Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00
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Algumas das figuras neste manuscrito foram generosamente fornecidos pelo laboratório de Bart O. Williams. Os autores são suportados pelo Instituto Nacional do Câncer concede U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 E.

Este protocolo cumpre e segue as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Johns Hopkins. 1. Micro-dissecando um rato próstata <ol><li> Euthanize o mouse por asfixia com dióxido de carbono ou por um método alternativo aprovado em conformidade com as orientações de cuidados de animais e uso institucional. </li><li> Pin o rato em decúbito dorsal para um quadro de dissecção, colocando um pino através de cada uma das quatro patas. </li><li> Pulverizar o abdômen...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium.">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li><li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland.">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li><li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Próstata de micro-dissecção de experimentação específica permite-lobo e análise da próstata de ratinho (Figura 1). Em modelos de rato geneticamente modificadas, fenótipos podem ser vistos em um lóbulo que não é observada em outros. Além disso, para análise histológica, este protocolo garante que a quantidade máxima de tecido da próstata puro pode ser seccionados e corados, sem outros tecidos do tracto urogenital presente na secção. Finalmente, para experiências de uma única célula,...

A próstata é o local mais comum de câncer em homens em os EUA. Cerca de 220.000 homens cada ano serão diagnosticados com câncer de próstata, e aproximadamente 27.000 homens vai sucumbir à sua doença 1. Os homens têm um risco de 1 em 7 vida de um diagnóstico de câncer de próstata em os EUA 1. Hiperplasia benigna da próstata (HBP), uma ampliação não canceroso relacionada com a idade da próstata, é também uma condição generalizada, afectando mais de 80% dos homens com mais de 80 2. Como tal, a próstata é o foco de consideráveis ​​pesquisas. Modelos de ratos têm sido amplamente utilizados para estudar doenças da próstata 3. No geral, a próstata do rato é um excelente representante da glândula humano 4, mas há semelhanças e diferenças entre rato e anatomia da próstata e fisiologia humana 5. Em ambas as espécies, a próstata está localizada na base da bexiga, em torno da uretra. A próstata humana é uma única Loser, dividido em quatro zonas: central, de transição, periférica e estroma fibromuscular anterior. Em contraste, a próstata do rato é composto por três lóbulos emparelhados em diferentes posições em torno da uretra: anterior, ventral, e dorsolateral. A um nível celular, a principal diferença é que a célula basal a proporção de células em luminal humana é de cerca de 1: 1, mas é de 1: 4 em ratinhos 6. O estroma murino também é diferente em ratinhos relativamente a seres humanos - os seres humanos têm mais extenso do músculo liso, enquanto que a camada muscular é muito mais fina na próstata murina. A adequada identificação, dissecção, e manipulação da próstata do rato são essenciais para a investigação do mouse próstata. Os níveis hormonais afectar drasticamente o desenvolvimento e a homeostase da glândula da próstata em humanos e ratos. Enquanto estrogénio parece desempenhar um papel no desenvolvimento da próstata 7, a hormona mais importante na próstata é a testosterona. A testosterona é essencial para um desenvolvimento glandulard manutenção. No seguimento de castração química ou física, aproximadamente 90% das células luminais na apoptose adulta próstata e a glândula encolhe. Se a testosterona é reintroduzido a um indivíduo em condições de castração, a próstata é capaz de regenerar-se a plena capacidade. A testosterona também parece dirigir o cancro da próstata, que é por terapia de privação de androgénio é uma estratégia terapêutica utilizada. No entanto, muitos cânceres de próstata se tornam resistentes à privação de andrógeno. Além disso, homens submetidos a terapia de privação de andrógeno para o tratamento de câncer de próstata submetidos a ciclos de condições castrados e regeneradas. No ratinho, a castração cirúrgica, juntamente com regeneração hormonal da próstata através da reintrodução de testosterona, é uma ferramenta importante para estudar com os quais a resistência a castração e os efeitos da testosterona sobre ciclismo da próstata. Neste artigo, vamos discutir e demonstrar as técnicas adequadas que permitam locatE e micro-dissecção de próstata de rato, assim como na cirurgia de castrar um rato.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="741">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Surgical tools</td>
			<td style="width:145px;">Roboz</td>
			<td style="width:113px;">Various</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">OCT medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td style="width:239px;">Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td align="right">10010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Johns Hopkins</td>
			<td></td>
			<td>Also available from vendors online</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cautery Pen</td>
			<td>Medline</td>
			<td>ESCT002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silk suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>M-S330R19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Wound Clips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9265</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Todos os seis lóbulos da próstata foram removidos a partir de um rato através de micro-dissecção de próstata (Figura 1). O tracto urogenital completo (UGT) é constituído por todos os lóbulos da próstata, da bexiga, vesícula seminal, e da uretra (Figura 1A). Os canais deferentes atribui à uretra, mas é desnecessário para próstata micro-dissecação, e pode, portanto, ser separado antes da remoção da UGT cortando a uretra (Figura 1...

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Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Este manuscrito descreve os protocolos de próstata micro-dissecção e castração cirúrgica no rato de laboratório. Nós também retratam resultados representativos produzidos por estes protocolos. Finalmente, discutimos as vantagens e utilização desses protocolos.

Murino próstata Micro-dissecção e castração cirúrgica

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Avaliação de Captação de nanopartículas em tumores em tempo real usando imagens intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Medicina

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Um Modelo murino de próstata humana Metástase Ortotópico

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

Um Modelo murino Novel de Fístula Arteriovenosa Falha: O procedimento cirúrgico em Detalhe

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Usando Saccadometry com Estimulação Cerebral Profunda para estudar normal e patológico função cerebral

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Pré-clínica Ortotópico Modelo murino de cancro da próstata humano

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

A microscopia intravital da vasculatura Tumor-associado usando avançada Dorsal câmaras de janela dobras cutâneas em ratos transgênicos fluorescentes

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Usando em Vitro viver-pilha de imagem para explorar Chemotherapeutics entregues por nanopartículas de lipídios-baseado

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Tratamento cirúrgico para a hiperplasia prostática benigna: Holmium Laser Enucleação da próstata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Microdissecação do órgão do esmalte do incisivo de ratos expostos a tóxicos ambientais

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

Gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia Radical murino

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...