Name: microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks
Uploaded: 2016-05-13T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Detta arbete har finansierats delvis av NIH R01 # DE021475 (CTM), en NIH Predoctoral Training Grant 5T32GM007127 (PAE), och en NSF Graduate Research Fellowship (NAE). Vi tackar Kevin Schwalbach för att utföra BAC recombineering och injektioner, Nick Donde för att generera crispr Sanger sekvensdata och Katherine Lipari för hjälp feedback på injektionsprotokollet.

All fisk arbete godkändes av Institutional Animal Care och användning kommittén vid University of California-Berkeley (protokollnummer R330). 1. Förbered nukleinsyror för injektion <ol><li> Tol2 Plasmid genmodifiering (Anpassad från Fisher 26). <ol><li> Skär 10 ug transposas plasmid (PCS-TP) 39 med 10 U NotI i medföljande buffert under 1 timme vid 37 ° C för att linjärisera. Obs: Material Transfer Agreements kan krävas för att uppnå Tol2 plasmider. </li><li> Extrahera...

Injicera en cell pigg embryon för genmodifiering eller genom redigering presenterar tre viktigaste utmaningarna. Först, i förhållande till zebrafisk embryon är spigg embryonala chorion tuff och kommer ofta bryta nålar. Detta problem kan delvis övervinnas genom användning av tjockare och starkare glasmikropipetter och injektions vinkelrät mot chorion (se protokoll, figur 2). Att se till att så lite vatten som möjligt tillsätts till embryona (bara tillräckligt för att orsaka chorion att svä...

