Name: generation of immature, mature and tolerogenic dendritic cells with differing metabolic phenotypes
Uploaded: 2016-06-22T14:00:00
Duration: 6 min 9 s
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इस काम के विज्ञान, प्रौद्योगिकी और रिसर्च कोर अनुदान (जे ई सी) के लिए एजेंसी द्वारा समर्थित किया गया।

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डीसी पहले देर से उन्नीसवीं सदी में पॉल आइलेट्स (Langerhans कोशिकाओं) द्वारा वर्णित के रूप में Jolles 1 द्वारा संदर्भित और 1973 के जो उन्हें पेशेवर प्रतिजन कोशिकाओं 2 के रूप में मान्यता में राल्फ Steinman और Zanvil कोहन की विशेषता थी। डीसी परिधीय रक्त में और इस तरह के त्वचा (Langerhans कोशिकाओं के रूप में उपस्थित) के रूप में और नाक, फेफड़े, पेट के अस्तर और आंतों जो सक्षम में शरीर, बाहरी वातावरण के संपर्क में हैं कि ऊतकों में विशेष रूप से प्रचुर मात्रा में से ज्यादातर के ऊतकों में पाया जाता है उन्हें बाह्य एंटीजन मुठभेड़ की। अपरिपक्व डीसी endocytic क्षमता है, लेकिन अपेक्षाकृत कम क्षमता टी कोशिकाओं 3 प्रोत्साहित करने के लिए है। अपरिपक्व डीसी विभिन्न पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRRS) उस पर कब्जा रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) या क्षति से जुड़े आणविक पैटर्न (damps) 4 व्यक्त करते हैं। को सक्रिय खतरे का संकेत immunogenic डीसी की ओर परिपक्वता ड्राइव करते हुए आत्म अणुओं टी सेल unresponsivene में परिणामएस एस और apoptosis 5। Immunogenic डीसी MHC अणुओं और सह उत्तेजक सतह अणुओं और प्रधानमंत्री भोले टी कोशिकाओं 6.7 करने के लिए अपनी क्षमता का अपरेगुलेशन की विशेषता है। अपरिपक्व DCs भी विटामिन डी 3 मेटाबोलाइट 1 ए, 25 (ओ) 2 डी से 3 और कुछ immunosuppressive एजेंटों इंटरल्युकिन-10 (आईएल -10) की तरह, dexamethasone और 8-9 rapamycin के जवाब में एक Treg उत्प्रेरण या tolerogenic राज्य की ओर से परिपक्व जा सकता है। Tolerogenic डीसी immunoreceptor tyrosine आधारित निरोधात्मक रूपांकनों (ITIMs) सतह रिसेप्टर्स और ligands युक्त उनकी अभिव्यक्ति की विशेषता है। Tolerogenic डीसी में ILT परिवार के सदस्यों, ILT3 और ILT4 युक्त ITIMs के संकेत पारगमन alloproliferation रोकना और ड्राइव Foxp3 + Treg विस्तार 10,11। Tolerogenic डीसी के इन अद्वितीय गुण विवो में उनकी गहन शक्ति, अर्थात् प्रत्यारोपित एलोजेनिक ग्राफ्ट और suppr करने के लिए टिकाऊ सहिष्णुता के लिए प्रेरित करने की क्षमता के लिए नेतृत्वस्व-प्रतिरक्षित बीमारियों के विकास ईएसएस। Tolerogenic डीसी परिपक्व ध्रुवीकरण DCs जो प्रतिरक्षा सक्रियण के निषेध में समारोह का एक उपप्रकार के रूप में इसलिए देखी जा सकती है। Plasmacytoid डीसी और माइलॉयड DCs 12: वर्तमान में, वहाँ मानव परिधीय रक्त में वृक्ष के समान कोशिकाओं के दो सामान्य उपसमुच्चय है। परिसंचारी डीसी मानव रक्त में ल्यूकोसाइट्स की 2% से कम करने के लिए दुर्लभ गठन कर रहे हैं और यह उनके immunoregulatory कार्यों का अध्ययन करने के लिए डीसी की एक उचित संख्या के अलगाव के लिए एक कठिनाई बन गया है। इस समस्या को दूर करने के लिए, एककेंद्रकश्वेतकोशिका भेदभाव डीसी वृक्ष के समान सेल समारोह के अध्ययन के लिए इन विट्रो मॉडल के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं। इन विट्रो में डीसी इन विवो डीसी की तुलना में समान रिसेप्टर्स और कार्य किया है। इन विवो डीसी की और इन विट्रो उत्पन्न एककेंद्रकश्वेतकोशिका निकाली गई DCS (moDCs) में विस्तृत तुलना अन्य प्रयोगशालाओं 13, 14, 15 से जांच कर रहे हैं। यह भी बताया जाता है कि moDCs और सीडी-1 सी + डीसी प्रतिजन और टी सेल समारोह 15 उत्प्रेरण पर बराबर थे। इस पत्र में, हम परिधीय रक्त monocytes से अपरिपक्व moDCs पैदा करने और फिर उन्हें immunogenic और tolerogenic डीसी में फर्क करने की एक विधि का वर्णन है। ये monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं (moDCs) उनकी सतह मार्कर, साइटोकाइन प्रोफाइल, immunoregulatory कार्यों और चयापचय राज्यों की विशेषता है। Immunogenic और tolerogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं अलग साइटोकिन्स जो या तो allogenic टी कोशिकाओं या नियामक टी कोशिकाओं के विस्तार में परिणाम का उत्पादन। इस पत्र में, साइटोकाइन प्रोफाइलिंग मल्टीप्लेक्स प्रौद्योगिकी का उपयोग कर सिस्टम के साथ किया जाता है। कोशिकाओं के विकास को मध्यम एंटीबॉडी स्थिर रंग कोडित मोतियों के साथ incubated और एक कॉम्पैक्ट विश्लेषक में पढ़ रहे हैं। डीसी के चयापचय राज्यों बाह्य प्रवाह एनालाइजर कि मापने ऑक्सीजन की खपत दर, सेलुलर श्वसन का सूचक है, और बाह्य अम्लीकरण दर जो glycolytic दर्शाता का उपयोग कर विश्लेषण कर रहे हैंवृक्ष के समान कोशिकाओं में प्रवाह। इन बायोइनरजेटिक्स दरों का मापन सेलुलर चयापचय में परिवर्तन जो वृक्ष के समान सेल के विकास और समारोह में महत्वपूर्ण हैं ट्रैक करने के लिए एक साधन प्रदान करता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-03</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton, Dickinson</td>
			<td>302832</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL falcon tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL falcon tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m filter</td>
			<td>Sartorius stedim biotech</td>
			<td>17597</td>
			<td>PBMC isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACs kit</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td>Monocyte enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-042-102</td>
			<td>Monocyte enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water</td>
			<td>Invitrogen, Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>11875-093</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30070103</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15140</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate 
