Name: detecting anastasis in vivo by caspasetracker biosensor
Uploaded: 2018-02-01T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor at JoVE.com

Мы благодарим Darren Obbard для дрозофилы изображения в рисунок отождествлены и видео рукописи; J. Мари Hardwick, Уэйд Гибсон и Хизер м. Lamb ценные обсуждения этой рукописи. Эта работа была поддержана, сэр Эдвард Youde Мемориал стипендий (H.L.T.), д-р Вальтер Szeto Мемориальная стипендия (H.L.T.), Фулбрайт Грант 007-2009 (H.L.T.), наука о жизни исследовательский фонд стипендий (H.L.T.) и NCI K22 Грант CA204458 (H.L.T.). Хо Лам Тан был Shurl и Кей Курчи фонд парень жизни наук исследовательский фонд (2014-2017 годы).

1) подготовка CaspaseTracker биосенсор мух
<ol><li>Анестезировать мух с CO2и использовать кисть для передачи 7 до 10 caspase чувствительных Gal4 (DQVD)19 девственной женщины и 7 10 G-Trace53 Gal4 репортер молодых мужчин мух (или наоборот) в же флакон с летать продовольствия и пасты све?...

Система двойной биосенсор CaspaseTracker Роман и уникальный инструмент, который позволяет обнаруживать последние или текущих caspase активности и отслеживания клеток, которые обратили вспять смерти клетки процесс и выжить после испытывают caspase активность в естественных усл...

Программированной гибели клеток, например, апоптоз, играет важную роль в эмбриональном развитии и нормальный гомеостаз, устраняя нежелательные, раненых или опасные клетки многоклеточных организмов1,2,3. Потеря равновесия между клеточной смерти и выживания может привести к фатальным последствиям таких, как рак, сердечная недостаточность, аутоиммунные заболевания и дегенерации4,5,6,,78. Активация палача, который caspases традиционно считается «точка невозврата» в апоптоз9,10,11, как он вызывает быстрое и массовое разрушение клеточных12, 13,14,,1516. Вызов этой общей догма, мы продемонстрировали, что искусственный умирающего первичные элементы и раковые клетки можно восстановить не только после активации caspase, но также следующие важные ячейки признаки смерти, включая плазматической мембраны блеббинг, сжатие клеток, митохондриальной фрагментации, выпуск митохондрий цитохрома c в цитозоль, ядерной и конденсацию хроматина, повреждение ДНК, ядерных фрагментации, клеток поверхностного воздействия фосфатидилсерина (PS) и формирование apoptotic тела 17 , 18 , 19 , 20 , 21. Мы предлагаем, что воскресение — это явление восстановления внутренней ячейки, как умирающий клеток можно восстановить после удаления клеток смерть раздражители17,18,19,20, 21. Мы придумал термин «Воскресение» (Αναστάσης)18, что означает «растет к жизни» в переводе с греческого, до описать это явление восстановления неожиданные клеток. Наши наблюдения иконографии подкрепляется последние независимые исследования, которые также выявить восстановление клеток после Фосфатидилсерин экстернализации22,23,24, ограниченный митохондриальной наружной мембрана permeabilization25, активация линии смешанных киназа как (MLKL) и клеток усадка26.
Характеризуя механизмы, регулирующие Воскресение Христово будет иметь радикальным изменениям физиологических и патологических терапевтического последствия. Воскресение Христово может представлять ранее неизвестных цитопротективного механизм для спасения или сохранить важные постмитотических клеток и тканей, которые трудно заменить и, возможно, учетная запись для разворота сердечной недостаточности, желудочковая разгрузки с левого желудочка помощь после травмы мозга32устройства (LVADs)27,28, восстановление фоторецепторных клеток после переходных воздействия чрезмерной свет29,30,31, или ремонт нейронов. Если так содействия иконографии может повысить восстановления клеток и тканей. И наоборот Воскресение Христово может быть неожиданным побег тактика, используемая раковые клетки выжить вызывая клеток смерть терапии, вызывая рак повторения17,18. Таким образом подавляя иконографии смерти раковые клетки во время и после лечения рака может быть Роман терапевтические стратегии для лечения рака путем предотвращения их возобновления.
Во время процесса иконографии мы обнаружили, что некоторые восстановленные клетки приобрела постоянных генетические изменения и прошли онкогенных преобразования, вероятно, из-за повреждения ДНК понесенные в апоптоз18,20,21 . Вспять процесс смерти повреждение ДНК клеток может быть механизмом tumorigenesis, потенциально лежащие в основе наблюдения, что повторные повреждения тканей увеличивает риск развития рака в различных тканях, таких, как хронический термической травмы пищевода индуцированной потребление очень горячие напитки33,34,35, повреждение печени из-за алкоголизма36,37, эволюция опухоли после генотоксичных рака терапии38, 39,40и разработка новых видов рака от нормальных тканей, которые возникают в периоды между циклами терапия против рака41,42,,4344 . Значение true, если ориентация иконографии может предотвратить или задержать развитие рака и прогрессии. Мы обнаружили, что голод индуцированной умирающие клетки семенозачатка проходят иконографии в повторную отправку дрозофилы19.  Если иконографии встречается в зародышевых клеток с повреждения ДНК, это может быть счет для наблюдения, что продолжительное экологический стресс способствует развитию генетических заболеваний. Например голод способствуют развитию следующих наследуемых болезней, таких как диабет и ишемической болезни сердца45. Таким образом воскресение понимание может привести к стратегии для предотвращения развития наследуемые заболеваний, вызванных этой потенциальным механизмом.
Чтобы использовать открытие иконографии и направить его в разработке инновационных методов лечения, важно изучить причину и следствие иконографии в живых животных. Однако это технически сложно идентифицировать и отслеживать anastatic клетки в естественных условиях, потому что клетки, которые оправились от процесса смерти клетки появляются морфологически отличаются от нормальных здоровых клеток, и нет никаких биомаркер иконографии выявлены еще17,18,21. Для решения этих проблем, мы недавно разработали новый в vivo caspase биосенсор места для «CaspaseTracker»19, идентифицировать и отслеживать клетки, которые выживают после активацию caspase19,46, апоптоз Отличительной чертой апоптоз10,14. Отличить его от «реального времени» caspase биодатчики Скат12,47, Apoliner48, CA-GFP49, ApoAlert18,50,51 C3AIs и iCasper52 , обнаруживать активность каспазы продолжается, CaspaseTracker биосенсор дополнительно включает способность постоянно ярлык клетки что Экспресс caspase деятельность даже временно. Таким образом CaspaseTracker биосенсор позволяет долгосрочные отслеживания иконографии после обращения вспять caspase опосредованной ячейки смерти процесс в естественных условиях.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1024">
	
