Name: an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00
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Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).

Todos los procedimientos siguen las pautas y protocolos aprobados por la Universidad de Georgia Regents Uso de Animales y el Comité de Cuidado. 1. Establecimiento de un tumor ortotópico de cáncer de mama <ol><li> Un día antes del experimento, la cultura de aproximadamente 2 x 10 6 células tumorales 4T1-Luc en una placa de cultivo de 10 cm en 10 ml de medio RPMI que contiene 10% de FBS. Incubar la placa de cultivo en un incubador de CO2 a 37 ° C y 5% de CO2. </li><li> En e...

<ol>
	<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis.">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> J Vis Exp. , (2015).</li><li>Stewart, T. J., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+tumours+escape+mass+destruction.">How tumours escape mass destruction.</a> Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).</li><li>Lopez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+attenuates+metastatic+invasion+during+breast+cancer+progression.">CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression.</a> Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).</li><li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+vivo.">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).</li><li>Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MEKK1+controls+matrix+degradation+and+tumor+cell+dissemination+during+metastasis+of+polyoma+middle-T+driven+mammary+cancer.">MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer.</a> Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).</li><li>Danna, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+removal+of+primary+tumor+reverses+tumor-induced+immunosuppression+despite+the+presence+of+metastatic+disease.">Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease.</a> Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deregulation+of+apoptotic+factors+Bcl-xL+and+Bax+confers+apoptotic+resistance+to+myeloid-derived+suppressor+cells+and+contributes+to+their+persistence+in+cancer.">Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer.</a> J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).</li><li>Kwan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenes+expressing+the+Wnt-1+and+int-2+proto-oncogenes+cooperate+during+mammary+carcinogenesis+in+doubly+transgenic+mice.">Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice.</a> Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).</li><li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene:+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease.">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li><li>Almholt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+metastasis+of+transgenic+mammary+cancer+in+urokinase-deficient+mice.">Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice.</a> Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).</li><li>Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+HGF/SF+in+mouse+mammary+epithelium+leads+to+metastatic+adenosquamous+carcinomas+through+the+activation+of+multiple+signal+transduction+pathways.">Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways.</a> Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).</li><li>Lin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+mutation+of+p53+leads+to+estrogen+receptor+alpha-positive+and+-negative+mouse+mammary+tumors+with+high+frequency+of+metastasis.">Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis.</a> Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).</li><li>Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P53+levels+determine+outcome+during+beta-catenin+tumor+initiation+and+metastasis+in+the+mammary+gland+and+male+germ+cells.">P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells.</a> Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> J Vis Exp. , (2010).</li></ol>

Se han desarrollado muchos tipos de modelos de ratones transgénicos de la metástasis del cáncer de mama. 1 Estos ratones transgénicos tienen alta incidencia de tumor que van desde 60 a 100%. Sin embargo, la incidencia de metástasis de estos ratones transgénicos es mucho menor que la incidencia de tumores (14-100%). Las células tumorales metastatizan a LN y los pulmones en la mayoría de estos modelos de ratones transgénicos de la metástasis del cáncer de mama. La latencia metástasis varía de un mo...

Según la Sociedad Americana del Cáncer, el cáncer de mama es la forma más frecuentemente diagnosticado de cáncer en mujeres en los Estados Unidos. La detección temprana en combinación con terapias dirigidas se han desarrollado recientemente ha reducido significativamente la mortalidad de cáncer de mama en las dos últimas décadas. Sin embargo, el cáncer de mama sigue siendo la segunda causa principal de muerte por cáncer en mujeres en los Estados Unidos 1. La mayoría de las muertes de pacientes con cáncer de mama se deben a metástasis de células tumorales. Desafortunadamente, la mayoría de cáncer de mama es invasivo y frecuentemente metástasis en el ganglio linfático y, posteriormente, a órganos distantes, incluyendo el hueso, pulmón, hígado y cerebro. 1,2 no hay actualmente ningún tratamiento eficaz para el cáncer de mama metastásico. Por lo tanto, el desarrollo de agentes quimioterapéuticos y inmunoterapéuticos para suprimir el cáncer de mama metastásico es de gran importancia. cáncer de mama Varios modelos de metástasis espontánea de ratón han been desarrollado para estudiar los mecanismos moleculares que subyacen a la progresión de las células tumorales de mama y metástasis y para ser utilizados como modelos para el desarrollo de agentes terapéuticos. 1,3-5 Sin embargo, la mayoría de estos modelos de ratón son modelos de tumores genéticos que, mientras excelentes modelos para mecanicista estudios, no son adecuados para el ensayo de agentes terapéuticos desde la metástasis toma meses para desarrollar en estos modelos genéticos, requiriendo por lo tanto la administración costosa a largo plazo de los agentes anti-cáncer. progresión tumoral 6,7 Monitoring en ratones vivos también es técnicamente difícil. Por el contrario, un modelo de metástasis de cáncer de mama trasplantado tiene las ventajas de la progresión del tumor a corto plazo y fácil de seguimiento de la progresión tumoral en ratones vivos. El modelo de ratón de metástasis espontánea 4T1 ortotópico de cáncer de mama es un modelo de tumor trasplantado tales. 8 En este modelo, las células de tumor de mama se trasplantan en la almohadilla de grasa mamaria de establecer nódulos tumorales primarios. El tumor primarioa continuación, se pueden extirpar quirúrgicamente como en pacientes con cáncer de mama humano. 4T1 células tumorales son altamente invasivos. 8,9, 3,10 Casi todos los portadores de tumores desarrollan metástasis en ratones 30 días después del trasplante del tumor en la almohadilla de grasa mamaria. Sin embargo, los tumores 4T1 crecer agresivamente en los sitios primarios y los tamaños de los tumores a menudo exceden los límites que se permiten en la mayoría de los animales protocolos. En esta etapa, las metástasis son a menudo micrometástasis. Por lo tanto, es esencial para eliminar los tumores primarios para permitir el progreso metástasis para el ensayo de agentes terapéuticos. Aquí, se presenta el establecimiento de un procedimiento simple y sin embargo sensible de trasplante de tumor primario, la extirpación quirúrgica del tumor primario y la bioluminiscencia cuantificación basada en imágenes del crecimiento tumoral y la progresión 4T1 in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="973">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Ami-X Imaging System&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">IsoTec SurgiVet</td>
			<td style="width:437px;">Anesthesia Service &#38; Equipment , Inc., Atlanta, GA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">AutoClip Physicians Kit</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Applier&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Remover</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">9 MM AutoClip Wound Clip</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td>
			<td style="width:119px;">427631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td style="width:437px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">8940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Fine-Pointed Forceps</td>
			<td style="width:437px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe&#160;</td>
			<td style="width:437px;">Becton Dickinson and Co. NJ&#160;</td>
			<td style="width:119px;">305620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">10-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">PBS</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:437px;">Ultrapure-usa.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:251px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:437px;">Mediatech Inc</td>
			<td style="width:119px;">25-040-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis

La metástasis es la causa principal de mortalidad de los pacientes de cáncer de mama. El mecanismo que subyace a la metástasis de células de cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer de mama, es en gran parte desconocida y es un foco en la investigación del cáncer. Se han establecido varios modelos de cáncer de mama espontáneos metástasis del ratón. Aquí, se presenta un procedimiento simplificado para establecer tumor primario del cáncer de mama y trasplantado ortotópico resultante metástasis espontánea que imitan la metástasis del cáncer de mama humano. En combinación con la formación de imágenes del tumor en vivo bioluminiscencia, este modelo de ratón permite el crecimiento del tumor y la cinética de progresión a controlar y cuantificados. En este modelo, se inyectó una dosis baja (1 x 10 4 células) de las células de cáncer de mama 4T1-Luc en / c de mama de ratón BALB almohadilla de grasa usando una jeringa de tuberculina. Los ratones fueron inyectados con luciferina y la imagen en varios puntos de tiempo utilizando un sistema de imagen bioluminiscente. Cuando los tumores primarios crecieron hasta el límite de tamaño como en el protocolo aprobado por el IACUC (aproximately 30 días), los ratones fueron anestesiados bajo flujo constante de 2% de isoflurano y oxígeno. El área del tumor fue esterilizada con 70% de etanol. La piel del ratón alrededor del tumor se extirpó para exponer el tumor que se retiró con un par de tijeras estériles. La eliminación del tumor primario se extiende la supervivencia de los ratones portadores de tumor 4T-1 durante un mes. Los ratones fueron entonces repetidamente con imagen formada por tumor metastásico propagación a órganos distantes. Los agentes terapéuticos pueden ser administrados para suprimir la metástasis tumoral en este punto. Este modelo es simple y, sin embargo sensible para cuantificar el crecimiento de células de cáncer de mama en el sitio primario y la cinética de la progresión a órganos distantes, y por lo tanto es un excelente modelo para estudiar el crecimiento del cáncer de mama y la progresión, y para el ensayo de agentes anti-metástasis terapéuticos y inmunoterapéuticos in vivo .

Establecimiento de mama Cáncer de ratón modelo ortotópico 4T1 es una línea celular de carcinoma de mama agresivo. La inyección de tan poco como 1 x 10 4 células en la almohadilla de grasa mamaria puede conducir a la creación de un solo nódulo tumoral en el sitio de la inyección (Figura 2A). Por lo tanto, el tumor imita carcinoma de mama primario humano. Casi el 100% ratones desarrollan el tumor ortotópico. El tamaño del tumor...

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An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Un modelo de tumor primario de cáncer de mama ortotópico y la extirpación quirúrgica del tumor primario para extender la vida del ratón para generar metástasis espontánea se describen. El crecimiento del tumor y la progresión se supervisan y se cuantificaron por imágenes de fluorescencia de la luciferasa.

Un modelo de ratón ortotópico de cáncer de mama metástasis espontánea

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

Research

JoVE Journal

Medicine

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Investigación

Medicina

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Análisis cuantitativo de la metástasis del cáncer utilizando un modelo de embrión aviar

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Multi-fotón imágenes de invasión de células tumorales en un modelo de ratón ortotópico de carcinoma oral de células escamosas

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Imágenes in vivo de tumores bioluminiscencia Dinámica hipoxia de la metástasis cerebral cáncer de mama en un modelo de ratón

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Modelo ortotópico bioluminiscente de la progresión del cáncer de páncreas

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Un modelo murino de cáncer de próstata humano Metástasis ortotópico

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

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Inicio de la metástasis de carcinoma de mama mediante la Focalización del epitelio ductal con adenovirus Cre: Un modelo de ratón transgénico de Novela del Cáncer de Mama

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