Name: methods to study mrp4-containing macromolecular complexes in the regulation of fibroblast migration
Uploaded: 2016-05-19T14:00:00
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This work was supported by National Institutes of Health grants R01-DK080834 and R01-DK093045. We thank J. Denise Wetzel, CCHMC Medical Writer, for editing of the manuscript.

1. Ingenuity Pathway Analysis <ol><li> Uploading Protein-interactome Dataset <ol><li> Insérer les protéines / gènes d&#39;intérêt dans une feuille de calcul avec leurs identificateurs uniques de gènes (de préférence des symboles de gènes et des numéros d&#39;identification de gènes tels qu&#39;ils sont obtenus avec des données de spectrométrie de masse). </li><li> Attribuer une colonne dans la feuille de calcul pour le numéro d&#39;identification de gènes et une colonne pour la valeur d&#39; observation...

<ol>
	<li>Ridley, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+integrating+signals+from+front+to+back.">Cell migration: integrating signals from front to back.</a> Science. 302 (5651), 1704-1709 (2003).</li><li>Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration:+a+physically+integrated+molecular+process.">Cell migration: a physically integrated molecular process.</a> Cell. 84 (3), 359-369 (1996).</li><li>Arora, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cyclic+nucleotide+signaling:+a+question+of+when,+where,+and+why?.">Compartmentalization of cyclic nucleotide signaling: a question of when, where, and why?.</a> Pflugers Arch. 465 (10), 1397-1407 (2013).</li><li>Howe, A. K., Baldor, L. C., Hogan, B. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+distribution+of+protein+kinase+A+activity+during+cell+migration+is+mediated+by+A-kinase+anchoring+protein+AKAP+Lbc.">Spatial distribution of protein kinase A activity during cell migration is mediated by A-kinase anchoring protein AKAP Lbc.</a> J Biol Chem. 284 (9), 5956-5967 (2009).</li><li>Weaver, A. M., Young, M. E., Lee, W. L., Cooper, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+signals+to+the+Arp2/3+complex.">Integration of signals to the Arp2/3 complex.</a> Curr Opin Cell Biol. 15 (1), 23-30 (2003).</li><li>Le Clainche, C., Carlier, M. 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B., Masereeuw, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multidrug+resistance+protein+4+(MRP4/ABCC4):+a+versatile+efflux+tra+(7),+2888-289nsporter+for+drugs+and+signalling+molecules.">Multidrug resistance protein 4 (MRP4/ABCC4): a versatile efflux tra (7), 2888-289nsporter for drugs and signalling molecules.</a> Trends Pharmacol Sci. 29 (4), 200-207 (2008).</li><li>Cheepala, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+nucleotide+compartmentalization:+contributions+of+phosphodiesterases+and+ATP-binding+cassette+transporters.">Cyclic nucleotide compartmentalization: contributions of phosphodiesterases and ATP-binding cassette transporters.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 53, 231-253 (2013).</li><li>Sinha, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-drug+resistance+protein+4+(MRP4)-mediated+regulation+of+fibroblast+cell+migration+reflects+a+dichotomous+role+of+intracellular+cyclic+nucleotides.">Multi-drug resistance protein 4 (MRP4)-mediated regulation of fibroblast cell migration reflects a dichotomous role of intracellular cyclic nucleotides.</a> J Biol Chem. 288 (6), 3786-3794 (2013).</li><li>Popovici, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+heterologous+approaches+to+identify+the+LET-756/FGF+interactome.">Direct and heterologous approaches to identify the LET-756/FGF interactome.</a> BMC Genomics. 7 (105), (2006).</li><li>Soler-Lopez, M., Zanzoni, A., Lluis, R., Stelzl, U., Aloy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactome+mapping+suggests+new+mechanistic+details+underlying+Alzheimer's+disease.">Interactome mapping suggests new mechanistic details underlying Alzheimer's disease.</a> Genome Res. 21 (3), 364-376 (2011).</li><li>Sinha, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKA+and+actin+play+critical+roles+as+downstream+effectors+in+MRP4-mediated+regulation+of+fibroblast+migration.">PKA and actin play critical roles as downstream effectors in MRP4-mediated regulation of fibroblast migration.</a> Cell Signal. 27 (7), 1345-1355 (2015).</li><li>Liu, L., Wang, Y. 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Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+encoded+reporters+of+protein+kinase+A+activity+reveal+impact+of+substrate+tethering.">Genetically encoded reporters of protein kinase A activity reveal impact of substrate tethering.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (26), 14997-15002 (2001).</li><li>Sinha, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forster+resonance+energy+transfer+-+an+approach+to+visualize+the+spatiotemporal+regulation+of+macromolecular+complex+formation+and+compartmentalized+cell+signaling.">Forster resonance energy transfer - an approach to visualize the spatiotemporal regulation of macromolecular complex formation and compartmentalized cell signaling.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (10), 3067-3072 (2014).</li><li>Sato, M., Ozawa, T., Inukai, K., Asano, T., Umezawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+indicators+for+imaging+protein+phosphorylation+in+single+living+cells.">Fluorescent indicators for imaging protein phosphorylation in single living cells.</a> Nat Biotechnol. 20 (3), 287-294 (2002).</li><li>Allen, M. D., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+dynamics+of+protein+kinase+A+activity+visualized+by+FRET-based+reporters.">Subcellular dynamics of protein kinase A activity visualized by FRET-based reporters.</a> Biochem Biophys Res Commun. 348 (2), 716-721 (2006).</li><li>Ananthanarayanan, B., Ni, Q., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+propagation+from+membrane+messengers+to+nuclear+effectors+revealed+by+reporters+of+phosphoinositide+dynamics+and+Akt+activity.">Signal propagation from membrane messengers to nuclear effectors revealed by reporters of phosphoinositide dynamics and Akt activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (42), 15081-15086 (2005).</li><li>Yamaguchi, H., Condeelis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+the+actin+cytoskeleton+in+cancer+cell+migration+and+invasion.">Regulation of the actin cytoskeleton in cancer cell migration and invasion.</a> Biochim Biophys Acta. 1773 (5), 642-652 (2007).</li><li>Lamalice, L., Le Boeuf, F., Huot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+migration+during+angiogenesis.">Endothelial cell migration during angiogenesis.</a> Circ Res. 100 (6), 782-794 (2007).</li><li>Ghosh, M. C., Makena, P. S., Gorantla, V., Sinclair, S. E., Waters, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CXCR4+regulates+migration+of+lung+alveolar+epithelial+cells+through+activation+of+Rac1+and+matrix+metalloproteinase-2.">CXCR4 regulates migration of lung alveolar epithelial cells through activation of Rac1 and matrix metalloproteinase-2.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (9), L846-L856 (2012).</li><li>Vicente-Manzanares, M., Webb, D. J., Horwitz, A. 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Cell migration is an intricate process that plays indispensable roles in many important physiological events including wound healing1,2. Aberrant cell migrations may cause catastrophic events, such as tumor metastasis and angiogenesis24,25. Therefore, fine-tuned regulation of cell migration is required to maintain normal body function.
Using high-content microscopy18, we demonstrated that MRP4-deficient MEFs migrate faster compared to wild-type fibroblasts...

