Name: detecting anastasis in vivo by caspasetracker biosensor
Uploaded: 2018-02-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor at JoVE.com

ونشكر أوبارد دارين للصورة المورفولوجية في الشكل 3، وفي المخطوطة الفيديو؛ ج. هردويك ماري ووأد جيبسون هيذر م. لامب لمناقشة قيمة من هذه المخطوطة. وأيد هذا العمل قبل السير إدوارد ينادي التذكارية زمالة (H.L.T.)، الدكتور والتر سيتو التذكارية المنح الدراسية (H.L.T.)، منح فولبرايت 007-2009 (H.L.T.)، منح زمالة "مؤسسة بحوث علوم الحياة" (H.L.T.)، ولجنة التحقيق الوطنية K22 CA204458 (H.L.T.). وكان "تانغ لام هو" شورل وزميل مؤسسة كورتشي كاي مؤسسة بحوث علوم الحياة (2014-2017).

1) إعداد الذباب بيوسينسور كاسباسيتراكير
<ol><li>تخدير الذباب مع CO2، واستخدم الرسام لنقل 7 إلى 10 الحساسة كاسباسي Gal4 (دقفد)19 العذراء الإناث و 7 إلى 10 ز-تتبع53 Gal4 مراسل الشباب الذكور الذباب (أو العكس بالعكس) في القنينة نفسها مع الغذاء يطير ولصق الخميرة الطازجة. ...

النظام المزدوج بيوسينسور كاسباسيتراكير هو أداة فريدة من نوعها تتيح كشف مؤخرا ورواية أو نشاط caspase الجارية، وتتبع الخلايا التي عكسها موت الخلايا عملية، والبقاء على قيد الحياة بعد أن شهدت caspase النشاط في الجسم الحي. بينما قد افترض caspase النشاط تقليديا كسمة مميزة للمبرمج،...

