Name: preparation and analysis of in vitro three dimensional breast carcinoma surrogates
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00
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The University of Alabama at Birmingham Center for Metabolic Bone Disease performed the histologic processing and sectioning of surrogates. Southern Research (Birmingham, AL) provided support for the manufacture of the bioreactor system. Funding was provided by the United States Department of Defense Breast Cancer Research Program (BC121367).

1.細胞培養<ol><li>氷上、4℃で一晩BM成分を解凍。 </li><li> 37℃に温培地。両方の231細胞およびCAFの成長を支持するために、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）+ 10％ウシ胎児血清（FBS）を使用します。 注： 使用される媒体は、細胞の種類および実験目的に依存するであろう。 </li><li>近くコンフルエント231細胞の培養皿（10センチメートル）から培地を除去し、1.5ミリリットルのト?...

<ol>
	<li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer.">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integr Biol (Camb). 3 (1), 31-38 (2011).</li><li>Horning, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-D+tumor+model+for+in+vitro+evaluation+of+anticancer+drugs.">3-D tumor model for in vitro evaluation of anticancer drugs.</a> Mol Pharm. 5 (5), 849-862 (2008).</li><li>Dhiman, H. K., Ray, A. R., Panda, A. 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本明細書において、3D培養の方法は、より密接にモデルヒト乳癌は概括的な3D形態の開発を可能にする量で、細胞外マトリックス（ECM）およびヒト間質線維芽細胞を含む組織の微小環境の成分を組み込むことが記載されています。記載の三次元培養法は、ECMの三次元ボリュームに組み込まれている、複数の細胞型における従来の2D細胞培養物よりも、ヒト疾患のより代表的です。組織構造、微?...