La migration cellulaire est un processus en plusieurs étapes compliquées. Des études ont montré que, pendant les cellules de migration sont polarisés en bords avant et arrière. En adhérant à la matrice extracellulaire, le bord d&#39;attaque fournit la traction nécessaire pour le corps de la cellule à se déplacer vers l&#39;avant. Enfin, les bords de fuite libère les pièces jointes arrière et complète le 1,2 du cycle de migration. Cellule polarisation pour la migration cellulaire efficace est régulée par la ségrégation spatiale de la signalisation intracellulaire. Seconds messagers cellulaires, tels que l&#39; AMPc, la médiation de la compartimentation des événements de signalisation nécessaires pour affiner directionnelle 3,4 de migration cellulaire. Accumulations préférentielles de AMPc et AMPc-kinase dépendante de l&#39; activité PKA à la fine pointe jouent un rôle clé dans la migration cellulaire directionnelle 5,6. Par phosphorylant petites GTPases tels que substrat liés à Ras toxine botulique C3 (Rac) et le contrôle de la division cellulaire protéine 42 homologue ou Cdc42, PKA active la protéine apparentée à l&#39; actine 2/3 (2/3 Arp) au niveau du bord d&#39; attaque et induit la formation de lamellipodes 7-9. PKA phosphoryle également un agent anti-bouchage, vasodilatateur phosphoprotéine stimulée (VASP), régule ainsi les cycles d&#39;oscillation de l&#39; extension de la membrane et la rétraction 10,11. Dans les cellules, les taux d&#39;AMPc sont régies par trois processus principaux: i) la synthèse de l&#39; adénylate cyclase, ii) la dégradation par phosphodiestérases, et iii) le transport par membranaires transporteurs d&#39; efflux 3. Polychimiothérapie protéine de résistance 4 (MRP4), membre de ATP-binding cassette (ABC) famille de transporteurs membranaires, fonctionne comme un transporteur d&#39;efflux endogène des nucléotides cycliques. Par conséquent, MRP4 peut réguler les taux d&#39;AMPc intracellulaires et dépendante de l&#39; AMPc cellulaire de signalisation 11-13. Nous avons précédemment montré que , dans MRP4 - / -, les fibroblastes contiennent des niveaux relativement élevés de nucléotides cycliques et migrent plus rapidement car rapport à MRP4 + / + 14 fibroblastes. Nous avons également signalé un effet biphasique de nucléotides cycliques sur la migration des fibroblastes. Basé sur des études antérieures et nous avons conclu que MRP4 - / - fibroblastes contiennent AMPc plus polarisée au cours de la migration, nous avons émis l&#39; hypothèse que ce règlement MRP4 médiation de la migration des fibroblastes est AMPc dépendante. Afin de comprendre le mécanisme en aval, nous avons pris une approche directe encore aux multiples facettes. Afin d&#39;identifier les protéines associées et en interaction avec MRP4, on a immunoprécipité des complexes macromoléculaires contenant MRP4-de cellules HEK293 qui expriment plus MRP4. En utilisant la spectrométrie de masse, nous avons identifié plusieurs protéines MRP4 interagissant et analysé leur interconnectivité en utilisant Ingenuity Pathway Analysis (IPA). IPA est un outil utile pour analyser les interactions protéine-protéine (à la fois structurelles et fonctionnelles) et d&#39;explorer leurs contributions en particulier physiologiques et pathologiquesévénements basés sur la littérature et des preuves expérimentales 15,16. CPl a indiqué que la F-actine est une cible en aval de la majeure MRP4 dans le contexte de la migration des cellules où l&#39; AMPc et du GMPc sont la clé de 17 molécules de signalisation. Ces données ont été confirmées par une teneur élevée microscopie. La microscopie à haute teneur peut capturer et analyser les comportements cellulaires telles que la migration des cellules d&#39;une manière plus commode, précis et à haut débit 18. Les données à haute teneur en microscopie ont démontré que l&#39;effet de MRP4 sur la migration des fibroblastes est complètement abolie perturbation du cytosquelette d&#39;actine ou de l&#39; inhibition de la PKA 17. En outre, nous avons utilisé un transfert d&#39;énergie par résonance Förster (FRET) à base de capteur PKA pour surveiller la dynamique PKA dans les cellules de la migration en temps