			Buffered Saline</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>10010-031</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>11140-040</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15575</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15630-080</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM-CSF</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-093-868</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-4</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-093-924</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin D3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1530</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2915</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>l2755</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypan blue</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-conjugated HLADR&#160;</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>307628</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated CD80</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>557227</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated CD83&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>556855</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated CD86&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555665</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated CD11c</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>340544</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated CD14&#160;</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-091-242</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated BDCA3&#160;</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-090-514</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated ILT3&#160;</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-5139-73</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotype matched 
			PerCP- conjugated Mab</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400250</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotype matched 
			PE- conjugated Mab</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-091-835</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isotype matched 
			APC- conjugated Mab</td>
			<td>Miltenyi biotec</td>
			<td>130-091-836</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR II Flow Cytometer</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>BD LSR II&#160;</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cytofix/cytoperm</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554714</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/CY7-conjugated CD25</td>
			<td>BD pharmingen</td>
			<td>557753</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/CY7-conjugated CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>300512</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-conjugated CD3</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>300428</td>
			<td>Cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human CD4+ T cell enrichment kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>19052</td>
			<td>Alloreaction study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep magnet&#160;</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18000</td>
			<td>Alloreaction study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Trace CFSE cell proliferation kit</td>
			<td>Molecular probes</td>
			<td>C34554</td>
			<td>Alloreaction study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>14025092</td>
			<td>Alloreaction study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647-conjugated FoxP3</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP Human 
			Cytokine/Chemokine 
			magnetic bead panel</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>HCYTOMAG-60K</td>
			<td>Cytokine analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Polystyrene tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td>Cytokine analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminex Sheath Fluid&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SHEATHFLUID</td>
			<td>Cytokine analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLEXMAP 3D system with xPONENT software</td>
			<td>Luminex Corporation</td>
			<td>FLEXMAP 3D</td>
			<td>Cytokine analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Red CMXRos</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td>9082</td>
			<td>Mitochondrial activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td>Mitochondrial activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Assay Medium (OCR)</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>102352-000</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G8769</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Base Medium (ECAR)</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>102353-100</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibrant</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>100840-000&#160;</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Cell Mito Stress kit</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>103015-100</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF Glycolysis Stress kit</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>103020-100</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse&#160;</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>XFe96</td>
			<td>Metabolic adaptation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of immature, mature and tolerogenic dendritic cells with differing metabolic phenotypes

