Name: injection of syngeneic murine melanoma cells to determine their metastatic potential in the lungs
Uploaded: 2016-05-24T14:00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs at JoVE.com

بدعم جزئي من منحة المعهد الوطني للسرطان 1R03CA172923.

بيان الأخلاق: استخدام الفئران في البحث هو مقبول فقط في الحالات التي تكون فيها قد دفع التفاهم بين البشر من علم الأحياء أو نحو العلاج في نهاية المطاف من المرض. 1. الترتيب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شراء أنثى C57BL / 6 الفئران (سن 6-8 أسابيع)، 5 الفئران في المجموعة. تسمح عدة أيام للفئران لضبط. </li></ol> 2. إعداد الخلايا B16-BL6 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة لوحات زراعة الخلايا من الحاضنة 37 درجة ومكان في غطاء العقيمة. وينبغي أن تكون لوحات ما يقرب من 70٪ متموجة مع خلايا سرطان الجلد في الفئران-B16 BL6. والتقاء أكبر قد يغير الخلايا إمكانات النقيلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من 0.05٪ التربسين-EDTA لكل لوحة، اتركيه لمدة 1 دقيقة، ثم نضح الحل التربسين وسائل الإعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من التربسين في لوحة والعودة لوحات الحاضنة لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد انتقاله لوحات من الحاضنة إلى غطاء العقيمة، إضافة 4 مل من مصل خالية Rosewell من الحديقة التذكارية معهد ميديوم (RPMI) إلى كل لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الخلايا مع معقمة، ماصة الآلية. إخراج الخلايا ضد الجزء السفلي من لوحة، مع تلميح الضغط في زاوية طفيف جدا، لتفتيت الخلايا. كرر عدة مرات من أجل ضمان الفصل الكافي من كتل الخلايا، والتي قد تسد إلا إبرة طرد. يتذكر ونقل إلى 50 مل أنبوب مخروطي الشكل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام عدادة الكريات لتحديد كثافة الخلية. الحفاظ على العدد الكلي للخلايا B16-BL6 ثابت، وتحديد حجم خالية من المصل RPMI اللازم للوصول إلى تركيزات النهائي من 0، 0.065، 0.015، 0.25، و 0.5 مليون خلية / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على قدم المساواة قسامة وسائل الإعلام في أنبوب 50 مل إلى 15 مل أنابيب مخروطية. أنابيب الطرد المركزي المخروطية في 2250 x ج لمدة 5 دقائق. صب سائل الإعلام. إضافة حجم مناسب من المصل خالية RPMI والتأكد من كثافة الخلايا المطلوبة عبر عدادة الكريات. ضبط densities- بإضافة إضافية RPMI أو الغزل وإعادة التعليق في volume- أصغر وفقا لذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 500 ميكرولتركل تعليق خلية في المسمى 1.8 مل أنابيب على الجليد. </li></ol> 3. الذيل الوريد حقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ الماوس، الذي عقد من ذيله، وتوجيهها الخلفي لأول مرة في رادع الماوس. مع الجذع في القاعة الرئيسية للرادع، مع ذيل خارجها، وسحب الماوس نحو نهاية رادع. إدراج رادع، الغطاس، والاستمرار في دفع حتى الفأر هو آمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدوير الماوس 90 درجة من هذا القبيل أن أحد الأوردة الذيل الأفقي تواجه صعودا. باستخدام وسادة الكحول، بقوة تنظيف جوانب من ذيل فأر، وخاصة حيث الوريد الذيل هو الأكثر وضوحا. ملاحظة: الإضاءة الجيدة ضرورية من أجل ذيل فعال الوريد التصور على B57BL / 6J الفئران. مصابيح الحرارة أو منصات جراحة ساخنة، في حين ليس من الضروري، سوف يساعد أيضا عن طريق زيادة حجم الوريد الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غطاء الثقافة العقيمة، وجمع 300 ميكرولتر من وسائل الإعلام ثقافة الخلية من 