Name: an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00
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Alle Verfahren folgen Richtlinien und genehmigten Protokollen von Georgia Regents Universität Tier Benutzung und Pflege Committee. 1. Einrichtung Orthotopische Brustkrebs-Tumor <ol><li> Einen Tag vor dem Experiment Kultur etwa 2 x 10 6 4T1-Luc Tumorzellen in einer 10 cm Kulturschale in 10 ml RPMI - Medium mit 10% FBS. Inkubieren der Kulturschale in einem CO 2 -Inkubator bei 37 ° C und 5% CO 2. </li><li> Am Tag der Injektion Zelltumor, Kulturmedium aus der Kulturschale mit Vak...

<ol>
	<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> J Vis Exp. , (2015).</li><li>Stewart, T. J., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+tumours+escape+mass+destruction.">How tumours escape mass destruction.</a> Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).</li><li>Lopez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+attenuates+metastatic+invasion+during+breast+cancer+progression.">CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression.</a> Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).</li><li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+vivo.">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).</li><li>Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MEKK1+controls+matrix+degradation+and+tumor+cell+dissemination+during+metastasis+of+polyoma+middle-T+driven+mammary+cancer.">MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer.</a> Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).</li><li>Danna, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+removal+of+primary+tumor+reverses+tumor-induced+immunosuppression+despite+the+presence+of+metastatic+disease.">Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease.</a> Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deregulation+of+apoptotic+factors+Bcl-xL+and+Bax+confers+apoptotic+resistance+to+myeloid-derived+suppressor+cells+and+contributes+to+their+persistence+in+cancer.">Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer.</a> J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).</li><li>Kwan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenes+expressing+the+Wnt-1+and+int-2+proto-oncogenes+cooperate+during+mammary+carcinogenesis+in+doubly+transgenic+mice.">Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice.</a> Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li><li>Almholt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+metastasis+of+transgenic+mammary+cancer+in+urokinase-deficient+mice.">Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice.</a> Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).</li><li>Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+HGF/SF+in+mouse+mammary+epithelium+leads+to+metastatic+adenosquamous+carcinomas+through+the+activation+of+multiple+signal+transduction+pathways.">Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways.</a> Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).</li><li>Lin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+mutation+of+p53+leads+to+estrogen+receptor+alpha-positive+and+-negative+mouse+mammary+tumors+with+high+frequency+of+metastasis.">Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis.</a> Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).</li><li>Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P53+levels+determine+outcome+during+beta-catenin+tumor+initiation+and+metastasis+in+the+mammary+gland+and+male+germ+cells.">P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells.</a> Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

Viele Arten von transgenen Mausmodellen von Brustkrebs - Metastasen entwickelt. 1 Diese transgenen Mäuse von 60 bis 100% reichen hohe Tumorinzidenz aufweisen. Jedoch ist die Metastasierung Inzidenz dieser transgenen Mäuse viel niedriger als die Tumorinzidenz (14-100%). Tumorzellen metastasieren bis LN und Lungen in den meisten dieser transgenen Mausmodellen von Brustkrebs-Metastasen. Die Metastasierung Latenz variiert von Modell zu Modell und im Bereich von 2 bis 8 Monate. 6,11-16 Diese transgene...

Nach Angaben der American Cancer Society ist Brustkrebs die am häufigsten diagnostizierte Form von Krebs bei Frauen in den Vereinigten Staaten. Früherkennung in Kombination mit neu entwickelten zielgerichtete Therapien hat sich deutlich die Mortalität von Brustkrebs in den letzten zwei Jahrzehnten reduziert. Allerdings ist Brustkrebs immer noch die zweithäufigste Ursache für krebsbedingte Todesursache bei Frauen in den Vereinigten Staaten von Amerika 1. Die Mehrheit der Todesfälle von Brustkrebspatienten sind aufgrund Metastasierung von Tumorzellen. Leider ist den meisten Brustkrebs - invasive und metastasiert häufig zu den Lymphknoten und in der Folge auf andere Organe, einschließlich Knochen, Lunge, Leber und Gehirn. 1,2 Es gibt derzeit keine wirksame Therapie bei metastasierendem Brustkrebs. Daher ist die Entwicklung von Mitteln, chemotherapeutischen und immun metastasierendem Brustkrebs zu unterdrücken, von großer Bedeutung ist. Verschiedene Brustkrebs spontane Metastasierung Mausmodelle haben been entwickelt , um die molekularen Mechanismen zu studieren , Brusttumorzellprogression und Metastasierung zugrunde liegen und als Modell für die Entwicklung von Therapeutika eingesetzt werden. 1,3-5 jedoch die meisten dieser Mausmodelle genetischen Tumormodelle sind , dass, während eine ausgezeichnete Modelle für mechanistische Studien zum testen therapeutischer Mittel nicht geeignet , da die Metastasierung Monate in dieser genetischen Modellen zu entwickeln , nimmt, wodurch es erforderlich teure Mittel langfristige Verabreichung der Anti-Krebs. 6,7 Überwachung der Tumorprogression in lebenden Mäusen ist auch technisch anspruchsvoll . Im Gegensatz dazu hat ein transplantiertes Brustkrebsmetastase Modell die Vorteile der kurzfristigen Tumorprogression und einfache Verfolgung der Tumorprogression in lebenden Mäusen. Die 4T1 orthotoper Brustkrebs spontane Metastasierung Maus - Modell ist ein solcher transplantierten Tumormodell. 8 In diesem Modell werden die Brusttumorzellen in das Brustfettpolster transplantiert primären Tumorknoten aufzubauen. Der Primärtumorkann dann chirurgisch als in menschlichen Brustkrebspatienten entfernt werden. 4T1 - Tumorzellen sind sehr invasiv. 8,9, 3,10 Fast alle tumortragenden Mäuse Metastasen in 30 Tage nach der Tumortransplantation in das Brustfettpolster entwickeln. Allerdings wachsen 4T1 Tumore aggressiv in den primären Standorten und die Tumorgrößen überschreiten oft die Grenzen, die in den meisten Tier Protokolle sind erlaubt. In diesem Stadium sind die Metastasen oft Mikrometastasen. Daher ist es wesentlich, Primärtumoren zu entfernen Metastasierung Fortschritt zum Testen therapeutischer Mittel zu ermöglichen. Hier berichten wir über die Einrichtung eines einfachen und doch empfindliches Verfahren der primären Tumortransplantation, chirurgische Entfernung des Primärtumors und Biolumineszenz - Bildgebung basierenden Quantifizierung des 4T1 Tumorwachstum und Progression in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="973">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Ami-X Imaging System&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">IsoTec SurgiVet</td>
			<td style="width:437px;">Anesthesia Service &#38; Equipment , Inc., Atlanta, GA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">AutoClip Physicians Kit</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Applier&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Remover</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Wound Clip</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td style="width:437px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">8940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Fine-Pointed Forceps</td>
			<td style="width:437px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson and Co. NJ&#160;</td>
			<td style="width:119px;">305620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">10-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">PBS</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:437px;">Ultrapure-usa.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">25-040-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis

Metastasierung ist die Hauptursache für die Sterblichkeit von Brustkrebspatientinnen. Der Mechanismus Metastasierung von Krebszellen zugrunde liegen, einschließlich Brustkrebs Metastasen, ist weitgehend unbekannt und ist ein Schwerpunkt in der Krebsforschung. Verschiedene Brustkrebs spontane Metastasierung Mausmodelle etabliert. Hier berichten wir über ein vereinfachtes Verfahren zu etablieren orthotoper transplantiert Brustkrebs Primärtumor und spontane Metastasierung daraus resultierenden, die menschliche Brustkrebs-Metastasen zu imitieren. In Kombination mit der Biolumineszenz lebenden Tumorbildgebung, ermöglicht diese Maus-Modell das Tumorwachstum und Progression Kinetik beobachtet und quantifiziert werden. In diesem Modell wird eine niedrige Dosis (1 x 10 4 Zellen) von 4T1-Luc Zellen Brustkrebs wurde in Balb / c - Maus Brustfettpolster injiziert , um eine Tuberkulin - Spritze. Mäuse wurden mit Luciferin und abgebildet zu verschiedenen Zeitpunkten unter Verwendung eines Biolumineszenz-Bilderzeugungssystem injiziert. Wenn wuchsen die Primärtumoren auf die Größenbeschränkung, wie im IACUC genehmigten Protokoll (ca.oximately 30 Tage), wurden die Mäuse unter konstanten Strom von 2% Isofluran und Sauerstoff anästhesiert. Die Tumorfläche wurde mit 70% Ethanol sterilisiert. Die Maus Haut um wurde der Tumor herausgeschnitten den Tumor aus, die mit einem Paar von sterilen Schere entfernt wurde. Entfernung des Primärtumors erstreckt sich das Überleben der 4T-1 tumortragenden Mäuse für einen Monat. Die Mäuse wurden dann wiederholt für metastasierenden Tumor abgebildet auf andere Organe ausbreiten. Therapeutische Mittel können verabreicht werden, um Tumormetastasierung an diesem Punkt zu unterdrücken. Dieses Modell ist einfach und doch empfindlich bei der Quantifizierung Brustkrebszellwachstum in der primären Standort und Progression Kinetik zu entfernten Organen und somit ist ein ausgezeichnetes Modell Brustkrebs Wachstum und die Progression für das Studium und zur Prüfung von anti-Metastasierungs und Immuntherapeutika in vivo .

Gründung der Orthotopische Brustkrebs Mausmodell 4T1 ist eine aggressive Mammakarzinom-Zelllinie. Die Injektion von so wenig wie 1 x 10 4 Zellen in das Brustfettpolster kann in der Injektionsstelle (2A) zur Schaffung eines einheitlichen Tumorknoten führen. Daher ahmt der Tumor primären humanen Mammakarzinom. Fast 100% Mäuse entwickeln die orthotoper Tumor. Die Tumorgröße kann unter Verwendung eines digitalen Sattels oder durch Liv...

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An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Eine orthotope Brustkrebs primären Tumormodell und die operative Entfernung des Primärtumors Maus Lebensdauer zu verlängern spontane Metastasierung zu erzeugen, werden beschrieben. Das Tumorwachstum und Progression werden überwacht und durch Luciferase Fluoreszenzbildgebung quantifiziert.

Ein orthotopen Mausmodell des Spontan Metastasierung von Brustkrebs

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Einem orthotopen Modell des Murine Blasenkrebs

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Forschung

Medizin

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Quantitative Analyse von Krebs Metastasen mit einem Vogelembryo Modell

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-Photonen-Imaging der Tumorzellinvasion in einem orthotopen Mausmodell des oralen Plattenepithelkarzinoms

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung von Tumorhypoxie Dynamics of Breast Cancer Hirnmetastasen in einem Mausmodell

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Kombination Strahlentherapie in einem orthotopen Maus Brain Tumor-Modell

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Ein orthotopen Mausmodell des Anaplastic Schilddrüsenkarzinom

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Ein orthotopen Blasenkrebs-Modell für Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Bioluminescent orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Ein orthotopen Mausmodell der menschlichen Prostatakrebs-Metastasen

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Initiation Metastasierende Mammakarzinom durch Targeting des duktalen Epithel mit Adenovirus-Cre: Eine neue transgene Maus-Modell der Brustkrebs

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...