Name: microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks
Uploaded: 2016-05-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert delvis av NIH R01 # DE021475 (CTM), en NIH Predoctoral Training Grant 5T32GM007127 (PAE), og en NSF Graduate Research Fellowship (NAE). Vi takker Kevin Schwalbach for å utføre BAC recombineering og injeksjoner, Nick Donde for generering CRISPR Sanger-sekvensering av data, og Katherine Lipari for nyttig tilbakemelding på injeksjons protokollen.

All fisk arbeidet ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité ved University of California i Berkeley (protokoll nummer R330). 1. Forbered nukleinsyrer for injeksjon <ol><li> Tol2 Plasmid transgenesis (Tilpasset fra Fisher 26). <ol><li> Klipp 10 mikrogram transposase plasmid (PCS-TP) 39 med 10 U Noti i medfølgende buffer for en time ved 37 ° C for å linear. Merk: Material Transfer avtaler kan være nødvendig for å oppnå Tol2 plasmider. </li><li> Ekstraher kuttet...

Injisere en celle stingsild embryoer for transgenesis eller genom redigering presenterer tre hovedutfordringer. Først i forhold til sebrafisk embryoer, er stingsild embryonale chorion tøff og vil ofte bryte nåler. Dette problem kan delvis løses ved å anvende tykkere og sterkere glass mikropipetter og injisere vinkelrett på chorion (se protokoll, figur 2). Å sikre at så lite vann som mulig tilsettes til embryoene (akkurat nok til å bevirke at chorion til å svelle og løfte vekk fra celle) bidra...

