Name: microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks
Uploaded: 2016-05-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret delvist af NIH R01 # DE021475 (CTM), en NIH Predoctoral Training Grant 5T32GM007127 (PAE), og en NSF Graduate Research Fellowship (NAE). Vi takker Kevin Schwalbach til at udføre BAC recombineering og injektioner, Nick Donde til at generere CRISPR Sanger sekventering data, og Katherine Lipari til nyttige feedback på indsprøjtning protokollen.

Alt fisk arbejde blev godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg fra University of California-Berkeley (protokol nummer R330). 1. Forbered nukleinsyrer til injektion <ol><li> Tol2 Plasmid Transgenese (Tilpasset fra Fisher 26). <ol><li> Skær 10 ug transposase plasmid (pcs-TP) 39 med 10 U NotI i medfølgende buffer i 1 time ved 37 ° C til linearisering. Bemærk: Materiale Transfer aftaler kan være nødvendigt for at opnå Tol2 plasmider. </li><li> Ekstraher Skær plasmid...

Injektion én-celle hundestejle embryoner til transgenese eller genom redigering præsenterer tre hovedudfordringer. Første, i forhold til zebrafisk embryoner hundestejle embryonale chorion er hård og vil ofte bryde nåle. Dette problem kan delvis overvindes ved anvendelse tykkere og stærkere glas mikropipetter og injektion vinkelret chorion (se protokol, figur 2). Sikring af, at så lidt vand som muligt sættes til embryonerne (lige nok til at forårsage chorion at svulme op og løfte væk fra celle...

