Name: murine prostate micro-dissection and surgical castration
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration at JoVE.com

Några av siffrorna i detta manuskript var generöst tillhandahålls av laboratoriet av Bart O. Williams. Författarna stöds av National Cancer Institute ger U54CA143803, CA163124, CA093900 OCH CA143055.

Detta protokoll uppfyller och följer de riktlinjer som fastställts av Johns Hopkins University Institutional Animal Care och användning kommittén. 1. Mikro dissekera en mus Prostate <ol><li> Euthanize musen genom kvävning med koldioxid eller en alternativ godkänd metod i enlighet med institutionella riktlinjer djurskötsel och användningsområden. </li><li> Stift musen i ryggläge till en dissektion ombord genom att sätta ett stift genom vart och ett av de fyra tassar. </li><li> Spraya buken med 70% et...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia.">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li><li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+prostate+cancer.">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238 (2011).</li><li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice:+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee.">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li><li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models.">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li><li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium.">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li><li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland.">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li><li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia.">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li><li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells.">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li><li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men--warning:+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males,+respectively.">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer.">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li><li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy.">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li><li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+prostate+cancer:+new+prospects+for+old+challenges.">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li></ol>

Prostata mikro-dissektion möjliggör lob specifika experiment och analys av mus prostata (Figur 1). I genetiskt modifierade musmodeller kan fenotyper ses i en lob som inte syns i andra. Även för histologisk analys, försäkrar detta protokoll att den maximala mängden ren prostatavävnad kan sektioneras och färgas, utan andra urogenitalsystemet vävnader som finns i avsnittet. Slutligen, för encelliga experiment, ger detta protokoll för isolering av nästan rena prostataceller. Epitelceller anrikn...

Prostatan är den vanligaste platsen för cancer hos män i USA. Nästan 220.000 män varje år kommer att diagnostiseras med prostatacancer, och cirka 27.000 män kommer att ge efter för sin sjukdom en. Män har en 1 i 7 livstidsrisken för en prostatacancer diagnos i USA ett. Godartad prostataförstoring (BPH), en åldersrelaterad noncancerous förstoring av prostatan, är också en utbredd sjukdom, som påverkar mer än 80% av män över 80 två. Som sådan är prostatan i fokus för omfattande forskning. Musmodeller har använts i stor utsträckning för att studera sjukdomar i prostata 3. Sammantaget är musen prostatan en utmärkt representant för den mänskliga körtel 4, men det finns likheter och skillnader mellan mus och människa prostata anatomi och fysiologi 5. Hos båda arterna, är prostata belägen vid basen av urinblåsan, som omger urinröret. Den humana prostatakörteln är en enda lovara uppdelad i fyra zoner: central, övergång, perifer och främre fibromuskulär stroma. I motsats till detta mus prostata består av tre parade lober vid olika positioner runt urinröret: anterior, ventrala och dorsolaterala. På en cellulär nivå, är den huvudsakliga skillnaden att den basala cellen till luminala cellförhållandet i människa är ca 1: 1, men det är 1: 4 i möss 6. Den murina stroma är också annorlunda i möss i förhållande till människor - människor har mer omfattande glatt muskulatur, medan muskellagret är mycket tunnare i murin prostata. Korrekt identifiering, dissektion och hantering av mus prostata är avgörande för mus prostata forskning. Hormonnivåer drastiskt påverka utveckling och homeostas av prostatakörteln hos både människor och möss. Medan östrogen verkar spela en roll i prostata utveckling 7, är det viktigaste hormonet i prostata testosteron. Testosteron är nödvändigt för körtel utveckling end underhåll. Efter antingen fysikalisk eller kemisk kastrering, krymper ca 90% av den luminala celler i den vuxna prostata apoptose, och bussningen. Om testosteron återinförs till en individ i kastrerings förhållanden, är prostata kan regenerera sig till full kapacitet. Testosteron verkar också för att driva prostatacancer, vilket är anledningen till androgendeprivationterapi är ett vanligt använt terapeutisk strategi. Men många prostatacancer blivit resistenta mot androgendeprivation. Dessutom män som genomgår androgendeprivationterapi för behandling av prostatacancer genomgår cykler av kastrerade och regenere villkor. I mus, kirurgisk kastrering, tillsammans med hormonella regenerering av prostata genom att återinföra testosteron, är ett viktigt verktyg för att studera kastrering motstånd och effekterna av testosteron cykling på prostatan. I denna artikel kommer vi att diskutera och påvisa tekniker som att Locate och mikro-dissekera en mus prostata, såväl som att kirurgiskt kastrera en mus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="741">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:244px;">Surgical tools</td>
			<td style="width:145px;">Roboz</td>
			<td style="width:113px;">Various</td>
			<td style="width:239px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">OCT medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td style="width:239px;">Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td align="right">10010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Johns Hopkins</td>
			<td></td>
			<td>Also available from vendors online</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cautery Pen</td>
			<td>Medline</td>
			<td>ESCT002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silk suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>M-S330R19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Wound Clips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9265</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine prostate micro-dissection and surgical castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

Alla sex prostata loberna avlägsnades från en mus via prostatamikro dissektion (Figur 1). Den fullständiga urogenitalsystemet (UGT) är sammansatt av alla prostata lober, urinblåsan, sädesblåsorna och urinröret (Figur 1A). Sädesledaren fäster till urinröret, men är onödigt för prostata mikro-dissektion, och kan därmed lösgöras före avlägsnande av UGT genom att skära urinröret (figur 1b-1c). Den urogenitalsystemet för...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration at JoVE.com

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Detta manuskript beskriver protokollen för prostatamikro dissekering och kirurgisk kastrering i laboratoriet musen. Vi skildrar också representativa resultat som produceras av dessa protokoll. Slutligen, vi diskutera fördelar och användning av dessa protokoll.

Murin Prostate Micro-dissektion och kirurgisk kastrering

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Utvärdering av nanopartiklar Upptag i tumörer i realtid med hjälp Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

En Orthotopic Murina Model of Human Prostate cancer metastaser

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

A Novel Murina Modell av arteriovenös fistel Fel: det kirurgiska ingreppet i detalj

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

Använda Saccadometry med Deep Brain Stimulation till Normal och Patologisk hjärnfunktion

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Preklinisk Orthotopic musmodell av human prostatacancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

Intravital mikroskopi av tumör-associerad vaskulatur använder avancerade dorsala Skinfold fönster Chambers på transgena fluorescerande möss

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Med In Vitro Live-cell Imaging att utforska kemoterapeutika levereras av Lipid-baserade nanopartiklar

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Kirurgisk behandling av godartad prostataförstoring: Holmium Laser Enucleation av prostata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Micro-dissektion av emalj Organ från Mandibular framtand hos råttor exponerade för miljögifter

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

Genererar en murin ortotop metastaserande bröstcancer Cancer modell och utför murina radikal mastektomi

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...