En grunnleggende del av å forstå hvordan biologiske mangfoldet oppstår er å avgjøre de genetiske og utviklings baser utviklet fenotypiske endringer i naturen. Den trepigget stingsild fisk, Gasterosteus aculeatus, har dukket opp som en utmerket modell for å studere genetiske grunnlaget for evolusjon. Stingsild har gjennomgått mange adaptive evolusjonære endringer som marine fisk har kolonisert utallige ferskvannsmiljøer rundt den nordlige halvkule, noe som resulterer i dramatisk morfologiske, fysiologiske og atferdsendringer 1. Genomene av individer fra tjueen stingsild populasjonene er blitt sekvensert og sammenstilt, og en leddforbindelse kart med høy tetthet har blitt generert for ytterligere å forbedre monteringen 2,3. Genetisk kartlegging eksperimenter har identifisert genomiske regioner underliggende utviklet fenotyper 4-6, og i noen tilfeller har de funksjonelle rollene til spesifikke kandidat gener testet 7,8. En rekke genomiske regioner underliggende morfologiske endringer har blitt identifisert med lovende kandidat gener, men disse kandidatene har ennå ikke blitt funksjonelt testet 9-12. I tillegg stingsild er vanlige modeller for studier av populasjonsgenetikk / genomikk 13,14, arts 15, atferd 1, endokrinologi 16, økotoksikologi 17, immunologi 18 og parasittologi 19. Fremtidige studier i hvert av disse feltene vil dra nytte av muligheten til å utføre funksjonelle genetiske manipulasjoner i stingsild. I tillegg til å manipulere sine sekvenser, kan rollene som kandidat gener vurderes ved å studere sine cis-regulatoriske sekvenser og fra funksjonelt økende, synkende, eller eliminere uttrykk for kandidaten genet. Mikroinjeksjon og transgenesis metoder i stingsild er godt etablert 7,8,20 og ble opprinnelig utviklet ved hjelp av en meganuclease-mediertFremgangsmåten 21 først beskrevet i medaka 22. Den modifiserte mikroinjeksjon Metoden som presenteres her er optimalisert for både Tol2-mediert transgenesis og nylig utviklet genom redigering reagenser inkludert Talens og CRISPRs. Endringer i cis-regulatoriske elementer er antatt å være kritisk for morfologisk evolusjon, som cis-regulatoriske endringer kan unngå de negative pleiotrope konsekvenser av mutasjoner som koder 23. Derfor teste og sammenligne mulige cis-regulatoriske sekvenser er blitt et sentralt mål for et økende antall evolusjonære studier. I tillegg har de fleste humane sykdomsvarianter regulatoriske varianter 24,25 og modell virveldyr systemer er sårt tiltrengt for å studere cis-regulatoriske element funksjon og logikk. Fisk som befrukte sine embryoer eksternt i store tall tilby kraftige virveldyr systemer for å studere cis -regulation. Den Tol2 transposon system, der utenrgn DNA som skal integreres i genomet er flankert av transposase Tol2 bindingsseter og ko-injisert med Tol2 transposase mRNA, arbeider med høy virkningsgrad for å lykkes med å integrere plasmid-konstruksjoner inn i fiske genomer 26 - 28. Vanligvis er en potensiell enhancer klonet oppstrøms fra et basal promoter (for eksempel hsp70l 29) og fluorescerende reportergen så som EGFP (forbedret grønt fluorescerende protein) eller mCherry i en Tol2 ryggrad og injisert med mRNA transposase 26. Observasjon av uttrykk for fluorescerende reporter, enten i injiserte embryoer eller avkom med stabilt integrert transgener, gir informasjon om tid og rom regulering av genekspresjon drevet av den antatte enhancer. I videre forsøk kan validerte forsterkere brukes til å drive vevsspesifikt overekspresjon av gener som er av interesse. For analyse av større cis-regulatoriske regioner, høy kvalitet, stor-insert genomic bibliotekene ved bruk av bakterie- kunstige kromosomer (Bacs) er konstruert for både saltvanns- og ferskvanns stingsild 30. Disse BACS kan recombineered for å erstatte et gen med en fluorescerende reporter gen i forbindelse med en stor (150-200 kb) genomisk region 31. Det fluorescerende reporter blir deretter uttrykt i en tid og rom mønster som bestemmes av regulatoriske sekvenser innenfor BAC. For studier i fisk, kan Tol2 sider legges til BAC å lette genomiske integrasjons 32,33. I senere stadier av utviklingen når in situ-hybridisering er teknisk utfordrende, kan den fluorescerende avlesning av BAC benyttes til å studere mønstre av genekspresjon, som har blitt vist for stingsild benmorfogenetisk protein 6 (Bmp6) 20. I tillegg kan fluorescerende ekspresjonsmønstre i et individ kan spores over tid, noe som ikke kan oppnås med in situ-hybridisering. BACS kan også brukes til å legge til en additional kopi av en genomisk region for å øke doseringen av et gen av interesse. For studier av genfunksjon, er genomet redigering en eksplosjonsartet ekspanderende felt som kan benyttes for å fremstille målrettede endringer av genomiske sekvenser i en rekke forskjellige organismer 34. Transkripsjons aktivator-lignende effektor nukleaser (Talens) er modulære, sekvensspesifikke nukleaser opprinnelig isolert fra plante patogener som kan presist konstruert for å binde direkte til en genomisk sekvens av valg og generere en dobbel tråd bryte 35,36. Gruppert regelmessig avbrutt av korte palindromic repetisjoner (CRISPR) / CAS-systemer ble opprinnelig funnet i bakterier og bruke en guide RNA og Cas9 protein for å generere en pause i en target DNA sekvens som er komplementær til guiden 37. Den etterfølgende reparasjon av dobbeltstrenget bryte laget av både Talens og CRISPRs ofte etterlater en liten innskudd eller delesjon, noe som kan forstyrre funksjonen av målsekvensen35-37. I stingsild, har Talens blitt brukt til å forstyrre genuttrykk ved å målrette en forsterker 20, og både Talens og CRISPRs har blitt produsert mutasjoner i sekvensene (upubliserte data). En detaljert protokoll for generering av CRISPRs for bruk i sebrafisk kan brukes som en retningslinje for å utvikle CRISPRs for stingsild 38. Transgene og genom redigering eksperimenter kreve innføring av nukleinsyrer inn i en nylig befruktede en celle-embryo. Ved å innføre transgenet eller genom-redigeringsverktøy tidlig i utviklingen, er antallet av genetisk manipulerte datterceller i embryoet maksimert. Injiserte embryoer blir så visuelt skjermet for fluorescens eller molekylært screenet for genom modifikasjoner. Hvis cellene bidrar til kimcellelinje er vellykket målrettet, kan transgenet eller mutasjon bli gitt videre til en undergruppe av avkom, selv når postinjeksjons dødelighet er høy. Mosaikk fisk kan outcrossed ellerintercrossed og deres avkom skjermet for å gjenopprette den muterte alleler eller et stabilt integrert transgen av interesse. Denne protokollen beskriver metoder for å innføre transgener og genom redigering reagenser i ett-celle stingsild embryoer og overvåking for vellykkede genomiske modifikasjoner.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Stereomicroscope with transillumination</td>
			<td style="width:145px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">S6e/ KL300 LED</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Manual micromanipulator</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MM33</td>
			<td style="width:167px;">Marzhauser M33 Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pressure Injecion system</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPPI-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Back pressure unit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">BPU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette holder kit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPIP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnetic base holder</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">Magnetic base</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Foot switch</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">FSW</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Iron plate (magnetic base)</td>
			<td style="width:145px;">Narishige</td>
			<td style="width:119px;">IP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:145px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:119px;">P-97</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable transfer pipettes</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5% phenol red in DPBS</td>
			<td style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">P0290</td>
			<td style="width:167px;">injection tracer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">#5 forceps, biologie dumoxel&#160;</td>
			<td style="width:145px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11252-30</td>
			<td style="width:167px;">for needle breaking</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette Storage Jar</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">E210</td>
			<td>holds needles</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">6&#34;, 6 teeth per inch plaster drywall saw</td>
			<td style="width:145px;">Lenox</td>
			<td>20571 (S636RP)</td>
			<td>hold eggs for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">13 cm x 13 cm glass plate</td>
			<td style="width:145px;">any hardware store</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Borosilicate glass capillaries, 1.0 mm OD/0.58 mm ID&#160;</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">1B100-F4</td>
			<td style="width:167px;">*harder glass than zebrafish injection capillaries</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">150 x 15mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">FB0875714</td>
			<td>raise stickleback embryos</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 x 10mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-757-100A</td>
			<td>store eggs pre-injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Instant Ocean Salt</td>
			<td style="width:145px;">Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tricaine methanesulfonate/MS-222</td>
			<td style="width:145px;">Western Chemical Inc</td>
			<td style="width:119px;">MS222</td>
			<td style="width:167px;">fish anaesthesia/euthanasia</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sp6 transcription kit</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For transcription of TALENs and transposase mRNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">RNeasy cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">purify transposase or TALEN RNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QiaQuick PCR cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28104</td>
			<td style="width:167px;">clean up plasmids for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proteinase K 20 mg/ml</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM2546</td>
			<td style="width:167px;">for DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nucleobond BAC 100 kit</td>
			<td style="width:145px;">Clontech</td>
			<td style="width:119px;">740579</td>
			<td>for BAC DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NotI</td>
			<td style="width:145px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">R0189L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phusion polymerase</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">F-530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Qiagen PlasmidPlus Midi kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">12943</td>
			<td style="width:167px;">contains endotoxin rinse buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QIAQuick Gel Extraction</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28704&#160;</td>
			<td>for sequencing induced mutations</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phenol:chloroform:Isoamyl alcohol</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P2069-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium acetate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S2889-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (molecular biology grade)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A9539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50X Tris-acetate-EDTA buffer</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">B49</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5-10KbRNA ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">15623-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nanodrop&#160; Spectrophotometer</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Nanodrop 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10X PBS</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>70011-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1kb Plus DNA Ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>10787-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>M8266-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NP-40</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>28324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P1379-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tris pH 8.3</td>
			<td style="width:145px;">Teknova</td>
			<td>T1083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">12-strip PCR tube</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AB-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks

Den trepigget stingsild fisk har dukket opp som et kraftig system for å studere genetiske grunnlaget for et bredt utvalg av morfologiske, fysiologiske og atferdsmessige fenotyper. Den bemerkelsesverdig forskjellige fenotyper som har utviklet seg som marine populasjoner tilpasse seg utallige ferskvannsmiljø, kombinert med evnen til å krysse saltvanns- og ferskvanns former, tilveiebringe et sjeldent virveldyr system hvor genetikk kan benyttes til å kartlegge genomiske regioner kontrollerende utviklet seg trekk. Gode ​​ressurser genomiske er nå tilgjengelig, tilrettelegge molekylær genetisk disseksjon av utviklet seg endringer. Mens kartleggingsforsøk generere lister over interessante kandidatgener, er funksjonelle genetiske manipulasjoner for å teste rollene til disse genene. Genregulering kan studeres med transgene reporter plasmider og BACS integrert i genomet bruker Tol2 transposase system. Funksjoner av spesifikke kandidatgener og cis-regulatoriske elementer kan vurderes ved å fremkalle målrettetmutasjoner med Talen og CRISPR / Cas9 genom redigering reagenser. Alle metoder krever innføring av nukleinsyrer inn befruktede én celle stingsild embryo, en oppgave laget utfordrende av den tykke chorion av stingsild embryoer og relativt liten og tynn blastomere. Her er en detaljert protokoll for mikroinjeksjon av nukleinsyrer i stingsild embryoer beskrevet for transgene og genom redigeringsprogrammer for å studere genekspresjon og funksjon, samt teknikker for å vurdere hvor vellykket transgenesis og gjenopprette stabile linjer.