En grundläggande komponent för att förstå hur den biologiska mångfalden uppstår är att bestämma de genetiska och utvecklingsmässiga grunderna för evolved fenotypiska förändringar i naturen. Den storspigg fisk, Gasterosteus aculeatus, har dykt upp som en utmärkt modell för att studera den genetiska grunden för utvecklingen. Spigg har genomgått många adaptiva evolutionära förändringar som marina fisk har koloniserat otaliga sötvattensmiljöer runt norra halvklotet, vilket resulterar i dramatisk morfologiska, fysiologiska och beteendeförändringar 1. Genomen av individer från tjugoen pigg populationer har sekvenserats och monteras, och en hög densitet koppling karta har tagits fram för att ytterligare förbättra enheten 2,3. Genetisk kartläggning experiment har identifierat genomregioner underliggande utvecklats fenotyper 4-6, och i några fall har de funktionella roller specifika gener testats 7,8. Ett antal genomregioner underliggande morfologiska förändringar har identifierats med lovande kandidatgener, men dessa kandidater har ännu inte funktionellt testade 9-12. Dessutom, spigg är vanliga modeller för studier av populationsgenetik / genomik 13,14, artbildning 15 beteende 1, endokrinologi 16, ekotoxikologi 17, immunologi 18 och parasitologi 19. Framtida studier i vart och ett av dessa områden kommer att gynnas av möjligheten att utföra funktionella genetiska manipulationer i spigg. Förutom att manipulera sina kodande sekvenser, kan rollerna av gener bedömas genom att studera deras cis -regulatory sekvenser och funktionellt ökar minskar eller eliminerar uttryck av genen kandidaten. Mikroinjektion och genmodifiering metoder spigg är väl etablerade 7,8,20 och ursprungligen utvecklats med hjälp av en meganuclease-medieradmetod 21 som först beskrevs i medaka 22. Den modifierade mikroinjektion metod som presenteras här har optimerats för både Tol2-medierad genmodifiering och nyutvecklade genomredigerings reagens inklusive Talens och CRISPRs. Ändringar cis -regulatory element tros vara avgörande för morfologisk evolution, som cis -regulatory förändringar kan undvika de negativa pleiotropa konsekvenserna av kodning mutationer 23. Därför testar och jämför förmodade cis -regulatory sekvenser har blivit ett centralt mål för ett ökande antal evolutionära studier. Dessutom har de flesta varianter humana sjukdoms regulatoriska varianter 24,25, och modell ryggradsdjur system är i högsta grad behövs för att studera cis -regulatory elementet funktion och logik. Fisk som befrukta sina embryon externt i ett stort antal erbjuder kraftfulla ryggradsdjur system för att studera cis -Förordning. Den Tol2 transposon-system, i vilket utrikgn DNA som skall integreras i genomet flankeras av Tol2 transposas bindningsställen samt co-injiceras med Tol2 transposas mRNA, arbetar med hög verkningsgrad för att framgångsrikt integrera plasmiden konstruktioner i fiskgenom 26 - 28. Normalt är en potentiell förstärkare klonad uppströms av en basal promotor (såsom hsp70l 29) och fluorescerande reportergen såsom EGFP (enhanced green fluorescent protein) eller mCherry i en Tol2 ryggrad och injiceras med transposas-mRNA 26. Observation av uttryck av den fluorescerande reporter, antingen i injicerade embryon eller avkomma med stabilt integrerade transgener, ger information om Spatiotemporal regleringen av genuttryck som drivs av den förmodade förstärkare. I ytterligare experiment, kan validerade förstärkare användas för att driva vävnadsspecifik överuttryck av gener av intresse. För analys av större cis -regulatory regioner, hög kvalitet stor insats GENOMic bibliotek med bakterie- artificiella kromosomer (BACS) har konstruerats för både marina och sötvattens spigg 30. Dessa BAC kan recombineered för att ersätta en gen med en fluorescerande reportergenen i samband med en stor (150 till 200 kb) genomregion 31. Den fluorescerande reporter uttrycks sedan i en spatiotemporal mönster som bestäms av regulatoriska sekvenser inom BAC. För studier i fisk kan Tol2 platser tillsättas till BAC att underlätta genomisk integration 32,33. I senare stadier av utveckling när in situ hybridisering är tekniskt utmanande, kan fluorescerande avläsning av BAC användas för att studera mönster av genuttryck, som har visats för Pigg benmorfogenetiskt protein 6 (BMP6) 20. Dessutom kan fluorescerande uttrycksmönster i en individ spåras över tiden, vilket inte kan uppnås med in situ-hybridisering. BAC kan också användas för att lägga till en additional kopia av en genomisk region för att öka dosen av en gen av intresse. För studier av genfunktion, är genom att redigera en explosivt växande område som kan användas för att producera riktade förändringar genomsekvenser i en mängd olika organismer 34. Transkriptionsaktivator liknande effektor nukleaser (Talens) är modulära, sekvensspecifika nukleaser ursprungligen isolerade från växtpatogener som kan exakt konstruerad för att binda direkt till en genomisk sekvens av val och generera en dubbelsträng bryta 35,36. Klustrade regelbundet mellanrum korta palindromiska upprepningar (crispr) / CAS-system var ursprungligen hittades i bakterier och använda en guide-RNA och Cas9 proteinet för att generera ett avbrott i en mål-DNA-sekvens som är komplementär till guiden 37. Den efterföljande reparation av dubbelsträngbrott som skapas av både Talens och CRISPRs lämnar ofta bakom en liten insättning eller deletion, som kan störa funktionen av målsekvensen35-37. I spigg har Talens använts för att störa genuttryck genom att rikta en förstärkare 20, och båda Talens och CRISPRs har framgångsrikt producerat mutationer i kodande sekvenser (opublicerade data). En detaljerat protokoll för generering av CRISPRs för användning i zebrafisk kan användas som en riktlinje för att utveckla CRISPRs för sticklebacks 38. Transgena och genom redigering experiment kräver införande av nukleinsyror i en nyligen befruktade en-cell embryo. Genom att införa transgenen eller genomet redigeringsverktyg tidigt i utvecklingen, är antalet genetiskt manipulerade dotterceller i embryot maximeras. Injicerade embryon sedan visuellt screenas för fluorescens eller molekylärt screenas för genom modifieringar. Om celler som bidrar till könscellinjen framgångsrikt målinriktad, kan transgenen eller mutation föras vidare till en undergrupp av avkomma, även när efter injektion letalitet är hög. De mosaik fisk kan utparade ellerintercrossed och deras avkomma screenas för att återställa muterade alleler eller ett stabilt integrerat transgen av intresse. Detta protokoll beskriver metoder för att införa transgener och genom redigering reagens i en cell pigg embryon och övervakning för framgångsrika iska förändringar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="647">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Stereomicroscope with transillumination</td>
			<td style="width:145px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">S6e/ KL300 LED</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Manual micromanipulator</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MM33</td>
			<td style="width:167px;">Marzhauser M33 Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pressure Injecion system</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPPI-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Back pressure unit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">BPU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette holder kit</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">MPIP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Magnetic base holder</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">Magnetic base</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Foot switch</td>
			<td style="width:145px;">Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td style="width:119px;">FSW</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Iron plate (magnetic base)</td>
			<td style="width:145px;">Narishige</td>
			<td style="width:119px;">IP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td style="width:145px;">Sutter Instrument</td>
			<td style="width:119px;">P-97</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable transfer pipettes</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7M</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5% phenol red in DPBS</td>
			<td style="width:145px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">P0290</td>
			<td style="width:167px;">injection tracer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">#5 forceps, biologie dumoxel&#160;</td>
			<td style="width:145px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11252-30</td>
			<td style="width:167px;">for needle breaking</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette Storage Jar</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">E210</td>
			<td>holds needles</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">6&#34;, 6 teeth per inch plaster drywall saw</td>
			<td style="width:145px;">Lenox</td>
			<td>20571 (S636RP)</td>
			<td>hold eggs for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">13 cm x 13 cm glass plate</td>
			<td style="width:145px;">any hardware store</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Borosilicate glass capillaries, 1.0 mm OD/0.58 mm ID&#160;</td>
			<td style="width:145px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">1B100-F4</td>
			<td style="width:167px;">*harder glass than zebrafish injection capillaries</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">150 x 15mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">FB0875714</td>
			<td>raise stickleback embryos</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 x 10mm petri dish</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-757-100A</td>
			<td>store eggs pre-injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Instant Ocean Salt</td>
			<td style="width:145px;">Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tricaine methanesulfonate/MS-222</td>
			<td style="width:145px;">Western Chemical Inc</td>
			<td style="width:119px;">MS222</td>
			<td style="width:167px;">fish anaesthesia/euthanasia</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sp6 transcription kit</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For transcription of TALENs and transposase mRNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">RNeasy cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">purify transposase or TALEN RNA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QiaQuick PCR cleanup kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28104</td>
			<td style="width:167px;">clean up plasmids for injection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Proteinase K 20 mg/ml</td>
			<td style="width:145px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">AM2546</td>
			<td style="width:167px;">for DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nucleobond BAC 100 kit</td>
			<td style="width:145px;">Clontech</td>
			<td style="width:119px;">740579</td>
			<td>for BAC DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NotI</td>
			<td style="width:145px;">NEB</td>
			<td style="width:119px;">R0189L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phusion polymerase</td>
			<td style="width:145px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">F-530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Qiagen PlasmidPlus Midi kit</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">12943</td>
			<td style="width:167px;">contains endotoxin rinse buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">QIAQuick Gel Extraction</td>
			<td style="width:145px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">28704&#160;</td>
			<td>for sequencing induced mutations</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phenol:chloroform:Isoamyl alcohol</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P2069-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium acetate</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>S2889-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethanol (molecular biology grade)</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A9539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50X Tris-acetate-EDTA buffer</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">B49</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.5-10KbRNA ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">15623-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nanodrop&#160; Spectrophotometer</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Nanodrop 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10X PBS</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>70011-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1kb Plus DNA Ladder</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>10787-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Potassium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>M8266-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NP-40</td>
			<td style="width:145px;">ThermoFisher</td>
			<td>28324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween 20</td>
			<td style="width:145px;">Sigma</td>
			<td>P1379-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tris pH 8.3</td>
			<td style="width:145px;">Teknova</td>
			<td>T1083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">12-strip PCR tube</td>
			<td style="width:145px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AB-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection for transgenesis and genome editing in threespine sticklebacks

