Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
1:53
Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
3:47
Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
5:51
High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
8:44
Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
10:16
Conclusion
Transcript
The overall goal of this protocol is to describe the functional assessment of comprehensive, single-site saturation mutagenesis libraries of proteins, utilizing high-throughput sequencing. This method can help answer key questions in the fields of
Sign in or start your free trial to access this content
Vi presenterar ett protokoll för funktionell bedömning av omfattande bibliotek av proteiner som använder hög genomströmning sekvense single-site mättnadsmutagenes. Viktigt använder detta tillvägagångssätt ortogonala primerpar att multiplexera bibliotekskonstruktion och sekvensering. Representativa resultat med hjälp av TEM-1 β-läktarnas väljs vid en kliniskt relevant dos av ampicillin tillhandahålls.