برمجة موت الخلايا، مثل المبرمج، وتلعب دوراً أساسيا في التنمية الجنينية والتوازن الطبيعي من خلال القضاء على الخلايا غير المرغوب فيها أو إصابة خطيرة في الكائنات الحية متعددة الخلايا1،،من23. يمكن أن يؤدي فقدان التوازن بين موت الخلية والبقاء على قيد الحياة إلى العواقب المميتة مثل السرطان والقلب والمناعة الذاتية وانحطاط4،،من56،،من78. تنشيط الجلاد caspases تقليديا تعتبر "نقطة اللاعودة" في المبرمج9،،من1011، كما أنه يشغل الهدم الخلوية السريعة والواسعة النطاق12، 13،14،،من1516. تتحدى هذه العقيدة العامة، أثبتنا أن مثقف يموت الخلايا الأولية والخلايا السرطانية يمكن استرداد ليس فقط بعد تفعيل caspase، لكن الخلية الهامة التالية أيضا بصمات الموت بما في ذلك بلبينغ غشاء البلازما، انكماش الخلية، المتقدرية التجزؤ، الإفراج عن الفسفرة المتقدرية ج في سيتوسول، النووية والتكثيف الكروماتين، ضرر الحمض النووي، وتجزئة النووية، تعرض الخلية السطحية فوسفاتيديلسيريني (PS)، وتشكيل هيئات apoptotic 17 , 18 , 19 , 20 , 21-ونحن نقترح أن القيامة ظاهرة استعادة خلية مضمن، كما يمكن استرداد خلايا الموت بعد إزالة خلية الموت المحفزات17،،من1819،20، 21-نحن مصطلح "القيامة" (Αναστάσης)18، الذي يعني "ارتفاع للحياة" باللغة اليونانية، إلى وصف هذه الظاهرة استرداد الخلية غير متوقعة. ملاحظتنا للقيامة يتم اعتماد مزيد من الدراسات المستقلة الحديثة التي تكشف أيضا عن استعادة الخلايا بعد فوسفاتيديلسيريني تخريج22،23،24، محدودة المتقدرية الخارجي غشاء بيرميبيليزيشن25والتنشيط من سلالة مختلطة مثل كيناز (ملكل)، و انكماش الخلية26.
وصف الآليات التي تنظم القيامة سيكون تحويل نموذج الآثار الفسيولوجية والمرضية والعلاجية. ويمكن أن تمثل القيامة إليه cytoprotective لم تكن معروفة سابقا لإنقاذ أو الحفاظ على هامة بوستميتوتيك الخلايا والأنسجة التي يصعب على استبدال، وربما الحساب لعكس فشل القلب بتفريغ البطين مع البطين الأيسر مساعدة الأجهزة (لفادس)،من2728، استرداد خلايا مستقبله بعد عابر التعرض المفرط الخفيفة29،،من3031، أو إصلاح الخلايا العصبية بعد إصابة الدماغ32. إذا كان الأمر كذلك تعزيز القيامة يمكن أن يعزز استعادة الخلايا والأنسجة. على العكس من ذلك، يمكن أن تكون القيامة تكتيك هروب غير متوقعة تستخدم الخلايا السرطانية للبقاء على قيد الحياة الذي يحفز موت الخلية والعلاج، يسبب سرطان تكرار17،18. ولذلك، قمع القيامة في موت الخلايا السرطانية أثناء وبعد علاج السرطان يمكن أن يكون رواية استراتيجية علاجية لعلاج السرطان عن طريق منع الانتكاس بها.
أثناء عملية القيامة، وجدنا أن بعض الخلايا المستردة المكتسبة التعديلات الوراثية الدائمة وخضع للتحول النمطان، تكبدت احتمالاً بسبب تلف الحمض النووي أثناء [ابوبتوسس]18،20،21 . عكس عملية موت الخلايا التالفة الحمض النووي يمكن أن يكون إليه توموريجينيسيس، المحتملة الكامنة وراء ملاحظة أن تكرار الإصابة الأنسجة يزيد من خطر الإصابة بالسرطان في مجموعة متنوعة من الأنسجة، مثل الناجم عن الإصابة الحرارية المزمنة في المريء حسب استهلاك المشروبات الساخنة جداً33،،من3435، تلف الكبد بسبب إدمان الكحول36،37، تطور الورم بعد العلاج سمية جينية سرطان38، 39،40، والتنمية من حالات السرطان الجديدة من الأنسجة الطبيعية التي تنشأ خلال الفترات الفاصلة بين دورات العلاج المضادة للسرطان41،42،،من4344 . إذا كانت القيمة true، استهداف القيامة يمكن منع أو اعتقال السرطان التنمية والتقدم. وقد وجدنا أن الخلايا الجرثومية الموت الناجم عن المجاعة الخضوع للقيامة في إعادة تغذية المورفولوجية19.  في حالة حدوث القيامة في الخلايا الجرثومية ذات ضرر الحمض النووي، يمكن أن يكون الحساب لملاحظة أن الإجهاد البيئي لفترات طويلة ويشجع تطور الأمراض الوراثية. على سبيل المثال، تسهم المجاعات في تطور الأمراض القابلة للتوريث تخذها مثل داء السكري وأمراض القلب التاجية45. ولذلك، فهم القيامة يمكن أن يؤدي إلى استراتيجيات للوقاية من الإصابة بأمراض قابلة للتوريث الناجمة عن هذه الآلية المحتملة.
تسخير اكتشاف القيامة وتوجيهها لتطوير علاجات مبتكرة، من الضروري دراسة سببا ونتيجة للقيامة في الحيوانات الحية. ومع ذلك، يمثل تحديا من الناحية التقنية لتحديد وتعقب أناستاتيك الخلايا في الجسم الحي، لتظهر الخلايا التي تم استردادها من عملية موت الخلايا شكلياً لا يمكن تمييزها عن خلايا صحية عادية، ولا أي العلامات البيولوجية للقيامة حددت حتى الآن17،،من1821. لمعالجة هذه المشاكل، وضعنا مؤخرا من جديد في فيفو caspase biosensor عينت19من "كاسباسيتراكير"، لتحديد وتعقب الخلايا التي البقاء على قيد الحياة المبرمج بعد تفعيل caspase19،46، السمة المميزة للمبرمج10،14. يميزه عن أجهزة استشعار العوامل البيولوجية caspase "الوقت الحقيقي" مثل طرد12،47، أبولينير48، كاليفورنيا-بروتينات فلورية خضراء49،18،أبواليرت50، C3AIs51 وإيكاسبير52 التي تكشف عن نشاط caspase الجارية، بيوسينسور كاسباسيتراكير بالإضافة إلى ذلك ميزات القدرة على بشكل دائم تسمية الخلايا هذا النشاط caspase صريحة حتى عابر. ولذلك، تمكن بيوسينسور كاسباسيتراكير تتبع طويل الأجل للقيامة بعد خلية عكس caspase بوساطة عملية الإعدام في فيفو.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1024">
	