réel. Capteurs de kinase à base de FRET se composent généralement de peptides de substrat de phosphorylation spécifiques flanquées de PCP et fluorophores YFP 19-21. pmAKAR3 est un amélioré et moiMbrane ciblé PKA capteur basé sur le FRET qui contient le domaine forkhead 1 associé (FHA1) et la séquence de substrat PKA LRRATLVD 5,22. Phosphorylation de pmAKAR3 par les PKA catalytic subunit augmente FRET signal entre CFP et YFP 19. L&#39; insertion d&#39;un domaine de modification des lipides dans le capteur cible à la membrane du plasma pour le contrôle dynamique de la PKA, notamment au niveau du compartiment de la membrane 23. Utilisation de pmAKAR3, nous avons démontré que la pointe de la migration MRP4 - / - fibroblastes présentaient une activité PKA plus polarisée MRP4 + / + fibroblastes, qui à son tour augmenté la formation d&#39;actine corticale au bord d&#39; attaque de la cellule 17. Ensemble, ces événements ont donné lieu à une meilleure polarisation cellulaire et la migration cellulaire directionnelle plus rapide en l&#39;absence de MRP4. Notre approche spécifique et directe a identifié des cibles en aval clés pour MRP4 et fournit un élément important, mais commed&#39;encore inexplorée mécanisme de régulation de MRP4 dépendant de la migration des fibroblastes.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="950">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td style="width:324px;">Invitrogen(Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">11668-027</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IncuCyte Zoom</td>
			<td style="width:324px;">Essen BioScience</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96-well IncuCyte Image-Lock microplates&#160;</td>
			<td>Essen BioScience</td>
			<td style="width:187px;">4493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Latrunculin B</td>
			<td style="width:324px;">Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).</td>
			<td>L5288</td>
			<td>Stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">H-89</td>
			<td style="width:324px;">Enzo Life Sciences (Farmingdale, NY)</td>
			<td>BML-EI196</td>
			<td>Stock in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35-mm glass-bottomed dishes&#160;</td>
			<td style="width:324px;">(MatTek Corporation; Ashland, MA)</td>
			<td style="width:187px;">P35G-1.5-20-C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:324px;">Sigma-Aldrich (St. Louis, MO).</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Opti-MEM Reduced Serum Media</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">31985-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">FRET microscopy system</td>
			<td>Olympus inverted microscope (IX51)</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">CCD camera&#160;</td>
			<td style="width:324px;">Hamamatsu, Japan</td>
			<td style="width:187px;">ORCA285</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">SlideBook software 5.5</td>
			<td style="width:324px;">Intelligent Imaging Innovation ( Denver, CO)</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ingenuity Pathway Analysis software</td>
			<td>IPA, QIAGEN Redwood City,</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forskolin</td>
			<td>Tocris (Ellisville, MO).&#160;</td>
			<td style="width:187px;">1099</td>
			<td>Stock in100% EtOH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM F-12&#160;&#160;</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">11330-057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">14025-134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Excel</td>
			<td style="width:324px;">Microsoft</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">PBS</td>
			<td style="width:324px;">Invitrogen(Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Trypsin/EDTA Solution (TE)</td>
			<td style="width:324px;">Invitrogen(Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td>R-001-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:324px;">Invitrogen(Carlsbad, CA)&#160;</td>
			<td style="width:187px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods to study mrp4-containing macromolecular complexes in the regulation of fibroblast migration