Et grundlæggende element i at forstå, hvordan biodiversiteten opstår er at bestemme de genetiske og udviklingsmæssige grundlag for udviklede fænotypiske ændringer i naturen. Den trepigget hundestejle fisk, Gasterosteus aculeatus, har vist sig som en fremragende model til at studere den genetiske basis for evolution. Hundestejler har gennemgået mange adaptive evolutionære ændringer som marine fisk har koloniseret utallige ferskvandsmiljøer omkring den nordlige halvkugle, hvilket resulterer i dramatisk morfologiske, fysiologiske og adfærdsmæssige ændringer en. Genomerne af individer fra enogtyve hundestejle populationer er blevet sekventeret og samles, og en høj densitet binding kort er blevet frembragt for yderligere at forbedre konstruktionen 2,3. Genetisk kortlægning eksperimenter har identificeret genomiske regioner underliggende udviklede fænotyper 4 - 6, og i enkelte tilfælde har de funktionelle roller specifikke kandidatgener testet 7,8. En række genomiske regioner underliggende morfologiske ændringer er blevet identificeret med lovende kandidatgener, men disse kandidater er endnu ikke blevet funktionelt testet 9 - 12 år. Hertil kommer, hundestejler er fælles modeller for studier af populationsgenetik / genomforskning 13,14, artsdannelse 15, adfærd 1, endokrinologi 16, økotoksikologi 17, immunologi 18 og parasitologi 19. Fremtidige studier i hvert af disse områder vil drage fordel af evnen til at udføre funktionelle genetiske manipulationer i hundestejler. Ud over at manipulere deres kodende sekvenser, kan roller kandidatgener vurderes ved at studere deres cis reguleringsmyndigheder sekvenser og ved funktionelt stigende, faldende eller eliminere ekspression af kandidat-gen. Mikroinjektion og transgenese metoder i hundestejler er veletablerede 7,8,20 og blev oprindeligt udviklet ved hjælp af en meganuklease-medieretmetode 21 først beskrevet i Medaka 22. Den modificerede mikroinjektion metode præsenteres her er blevet optimeret til både Tol2-medieret transgenese og for nylig udviklet genom redigering reagenser herunder Talens og CRISPRs. Ændringer i cis reguleringsmyndigheder elementer menes at være kritisk for morfologiske udvikling, som cis reguleringsmyndigheder ændringer kan undgå de negative pleiotropiske konsekvenser af kodende mutationer 23. Derfor tester og sammenligner formodede cis reguleringsmyndigheder sekvenser er blevet et centralt mål med et stigende antal evolutionære studier. Desuden har de fleste menneskelige sygdom varianter er regulatoriske varianter 24,25 og model hvirveldyr systemer er hårdt brug for at studere cis reguleringsmyndigheder element funktion og logik. Fisk, der befrugte deres embryoner eksternt i stort tal tilbyde kraftige hvirveldyr systemer til at studere cis -forordning. Det Tol2 transposon system, hvor udenlagn DNA, der skal integreres i genomet flankeres af Tol2 transposase binding sites og co-injiceret med Tol2 transposase mRNA, arbejder med høj effektivitet for vellykket integration plasmidkonstruktioner i fisk genomer 26 - 28. Typisk er en potentiel enhancer klonet opstrøms for en basal promotor (såsom hsp70l 29) og fluorescerende reporter gen, såsom EGFP (forstærket grønt fluorescerende protein) eller mCherry i en Tol2 backbone og injiceret med transposase mRNA 26. Observation af udtryk for den fluorescerende reporter, enten i injicerede embryoner eller afkom med stabilt integrerede transgener, giver oplysninger om den Spatiotemporal regulering af genekspression drevet af den formodede forstærker. I yderligere eksperimenter, kan validerede enhancere anvendes til at drive vævsspecifik overekspression af gener af interesse. Til analyse af større cis reguleringsmyndigheder regioner, høj kvalitet, stor-insert genomic biblioteker med bakterie- kunstige kromosomer (BAC&#39;er) er blevet konstrueret til både marine og ferskvands hundestejler 30. Disse BAC&#39;er kan recombineered at erstatte et gen med en fluorescerende reporter-gen i forbindelse med et stort (150-200 kb) genomiske region 31. Den fluorescerende reporter udtrykkes derefter i en Spatiotemporal mønster som bestemt af regulatoriske sekvenser i BAC. For studier i fisk, kan Tol2 sites føjes til BAC at lette genomisk integration 32,33. I senere stadier af udvikling, når in situ hybridisering er teknisk udfordrende, kan det fluorescerende udlæsning af BAC bruges til at studere mønstre af genekspression, som det er blevet vist for hundestejle knoglemorfogenetisk protein 6 (BMP6) 20. Derudover kan fluorescerende ekspressionsmønstre i et individ spores over tid, hvilket ikke kan opnås med in situ hybridisering. AKB kan også bruges til at tilføje en additional kopi af et genomisk region for at øge doseringen af ​​et gen af ​​interesse. Til undersøgelse af genfunktion, genom redigering er en eksplosivt voksende område, der kan anvendes til fremstilling af målrettede ændringer genomiske sekvenser i en lang række organismer 34. Transskriptionsaktivator-lignende effektor nukleaser (Talens) er modulopbyggede, sekvensspecifikke nukleaser oprindeligt isoleret fra plantepatogener, som kan netop manipuleret til at binde direkte til en genomisk sekvens af valg og generere en dobbeltstrengsbrud 35,36. Grupperet regelmæssigt spatierede korte palindrome repeats (CRISPR) / CAS systemer blev oprindeligt fundet i bakterier og bruge en guide RNA og Cas9 proteinet for at generere en pause i en mål-DNA-sekvens komplementær til føringen 37. Den efterfølgende reparation af dobbeltstrengsbrud skabt af både TALENS og CRISPRs ofte efterlader en lille insertion eller deletion, der kan forstyrre funktionen af ​​målsekvensen35-37. I hundestejler, er Talens blevet brugt til at afbryde genekspression ved at målrette en forstærker 20, og begge Talens og CRISPRs har med succes produceret mutationer i kodning sekvenser (upublicerede data). En detaljeret protokol for generering af CRISPRs til brug i zebrafisk kan bruges som en rettesnor til at udvikle CRISPRs for hundestejler 38. Transgene og genom redigering eksperimenter kræver introduktion af nukleinsyrer i en nyligt befrugtet én-celle embryon. Ved at indføre transgen eller genom-redigeringsværktøj tidligt i udviklingen, er antallet af genetisk manipulerede datter celler i fosteret maksimeret. Injicerede embryoer derefter visuelt screenet for fluorescens eller molekylært screenet for genommodifikationer. Hvis celler, der bidrager til kønscellelinie succes er målrettet, kan transgenet eller mutation videregives til en delmængde af afkom, selv når efter injektion dødelighed er høj. De mosaik fisk kan udkrydsede ellerintercrossed og deres afkom screenet for at inddrive de mutant alleler eller et stabilt integreret transgen af ​​interesse. Denne protokol beskriver metoder til indførelse transgener og genom redigering reagenser i én-celle hundestejle embryoner og overvågning for vellykkede genomiske modifikationer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Stereomicroscope with transillumination</td>
			<td style="width:145px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">S6e/ KL300 LED</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Manual micromanipulator</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MM33</td>
			<td style="width:167px;">Marzhauser M33 Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pressure Injecion system</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPPI-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Back pressure unit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">BPU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette holder kit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPIP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnetic base holder</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">Magnetic base</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Foot switch</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">FSW</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Iron plate (magnetic base)</td>
			<td style="width:145px;">Narishige</td>
			<td style="width:119px;">IP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:145px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:119px;">P-97</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable transfer pipettes</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5% phenol red in DPBS</td>
			<td style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">P0290</td>
			<td style="width:167px;">injection tracer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">#5 forceps, biologie dumoxel&#160;</td>
			<td style="width:145px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11252-30</td>
			<td style="width:167px;">for needle breaking</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette Storage Jar</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">E210</td>
			<td>holds needles</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">6&#34;, 6 teeth per inch plaster drywall saw</td>
			<td style="width:145px;">Lenox</td>
			<td>20571 (S636RP)</td>
			<td>hold eggs for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">13 cm x 13 cm glass plate</td>
			<td style="width:145px;">any hardware store</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Borosilicate glass capillaries, 1.0 mm OD/0.58 mm ID&#160;</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">1B100-F4</td>
			<td style="width:167px;">*harder glass than zebrafish injection capillaries</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">150 x 15mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">FB0875714</td>
			<td>raise stickleback embryos</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 x 10mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-757-100A</td>
			<td>store eggs pre-injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Instant Ocean Salt</td>
			<td style="width:145px;">Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tricaine methanesulfonate/MS-222</td>
			<td style="width:145px;">Western Chemical Inc</td>
			<td style="width:119px;">MS222</td>
			<td style="width:167px;">fish anaesthesia/euthanasia</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sp6 transcription kit</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For transcription of TALENs and transposase mRNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">RNeasy cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">purify transposase or TALEN RNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QiaQuick PCR cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28104</td>
			<td style="width:167px;">clean up plasmids for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proteinase K 20 mg/ml</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM2546</td>
			<td style="width:167px;">for DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nucleobond BAC 100 kit</td>
			<td style="width:145px;">Clontech</td>
			<td style="width:119px;">740579</td>
			<td>for BAC DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NotI</td>
			<td style="width:145px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">R0189L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phusion polymerase</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">F-530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Qiagen PlasmidPlus Midi kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">12943</td>
			<td style="width:167px;">contains endotoxin rinse buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QIAQuick Gel Extraction</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28704&#160;</td>
			<td>for sequencing induced mutations</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phenol:chloroform:Isoamyl alcohol</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P2069-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium acetate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S2889-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (molecular biology grade)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A9539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50X Tris-acetate-EDTA buffer</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">B49</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5-10KbRNA ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">15623-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nanodrop&#160; Spectrophotometer</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Nanodrop 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10X PBS</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>70011-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1kb Plus DNA Ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>10787-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>M8266-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NP-40</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>28324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P1379-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tris pH 8.3</td>
			<td style="width:145px;">Teknova</td>
			<td>T1083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">12-strip PCR tube</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AB-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks

