Name: adenoviral gene therapy for diabetic keratopathy: effects on wound healing and stem cell marker expression in human organ-cultured corneas and limbal epithelial cells
Uploaded: 2016-04-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epitheli

We gratefully acknowledge financial support by NIH/NEI R01 EY13431 (AVL), CTSI grant UL 1RR033176 (AVL), and grants from the Regenerative Medicine Institute, Cedars-Cedars Medical Center.

Национальный исследовательский болезнь Interchange (NDRI, Филадельфия, штат Пенсильвания), подаваемая соглашался посмертных здоровых и диабетических человеческих глаз и роговицу. Протокол Ndri в человеческой коллекции тканей утверждается управленческую комитетом и при условии соблюдения Национальных ?...

<ol>
	<li>Bikbova, G., Oshitari, T., Tawada, A., Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+changes+in+diabetes+mellitus.">Corneal changes in diabetes mellitus.</a> Curr Diabetes Rev. 8 (4), 294-302 (2012).</li><li>Calvo-Maroto, A. M., Perez-Cambrod&#237;, R. J., Albar&#225;n-Diego, C., Pons, A., Cervi&#241;o, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+quality+of+the+diabetic+eye:+a+review.">Optical quality of the diabetic eye: a review.</a> Eye (Lond). 28 (11), 1271-1280 (2014).</li><li>Tripathy, K., Chawla, R., Sharma, Y. R., Venkatesh, P., Vohra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+changes+in+diabetes+mellitus.">Corneal changes in diabetes mellitus.</a> DOS Times. 20 (5), 55-58 (2015).</li><li>Ljubimov, A. V., Saghizadeh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+corneal+wound+healing.">Progress in corneal wound healing.</a> Prog Retin Eye Res. 49, 17-45 (2015).</li><li>Saghizadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+matrix+metalloproteinase-10+and+matrix+metalloproteinase-3+in+human+diabetic+corneas:+a+possible+mechanism+of+basement+membrane+and+integrin+alterations.">Overexpression of matrix metalloproteinase-10 and matrix metalloproteinase-3 in human diabetic corneas: a possible mechanism of basement membrane and integrin alterations.</a> Am J Pathol. 158 (2), 723-734 (2001).</li><li>Saghizadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteinase+and+growth+factor+alterations+revealed+by+gene+microarray+analysis+of+human+diabetic+corneas.">Proteinase and growth factor alterations revealed by gene microarray analysis of human diabetic corneas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (10), 3604-3615 (2005).</li><li>Kabosova, A., Kramerov, A. A., Aoki, A. M., Murphy, G., Zieske, J. D., Ljubimov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+diabetic+corneas+preserve+wound+healing,+basement+membrane,+integrin+and+MMP-10+differences+from+normal+corneas+in+organ+culture.">Human diabetic corneas preserve wound healing, basement membrane, integrin and MMP-10 differences from normal corneas in organ culture.</a> Exp Eye Res. 77 (2), 211-217 (2003).</li><li>Saghizadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+of+epithelial+stem+cell+marker+patterns+in+human+diabetic+corneas+and+effects+of+c-met+gene+therapy.">Alterations of epithelial stem cell marker patterns in human diabetic corneas and effects of c-met gene therapy.</a> Mol Vis. 17, 2177-2190 (2011).</li><li>Kowluru, R. A., Kowluru, A., Mishra, M., Kumar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+epigenetic+modifications+in+the+pathogenesis+of+diabetic+retinopathy.">Oxidative stress and epigenetic modifications in the pathogenesis of diabetic retinopathy.</a> Prog Retin Eye Res. 48 (Sep), 40-61 (2015).</li><li>Lehrer, M. S., Sun, T. T., Lavker, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+epithelial+repair:+modulation+of+stem+cell+and+transit+amplifying+cell+proliferation.">Strategies of epithelial repair: modulation of stem cell and transit amplifying cell proliferation.</a> J Cell Sci. 111 (Pt 19), 2867-2875 (1998).