Polychimiothérapie protéine de résistance 4 (MRP4) est un membre de la famille des cassettes de liaison ATP des transporteurs membranaires et est un transporteur d&#39;efflux endogène des nucléotides cycliques. En modulant la concentration intracellulaire de nucléotides cycliques, MRP4 peut réguler des événements cellulaires multiples dépendant nucléotidiques cycliques, y compris la migration cellulaire. Précédemment, nous avons démontré qu&#39;en l&#39;absence de MRP4, les cellules fibroblastiques contiennent des niveaux plus élevés de nucleotides cycliques intracellulaires et peuvent migrer plus rapidement. Pour comprendre les mécanismes sous-jacents de cette constatation, nous avons adopté une approche directe encore aux multiples facettes. Tout d&#39;abord, nous avons isolé les complexes potentiels de protéines qui interagissent de MRP4 à partir d&#39;un système de pile à MRP4 surexpression utilisant une immunoprécipitation suivie d&#39;une spectrométrie de masse. Après l&#39;identification des protéines uniques dans le interactome MRP4, nous avons utilisé Ingenuity Pathway Analysis (IPA) pour étudier le rôle de ces interactions protéine-protéine dans le contexte de la transduction du signal. Nous élucidé le potentiel rôle du complexe protéique MRP4 dans la migration cellulaire et identifié F-actine comme un médiateur majeur de l&#39;effet de MRP4 sur la migration cellulaire. Cette étude a également souligné le rôle de l&#39;AMPc et GMPc comme des acteurs clés dans les phénomènes migratoires. En utilisant la microscopie à haute teneur, nous avons effectué des analyses de cellules migration et observé que l&#39;effet de MRP4 sur la migration des fibroblastes est complètement abolie par la perturbation du cytosquelette d&#39;actine ou l&#39;inhibition de l&#39;AMPc-dépendante kinase A (PKA). Pour visualiser les modulations de signalisation dans une cellule de la migration en temps réel, nous avons utilisé un capteur à base de FRET pour mesurer l&#39; activité PKA et trouvé, la présence de l&#39; activité PKA plus polarisée près de la pointe de la migration MRP4 - / - fibroblaste, par rapport à MRP4 + / + fibroblastes. Cela augmente la formation d&#39;actine corticale et augmenté le processus de migration. Notre approche permet d&#39;identifier les protéines qui agissent en aval MRP4 et nous donne une plusvue du mécanisme impliqué dans la régulation de MRP4 dépendant de la migration des fibroblastes.