Den trepigget hundestejle fisk har vist sig som et kraftfuldt system til at studere den genetiske basis for en bred vifte af morfologiske, fysiologiske og adfærdsmæssige fænotyper. De bemærkelsesværdigt forskellige fænotyper der har udviklet sig som marine populationer tilpasse sig utallige ferskvandsmiljøer, kombineret med evnen til at krydse havvand og ferskvand former, giver en sjælden hvirveldyr system, hvor genetik kan anvendes til at kortlægge genomiske regioner at styre udviklet træk. Fremragende genomiske ressourcer er nu tilgængelige, lette molekylær genetisk dissektion af udviklede ændringer. Mens mapping eksperimenter generere lister over interessante kandidatgener, er funktionelle genetiske manipulationer kræves for at afprøve roller disse gener. Genregulering kan studeres med transgene reporterplasmider og BAC&#39;er integreret i genomet ved hjælp af Tol2 transposasen systemet. Funktioner af specifikke kandidatgener og cis reguleringsmyndigheder elementer kan vurderes ved at inducere målrettetmutationer med talen og CRISPR / Cas9 genom redigering reagenser. Alle metoder kræver indføring af nukleinsyrer i befrugtede én-celle hundestejle embryoer, en opgave gjort udfordrende ved den tykke chorion af hundestejle embryoer og den relativt lille og tynd blastomer. Her er en detaljeret protokol til mikroinjektion af nukleinsyrer i hundestejle embryoner beskrevet for transgene og genom redigeringsfunktioner at studere genekspression og funktion, samt teknikker til at vurdere succes transgenese og inddrive stabile linjer.