</li><li>Lu, L., Reinach, P., Kao, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+epithelial+wound+healing.">Corneal epithelial wound healing.</a> Exp Biol Med. 226 (7), 653-664 (2001).</li><li>Rama, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+stem-cell+therapy+and+long-term+corneal+regeneration.">Limbal stem-cell therapy and long-term corneal regeneration.</a> N Engl J Med. 363 (2), 147-155 (2010).</li><li>Di Girolamo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+fate+of+limbal+epithelial+progenitor+cells+in+the+murine+cornea.">Tracing the fate of limbal epithelial progenitor cells in the murine cornea.</a> Stem Cells. 48 (1), 203-225 (2014).</li><li>Amitai-Lange, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+of+stem+and+progenitor+cells+of+the+murine+corneal+epithelium.">Lineage tracing of stem and progenitor cells of the murine corneal epithelium.</a> Stem Cells. 33 (1), 230-239 (2015).</li><li>Di Girolamo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+epithelia:+Tracking+the+fate+of+mammalian+limbal+epithelial+stem+cells.">Moving epithelia: Tracking the fate of mammalian limbal epithelial stem cells.</a> Prog Retin Eye Res. 48 (Sep), 203-225 (2015).</li><li>Saghizadeh, M., Kramerov, A. A., Yu, F. S., Castro, M. G., Ljubimov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+wound+healing+and+diabetic+markers+in+organ+cultured+human+diabetic+corneas+by+adenoviral+delivery+of+c-met+gene.">Normalization of wound healing and diabetic markers in organ cultured human diabetic corneas by adenoviral delivery of c-met gene.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (4), 1970-1980 (2010).</li><li>Saghizadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+wound+healing,+kinase+and+stem+cell+marker+expression+in+diabetic+organ-cultured+human+corneas+upon+MMP-10+and+cathepsin+F+gene+silencing.">Enhanced wound healing, kinase and stem cell marker expression in diabetic organ-cultured human corneas upon MMP-10 and cathepsin F gene silencing.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (13), 8172-8180 (2013).</li><li>Saghizadeh, M., Dib, C. M., Brunken, W. J., Ljubimov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+wound+healing+and+stem+cell+marker+patterns+in+organ-cultured+human+diabetic+corneas+by+gene+therapy+of+limbal+cells.">Normalization of wound healing and stem cell marker patterns in organ-cultured human diabetic corneas by gene therapy of limbal cells.</a> Exp Eye Res. 129 (Dec), 66-73 (2014).</li><li>Hatchell, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+epithelial+basement+membrane+in+the+corneas+of+diabetic+rabbits.">Damage to the epithelial basement membrane in the corneas of diabetic rabbits.</a> Arch Ophthalmol. 101 (3), 469-471 (1983).</li><li>Chung, J. H., Kim, W. K., Lee, J. S., Pae, Y. S., Kim, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+topical+Na-hyaluronan+on+hemidesmosome+formation+in+n-heptanol-induced+corneal+injury.">Effect of topical Na-hyaluronan on hemidesmosome formation in n-heptanol-induced corneal injury.</a> Ophthalmic Res. 30 (2), 96-100 (1998).</li><li>Saghizadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus-driven+overexpression+of+proteinases+in+organ-cultured+normal+human+corneas+leads+to+diabetic-like+changes.">Adenovirus-driven overexpression of proteinases in organ-cultured normal human corneas leads to diabetic-like changes.</a> Brain Res Bull. 81 (2-3), 262-272 (2010).</li><li>Sareen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+limbal-derived+induced+pluripotent+stem+cells+into+limbal-like+epithelium.">Differentiation of human limbal-derived induced pluripotent stem cells into limbal-like epithelium.</a> Stem Cells Transl Med. 3 (9), 1002-1012 (2014).</li><li>Funari, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentially+expressed+wound+healing-related+microRNAs+in+the+human+diabetic+cornea.">Differentially expressed wound healing-related microRNAs in the human diabetic cornea.</a> PLoS One. 8 (12), e84425 (2013).