2 مليون خلية أنبوب / مل. عكس إبرة، عبها الصورةبيئة تطوير متكاملة ودفع المكبس، لإخراج فقاعات من الحقنة. إخراج ثقافة RPMI أن يؤدي إلى الحجم النهائي من 250 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمديد الماوس الذيل مع جهة غير المهيمنة. عقد الذيل مع نهاية القريبة من الذيل مرتفعة مع السبابة من اليد غير المسيطرة، والجزء الأعلى من الذيل الاكتئاب مع الإبهام. ملاحظة: في هذه الطريقة، يتم عقد الوريد الذيل في وضع جانبي، موازية لسطح رادع، مع إدخال المنسجمة ممكن في الجزء الأكثر البعيدة من الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال الإبرة في الوريد الذيل، في نهاية البعيدة، في زاوية الهبوط دقيقة لتبدأ، ومن ثم ضبط الإبرة لتتناسب مع زاوية من الوريد الذيل على مزيد من الإدراج (خفض نهاية المكبس من حقنة المتعلقة إبرة) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادخال الإبرة حوالي 1 سم في الوريد الذيل. بعد الإدراج، والبدء في دفع المكبس، وعقد إبرة ثابتة. ملاحظة: إذا كانت الإبرة في الوريد الذيل ونهاية الإبرة نعرقلة التمديد يجب على وسائل الإعلام تتدفق دون عوائق في الوريد. يتميز حقن الفعلي من إزالة الدم من الوريد. إذا كان هناك مقاومة، أو يبدأ فقاعة لتشكيل في الموقع في الحقن، وإزالة الإبرة وحاول مرة أخرى في مكان أكثر الداني على طول الوريد الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الإبرة من الوريد وتخلص منه. عقد الشاش ضد دخول موقع لوقف أي نزيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المكبس من رادع ووضع الماوس في قفص المتلقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أكرر للجميع التركيزات أخرى. ملاحظة: الرئة إنشاء بؤر يستغرق حوالي 2-3 أسابيع، مع التباين باختلاف خط الخلية والحجم المطلوب من بؤر 9 في غضون ذلك، ينبغي رصد الفئران عن الأعراض التي يمكن أن تبرر القتل الرحيم في وقت مبكر، مثل يلهث المفرط. </li></ol> 4. عد الرئة بؤر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس عن طريق وضع في غرفة CO 2 وفضح إلى 100٪ CO 2 </sيو بي&gt; قدم في 10-30٪ من حجم الغرفة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. اتبع مع خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسع الماوس على الستايروفوم. باستخدام مقص جراحي، إنشاء شق جراحي على طول القص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل اثنين من الشقوق إضافية، سواء من الجزء العلوي من شق عظمة القص والمتفرعة نحو الكتفين من الفأرة، وفضح القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل اثنين من التخفيضات، كل على طول الجانبين الوحشية للقص، لإزالة القفص الصدري من الجذع، وتعريض الرئتين والقلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد القلب مع ملاقط جراحية، وقطع المريء والقصبة الهوائية، وتحرير القلب والرئتين من الفأرة. وضع تحت المجهر تشريح، في 10X التكبير، لتحسين التصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح القلب من الرئتين وإزالة الغدة الصعترية، ولم يتبق سوى الرئتين اثنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الرئتين تحت نطاق تشريح، والبدء في الاعتماد على بؤر الرئة. يجب أن تظهر كل بؤر كما تعميما، الحشو البني على سطح الرئتين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إلىالاتساق بين الفئران وحساب عدد من البؤر على سطح شحمة الأذن، وثم قلب أن الفص. فعل كل من الفص أربع يسمح بشكل فردي لتسهيل الفرز. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حفظ وإصلاح الرئتين إذا أداء IHC، وإلا، ونبذ ما تبقى. </li></ol>