For reportergen transgener som har enhancer aktivitet, vil vellykket injeksjon resultere i spesifikk, cellulær ekspresjon av transgenet (figur 4A, 4C). Injiserte fisk kan deretter outcrossed for å fremstille stabile linjer (eksempel på en BAC stabil linje vist i figur 4B). Injisering DNA inn stingsild embryoer vanligvis resulterer i langt høyere dødelighet enn RNA alene. Det er vanlig å se opp til 50% (noen ganger enda mer) letalit...

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Mikroinjeksjon for transgenesis og Genome redigering i Threespine Sticklebacks

Transgene manipulasjoner og genom redigering er avgjørende for funksjonelt teste rollene som gener og cis-regulatoriske elementer. Her en detaljert mikroinjeksjon protokoll for generering av genomiske modifikasjoner (inkludert Tol2-mediert fluorescerende reporter transgene konstruksjoner, Talens, og CRISPRs) er presentert for emergent modell fisken, trepigget stingsild.

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genome-wide Snapshot av Chromatin regulatorer og statene i<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryoer av Chip-Seq

The recruitment of chromatin regulators and the assignment of chromatin states to specific genomic loci are pivotal to cell fate decisions and tissue and ...

Mosaic Zebrafish Transgenesis for Functional Genomic Analysis of Candidate Cooperative Genes in Tumor Pathogenesis

Mosaic Sebrafisk transgenesis for Funksjonell Genomisk Analyse av søker Cooperative Gener i Tumor Patogenese

Comprehensive genomic analysis has uncovered surprisingly large numbers of genetic alterations in various types of cancers.  To robustly and efficiently ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse av Sebrafisk Larver Skeletal Muscle Integrity med Evans blå Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknikken til Target Mikroinjeksjon til utviklings<em&gt; Xenopus</em&gt; Nyre

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

Identifisering av kritiske forhold for Farging i Pea Aphid Embryoet: Økende Tissue Permeabilitet og Avtagende bakgrunnsfarging

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Mikroinjeksjon og Electroporation i chordate<em&gt; Ciona intestinalis</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Microstructured enheter for optimal Microinjection og bildebehandling for sebrafisk larver

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

En effektiv strategi for å generere vev-spesifikke binære transkripsjon systemer i Drosophila av genomet redigering

Binary transcription systems are powerful genetic tools widely used for visualizing and manipulating cell fate and gene expression in specific groups of ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Microinjection-basert System for i Vivo implantering av embryonale Cardiomyocytes i Avian Embryo

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Eggmikroinjeksjon og effektiv parring for genomredigering i Firebrat Thermobia domestica

The firebrat Thermobia domestica is an ametabolous, wingless species that is suitable for studying the developmental mechanisms of insects that led to ...