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">CONSUMABLES AND REAGENTS</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Vectashield mounting medium</td>
			<td style="width:229px;">Vector Products</td>
			<td style="width:225px;">H-1000</td>
			<td>Antifade mounting medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield mounting medium (with DAPI)</td>
			<td style="width:229px;">Vector Products</td>
			<td style="width:225px;">H-1200</td>
			<td>Antifade mounting medium with DAPI</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps</td>
			<td style="width:229px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:225px;">#505 (110mm, #5)</td>
			<td>Dumont tweezer biology grade, stainless steel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hanging Drop Slides</td>
			<td style="width:229px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:225px;">12-565B</td>
			<td>Glass slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechst 33342</td>
			<td style="width:229px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:225px;">H1399</td>
			<td>DNA stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mitotracker Red CMXRos&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:225px;">M-7512</td>
			<td>Mitochondria stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Cleaved caspase-3 (Asp175) antibody</td>
			<td style="width:229px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:225px;">#9661</td>
			<td>Stain for active fragment of caspase-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Bovine Serum Albumin (BAS)</td>
			<td style="width:229px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:225px;">A8806</td>
			<td>Blocking agent for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td style="width:229px;">VWR</td>
			<td style="width:225px;">114-056-101</td>
			<td>Medium for washing and immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton&#8482; X-100</td>
			<td style="width:229px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:225px;">T8787</td>
			<td>Detergent for cell permeabilization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Name</td>
			<td style="width:229px;">Company</td>
			<td style="width:225px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">EQUIPMENT</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM780 confocal microscope</td>
			<td style="width:229px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:225px;">N/A</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Carl Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:225px;">N/A</td>
			<td>Drosophila dissection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">AmScope Fiber Optic Dual Gooseneck Microscope Illuminator, 150W</td>
			<td style="width:229px;">AmScope</td>
			<td style="width:225px;">WBM99316&#160;</td>
			<td>Light source</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting anastasis in vivo by caspasetracker biosensor