<ol>
	<li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perspective+on+cancer+cell+metastasis.">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331, 1559-1564 (2011).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> J Clin Invest. 119 (6), 1420-1428 (2009).</li><li>Stetler-Stevenson, W. G., Aznavoorian, S., Liotta, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+interactions+with+the+extracellular+matrix+during+invasion+and+metastasis.">Tumor cell interactions with the extracellular matrix during invasion and metastasis.</a> Annu Rev Cell Biol. 9, 541-573 (1993).</li><li>Allard, W. J., Matera, J., Miller, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cells+circulate+in+the+peripheral+blood+of+all+major+carcinomas+but+not+in+healthy+subjects+or+patients+with+nonmalignant+disease.">Tumor cells circulate in the peripheral blood of all major carcinomas but not in healthy subjects or patients with nonmalignant disease.</a> Clin Cancer Res. 10, 6897-6904 (2004).</li><li>Dunn, G. P., Bruce, A. T., Ikeda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunoediting:+from+iimmunosurveillance+to+tumor+escape.">Cancer immunoediting: from iimmunosurveillance to tumor escape.</a> Nat Immunol. 3, 991-998 (2002).</li><li>Hugo, H., Ackland, M. L., Blick, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+and+mesenchymal-epithelial+transition+in+carcinoma+progression.">Epithelial-mesenchymal and mesenchymal-epithelial transition in carcinoma progression.</a> J Cell Physiol. 213, 374-383 (2007).</li><li>Kang, Y., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+transitions:+Twist+in+development+and+metastasis.">Epithelial-mesenchymal transitions: Twist in development and metastasis.</a> Cell. 118, 277-279 (2004).</li><li>Hodi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+survival+with+Ipilimumab+in+patients+with+metastatic+melanoma.">Improved survival with Ipilimumab in patients with metastatic melanoma.</a> NEJM. 363 (13), 711-723 (2002).</li><li>Ekwueme, D. U., Guy, G. P., Li, C., Rim, S. H., Parelkar, P., Chen, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+health+burden+and+economic+costs+of+cutaneous+melanoma+motality+by+race/ethnicity-United+States.">The health burden and economic costs of cutaneous melanoma motality by race/ethnicity-United States.</a> J. Am. Acad. Dermatol. 65, 133-143 (2011).</li><li>Alizadeh, A. M., Shiri, S., Farsinejad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastasis+review:+from+bench+to+bedside.">Metastasis review: from bench to bedside.</a> Tumor. Bio.Volume. 35, 8483-8523 (2014).</li><li>Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+metastasis+predetermined.">Is metastasis predetermined.</a> Mol. Oncol. 1 (3), 263-264 (2007).</li><li>Ishiguro, T., Nakajima, M., Naito, M., Muto, T., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+genes+differentially+expressed+in+B16+murine+melanoma+sublines+with+different+metastatic+potentials.">Identification of genes differentially expressed in B16 murine melanoma sublines with different metastatic potentials.</a> Cancer Res. 56 (4), 875-879 (1996).</li><li>Clark, E. A., Todd, R. G., Lander, E. S., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+metastasis+reveals+an+essential+role+for+RhoC.">Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC.</a> Nature. 406, 532-535 (2000).</li><li>Terranova, V. P., Hic, S., Diflorio, R. M., Lyall, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+metastasis.">Tumor cell metastasis.</a> Crit. Rev. Oncol. Hematol. 5 (2), 87-114 (1986).</li><li>Elkin, M., Vlodavsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tail+vein+assay+of+cancer+metastasis.">Tail vein assay of cancer metastasis.</a> Curr Protoc in Cell Biol. , (2001).</li><li>Hagedorn, H. G., Bachmeier, B. E., Nerlich, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+degradation+of+basement+membranes+and+extracellular+matrix+and+their+regulation+by+TGF-beta+in+invasive+carcinomas+(Review).">Synthesis and degradation of basement membranes and extracellular matrix and their regulation by TGF-beta in invasive carcinomas (Review).</a> Int. J. Oncol. 18 (4), 669-681 (2001).</li><li>Hart, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+selection+and+characterization+of+an+invasive+variant+of+the+B16+melanoma.">The selection and characterization of an invasive variant of the B16 melanoma.</a> Am J Pathol. 97 (3), 587-600 (1979).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N.P.+B16+as+a+Mouse+Model+for+Human+Melanoma.">N.P. B16 as a Mouse Model for Human Melanoma.</a> Curr Protoc Immunol. 20 (1), (2001).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