</li><li>Mohan, R. R., Rodier, J. T., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+gene+therapy:+basic+science+and+translational+perspective.">Corneal gene therapy: basic science and translational perspective.</a> Ocul Surf. 11 (3), 150-164 (2013).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+tropism+of+adenoviruses+and+adeno-associated+viruses+to+corneal+cells:+implications+for+corneal+gene+therapy.">Different tropism of adenoviruses and adeno-associated viruses to corneal cells: implications for corneal gene therapy.</a> Mol Vis. 14, 2087-2096 (2008).</li><li>Thomas, C. E., Ehrhardt, A., Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+problems+with+the+use+of+viral+vectors+for+gene+therapy.">Progress and problems with the use of viral vectors for gene therapy.</a> Nat Rev Genet. 4 (5), 346-358 (2003).</li><li>Sharma, G. D., He, J., Bazan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P38+and+ERK1/2+coordinate+cellular+migration+and+proliferation+in+epithelial+wound+healing:+evidence+of+cross-talk+activation+between+MAP+kinase+cascades.">P38 and ERK1/2 coordinate cellular migration and proliferation in epithelial wound healing: evidence of cross-talk activation between MAP kinase cascades.</a> J Biol Chem. 278 (24), 21989-21997 (2003).</li><li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+p38+MAP+kinase+in+regulation+of+cell+migration+and+proliferation+in+healing+corneal+epithelium.">Role of p38 MAP kinase in regulation of cell migration and proliferation in healing corneal epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (1), 100-109 (2004).</li><li>Xu, K. P., Li, Y., Ljubimov, A. V., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+glucose+suppresses+epidermal+growth+factor+receptor/phosphatidylinositol+3-kinase/Akt+signaling+pathway+and+attenuates+corneal+epithelial+wound+healing.">High glucose suppresses epidermal growth factor receptor/phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathway and attenuates corneal epithelial wound healing.</a> Diabetes. 58 (5), 1077-1085 (2009).</li><li>Xu, K., Yu, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+epithelial+wound+healing+and+EGFR+signaling+pathways+in+the+corneas+of+diabetic+rats.">Impaired epithelial wound healing and EGFR signaling pathways in the corneas of diabetic rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (6), 3301-3308 (2011).</li><li>Takamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldose+reductase+inhibitor+counteracts+the+enhanced+expression+of+matrix+metalloproteinase-10+and+improves+corneal+wound+healing+in+galactose-fed+rats.">Aldose reductase inhibitor counteracts the enhanced expression of matrix metalloproteinase-10 and improves corneal wound healing in galactose-fed rats.</a> Mol Vis. 19, 2477-2486 (2013).</li><li>Byun, Y. S., Kang, B., Yoo, Y. S., Joo, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(ADP-ribose)+polymerase+inhibition+improves+corneal+epithelial+innervation+and+wound+healing+in+diabetic+rats.">Poly(ADP-ribose) polymerase inhibition improves corneal epithelial innervation and wound healing in diabetic rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (3), 1948-1955 (2015).</li><li>Deng, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+limbal+stem+cell+deficiency+by+in+vivo+laser+scanning+confocal+microscopy:+a+microstructural+approach.">Characterization of limbal stem cell deficiency by in vivo laser scanning confocal microscopy: a microstructural approach.</a> Arch Ophthalmol. 130 (4), 440-445 (2012).</li><li>Lagali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+morphology+of+the+limbal+palisades+of+Vogt+correlates+with+progressive+stem+cell+deficiency+in+aniridia-related+keratopathy.">In vivo morphology of the limbal palisades of Vogt correlates with progressive stem cell deficiency in aniridia-related keratopathy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5333-5342 (2013).</li></ol>