Den storspigg fisk har visat sig vara ett kraftfullt system för att studera den genetiska grunden för ett brett utbud av morfologiska, fysiologiska och beteendemässiga fenotyper. De anmärkningsvärt olika fenotyper som har utvecklats som marina populationer anpassar sig till otaliga sötvattensmiljöer, i kombination med förmågan att passera marina och sötvattensformer, ger en sällsynt ryggradsdjur system där genetiken kan användas för att kartlägga genomregioner styra utvecklats drag. Utmärkt iska resurser finns nu tillgängliga, vilket underlättar molekylärgenetisk dissektion av utvecklade förändringar. Medan kartläggningsexperiment generera listor av intressanta gener är funktionella genetiska manipulationer som krävs för att testa roller dessa gener. Genreglering kan studeras med transgena reporter plasmider och BAC integrerade i genomet med hjälp av Tol2 transposas systemet. Funktioner av specifika gener och cis -regulatory element kan bedömas genom att inducera riktademutationer med talen och crispr / Cas9 genomet redigering reagenser. Alla metoder kräver införande av nukleinsyror i befruktade en-cellpigg embryon, en uppgift gjorde utmanande av den tjocka chorion av pigg embryon och den relativt liten och tunn blastomer. Här är ett detaljerat protokoll för mikroinjektion av nukleinsyror i spigg embryon beskrivs för transgena och genom redigeringsprogram för att studera genuttryck och funktion, samt tekniker för att bedöma framgången för genmodifiering och återställa stabila linjer.

