Name: correlative light and electron microscopy to study microglial interactions with &#946;-amyloid plaques
Uploaded: 2016-06-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with ÃŽÂ²-Amyloid Plaques at JoVE.com

We are grateful to Dr. Sachiko Sato and Julie-Christine L&#233;vesque at the Bioimaging Platform of the Centre de recherche du CHU de Qu&#233;bec for their technical assistance. Grants from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) RGPIN-2014-05308, The Banting Research Foundation, and The Scottish Rite Charitable Foundation of Canada to M.E.T supported this work.
H.E.H. is recipient of a scholarship from the Lebanese Ministry of Education and Higher Education, and K.B. from the Facult&#233; de m&#233;decine of Universit&#233; Laval.

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع التجارب وتنفيذها في إطار المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية، بما يتفق مع المجلس الكندي بشأن المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان كما تدار من قبل لجنة رعاية الحيوان من جامعة لافال. واستخدمت APP-PS1 الفئران الذكور ما بين 4 و 21 شهرا ...

<ol>
	<li>Heneka, M. T., Carson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation+in+Alzheimer's+disease.">Neuroinflammation in Alzheimer's disease.</a> The Lancet Neurol. 14 (4), 388-405 (2015).</li><li>Herrup, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+rejecting+the+amyloid+cascade+hypothesis.">The case for rejecting the amyloid cascade hypothesis.</a> Nat. Neurosci. 18 (6), 794-799 (2015).</li><li>Heppner, F. L., Ransohoff, R. M., Becher, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+attack:+the+role+of+inflammation+in+Alzheimer+disease.">Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease.</a> Nat. Rev. Neurosci. 16 (6), 358-372 (2015).</li><li>Klunk, W. E., Bacskai, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Abeta+plaques+in+living+transgenic+mice+with+multiphoton+microscopy+and+methoxy-X04,+a+systemically+administered+Congo+red+derivative.">Imaging Abeta plaques in living transgenic mice with multiphoton microscopy and methoxy-X04, a systemically administered Congo red derivative.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 61 (9), 797-805 (2002).</li><li>Liebscher, S., Meyer-Luehmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peephole+into+the+brain:+Neuropathological+features+of+Alzheimer's+disease+revealed+by+in+vivo+two-photon+imaging.">A peephole into the brain: Neuropathological features of Alzheimer's disease revealed by in vivo two-photon imaging.</a> Front Psychiatry. 3, 26 (2012).</li><li>Fuhrmann, M., Bittner, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Cx3cr1+knockout+prevents+neuron+loss+in+a+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Microglial Cx3cr1 knockout prevents neuron loss in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Nat. Neurosci. 13 (4), 411-413 (2010).</li><li>Borchelt, D. R., Ratovitski, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+amyloid+deposition+in+the+brains+of+transgenic+mice+coexpressing+mutant+presenilin+1+and+amyloid+precursor+proteins.">Accelerated amyloid deposition in the brains of transgenic mice coexpressing mutant presenilin 1 and amyloid precursor proteins.</a> Neuron. 19 (4), 939-945 (1997).</li><li>Ly, P. T. T., Cai, F., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+neuritic+plaques+in+Alzheimer's+disease+mouse+model.">Detection of neuritic plaques in Alzheimer's disease mouse model.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li><li>Sadowski, M., Pankiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+prion+amyloid+deposits+in+vivo.">Targeting prion amyloid deposits in vivo.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 63 (7), 775-784 (2004).</li><li>Bussi&#232;re, T., Bard, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+characterization+of+Thioflavin-S-positive+amyloid+plaques+in+transgenic+Alzheimer+mice+and+effect+of+passive+Abeta+immunotherapy+on+their+clearance.">Morphological characterization of Thioflavin-S-positive amyloid plaques in transgenic Alzheimer mice and effect of passive Abeta immunotherapy on their clearance.</a> Am. J. Pathol. 165 (3), 987-995 (2004).</li><li>Rajamohamedsait, H. B., Sigurdsson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+staining+of+amyloid+and+pre-amyloid+peptides+and+proteins+in+mouse+tissue.">Histological staining of amyloid and pre-amyloid peptides and proteins in mouse tissue.</a> Methods Mol. Biol. 849, 411-424 (2012).</li><li>Afkhami, A., Moosavi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adsorptive+removal+of+Congo+red,+a+carcinogenic+textile+dye,+from+aqueous+solutions+by+maghemite+nanoparticles.">Adsorptive removal of Congo red, a carcinogenic textile dye, from aqueous solutions by maghemite nanoparticles.</a> J. Hazard. Mater. (1-3), 398-403 (2010).</li><li>Tremblay, M. -. E., Riad, M., Majewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+mouse+brain+tissue+for+immunoelectron+microscopy.">Preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li><li>Konsman, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates.">The mouse brain in stereotaxic coordinates.</a> Psychoneuroendocrinology. 28 (6), (2003).</li><li>Norden, D. M., Muccigrosso, M. M., Godbout, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+priming+and+enhanced+reactivity+to+secondary+insult+in+aging,+and+traumatic+CNS+injury,+and+neurodegenerative+disease.">Microglial priming and enhanced reactivity to secondary insult in aging, and traumatic CNS injury, and neurodegenerative disease.</a> Neuropharmacology. 96 ((Pt A)), 29-41 (2014).</li><li>Tremblay, M. -. E., Stevens, B., Sierra, A., Wake, H., Bessis, A., Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+microglia+in+the+healthy+brain.">The role of microglia in the healthy brain.</a> J. Neurosci. 31 (45), 16064-16069 (2011).</li><li>&#352;i&#353;kov&#225;, Z., Tremblay, M. &. #. 2. 3. 2. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+and+synapse:+Interactions+in+health+and+neurodegeneration.">Microglia and synapse: Interactions in health and neurodegeneration.</a> Neural Plast. 2013, 425845 (2013).</li><li>DeKosky, S. T., Scheff, S. W., Styren, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+correlates+of+cognition+in+dementia:+quantification+and+assessment+of+synapse+change.">Structural correlates of cognition in dementia: quantification and assessment of synapse change.</a> Neurodegeneration. 5 (4), 417-421 (1996).</li><li>Terry, R. D., Masliah, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+basis+of+cognitive+alterations+in+Alzheimer's+disease:+Synapse+loss+is+the+major+correlate+of+cognitive+impairment.">Physical basis of cognitive alterations in Alzheimer's disease: Synapse loss is the major correlate of cognitive impairment.</a> Ann. Neurol. 30 (4), 572-580 (1991).</li></ol>