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">CONSUMABLES AND REAGENTS</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td style="width:297px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Vectashield mounting medium</td>
			<td style="width:229px;">Vector Products</td>
			<td style="width:225px;">H-1000</td>
			<td>Antifade mounting medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield mounting medium (with DAPI)</td>
			<td style="width:229px;">Vector Products</td>
			<td style="width:225px;">H-1200</td>
			<td>Antifade mounting medium with DAPI</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Forceps</td>
			<td style="width:229px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:225px;">#505 (110mm, #5)</td>
			<td>Dumont tweezer biology grade, stainless steel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hanging Drop Slides</td>
			<td style="width:229px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:225px;">12-565B</td>
			<td>Glass slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hoechst 33342</td>
			<td style="width:229px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:225px;">H1399</td>
			<td>DNA stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mitotracker Red CMXRos&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:225px;">M-7512</td>
			<td>Mitochondria stain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Cleaved caspase-3 (Asp175) antibody</td>
			<td style="width:229px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:225px;">#9661</td>
			<td>Stain for active fragment of caspase-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Bovine Serum Albumin (BAS)</td>
			<td style="width:229px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:225px;">A8806</td>
			<td>Blocking agent for immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td style="width:229px;">VWR</td>
			<td style="width:225px;">114-056-101</td>
			<td>Medium for washing and immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton&#8482; X-100</td>
			<td style="width:229px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:225px;">T8787</td>
			<td>Detergent for cell permeabilization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Name</td>
			<td style="width:229px;">Company</td>
			<td style="width:225px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">EQUIPMENT</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSM780 confocal microscope</td>
			<td style="width:229px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:225px;">N/A</td>
			<td>Imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Carl Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:225px;">N/A</td>
			<td>Drosophila dissection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">AmScope Fiber Optic Dual Gooseneck Microscope Illuminator, 150W</td>
			<td style="width:229px;">AmScope</td>
			<td style="width:225px;">WBM99316&#160;</td>
			<td>Light source</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting anastasis in vivo by caspasetracker biosensor