より正確にインビボでの腫瘍アーキテクチャおよび微小環境を模倣する三次元（3D）培養モデルは、細胞とその微小環境との間の複雑な相互作用を分析するために候補治療法の有効性を試験することを目的とした研究のために重要です。腫瘍次元への影響の酸素と栄養勾配、薬物暴露、間質圧/血液の流れ、および3Dアーキテクチャ1-4の均一性。適切な間質微小環境の存在は、腫瘍の次元と影響細胞のECMシグナリングおよびストローマ細胞と悪性上皮細胞間の傍分泌シグナル伝達に貢献しています。細胞機能に対する腫瘍の次元と微小環境の影響はよく両方の要因が、薬物応答1,3,5-8を変更することで、確立されています。さらに、細胞増殖動態、代謝率、および細胞シグナル伝達は、これらの要因がaffeで、3Dで2次元（2D）文化と文化の間で異なります細胞応答1,3,8-10を cting。 インビトロでは 、腫瘍微小環境代理代表ECM成分および間質細胞の集団を含むことによって調節することができます。悪性上皮細胞はさらに、腫瘍の伝播5,6,10を阻害するためにECMおよび癌関連間質細胞のいずれかによって腫瘍の進行を促進するための相乗/保護方法で、または抑制の方法で影響を受けています。いずれかの文脈では、基質は、薬物送達1,6を減少パラ分泌シグナル伝達を介して、および/ ​​または、その結果、腫瘍内の間質圧力を増加させることによって、治療応答および薬物送達に影響を与えることができます。したがって、前臨床モデルへのECMとの間質細胞の添加は、2D培養で十分にモデル化することができない腫瘍の特徴を再現するのに役立ちます。 ECM成分とsを含む概括的微小環境を組み込む乳癌サロゲートを確立するために、本明細書の方法3D体積tromal細胞は、記載されています。乳癌では、間質細胞集団は主に癌関連線維芽細胞（CAF）および間質ECMから構成されているが、主としてラミニンおよびコラーゲンIV型を含む基底膜に見出されるマトリックス成分のより少ない割合でI型コラーゲンで構成されています1,4,11-13。したがって、乳癌の微小環境（ すなわち、CAF、コラーゲンI、および基底膜）のこれらの構成要素は、サロゲートに組み込まれています。この方法は、固体の、非灌流3D代用物（ 図1A）を生成するために使用することができ、またはバイオリアクターシステム（ 図1B）を介してサロゲートを通して培地の灌流を含むように適合させることができます。両方のアプローチは、ここで説明されています。この方法はまた、腫瘍関連マクロファージのような他の間質要素を含むように改変され得る、または必要に応じて、細胞とECMの成分を調整することにより、他の固形腫瘍をモデル化します。 <pクラスここで説明乳癌サロゲートの場合= &quot;jove_content&quot;&gt;我々は、MDA-MB-231を利用している（231）乳癌細胞株、CAFは、以前にヒト乳癌14、及びIは、（90％のコラーゲンからなるECMから単離されました6 mg / mlで）および10％の増殖因子低減基底膜材料（BM）。サロゲートは、いずれか8ウェルチャンバースライド（固体サロゲート）に成長させるか、バイオリアクターシステムは、連続的栄養かん流（灌流サロゲート）を提供するために利用されます。 ECMを含有する細胞の量を収容することができる任意の灌流バイオリアクターシステム15を使用することができます。例として、私たちは私たちのバイオリアクターシステムにおける組織サロゲートの調製を記載します。このシステムは、社内で開発され、市販されていないました。ここで我々の焦点は、3D組織代替物の調製および分析上にあるので、私たちは私たちのバイオリアクターシステムの製造及び組み立ての仕様に関する広範な詳細に行っていません。しかしながら、詳細な説明このシステムとその開発は16を発表してきました。このバイオリアクターシステムにおいては、ポリジメチルシロキサン（PDMS）流路は、PDMSフォームでサポートされているサロゲートを収容するために使用される（Calcagnile ら 17によって記載されたものと同様の方法を用いて形成されます）。このボリュームは、連続的に代理に酸素と栄養を供給するためにmicrophysiologicポンプを介して媒体によって灌流されている4マイクロチャンネル（直径各400ミクロン）によって貫通されています。 サロゲートの適切な分析は、治療または他の操作に応答した細胞機能に関する適切な情報を得るために重要です。サロゲートは、固定および処理後の分泌物、または組織切片上での分析のために、共焦点顕微鏡または非侵襲的イメージングの他の手段、馴化培地、または灌流液をアッセイすることによって間接的細胞解析を用いて、無傷のサロゲートの直接画像を含む様々な方法によって分析することができますにパラフィン。組織切片で評価することができるそのようなパラメータは、セル密度です。我々は、ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）で染色されたサロゲート組織切片の顕微鏡写真に適用される半自動画像処理技術を用いて細胞密度（ すなわち、断面積当たりの有核細胞数）を測定するための一つのアプローチを提示します。細胞密度は、時間の経過または様々な増殖条件および処理の結果は、細胞数の相対的な変化の指標として用いることができます。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" /> 図1の3次元ボリュームとバイオリアクターシステム。 3Dソリッドサロゲートを生成するためのプロセスのA）概略図。トップ：ECMを含む固体3Dボリュームの漫画（ピンク）、上皮癌細胞（黄色）、およびCAF（オレンジ）。下：サロゲートを含む8ウェルチャンバースライドの上面図B）概略工程の灌流3Dのサロゲートを生成します。トップ：CA培地灌流およびECMを含む（ピンク）、上皮癌細胞（黄色）、およびCAF（オレンジ色）を可能にするためのチャネルを有する3Dボリュームのrtoon。中央：PDMSフォーム（黒矢印）を含むPDMS流路の画像は、細胞+ ECMを注入し、直径400μmの測定ポリマー被覆ステンレス鋼線（ピンク色矢印）によって貫通されます。底：サロゲートを含有する連続媒体灌流を可能にするバイオリアクターシステムに接続されたPDMS流路の画像（蠕動ポンプと媒体リザーバ図示せず）とC）培養後、固体及び灌流サロゲート両方の処理ステップの写真。左：ゲルとサロゲートを処理する検体を含むcryomoldの画像。ミドル：固定され、処理サロゲートを含むパラフィンブロックの画像。右：サロゲートのH＆E染色した組織学的セクションとスライドガラスの画像<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">表示するには、こちらをクリックしてください。</a>この図の拡大版。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="465">
	<tbody>
		<tr height="94">
			<td height="94" style="height:94px;width:131px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagel Medium 1x (DMEM)</td>
			<td style="width:107px;">Corning CellGro</td>
			<td style="width:107px;">10-014-CV</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:131px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:107px;">Atlanta Biologicals</td>
			<td style="width:107px;">S11150</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:131px;">0.25% Trypsin + 2.21 mM EDTA 1x</td>
			<td style="width:107px;">Corning</td>
			<td style="width:107px;">25-053-CI</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:131px;">Tissue Culture plates, 100mm</td>
			<td style="width:107px;">CellTreat Scientific Products</td>
			<td style="width:107px;">229620</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:131px;">Tissue Culture plates, 35mm</td>
			<td style="width:107px;">CellTreat Scientific Products</td>
			<td style="width:107px;">229638</td>
			<td style="width:121px;">For PDMS foam formation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:131px;">9&#34; Glass pipette</td>
			<td style="width:107px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:107px;">13-678-20D</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="68">
			<td height="68" style="height:68px;width:131px;">10 ml pipette</td>
			<td style="width:107px;">CellTreat Scientific Products</td>
			<td style="width:107px;">229210B</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:131px;">1000 &#181;l piptette tips</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">02-717-166</td>
			<td style="width:121px;">Sterile Filtered</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:131px;">200 &#181;l pipette tips</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">02-717-141</td>
			<td style="width:121px;">Sterile Filtered</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:131px;">10 &#181;l pipette tips</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">02-717-158</td>
			<td style="width:121px;">Sterile Filtered</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:131px;">15 ml conical tubes</td>
			<td style="width:107px;">CellTreat Scientific Products</td>
			<td style="width:107px;">229410</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:131px;">50 ml conical tubes</td>
			<td style="width:107px;">CellTreat Scientific Products</td>
			<td style="width:107px;">229422</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:131px;">1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">05-408-129</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:131px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:107px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:107px;">25-900-CI</td>
			<td style="width:121px;">Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="125">
			<td height="125" style="height:125px;width:131px;">Sylgard 184</td>
			<td style="width:107px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:107px;">24236-10</td>
			<td style="width:121px;">PDMS elastomer and curing agent. Used for our in-house bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:131px;">PDMS Foam</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:121px;">Made in-house for use in our in-house bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr height="86">
			<td height="86" style="height:86px;width:131px;">High Concentration Bovine Collagen Type I</td>
			<td style="width:107px;">Advanced Biomatrix</td>
			<td style="width:107px;">5133-A</td>
			<td style="width:121px;">FibriCol ~10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:131px;">Growth Factor Reduced Matrigel (Basement Membrane)</td>
			<td style="width:107px;">Corning</td>