Роговица, как представляется, является идеальным ткани для генной терапии из-за своей поверхности места, где для доставки генов, а также оценка эффективности и побочных эффектов, которые легко. Тем не менее, клинический перевод этого мощного подхода по - прежнему медленно из - за недоста...

Диабетическая заболевания роговицы в основном приводит к дегенеративным эпителиальные (кератопатии) и нервов (невропатия) изменений. Она часто проявляется аномалии эпителиального заживления ран и уменьшения рогового нерва 1-4. По оценкам , 60-70% больных диабетом имеют различные проблемы роговицы 1,3. Проведенные нами исследования выявили несколько белков - маркеров с измененной экспрессии в диабетических роговиц человека , включая понижающей с-мет прото-онкогенов (рецептор фактора роста гепатоцитов) и повышающей регуляцией матриксных металлопротеиназ-10 (ММР-10) и катепсина F 5, 6. Мы также зафиксировали значительное снижение экспрессии нескольких предполагаемых маркеров эпителиальных стволовых клеток в диабетической роговиц человека. В предыдущих исследованиях мы разработали на основе аденовирусов генной терапии для нормализации уровней маркеров диабета изменены с помощью диабетической роговице системы органной культуры человека, которая показывает медленное заживление ран, диабетическуюИзменения маркера, и стволовых снижение экспрессии клеточного маркера , похожий на роговицу бывших естественных условиях 7,8. Это сохранение изменений , как представляется, из - за существования эпигенетической памяти метаболического 9. Эта система культуры использовали далее для генной терапии. Цели для этой терапии были выбраны из маркеров либо с пониженной экспрессией в диабетических роговиц (с-мет протоонкогена), или повышенная экспрессия (MMP-10 и катепсин F). Аденовирусная (AV) терапия была использована в целом органных культивируют роговиц или корнеосклеральный периферической лимбальных только купе. Это отделение таит эпителиальные стволовые клетки , которые возобновить эпителий роговицы и активно участвовать в ранозаживляющих 4,10-15. Здесь протоколы предназначены для нормальной и диабетического человека роговичного органной культуры, эпителиальные заживление ран, выделение и характеристики клеток, обогащенных культур стволовых клеток лимбальных и аденовирусной трансдукции клетки и роговичного. нашРезультаты показывают целесообразность этой терапии для нормализации экспрессии маркеров и заживление ран у больных сахарным диабетом роговиц для возможной трансплантации в будущем. Они также предполагают , что комбинированная терапия является наиболее эффективным способом восстановить нормальную структуру маркера и эпителиальной исцеление в диабетической роговицы 16-18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1111">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:384px;">minimum essential medium</td>
			<td style="width:277px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:169px;">11095-080</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optisol-GS&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>50006-OPT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ABAM antibiotic-antimycotic mixture</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">calf skin collagen&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>C9791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">agar, tissue culture grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">n-heptanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>72954-5ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">O.C.T. compound&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dispase II&#160;</td>
			<td>Roche Applied Science</td>
			<td>4942078001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">keratinocyte serum-free medium (KSFM)&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17005042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EpiLife medium with calcium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MEPI500CA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">N2 medium supplement, 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">B27 medium supplement, 50x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">human keratinocyte growth supplement, 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>S-001-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">trypsin 0.25% - EDTA 0.02% with phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">trypsin 0.25% with phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15050065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">soybean trypsin inhibitor&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>T6414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">fetal bovine serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">insulin-transferrin-selenite supplement (ITS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>I3146-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to keratin 14</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-53253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to keratin 15</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-47697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to keratin 17</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>SC-58726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to &#916;Np63&#945;</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-8609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to PAX6</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>PRB-278P-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to nidogen-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB2570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">antibody to integrin &#945;3&#946;1</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>MAB1992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">human fibronectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">human laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>L4445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">human type IV collagen</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>C6745-1ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">adenovirus expressing MMP-10 shRNA</td>
			<td>Capital BioSciences</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">adenovirus expressing cathepsin F shRNA</td>
			<td>Capital BioSciences</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">adenovirus expressing scrambled shRNA and GFP</td>
			<td>Capital BioSciences</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">adenovirus expressing c-met</td>
			<td>OriGene (plasmid)</td>
			<td>SC323278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">adenovirus expressing GFP</td>
			<td>KeraFAST</td>
			<td>FVQ002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">sildenafil citrate, 25 mg</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>from pharmacy</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">epidermal growth factor&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PHG0311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">polybrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>107689-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ViraDuctin</td>
			<td>Cell Biolabs</td>
			<td>AD-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ibiBoost</td>
			<td>ibidi, Germany</td>
			<td>50301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Corning round end spatula&#160;</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">60-mm petri dishes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>174888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Nunc Lab-Tek II multiwell chamber slides&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">200 microliter pipet tips</td>
			<td>Bioexpress</td>
			<td>P-1233-200</td>
			<td>other suppliers available</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">inverted microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Diaphot</td>
			<td>other suppliers/models available</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">humidified CO2 incubator&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>370 (Steri-Cycle)</td>
			<td>other suppliers/models available</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>BX-40</td>
			<td>other suppliers/models available</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">dissecting stereo microscope</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td>S4 E</td>
			<td>other suppliers/models available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adenoviral gene therapy for diabetic keratopathy: effects on wound healing and stem cell marker expression in human organ-cultured corneas and limbal epithelial cells