يشرح هذا البروتوكول نهج مترابط لاستهداف ويحات Aβ نواة كثيفة مع EM. ميثوكسي-X04 في حقن الجسم الحي يسمح اختيار السريع لأقسام الدماغ التي تحتوي على لويحات Aβ في مناطق معينة وطبقات من الفائدة، وعلى سبيل المثال CA1 الحصين، المشععة طبقات، والجوبية-moleculare. في المثال الح...

اميلويد Aβ تشكيل اللوحة هو السمة المميزة عصبية مرضية الرئيسية لمرض الزهايمر (AD). ومع ذلك أدلة متزايدة تشير إلى الأدوار المهمة للنظام المناعي في 1،2 تطور المرض. على وجه الخصوص، أنشأت بيانات جديدة من الدراسات قبل السريرية والسريرية الخلل المناعي كمحرك أساسي ومساهم في AD علم الأمراض. مع هذه النتائج، ظهرت الخلايا المناعية المركزية والطرفية الأهداف العلاجية بأنها واعدة لمدة 3 م. بروتوكول التالي يجمع بين الضوء والمجهر الإلكتروني (EM) لتوليد رؤى جديدة في العلاقة بين Aβ ترسب البلاك والتعديلات المظهرية دبقية في م. يسمح هذا البروتوكول وصفها لويحات Aβ في نماذج الفئران ميلادي استخدام في حقن الجسم الحي من صبغة الفلورسنت ميثوكسي-X04. ميثوكسي-X04 هو مشتق الكونغو الأحمر التي يمكن بسهولة عبور حاجز الدم في الدماغ لدخول حمة الدماغ وربط صحائف β-مطوي مع ارتفاعffinity. منذ صبغ فلوري، يمكن استخدامه في الجسم الحي الكشف عن Aβ وحة ترسب مع اثنين من الفوتون المجهري 4. مرة واحدة متجهة إلى Aβ، ميثوكسي-X04 لا فصل أو إعادة توزيع بعيدا من لويحات، وأنه يحتفظ مضان على مر الزمن. يدار بشكل عام محيطيا للسماح للتصوير غير الغازية للديناميات الدماغ 5. يبقى مضان أيضا بعد تثبيت ألدهيد، والسماح لتحليل المتلازم بعد الوفاة، بما في ذلك التحقيق في وفاة الخلايا العصبية في المنطقة المجاورة لويحات Aβ 6. يأخذ هذا البروتوكول الاستفادة من خصائص ميثوكسي-X04 لتحديد أقسام الدماغ من APP SWE / PS1A 246E الفئران (APP-PS1، coexpressing طفرة مزدوجة في APP الجينات Lys670Asn / Met671Leu، والإنسان presenilin PS1-A264E البديل) 7 الذي يحمل Aβ لويحات في مناطق معينة من الفائدة (CA1 الحصين، المشععة طبقات، والجوبية-moleculare) قبل إلى ما قبل تضمين المناعية ضد علامة دبقية المتأينة ملزم الكالسيوم محول جزيء 1 (IBA1) لتصور أجسام الخلايا الدبقية والعمليات مع EM. أعطيت الفئران حقن داخل الصفاق من حل ميثوكسي-X04، 24 ساعة قبل تثبيت الدماغ من خلال نضح transcardial. ويتم الحصول على أقسام الدماغ الاكليلية باستخدام vibratome. يتم فحص الأجزاء التي تحتوي على CA1 الحصين تحت المجهر الفلورسنت لوجود لويحات Aβ في المشععة لطبقات والجوبية-moleculare. المناعية لIBA1، ثم يتم إجراء رباعي أكسيد الأوزميوم بعد التثبيت، والبلاستيك الراتنج التضمين على أقسام الدماغ المحدد. في نهاية هذا البروتوكول، وأقسام يمكن أرشفة دون مزيد من التدهور التركيبية، وعلى استعداد لباجتزاء سامسونج وفحص التركيبية. الأهم من ذلك، لويحات لا تزال فلوري بعد المناعية مع الأجسام المضادة مختلفة، على سبيل المثال IBA1 كما هو الحال في هذا البروتوكول. فإنها تصبح أكثر قتامة رهان neuropil من المحيط التالية رباعي أكسيد الأوزميوم بعد التثبيت، بشكل مستقل عن ميثوكسي-X04 تلطيخ، مما يساعد على تحديد دقيق للمناطق الفائدة، بشكل عام ليصل إلى بضعة مليمترات مربعة، لفحصها بالمجهر الإلكتروني النافذ. ويوفر هذا النهج مترابط وسيلة فعالة لتحديد أقسام الدماغ محددة لفحص على مستوى التركيبية. وهذا مفيد بشكل خاص عند دراسة علم الأمراض الميلادي في وقت مبكر، في مناطق محددة في الدماغ أو الطبقات التي قد تحتوي سوى عدد قليل من لويحات Aβ، موجودة في جزء صغير فقط من أقسام الأنسجة. خلال هذه الأوقات خاصة، فإنه سيكون غير فعال لاستخدام المناعية لAβ (ووضع العلامات مزدوج للعلامات الخلوية الأخرى مثل IBA1) على عدة أقسام الدماغ ببساطة أن تسفر عن جزء صغير يحتوي على لويحات Aβ في الموقع المناسب. وبالإضافة إلى ذلك، حقن الفئران حية مع ميثوكسي-X04 قبل أن يضحي ومعالجة الأنسجة لا التراضيالبريد الحفاظ التركيبية. الطرق البديلة مثل تلطيخ بعد الوفاة مع الكونغو الأحمر، Thioflavin S، Thioflavin تي أو ميثوكسي-X04 على أقسام الأنسجة الثابتة تتطلب التفريق تلطيخ في الإيثانول، 11/08 الذي يسبب الضغط الاسموزي ويعطل التركيب الدقيق. الكونغو الأحمر هو أيضا مادة مسرطنة معروفة الإنسان 12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1006">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:523px;">Methoxy-X04</td>
			<td style="width:197px;">Tocris Bioscience</td>
			<td style="width:119px;">4920</td>
			<td style="width:167px;">10 mg substrate per tablet</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Propylene glycol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W294004&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP231-1</td>
			<td>Caution: toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Chloride NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris Hydrochloride</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP153500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acrolein&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>110221</td>