			<td style="width:107px;">354230</td>
			<td style="width:121px;">Basement membrane material</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:131px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:107px;">Sigma</td>
			<td style="width:107px;">S8761</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:131px;">Molecular Biology Grade Water</td>
			<td style="width:107px;">Fisher</td>
			<td style="width:107px;">BP2819-1</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:131px;">DMEM 10x&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:107px;">D2429</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:131px;">Nunc Lab-Tek Chamber Slide System&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:107px;">177402</td>
			<td style="width:121px;">8-well</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:131px;">Bioreactor</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:121px;">Made in-house.</td>
		</tr>
		<tr height="185">
			<td height="185" style="height:185px;width:131px;">Spring-Back 304 Stainless Steel&#8212;Coated with PTFE polymer</td>
			<td style="width:107px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:107px;">1749T19</td>
			<td style="width:121px;">Stainless steel wires to generate microchannels in our in-house&#160; bioreactor system. 0.016&#34; Diameter</td>
		</tr>
		<tr height="154">
			<td height="154" style="height:154px;width:131px;">BioPharm Plus platinum-cured silicone pump tubing, L/S 14</td>
			<td style="width:107px;">Masterflex&#160;</td>
			<td style="width:107px;">EW-96440-14</td>
			<td style="width:121px;">For use in our in-house bioreactor system. Tubing ID: 1.6 mm, Hose barb size: 1/16 in.</td>
		</tr>
		<tr height="158">
			<td height="158" style="height:158px;width:131px;">2-Stop Tubing Sets, non-flared PVC, 1.52 mm ID</td>
			<td style="width:107px;">Cole-Parmer&#160;</td>
			<td style="width:107px;">EW-74906-36</td>
			<td style="width:121px;">For use in our in-house bioreactor system (with microperistalitic pump).&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="158">
			<td height="158" style="height:158px;width:131px;">Six Channel precision micro peristaltic pump</td>
			<td style="width:107px;">Cole-Parmer</td>
			<td style="width:107px;">EW-74906-04</td>
			<td style="width:121px;">For use with our in-house bioreactor system</td>
		</tr>
		<tr height="166">
			<td height="166" style="height:166px;width:131px;">Labtainer BPC Bag &#8211; 2 Ports, Luer Lock 
			50mL</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:107px;">&#8203;SH3065711</td>
			<td style="width:121px;">Example Media Reservoir&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="65">
			<td height="65" style="height:65px;width:131px;">Tuberculin Syringes</td>
			<td style="width:107px;">BD Medical</td>
			<td style="width:107px;">309625</td>
			<td style="width:121px;">26 gauge 3/8 in. needle; Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:131px;">Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">13-812-36</td>
			<td style="width:121px;">5.5 inch</td>
		</tr>
		<tr height="180">
			<td height="180" style="height:180px;width:131px;">Mini Tube Rotator</td>
			<td style="width:107px;">Boekel Scientific</td>
			<td style="width:107px;">260750</td>
			<td style="width:121px;">Equipment option for surrogate rotation. Used with carousel for 50 ml tubes (model number 260753)</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:131px;">50 ml tube carousel</td>
			<td style="width:107px;">Boekel Scientific</td>
			<td style="width:107px;">260753</td>
			<td style="width:121px;">Used with mini tube rotator</td>
		</tr>
		<tr height="88">
			<td height="88" style="height:88px;width:131px;">Bambino&#160; Hybridization Oven</td>
			<td style="width:107px;">Boekel Scientific</td>
			<td style="width:107px;">230301</td>
			<td style="width:121px;">Equipment option for surrogate rotation</td>
		</tr>
		<tr height="87">
			<td height="87" style="height:87px;width:131px;">HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:107px;">HG-4000-012</td>
			<td style="width:121px;">Specimen Processing Gel described in Step 5.2</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:131px;">Cryomold</td>
			<td style="width:107px;">Andwin Scientific</td>
			<td style="width:107px;">4566</td>
			<td style="width:121px;">15 mm x 15 mm x 5 mm</td>
		</tr>
		<tr height="192">
			<td height="192" style="height:192px;width:131px;">Tissue Marking Dye</td>
			<td style="width:107px;">Cancer Diagnostics, inc.&#160;</td>
			<td style="width:107px;">03000P</td>
			<td style="width:121px;">Can be used to mark surrogates,&#160; allowing multiple samples to be included in one tissue cassette&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:131px;">Hinged tissue cassettes&#160;</td>
			<td style="width:107px;">FisherBrand</td>
			<td style="width:107px;">22-272-416</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:131px;">Formalin</td>
			<td style="width:107px;">Fisher</td>
			<td style="width:107px;">23-245-685</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:131px;">GoldSeal Plain Glass Slides</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:107px;">3048-002</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:131px;">Xylene</td>
			<td style="width:107px;">Fisher</td>
			<td style="width:107px;">X3P-1GAL</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:131px;">Ethanol, 200 proof (100%), USP</td>
			<td style="width:107px;">Decon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:107px;">2805M</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="87">
			<td height="87" style="height:87px;width:131px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:107px;">7211</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="87">
			<td height="87" style="height:87px;width:131px;">Clarifier</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:107px;">7401</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="87">
			<td height="87" style="height:87px;width:131px;">Bluing Solution</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:107px;">7301</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="87">
			<td height="87" style="height:87px;width:131px;">Eosin Y</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:107px;">7111</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:83px;width:131px;">Cytoseal XYL mounting media</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:107px;">83124</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:131px;">Coverslips</td>
			<td style="width:107px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:107px;">12-548-5G</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and analysis of in vitro three dimensional breast carcinoma surrogates