Цель этого протокола заключается в описании молекулярных изменений в диабетических роговиц человека и показать, как они могут быть облегчены с помощью аденовирусной генной терапии в органе культивируют роговиц. Диабетическая заболевания роговицы является осложнение диабета с частыми аномалиями нервов роговицы и эпителиальной заживления раны. Мы также зарегистрировали значительно измененную экспрессию нескольких предполагаемых маркеров эпителиальных стволовых клеток при диабете роговиц человека. Чтобы облегчить эти изменения, аденовирусной генной терапии была успешно осуществлена ​​с использованием повышающую регуляцию с-встретил протоонкогена экспрессии и / или понижающей регуляции протеиназы матрицы металлопротеиназы-10 (ММР-10) и катепсина F. Эта терапия ускоренного заживления ран у больных сахарным диабетом роговиц даже тогда, когда только лимбальных стволовых клеток отсек трансдуцированная. Наилучшие результаты были получены при комбинированном лечении. Для возможной трансплантации пациентов нормированных стволовых клеток, пример также представлен в ОПТИМИЗАЦИЯна трансдукции гена в клеточных культурах, обогащенной стволовыми использованием поликатионные усилителями. Такой подход может быть полезен не только для выбранных генов, но и для других медиаторов эпителия роговицы заживления ран и стволовых клеток функцию.

Ранее мы показали , что в роговичных органных культурах, различия в экспрессии диабетических маркеров (например, базальной мембраны белков и интегрина α3β1) и заживления ран между нормальной и диабетических роговиц сохраняются. Эта система культуры подвергали ге?...

Watch this Scientific Journal Video about Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epitheli

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

An example of adenoviral gene therapy in the human diabetic organ-cultured corneas is presented towards the normalization of delayed wound healing and markedly reduced epithelial stem cell marker expression in these corneas. It also describes the optimization of this process in stem cell-enriched limbal epithelial cultures.

Аденовируса генной терапии для больных сахарным диабетом Кератопатия: Влияние на заживление ран и стволовых клеток маркера выражение в человеческих органов культивируемых роговиц и лимбальных эпителиальных клеток

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Murine Cardiac Pacemaker Cell Aggregates Based on ES-Cell-Programming in Combination with Myh6-Promoter-Selection

Генерация мышиный кардиостимулятор клеточных агрегатов на основе ES-Cell-программирования в комбинации с Myh6-промоутер-Selection

Treatment of the &#8220;sick sinus syndrome&#8221; is based on artificial pacemakers. These bear hazards such as battery failure and infections. Moreover, ...

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Рыбок данио кератоцитов Экспланты по изучению коллективной миграции клеток и реэпителизации кожного заживления ран

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

Культивирование Человеческий плюрипотентных и нервные стволовые клетки в замкнутой системе клеточной культуре фундаментальных и доклинических исследований

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Быстрое, режиссер дифференциация клеток эпителия сетчатки пигмента от человеческого эмбриона или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion одноклеточных в живых нетронутыми данио рерио

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Поколение эшафот бесплатно, трехмерные инсулина выражая Pancreatoids от мыши поджелудочной железы прародителями в пробирке

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Efficient and Scalable Directed Differentiation of Clinically Compatible Corneal Limbal Epithelial Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Высокоэффективные и масштабируемые направленного дифференцирования клинически совместимый роговицы послабляющие стволовых клеток эпителия от человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Corneal limbal epithelial stem cells (LESCs) are responsible for continuously renewing the corneal epithelium, and thus maintaining corneal homeostasis ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

В Vitro поколения Сомит производных от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Hemogenic Reprogramming of Human Fibroblasts by Enforced Expression of Transcription Factors

Гемогенное перепрограммирование фибробластов человека путем принудительного выражения факторов транскрипции

The cellular and molecular mechanisms underlying specification of human hematopoietic stem cells (HSCs) remain elusive. Strategies to recapitulate human ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Подготовка малых РНК-библиотек для секвенирования ранних эмбрионов мыши

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...