تعميم الخلايا السرطانية من حقن الوريد الذيل تمثل الانبثاث تتهرب من المواقع النمو الابتدائي والهجرة من خلال طرق مثل مجرى الدم أو الجهاز الليمفاوي، وأحيانا وضع أنفسهم في الأسرة الشعرية من أماكن بعيدة. 14 البروتوكول المذكورة أعلاه نموذجا للمرحلة الثانوية الانبثاث. مع العدد الأمثل من الخلايا B16-BL6 حقن، ويمكن المجربون تحديد أثر النسبي للعقار تدار أو السكان الخلايا المناعية، بعد تحييد، على ورم خبيث الخلايا السرطانية. هذا البروتوكول لديه قيود. وقد تم اختيار الخلايا السرطانية المنتشرة لقدرتها على metastasize، وبالتالي غير قابلة للمناعة، وجود مستويات أدنى من التوافق النسيجي الرئيسي من الدرجة المعقدة 1 الجزيئات. 12 وعلاوة على ذلك، وإدخال مفاجئ ومتفاوت من عدد كبير من الانبثاث هو عكس السيناريو النموذجي في المرضى حيث أعداد صغيرة من خلايا الورم النقيليتبدد على مدى فترة طويلة من الزمن من موقع الورم الرئيسي. بالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا السرطانية قدم عن طريق الوريد هي من زراعة الأنسجة وليس من أصل الورم الرئيسي. لذلك، وهذه الخلايا هي عكس الانبثاث الثانوية التي تنتج عن تغيرات في التصاق الخلايا، والهجرة، والاعتراف المناعة، والمتلقي إنشاء الجهاز. 15،16 ومن شأن بروتوكول بديل يكون حقن تحت الجلد B16 / BL6 لتوليد الأورام الأولية وتحليل الناتج الانبثاث الرئة &quot;عفوية&quot;. تم العثور على هذه الانبثاث &quot;عفوية&quot; لاحتواء المزيد من التجانس من نظرائهم &quot;التجريبية&quot;، مطابقة بشكل وثيق أولئك المرضى من البشر. بروتوكول يحد في قدرتها على تحديد تأثير مركب تجريبي على ورم خبيث. مع الجانبي حقن الوريد الذيل، وعدد من خلايا سرطان الجلد حقنها في مجرى الدم ويمكن أن يقترب عبر حemocytometer. مع ورم خبيث &quot;عفوية&quot;، ولكن، هناك قدر أكبر من التجانس بين الأورام، إضافة متغير إضافي لعدد من الناتج بؤر الرئة. 16 في الختام، يمثل الذيل الوريد B16 BL6 نموذج سرطان الجلد الفئران نموذج بسيط لتحديد تأثير العلاج أو العلاج المناعي على ورم خبيث. عن طريق حقن الوريد تعميم الخلايا السرطانية، يمكن للباحثين تكرار، إلى حد ما، والمرضى بعد ورم خبيث. وبالنظر إلى الآثار المدمرة للخلايا الورم النقيلي في مرضى السرطان، وهذا النموذج هو أداة قوية لفهم عملية متعددة الخطوات من ورم خبيث.

ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفاة بين مرضى الأورام الخبيثة. عملية نشر المنتشر من الخلايا السرطانية وغير مفهومة ولكن يبدو أن تنطوي على عدة خطوات، بما في ذلك غزو الأنسجة المجاورة، دخول الوعاء في الأوعية اللمفاوية والأوعية الدموية والبقاء والنبات ضمن نظام الدورة الدموية، والتسرب من الأوعية الدموية في موقع ورم خبيث، والتكيف لالمكروية الجديدة للموقع الجديد، والاستعمار في الموقع الجديد من خلال انتشار وتشكيل الأورام الثانوية 1. كل هذه الأحداث البيولوجية تنطوي على التحول ونشر وبقاء خلايا الورم النقيلي. على سبيل المثال، فإن التحول من النمط الظاهري الظهارية للخلية السرطانية في النمط الظاهري الوسيطة، إلى جانب التفاعل الناجح مع المصفوفة خارج الخلية، تمكنها من غزو الأنسجة المجاورة وmetastasize إلى أجزاء أخرى من الجسم. 2،3 علاوة على ذلك، فإن هذه النقيلي خلايايجب البقاء على قيد الحياة داخل مجرى الدم تعميم والتهرب من مراقبة محصنة من المضيف. 4،5 وأخيرا، عندما زرعت في موقع بعيد داخل الجسم، والخلايا السرطانية يجب أن تتكيف مع المكروية بهم من أجل التكاثر وتشكيل الأورام الثانوية. 6،7 لذلك ، على الرغم من ورم خبيث هو ظاهرة شائعة بين مرضى السرطان، وخلايا الورم النقيلي لها مجالات متعددة من الضعف التي هي قابلة للتدخل العلاجي. ونظرا لطبيعة مناعة من سرطان الجلد، والفائدة الأخيرة في المناعية، ونماذج لسرطان الجلد مفيدة على نحو متزايد. 8 في الولايات المتحدة وحدها، سرطان الجلد هو سبب ما يقدر بنحو 9000 حالة وفاة سنويا. 9 مواقع مشتركة من ورم خبيث سرطان الجلد هي العظام والدماغ والكبد، والرئتين. غالبية الانبثاث إلى مواقع بعيدة تحدث من خلال مجرى الدم. تعميم الخلايا السرطانية في الدم يجب أن تهرب من إزالة المناعي، والوصول إلى سرير شعري من جهاز القاصي وغزو ​​من خلال الخلايا البطانية في الأوعية الدموية من أجل إثبات وجودها بنجاح. 4-7،10، 11 لمحاكاة الظواهر الشائعة وضراوة من ورم خبيث، تم إنشاء الفئران B16-BL6 خط الخلية. والمتوفي من الوالدين C57BL / 6 خط خلية سرطان الجلد B16-F0، B16-BL6 هو المنتج النهائي من 10 اختيارات متتالية لورم خبيث في الرئة من الحقن في الوريد (مما أدى إلى B16-F10)، تليها 6 اختيارات متتالية لاختراق غشاء المثانة. 12 وعلى هذا النحو، بل هو خط خلية سرطان الجلد يمكن الاعتماد عليها لإقامة بؤر المنتشر في الماوس، وخاصة عندما تم حقنها عن طريق الوريد. 13 بعد حقن كمية كافية من B16-BL6 الخلايا في الوريد ذيل B57BL / 6 الماوس، تليها أسبوعين أو أكثر للسماح للزرع ونمو الخلايا B16 / BL6، وبؤر المنتشر يشكل في الرئتين. على القتل الرحيم والتفتيش من قبل تشريح المجهر، وعدد منفرد بؤر الحاضر يمكن أن يكون كميا. وهذا، بدوره، يمكن استخدامها لإنشاء تأثير جرعة ورم خبيث، وعدد الخلايا B16-BL6 حقن يرتبط مع عدد من البؤر تشكلت على سطح الرئتين. ويعرف هذا النموذج ب &quot;ورم خبيث التجريبي&quot;، حيث يتم إدخال الخلايا المعروفة النقيلي مباشرة إلى مجرى الدم، وتسهيل انتشار سريع ويمكن التنبؤ به وإنشاء في الرئتين، الكبد، أو جهاز آخر من التحقيق. هذا هو على النقيض من &quot;ورم خبيث عفوية،&quot; حيث يتم زرع الخلايا السرطانية، وغالبا ما تحت الجلد، والانبثاث تنشأ من إلقاء عضويا الخلايا السرطانية. 14،15 ومن المهم أن حقن كمية مناسبة من الخلايا B16 / BL6 في الأوردة ذيل الفئران. كثيرة جدا، وسيتم تغطية الرئتين مع الانبثاث وسوف البؤر المجاورة لا يمكن تمييزها عن بعضها البعض. عدد قليل جدا، وسوف تأثير عامل علاجي يكون غير مدرك بسبب الأصيل فاريبالجمع بين الحقن. من أجل الحصول على العدد الأمثل من بؤر على الرئتين من C57BL / 6 الفئران، فمن الضروري ربط عدد من حقن الخلايا مع كمية من بؤر النقيلي أنشئت على سطح الرئتين مع الأخذ بعين الاعتبار distinguishability الفردية البؤر. وهذا البروتوكول يبرهن على وجود نموذج سرطان الجلد المنتشر الفئران لC57BL / 6 الفئران.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1227">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:377px;">Trypsin</td>
			<td style="width:275px;">Corning</td>
			<td style="width:288px;">MT25052CV</td>
			<td style="width:287px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT15040CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phase Contraast Hemacytometer</td>
			<td>Hausser</td>
			<td>02-671-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-Fine IV Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>14-829-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Restrainer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>NC9999969</td>
			<td>Restrainer choice depends on age/size of mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating Pad</td>
			<td>Harry Schein</td>
			<td>NC0012697</td>
			<td>Optional</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