三次元（3D）培養は、二次元培養物よりもin vitroでの細胞の挙動をモデル化するために、より生理学的に関連する方法です。乳癌を含む癌は、線維芽細胞および細胞外マトリックス（ECM）を含む、がん上皮細胞および間質成分からなる複雑な3次元組織です。しかし、乳癌のほとんどのin vitroモデルは、したがって、間質を省略し、唯一の癌上皮細胞からなり、そして、in vivoでの腫瘍の3Dアーキテクチャ。癌の適切な3Dモデリングは、腫瘍生物学、行動、および治療に対する反応の正確な理解のために重要です。しかし、3Dモデルの文化とボリュームの持続時間は、培養中の酸素や栄養素の利用可能性によって制限されます。ここで、我々は、乳癌上皮細胞及び間質線維芽細胞は、間質を含むとして培養することができる3D乳癌サロゲートを生成するECMに組み込まれた方法を示します固体の3D構造または酸素および栄養素を送達するための灌流バイオリアクターシステムを使用することによって。セットアップおよび初期成長期に続いて、サロゲートは、前臨床薬物試験のために使用することができます。代替的に、代理の細胞およびマトリックスの構成要素は、生物学的問題の様々な対処するために変更することができます。培養後、サロゲートを固定し、目的のパラメータの評価のために、臨床的乳癌試料の処理と同様に、パラフィンに処理されます。 ImageJのとCellProfiler画像解析ソフトウェアシステムは、サロゲートの組織切片の顕微鏡写真に適用され、説明されているそのようなパラメータ、存在する細胞の密度の評価は、面積当たりの有核細胞の数を定量します。これは、時間の経過とともに細胞数の変化または変動する成長条件および治療から得られた細胞数の変化の指標として使用することができます。

上述の7日間増殖させたような固体及び灌流の両方の3D乳癌代用物を調製しました。その後、サロゲートは、固定パラフィンように処理し、切片、および上記のように、ヘマトキシリン​​およびエオシンで染色しました。各サロゲートの面積当たりの有核細胞の数（両方とも231細胞及びCAF）を測定しました。 図12に見られるように、H＆E染色切片の代表的...

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Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

We demonstrate a method to generate 3D breast cancer surrogates, which can be cultured using a perfusion bioreactor system to deliver oxygen and nutrients. Following growth, surrogates are fixed and processed to paraffin for evaluation of parameters of interest. The evaluation of one such parameter, cell density, is explained.

の調製と分析<em&gt;インビトロ</em&gt;三次元乳癌サロゲート

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

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Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

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Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

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