القيامة (اليونانية عن "ارتفاع إلى الحياة") هي ظاهرة انتعاش خلية مكتشفة حديثا حيث تموت الخلايا يمكن عكس العمليات موت الخلية المرحلة المتأخرة التي يفترض عموما أن يكون جوهريا لا رجعة فيه. تعزيز القيامة يمكن في مبدأ الإنقاذ أو الحفاظ على إصابة الخلايا التي يصعب على استبدال مثل كارديوميوسيتيس أو الخلايا العصبية، وبالتالي تيسير استعادة الأنسجة. على العكس من ذلك، قد قمع القيامة في الخلايا السرطانية، تخضع للمبرمج بعد العلاجات المضادة للسرطان، والتأكد من موت الخلايا السرطان وتقليل فرص تكرار. ومع ذلك، أعيقت هذه الدراسات بعدم وجود أدوات لتتبع مصير الخلايا التي يخضع لها القيامة في الحيوانات الحية. يتمثل التحدي في تحديد الخلايا التي قد عكس عملية الإعدام الخلية على الرغم من مظهرها الطبيعي شكلياً بعد الشفاء. وللتغلب على هذه الصعوبة، قمنا بتطوير أنظمة بيوسينسور كاسباسيتراكير الثدييات التي يمكن تحديد وتعقب بشكل دائم أناستاتيك الخلايا في المختبر أو في الجسم الحيو المورفولوجية . نقدم هنا، في فيفو البروتوكولات لتوليد واستخدام نظام كاسباسيتراكير بيوسينسور المزدوج لكشف وتعقب القيامة في melanogaster المورفولوجية بعد التعرض عابر للمحفزات موت الخلية. بينما أجهزة الاستشعار التقليدية والبروتوكولات يمكن تسمية الخلايا تمر بنشاط موت الخلية أبوبتوتيك، بيوسينسور كاسباسيتراكير بشكل دائم يمكن تسمية الخلايا التي انتعشت بعد تفعيل caspase-من السمات مميزة للمرحلة المتأخرة المبرمج، و في الوقت نفسه تحديد العمليات apoptotic النشطة. كما يمكنك تعقب هذا biosensor استعادة الخلايا التي حاول أشكال أخرى من موت الخلايا التي تنطوي على نشاط caspase مباشرة أو غير مباشرة. ولذلك، هذا البروتوكول تمكننا من تتبع مصير هذه الخلايا وذرياتهم، تسهيل الدراسات المستقبلية الوظائف البيولوجية والآليات الجزيئية، الآثار الفسيولوجية والمرضية، والآثار المترتبة على العلاج بشكل مستمر القيامة. نناقش أيضا عناصر التحكم المناسبة لتمييز الخلايا التي يخضع لها القيامة من تلك التي عرضها غير apoptotic caspase النشاط في فيفو.

أن الوقت الفاصل بين الخلية حية مجهرية طريقة موثوقة للقيامة المسالك في الخلايا المستزرعة20، فإنها صعبة لتحديد الخلايا التي خضعت للقيامة في الحيوانات، لأن تظهر الخلايا المستردة شكلياً لا يمكن تمييزها من الطبيعي الخلايا السليمة التي حاولت عدم موت الخلية. على سبيل المثال، عرض ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor at JoVE.com

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

القيامة يمثل تحديا تقنيا للكشف في فيفو للخلايا التي عكسها في عملية موت الخلايا يمكن أن يكون شكلياً لا يمكن تمييزها عن خلايا صحية طبيعية. هنا يصف لنا البروتوكولات لكشف وتعقب الخلايا التي يخضع لها القيامة في الحيوانات الحية باستخدام نظامنا بيوسينسور كاسباسيتراكير المطورة حديثا في فيفو .

الكشف عن القيامة في فيفو قبل بيوسينسور كاسباسيتراكير

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

In Vivo Canine Muscle Function Assay

In Vivo Canine Muscle Function Assay

فيفو الناب في العضلات وظيفة الفحص

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

في الجسم الحي التصوير المزدوج الركيزة Bioluminescent

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

A Research Method For Detecting Transient Myocardial Ischemia In Patients With Suspected Acute Coronary Syndrome Using Continuous ST-segment Analysis

A أسلوب البحث العلمي للكشف عن نقص تروية عضلة القلب في المرضى الذين يعانون عابر متلازمة الشريان التاجي الحادة عن طريق يشتبه المستمر ST-الجزء تحليل

Each year, an estimated 785,000 Americans will have a new coronary attack, or acute coronary syndrome (ACS). The pathophysiology of ACS involves rupture ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

الكشف عن شذوذ في الأوعية الدموية في غلاف العين المشيمي في نموذج الفأر من السن المتصلة تحلل البقعة الصفراء عن طريق التوقيت بالطبع الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

القياس عن بعد داخل الرحم لقياس ماوس مقلص الضغط<em&gt; في فيفو</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

روز البنغال Photothrombosis بواسطة التصوير الضوئي متحد البؤر<em&gt; في فيفو</em&gt;: نموذج لسفينة واحدة السكتة الدماغية

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

مما اثار رد الفعل دباق<em&gt; في فيفو</em&gt; من الدماغ الأمامي الطعنة الإصابات

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...