injection of syngeneic murine melanoma cells to determine their metastatic potential in the lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

على الفحص البصري، والاختلاف في بؤر السطح هو واضح. يجب حساب عدد من الأورام تحت المجهر تشريح تسفر عن وجود علاقة خطية بين عدد من الخلايا السرطانية حقن وعدد من الناتج وبؤر معدود. استخدام العدد الأمثل من الخلايا عن طريق الحقن، والهدف هو واحد حيث لم تتم تغطية الرئتين تماما، كما هي في 500000 خلية / مل في الشكل 1A، والتي لا تغطيها قليلة جدا، كما هي على 62500 خلية / مل و 125000 خلية / مل. وهذا هو أيضا قابل للقياس عن طريق الارتباط الخطي (الشكل 1B). <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54039/54039fig1.jpg" /> الشكل 1. الرئة البؤر الناتجة من الذيل الوريد حقن الخلايا B16 / BL6. (A) الرئة بؤر يمكن تصور على سطح الرئتين من C57BL / 6 الفئران كما الجماهير دائرية البني (بؤر تمثيلي تحت السهام). كما أوكارإيتي الثقافة حقن الخلايا (فوق كل صورة) يزيد، لذلك لا عدد مماثل من الناتج بؤر الرئة (تحت كل صورة). الرئتين من الماوس وفقا لأعلى كثافة من حقن الخلايا لديها أكبر تغطية مرئية من بؤر الرئة. تمثل الحانات مقياس 20 ملم. (ب) تعداد بؤر الرئة بالنسبة للكثافة زراعة الخلايا. هناك علاقة خطية تقريبا فوق 125000 خلية / مل، على النحو الذي يحدده عدادة الكريات. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54039/54039fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs at JoVE.com

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

حقن خلايا الفئران مسانج الميلانوما لتحديد ما إمكاناتهم الإنتقالية في الرئتين

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

و في المختبر النظام الدراسي لاستئصال ورم من الخمول وتبديل للنمو النقيلي

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent ...

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

احتشاء عضلة القلب وتقييم نتائج وظيفية في الخنازير

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

والتعديل<em&gt; في المختبر</em&gt; الغزو الفحص لتحديد الدور المحتمل للالهرمونات، السيتوكينات و / أو عوامل النمو في التوسط السرطان غزو الخلايا

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Focus Formation: A Cell-based Assay to Determine the Oncogenic Potential of a Gene

التركيز تشكيل: A الفحص القائم على خلية لتحديد إمكانية أنكجنيك لجين

Malignant transformation of cells is typically associated with increased proliferation, loss of contact inhibition, acquisition of anchorage-independent ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

قياس منحنى الضغط الحجم في الرئتين ماوس

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

A &quot;المريض مثل&quot; مثلي مسانج نموذج الفأر من سرطان الكبد الانبثاث

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

عزل الخلايا البطانية السلف من المتطوعين الأصحاء وإمكاناتهم الكثيرة تأثر عينات المصل بعد جراحة القلب

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

حقن إينتراكاردياك الموجهة بالموجات فوق الصوتية البشرية الخلايا الجذعية الوسيطة لزيادة صاروخ موجه للاستخدام في نماذج مورين من أمراض التهاب الأمعاء التجريبية للامعاء

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

توليد نموذج سرطان الثدي المنتشر مورين أورثوتوبيك والقيام باستئصال الثدي الجذري مورين

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...