">Syringe needle 20/26G&#160;</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">(REF305115/175)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Iml syringe</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Catheter 20GA</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 381433</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Scissors, straight, 10 cm long</td>
			<td>kentscientific</td>
			<td>INS600393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iris Forceps, serrated, 10cm long</td>
			<td>kentscientific</td>
			<td>INS650915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezer #5 Stainless steel, 11cm long</td>
			<td>kentscientific</td>
			<td>INS600095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">10% Formalin</td>
			<td style="width:127px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">CAS 67-56-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Agarose</td>
			<td style="width:127px;">peqlab</td>
			<td style="width:119px;">35-1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">5ml polystyrene round-bottom tubes</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">1.5 ml Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:127px;">Light Labs</td>
			<td style="width:119px;">A-7001-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Reasy Mini&#160; kit&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Pellet pestile motor (Tissue homoginizer)</td>
			<td style="width:127px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">Z359971-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">96 well microtiter plates V bottom</td>
			<td style="width:127px;">Thermo</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">1X PBS</td>
			<td style="width:127px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">OneComp eBeads</td>
			<td style="width:127px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">01-1111-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">CD45.2-APC</td>
			<td style="width:127px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">17-0454-81</td>
			<td>Working dilution 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Ly-6G-eFlor 450</td>
			<td style="width:127px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">48-5931-82</td>
			<td>Working dilution 1:100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">BSA</td>
			<td style="width:127px;">HyClone</td>
			<td style="width:119px;">SH30574.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">RBC Lysis Buffer (10X)</td>
			<td style="width:127px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">420301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Live/Dead fixable aqua dead cell stain kit</td>
			<td style="width:127px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">L-34957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">EDTA (0.5M)</td>
			<td style="width:127px;">lifetechnologies</td>
			<td style="width:119px;">15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">CD16/CD32 FcBlock</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">553142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Facs tubes polystyrene round bottom tube</td>
			<td style="width:127px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:127px;">Polyscience</td>
			<td style="width:119px;">4018</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-tracheal administration of haemophilus influenzae in mouse models to study airway inflammation

यहाँ, हम कुशलतापूर्वक एक विस्तृत प्रक्रिया का वर्णन है और सीधे हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा देने चूहों के निचले इलाकों में सांस। हम एच तैयार करने के लिए प्रक्रिया का प्रदर्शन इन्फ्लुएंजा inoculum, एच के इंट्रा-सांस की नली टपकाना फेफड़ों में इन्फ्लुएंजा, ब्रांको-वायुकोशीय पानी से धोना तरल पदार्थ (BALF), BALF में प्रतिरक्षा कोशिकाओं का विश्लेषण, और आरएनए अलगाव अंतर जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए का संग्रह। यह प्रक्रिया किसी भी बैक्टीरिया, वायरस या कवक को फेफड़ों की सूजन की प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। प्रत्यक्ष सांस की नली टपकाना ज्यादातर intranasal या एयरोसोल साँस लेना प्रक्रियाओं से अधिक पसंद है क्योंकि यह अधिक कुशलता से कम अस्पष्टता के साथ निचले श्वसन तंत्र में बैक्टीरियल inoculum बचाता है।

इंट्रा-सांस की नली टपकाना BALF (चित्रा 1 ए, बाएं पैनल) खारा के साथ स्थापना की तुलना में ल्यूकोसाइट्स की एक उल्लेखनीय वृद्धि हुई संख्या में हुई। ल्यूकोसाइट्स का अंतर स्पष्ट रूप से वृद्धि ?...

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Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.

की इंट्रा-सांस की नली प्रशासन<em&gt; हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा</em&gt; माउस मॉडल में अध्ययन करने के लिए airway सूजन

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

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सह - संस्कृति के मॉडल Pseudomonas aeruginosa Biofilms लाइव मानव Airway कक्ष पर बढ़ी

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

एलर्जी airway सूजन फेफड़े के वृक्ष के समान सेल परिपक्वता और प्रवासन के दौरान विश्लेषण

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Polarized मानव airway के एक तरल से ढके संस्कृति की स्थापना उपकला Calu 3 मेजबान सेल श्वसन रोगज़नक़ों रिस्पांस कोशिकाओं के अध्ययन<em&gt; इन विट्रो में</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

विवो इमेजिंग विधि में तीव्र और जीर्ण सूजन भेद

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Chimeric माउस मॉडल में संयोजक फ्लू के टीके की intranasal प्रशासन mucosal प्रतिरक्षण अध्ययन करने के लिए

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

इन्फ्लुएंजा ए वायरस nucleoprotein के साथ माउस MX1 प्रोटीन की सह immunoprecipitation

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

माउस तिल्ली से अपरिवर्तनीय प्राकृतिक हत्यारा टी कोशिकाओं को अलग करने और विस्तार के लिए एक अनुकूलित विधि

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

बढ़ी हुई वसूली समय और LPS प्रशासन में कमी लिमिटेड भड़काऊ प्रतिक्रियाओं में वेगस तंत्रिका उत्तेजना तंत्र का अध्ययन करने

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

प्रेसिजन कटौती माउस फेफड़े स्लाइस लाइव फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं कल्पना करने के लिए

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...