			<td>Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Granular</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19210</td>
			<td>Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter paper</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-790-14F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Peristaltic Pump with Tubing</td>
			<td>ColeParmer</td>
			<td>cp.78023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Excel Winged blood Collection Set Needles 25G&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Extrafine Forceps</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>11152-10</td>
			<td>Tip shape: curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scissors</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hartman Hemostats</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>13003-10</td>
			<td>Tip shape: curved</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissors</td>
			<td>F.S.T</td>
			<td>14004-16</td>
			<td>Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>ROBOZ surgical store</td>
			<td>5818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass scintillation vials</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>74515-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vibrating Blade Michrotome Leica VT1000 S</td>
			<td>Leica Biosystems&#160;</td>
			<td>14047235612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vibratome blades</td>
			<td>Electron microscopy Sciences</td>
			<td>71990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well Tissue Culture Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>353047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethylene Glycol</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP230-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP229-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrogen Peroxide, 30%</td>
			<td>J.T.BAKER</td>
			<td>cat: 2186-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium borohydride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>480886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris HCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP153-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F1051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine serum albumin (BSA), fraction V</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>C001H24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti IBA1, Rabbit&#160;</td>
			<td>WAKO</td>
			<td>019-19741</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>111066046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">VECTASTAIN Elite ABC Kit (Standard)</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3.3&#39;-Diaminobenzidine tetra-hydrochloride (DAB)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5905-50TAB</td>
			<td>Caution: toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Osmium tetroxide, 4% solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19150</td>
			<td>Caution: toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:523px;">Durcupan&#8482; ACM single component A</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>44611</td>
			<td>Resin Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:523px;">Durcupan&#8482; ACM single component B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>44612</td>
			<td>Hardener Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:523px;">Durcupan&#8482; ACM single component C</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>44613</td>
			<td>Plasticizer Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:523px;">Durcupan&#8482; ACM single component D</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>44614</td>
			<td>Accelerator Caution: Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>LesAlcoolsdeComerce</td>
			<td>151-01-15N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Propylene oxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>110205</td>
			<td>Caution: corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum weigh dishes</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70048-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ACLAR&#174;&#8211;Fluoropolymer Films</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>50425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oven/Incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

