Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00
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Alcune delle figure in questo manoscritto sono stati generosamente fornito dal laboratorio di Bart O. Williams. Gli autori sono supportati dal National Cancer Institute concede U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 E.

Questo protocollo incontra e segue le linee guida stabilite dal Comitato Istituzionale cura degli animali e Usa Johns Hopkins University. 1. Micro-dissezione una prostata mouse <ol><li> Eutanasia il mouse per asfissia anidride carbonica o un metodo approvato alternativo in conformità con le linee guida per la cura degli animali e uso istituzionale. </li><li> Pin il mouse nella posizione supina ad una tavola di dissezione mettendo un perno attraverso ciascuno dei quattro zampe. </li><li> Spruzzare la addome co...

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	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Prostate micro-dissezione consente di sperimentazione specifici lobi e analisi della prostata mouse (Figura 1). Nei modelli di topo geneticamente, fenotipi possono essere visti in un lobo che non si vede in altri. Inoltre, per l&#39;analisi istologica, questo protocollo assicura che la massima quantità di tessuto prostatico puro può essere sezionato e macchiato, senza altri tessuti del tratto urogenitale presenti nella sezione. Infine, per gli esperimenti a cella singola, questo protocollo permette pe...

La prostata è il sito più comune di cancro negli uomini negli Stati Uniti. Quasi 220.000 uomini ogni anno saranno con diagnosi di cancro alla prostata, e circa 27.000 uomini soccombere alla loro malattia 1. Gli uomini hanno un rischio 1 a 7 vita di una diagnosi di cancro alla prostata negli Stati Uniti 1. Iperplasia prostatica benigna (BPH), un noncancerous ingrandimento legata all&#39;età della prostata, è anche una condizione molto diffusa, che colpisce oltre l&#39;80% degli uomini oltre 80 2. In quanto tale, la prostata è al centro di molte ricerche. Modelli di topo sono stati utilizzati ampiamente per studiare le malattie della prostata 3. Nel complesso, la prostata mouse è un ottimo rappresentante della ghiandola umana 4, ma ci sono somiglianze e le differenze tra il mouse e anatomia della prostata umana e fisiologia 5. In entrambe le specie, la prostata si trova alla base della vescica, che circonda l&#39;uretra. La prostata di essere una sola loessere, diviso in quattro zone: centrale, di transizione, periferiche, e stroma fibromuscolare anteriore. Al contrario, la prostata mouse è suddiviso in tre lobi accoppiati a diverse posizioni intorno all&#39;uretra: anteriore, ventrale e dorsolateral. A livello cellulare, la differenza principale è che la cellula basale rapporto cellulare luminale nell&#39;uomo è di circa 1: 1, ma è 1: 4 in topi 6. Lo stroma murino è inoltre differente nei topi relativi agli esseri umani - esseri umani hanno più estesa muscolatura liscia, mentre lo strato muscolare è molto più sottile nella prostata murino. La corretta identificazione, la dissezione, e la manipolazione della prostata del mouse sono essenziali per la ricerca del mouse prostata. i livelli ormonali influenzano drasticamente lo sviluppo e l&#39;omeostasi della ghiandola prostatica in entrambi gli uomini e topi. Mentre gli estrogeni sembra giocare un ruolo nello sviluppo della prostata 7, l&#39;ormone più importante nella prostata è testosterone. Il testosterone è essenziale per uno sviluppo ghiandolared manutenzione. Dopo castrazione fisica o chimica, circa il 90% delle cellule luminali del Apoptose adulti prostata, e la ghiandola restringe. Se il testosterone viene reintrodotto ad un individuo in condizioni di castrazione, la prostata è in grado di rigenerarsi a piena capacità. Il testosterone sembra anche a guidare il cancro alla prostata, che è il motivo per cui la terapia di deprivazione androgenica è una strategia terapeutica di uso comune. Tuttavia, molti tumori della prostata diventano resistenti alla deprivazione androgenica. Inoltre, gli uomini sottoposti a terapia di deprivazione androgenica per il trattamento del cancro alla prostata sottoposti a cicli di condizioni castrati e rigenerati. Nel topo, la castrazione chirurgica, insieme con la rigenerazione ormonale della prostata reintroducendo il testosterone, è un importante strumento con cui studiare la resistenza castrazione e gli effetti del testosterone in bicicletta sulla prostata. In questo articolo, si discuterà e dimostrare le tecniche adeguate in base ai quali Locatee micro-sezionare una prostata mouse, nonché chirurgicamente castrare un mouse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="741">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Surgical tools</td>
			<td style="width:145px;">Roboz</td>
			<td style="width:113px;">Various</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">OCT medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td style="width:239px;">Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td align="right">10010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Johns Hopkins</td>
			<td></td>
			<td>Also available from vendors online</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cautery Pen</td>
			<td>Medline</td>
			<td>ESCT002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silk suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>M-S330R19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Wound Clips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9265</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Tutti i sei lobi della prostata sono stati rimossi da un mouse via prostata micro-dissezione (Figura 1). Il tratto urogenitale completa (UGT) è composta da tutti i lobi della prostata, della vescica, vescicole seminali, e l&#39;uretra (Figura 1A). I vasi deferenti attribuisce al uretra, ma non è necessaria per la prostata micro-dissezione, e possono quindi essere staccati prima della rimozione della UGT tagliando l&#39;uretra (Figura 1b-1c).</s...

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Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Questo manoscritto descrive i protocolli per la prostata micro-dissezione e la castrazione chirurgica nel topo di laboratorio. Noi raffiguriamo anche risultati rappresentativi prodotti da questi protocolli. Infine, si discute i vantaggi e l&#39;utilizzo di questi protocolli.

Murino della prostata Micro-dissezione e la castrazione chirurgica

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Valutazione della captazione nanoparticelle nei tumori in tempo reale utilizzando intravitale Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

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Medicina

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A Novel Modello murino di fistola artero-venosa Fallimento: la procedura chirurgica in dettaglio

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Utilizzando Saccadometry con stimolazione cerebrale profonda per studiare normali e patologiche funzione cerebrale

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

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Videomicroscopia microscopia del sistema vascolare del tumore-associati utilizzando avanzate dorsale dello Skinfold finestra Chambers su topi transgenici fluorescenti

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Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

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Utilizzo In Vitro cellule vive di Imaging per esplorare chemioterapici consegnato da nanoparticelle di basata sui lipidi

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

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Trattamento chirurgico per l'iperplasia prostatica benigna: Holmium Laser Enucleation della prostata (HoLEP).

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