Pour étudier l&#39;effet de MRP4 sur la migration des fibroblastes, nous avons utilisé un test de cicatrisation en utilisant la microscopie à haute teneur en 14. Plaies précises ont été réalisées sur des monocouches confluentes de FAE soit isolées à partir MRP4 - / - ou MRP4 des souris + / +, et les images ont été prises à des intervalles de 1 h à 24 h. Nous avons observé un taux de migration plus élevé...

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Methods to Study Mrp4-containing Macromolecular Complexes in the Regulation of Fibroblast Migration

MRP4 réglemente les divers événements de signalisation nucléotidiques dépendant cycliques, y compris un rôle récemment élucidé dans la migration cellulaire. Nous décrivons une approche directe, mais à multiples facettes pour démêler les cibles moléculaires en aval de MRP4 aboutissant à l&#39;identification d&#39;un interactome MRP4 unique qui joue un rôle clé dans la régulation de fine de la migration des fibroblastes.

Méthodes pour l&#39;étude de complexes macromoléculaires contenant MRP4 dans le règlement du fibroblaste Migration

Multidrug resistance protein 4 (MRP4) is a member of the ATP-binding cassette family of membrane transporters and is an endogenous efflux transporter of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Poisson zèbre kératocyte explants d&#39;étudier la migration cellulaire collective et réépithélialisation dans la cicatrisation cutanée plaies

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Recherche

Biologie du développement

Stable and Efficient Genetic Modification of Cells in the Adult Mouse V-SVZ for the Analysis of Neural Stem Cell Autonomous and Non-autonomous Effects

Stable et efficace modification génétique de cellules dans le Adulte souris V-SVZ pour l&#39;analyse des cellules souches neurales autonome et effets non autonomes

Relatively quiescent somatic stem cells support life-long cell renewal in most adult tissues. Neural stem cells in the adult mammalian brain are ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimisation du dosage Blessure Scratch pour détecter les changements dans murin mésenchymateuses stromales migration cellulaire Après Dommages par Soluble Extrait Cigarette Smoke

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae

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Méthodes pour examiner la lymphe et Gland hémocytes dans<em&gt; Drosophila</em&gt; larves

Many parallels exist between the Drosophila and mammalian hematopoietic systems, even though Drosophila lack the lymphoid lineage that characterize ...

Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained Tribolium castaneum Embryos

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Feuille à base de lumière de la vie Microscopie Fluorescence ou fixe et Stained<em&gt; Tribolium castaneum</em&gt; embryons

The red flour beetle Tribolium castaneum has become an important insect model organism in developmental genetics and evolutionary developmental biology. ...

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

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Méthodes pour l’étude de la régénération de Stentor

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

Direct Lineage Reprogramming of Adult Mouse Fibroblast to Erythroid Progenitors

Diriger la lignée reprogrammation de fibroblastes de souris adulte de progéniteurs érythroïdes

Erythroid cell commitment and differentiation proceed through activation of a lineage-restricted transcriptional network orchestrated by a group of cell ...

Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

Visualisation de la Migration cellulaire tangentielle dans le Tectum optique de poussin en développement

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster

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Méthodes pour tester la perturbation endocrinienne dans le mélanogaster drosophila

In recent years there has been growing evidence that all organisms and the environment are exposed to hormone-like chemicals, known as endocrine disruptor ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Hybridation in situ à monture entière chez les embryons de poissons zèbres et l’essai de formation de tubes dans iPSC-ECs pour étudier le rôle de l’Endoglin dans le développement vasculaire

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