För reportergen transgener som har förstärkaraktivitet, kommer lyckad injektion resultera i specifik, cellulär expression av transgenen (Figur 4A, 4C). Injicerade fisk kan sedan utparade att producera stabila linjer (Exempel på en BAC stabil linje visas i figur 4B). Injicera DNA i pigg embryon resulterar typiskt i mycket högre dödlighet än RNA ensamt. Det är typiskt att se upp till 50% (ibland mer) dödlighet eller missbildning ...

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks at JoVE.com

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Mikroinjektion för genmodifiering och Genome redigering i Threespine sticklebacks

Transgena manipulationer och genom redigering är avgörande för funktionellt testa roller gener och cis -regulatory element. Här en detaljerad mikroinjektion protokoll för generering av genomiska förändringar (inklusive Tol2-förmedlade fluorescerande reporter transgenstrukturerna, Talens och CRISPRs) presenteras för den framväxande modellen fisken, storspigg.

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genomvid ögonblicksbild av kromatin tillsynsmyndigheter och stater i<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryon från Chip-Seq

The recruitment of chromatin regulators and the assignment of chromatin states to specific genomic loci are pivotal to cell fate decisions and tissue and ...

Mosaic Zebrafish Transgenesis for Functional Genomic Analysis of Candidate Cooperative Genes in Tumor Pathogenesis

Mosaic Zebrafish genmodifiering för Funktionell Genomic analys av kandidat Kooperativa gener i tumör Patogenes

Comprehensive genomic analysis has uncovered surprisingly large numbers of genetic alterations in various types of cancers.  To robustly and efficiently ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknik till Target mikroinjektion till utvecklings<em&gt; Xenopus</em&gt; Njure

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

Identifiering av kritiska förhållanden för immunfärgning i Pea Aphid embryon: Öka Tissue Permeabilitet och Minska bakgrundsfärgning

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo Microinjection and Electroporation in the Chordate Ciona intestinalis

Embryo mikroinjektion och elektroporering i chordate<em&gt; Tarmsjöpung</em

Simple model organisms are instrumental for in vivo studies of developmental and cellular differentiation processes. Currently, the evolutionary distance ...

Microstructured Devices for Optimized Microinjection and Imaging of Zebrafish Larvae

Microstructured enheter för optimerad Mikroskop och Imaging av zebrafisk larver

Zebrafish have emerged as a powerful model of various human diseases and a useful tool for an increasing range of experimental studies, spanning ...

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing

En effektiv strategi för att generera vävnadsspecifika binära transkription system i Drosophila genom gen editering

Binary transcription systems are powerful genetic tools widely used for visualizing and manipulating cell fate and gene expression in specific groups of ...

Microinjection-based System for In Vivo Implantation of Embryonic Cardiomyocytes in the Avian Embryo

Mikroskop-baserat System för i Vivo Implantation av embryonala hjärtmuskelcellerna i aviär embryot

Interpreting the relative impact of cell autonomous patterning versus extrinsic microenvironmental influence on cell lineage determination represents a ...

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Egg Microinjection and Efficient Mating for Genome Editing in the Firebrat Thermobia domestica

Egg Microinjection och effektiv parning för genomredigering i Firebrat Thermobia domestica

The firebrat Thermobia domestica is an ametabolous, wingless species that is suitable for studying the developmental mechanisms of insects that led to ...