For reportergenassays transgener der har enhanceraktivitet, vil succesfuld injektion resultere i specifik, cellulær ekspression af transgenet (figur 4A, 4C). Injicerede fisk kan derefter udkrydsede at producere stabile linjer (Eksempel på en BAC stabil linie vist i figur 4B). Injektion DNA i hundestejle embryoner typisk resulterer i langt højere dødelighed end RNA alene. Det er typisk at se op til 50% (nogle gange endda mere) letalit...

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Mikroinjektion for Transgenese og Genome Redigering i Trepigget Sticklebacks

Transgene manipulationer og genom-redigering er kritiske for funktionelt teste roller gener og cis reguleringsmyndigheder elementer. Her et detaljeret mikroinjektion protokol for generering af genomiske modifikationer (herunder Tol2-medierede fluorescerende reporter transgene konstruktioner, Talens og CRISPRs) præsenteres for emergente model fisk, den trepigget hundestejle.

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genom-dækkende Snapshot af Chromatin Regulators og stater i<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryoner af Chip-Seq

The recruitment of chromatin regulators and the assignment of chromatin states to specific genomic loci are pivotal to cell fate decisions and tissue and ...

Mosaic Zebrafish Transgenesis for Functional Genomic Analysis of Candidate Cooperative Genes in Tumor Pathogenesis

Mosaic zebrafisk Transgenese for Funktionel Genomisk analyse af kandidatlandenes Cooperative gener i Tumor Patogenese

Comprehensive genomic analysis has uncovered surprisingly large numbers of genetic alterations in various types of cancers.  To robustly and efficiently ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknik Target Mikroinjektion til udviklingslandene<em&gt; Xenopus</em&gt; Nyre

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

Identifikation af kritiske forhold for Immunfarvning i Ærten Bladlus embryoner: Stigende Tissue permeabilitet og aftagende baggrundsfarvning

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Mikroinjektion og Elektroporering i Chordatzoologi<em&gt; Ciona intestinalis</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Microstructured anordninger til optimeret mikroinjektion og billeddannelse af zebrafisk larver

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

En effektiv strategi til at generere væv-specifikke binære transskription systemer i Drosophila af genom-redigering

Binary transcription systems are powerful genetic tools widely used for visualizing and manipulating cell fate and gene expression in specific groups of ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Mikroinjektion-baseret System for i Vivo Implantation af embryonale Cardiomyocytes i aviær Embryo

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Egg Microinjection og effektiv parring for Genom Redigering i Firebrat Thermobia domestica

The firebrat Thermobia domestica is an ametabolous, wingless species that is suitable for studying the developmental mechanisms of insects that led to ...