correlative light and electron microscopy to study microglial interactions with &#946;-amyloid plaques

ويرد بروتوكول مفصلة هنا لتحديد اميلويد لويحات Aβ في أقسام الدماغ من نماذج الماوس مرض الزهايمر قبل المناعية تضمين ما قبل (على وجه التحديد لالمتأين ملزم الكالسيوم محول جزيء 1 (IBA1)، وهو بروتين ملزمة الكالسيوم التي أعرب عنها الخلايا الدبقية الصغيرة) ومعالجة الأنسجة ل المجهر الإلكتروني (EM). ميثوكسي-X04 هو صبغة الفلورسنت التي تعبر حاجز الدم في الدماغ وبشكل انتقائي بربط أوراق بيتا مطوي وجدت في لويحات Aβ نواة كثيفة. حقن الحيوانات مع ميثوكسي-X04 قبل للتضحية وتثبيت الدماغ يسمح الفرز المسبق واختيار من أقسام الدماغ التي تحتوي على لوحة لمزيد من المعالجة مع التلاعب تستغرق وقتا طويلا. وهذا مفيد بشكل خاص عند دراسة علم الأمراض في وقت مبكر م ضمن مناطق محددة في الدماغ أو الطبقات التي قد تحتوي على عدد قليل جدا من لويحات والحاضر إلا في جزء صغير من الأقسام. معالجة ما بعد الوفاة من أقسام الأنسجة مع الكونغو الأحمر، Thioflavin S، وThioflتي AVIN (أو حتى مع ميثوكسي-X04) يمكن تسمية ورقة بيتا مطوي، ولكن يتطلب تطهير واسعة مع الإيثانول لإزالة الصبغة الزائدة وهذه الإجراءات لا تتفق مع الحفاظ التركيبية. ومن شأنه أيضا أن تكون غير فعالة لأداء العلامات لAβ (وغيرها من علامات الخلوية مثل IBA1) على جميع أقسام الدماغ من المناطق ذات الاهتمام، إلا أن تسفر عن جزء صغير يحتوي على لويحات Aβ في الموقع المناسب. الأهم من ذلك، لويحات Aβ لا تزال مرئية بعد معالجة الأنسجة لEM، والسماح لتحديد دقيق للمناطق (بشكل عام ليصل إلى بضعة مليمترات مربعة) لفحص بالمجهر الإلكتروني.