Воскресение Христово (греческого «восходящая к жизни») явление недавно обнаружили клеток восстановления которой умирая клетки можно отменить смерти поздней стадии клеточных процессов, которые обычно считаются сути необратимым. Содействие иконографии может в принципе спасения или заповедник ранения клетки, которые трудно заменить например кардиомиоцитов или нейроны, способствуя тем самым восстановлению тканей. И наоборот подавления иконографии в раковых клетках, проходят apoptosis после противораковых терапий, может обеспечить смерть клетки рака и уменьшить вероятность рецидива. Однако эти исследования сдерживаются отсутствием инструментов для отслеживания судьбы клеток, которые проходят иконографии в живых животных. Задача заключается в определении клетки, которые обратили вспять процесс смерти клеток, несмотря на их морфологически нормальных внешний вид после восстановления. Для преодоления этой трудности, мы разработали дрозофилы и млекопитающих CaspaseTracker биосенсор систем, которые могут идентифицировать и постоянно следить за anastatic клетки в vitro или в естественных условиях. Здесь мы представляем в vivo протоколы для генерации и использования системы CaspaseTracker двойной биосенсора для обнаружения и отслеживания иконографии в Drosophila melanogaster после переходных воздействия раздражителей смерти клетки. В то время как обычные биодатчики и протоколы можно пометить клетки активно проходят смерть клетки apoptotic, CaspaseTracker биосенсор постоянно можно пометить клетки, которые оправились после активации caspase - признаком поздней стадии апоптоза, и одновременно определите активные apoptotic процессы. Этот биодатчик можно также отслеживать восстановление клеток, которые пытались другие формы смерти клетки, которые прямо или косвенно вовлечены активность каспазы. Таким образом этот протокол позволяет нам постоянно отслеживать судьбу этих клеток и их потомства, облегчения будущих исследований биологических функций, молекулярные механизмы, физиологических и патологических последствий и терапевтические последствия Воскресение Христово. Мы также обсуждаем соответствующие элементы управления для различения клетки, которые проходят иконографии от тех, которые отображают активность каспазы-apoptotic в естественных условиях.

Хотя промежуток времени живой клетки микроскопии является надежным методом для тракта иконографии в культивируемых клеток20, это сложно определить, какие клетки претерпели иконографии в животных, потому что восстановленные клетки появляются морфологически отличаются от...

Watch this Scientific Journal Video about Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor at JoVE.com

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

Воскресение Христово технически сложно обнаружить в естественных условиях , потому что клетки, которые обратили вспять процесс гибели клеток может быть морфологически отличаются от нормальных здоровых клеток. Здесь мы описываем протоколы для обнаружения и отслеживания клетки, которые проходят иконографии в живых животных с помощью нашей недавно разработанных в естественных условиях системы биосенсор CaspaseTracker.

Обнаружение иконографии в естественных условиях , CaspaseTracker биосенсор

Anastasis (Greek for &#8220;rising to life&#8221;) is a recently discovered cell recovery phenomenon whereby dying cells can reverse late-stage cell death ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Detecting Anastasis In Vivo by CaspaseTracker Biosensor

In Vivo Canine Muscle Function Assay

In Vivo Canine Muscle Function Assay

В Vivo собак Пробирной функции мышц

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

В естественных условиях двойного основания Bioluminescent изображений

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

A Research Method For Detecting Transient Myocardial Ischemia In Patients With Suspected Acute Coronary Syndrome Using Continuous ST-segment Analysis

Метод исследования для выявления преходящей ишемии миокарда у больных с подозрением Острый коронарный синдром Использование серийной ST-сегмента анализа

Each year, an estimated 785,000 Americans will have a new coronary attack, or acute coronary syndrome (ACS). The pathophysiology of ACS involves rupture ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

В естественных условиях 19 F МРТ для отслеживания сотовых

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography

Обнаружение аномалий в хориоидальной сосудистой в мышиной модели возрастной макулярной дегенерации путем Время блюд Индоцианиновая Green ангиографии

Indocyanine Green&#160;Angiography (or ICGA) is a technique performed by ophthalmologists to diagnose abnormalities of the choroidal and retinal ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Внутриматочная телеметрии измерить мышь сократительной давления<em&gt; В Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Роза Бенгалия фототромбоза конфокальной оптической томографии<em&gt; В Vivo</em&gt;: Модель одно судно инсульта

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury

Запуск реактивной глиоз<em&gt; В Vivo</em&gt; По переднего мозга Stab травмы

Following injury to the CNS, astrocytes undergo a broad range of biochemical, morphological, and molecular changes collectively referred to as reactive ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Генерация Microtumors Использование 3D человека биогель системы культуры и терпеливый происхождения клеток глиобластомы для Kinomic профилирование и тестирования реагирования на наркотики

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...