يوضح هذا القسم النتائج التي يمكن الحصول عليها في المراحل الحرجة مختلفة من البروتوكول. على وجه الخصوص أظهرت النتائج أمثلة من أقسام الدماغ التي تحتوي على ميثوكسي-X04 لويحات الملون في منطقة محددة وطبقات من الفائدة: وCA1 الحصين، المشععة طبقات، والجوبية-mol...

Watch this Scientific Journal Video about Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with ÃŽÂ²-Amyloid Plaques at JoVE.com

Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with ÃƒÅ½Ã‚Â²-Amyloid Plaques

توضح هذه المقالة بروتوكول لتصور اميلويد لويحات Aβ في نماذج الفئران مرض الزهايمر باستخدام ميثوكسي-X04، الذي يعبر حاجز الدم في الدماغ وبشكل انتقائي يربط بيتا-مطوي أوراق وجدت في لويحات Aβ نواة كثيفة. فإنه يسمح الفرز المسبق من أقسام الأنسجة التي تحتوي على لوحة قبل المناعية وتجهيز المجهر الإلكتروني.

متلازم الضوء والمجهر الإلكتروني لدراسة دبقية التفاعل مع اللوحات-β اميلويد

A detailed protocol is provided here to identify amyloid A&#946; plaques in brain sections from Alzheimer&#39;s disease mouse models before pre-embedding ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with &#946;-Amyloid Plaques

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

ركزت شعاع ايون طحن والمجهر الإلكتروني لأنسجة الدماغ

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

ضوء الفحص ميول لدراسة الساعة البيولوجية الفطرية وPhotobehavior الخاضعة للرقابة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

ميكرون على نطاق بصري القرار المقطعي من أدمغة فئران كاملة مع متحد البؤر المجهري الخفيفة ورقة

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

التلاعب الجيني للمخيخي الحبيبة الخلايا العصبية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية والهجرة

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

النظام الشمي كنموذج لدراسة أنماط نمو محور عصبي ومورفولوجيا<em&gt; في فيفو</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

A Human Blood-Brain Interface Model to Study Barrier Crossings by Pathogens or Medicines and Their Interactions with the Brain

نموذج واجهة دماغ دم البشري لدراسة نقاط عبور الحاجز بمسببات الأمراض أو الأدوية وتفاعلاتها مع الدماغ

The early screening of nervous system medicines on a pertinent and reliable in cellulo BBB model for their penetration and their interaction with the ...

Light-Induced Molecular Adsorption of Proteins Using the PRIMO System for Micro-Patterning to Study Cell Responses to Extracellular Matrix Proteins

الامتزاز الجزيئي المستحث بالضوء من البروتينات باستخدام نظام بريمو لزخرفه الصغرى لدراسة استجابات الخلايا للبروتينات المصفوفة خارج الخلية

Cells sense a variety of extracellular cues, including the composition and geometry of the extracellular matrix, which is synthesized and remodeled by the ...

Cone-Enriched Cultures from the Retina of Chicken Embryos to Study Rod to Cone Cellular Interactions

مخروط المخصب الثقافات من شبكية العين من أجنة الدجاج لدراسة رود إلى مخروط التفاعلات الخلوية

Human daytime vision relies on the function of cone photoreceptors at the center of the retina, the fovea. Patients suffering from the most prevalent form ...

Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBEM) for the Study of Dendritic Spines

Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBEM for the Study of Dendritic Spines

المسلسل كتلة الوجه المسح المجهري الإلكترون (SBEM) لدراسة العمود الفقري Dendritic

Three-dimensional electron microscopy (3D EM) gives a possibility to analyze morphological parameters of dendritic spines with nanoscale resolution. In ...

Primary Cultures of Rat Astrocytes and Microglia and Their Use in the Study of Amyotrophic Lateral Sclerosis

الثقافات الأولية للخلايا النجمية للفئران والخلايا الدبقية الصغيرة واستخدامها في دراسة التصلب الجانبي الضموري

This protocol demonstrates how to prepare primary cultures of glial cells, astrocytes, and microglia from the cortices of Sprague Dawley rats and how to ...