प्रतिजन गैर विशिष्ट सहज प्रतिरक्षा प्रणाली और विशिष्ट प्रतिजन अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच एक जटिल परस्पर क्रिया से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का परिणाम है। प्रतिरक्षा प्रणाली आत्म अणुओं को सहिष्णुता बनाए रखने और रोगजनकों के लिए तेजी से प्रतिक्रिया में एक निरंतर संतुलन है। वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) शक्तिशाली पेशेवर प्रतिजन कोशिकाओं कि अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए सहज प्रतिरक्षा प्रणाली से जोड़ने और आत्म और गैर आत्म बीच अनुकूली प्रतिक्रिया को संतुलित कर रहे हैं। परिपक्वता संकेतों पर निर्भर करता है, अपरिपक्व वृक्ष के समान कोशिकाओं चुनिंदा immunogenic या tolerogenic डीसी में अंतर करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है। Immunogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं क्लोनल विस्तार के लिए विशिष्ट प्रतिजन टी कोशिकाओं को प्रसार संकेतों प्रदान करते हैं; tolerogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं प्रतिजन विशेष टी सेल विलोपन या नियामक टी कोशिकाओं की क्लोनल विस्तार से सहिष्णुता को विनियमित करते हैं। इस अनूठी संपत्ति के कारण, वृक्ष के समान कोशिकाओं को अत्यधिक कैंसर और स्व-प्रतिरक्षित डीआईएसई के लिए के रूप में चिकित्सीय एजेंट के बाद की मांग कर रहे हैंases। वृक्ष के समान कोशिकाओं इन विट्रो में विशिष्ट एंटीजन के साथ भरी हुई है और मानव शरीर में इंजेक्शन एक विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया दोनों immunogenic और tolerogenic माउंट करने के लिए किया जा सकता है। इस काम monocytes, अपरिपक्व monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं (moDCs), tolerogenic और परिपक्व moDCs कि सतह मार्कर अभिव्यक्ति, समारोह और चयापचय phenotypes में अलग से इन विट्रो में उत्पन्न करने के लिए एक साधन प्रस्तुत करता है।

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Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Immature dendritic cells can be selectively differentiated into tolerogenic or mature dendritic cells to regulate the balance between immunity and tolerance. This work presents a means to generate from immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), in vitro tolerogenic and mature moDCs that differ in metabolic phenotypes.

मेटाबोलिक phenotypes भिन्न के साथ अपरिपक्व, परिपक्व और Tolerogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं की पीढ़ी

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

सेल परिपक्वता के बिना वृक्ष के समान कोशिकाओं के कुशल अभिकर्मक के लिए अनुकूलित प्रोटोकॉल

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

जनरेशन और ट्रैकिंग अध्ययन के लिए Qdot Nanocrystals साथ murine अस्थि मज्जा व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं के लेबल

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

माउस फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं का अलगाव

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

Immunotherapy के लिए ट्यूमर एंटीजन से भरी हुई परिपक्व वृक्ष के समान कोशिकाओं की तैयारी

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Generation of a Novel Dendritic-cell Vaccine Using Melanoma and Squamous Cancer Stem Cells

मेलानोमा और स्क्वैमस कैंसर स्टेम सेल का उपयोग करके एक उपन्यास डेंड्रिटिक-सेल वैक्सीन की पीढ़ी

We identified cancer stem cell (CSC)-enriched populations from murine melanoma D5 syngeneic to C57BL/6 mice and the squamous cancer SCC7 syngeneic to C3H ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

मानव थाइमस से माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं का अलगाव

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

टी कोशिकाओं वृक्ष के समान कोशिकाओं से Transinfection द्वारा बैक्टीरिया पर कब्जा

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

एसी-6 फीडर सिस्टम का उपयोग आम लिम्फायड progenitors से Murine Plasmacytoid वृक्ष के समान कोशिकाओं की इन विट्रो पीढ़ी में

Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are powerful type I interferon (IFN-I) producing cells that are activated in response to infection or during ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

जनरेशन और जीएम-सीएसएफ की पहचान व्युत्पन्न वायुकोशीय तरह मैक्रोफेज और वृक्ष के समान माउस अस्थि मज्जा से कोशिकाओं

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

पूरे रक्त से मानव monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं की पीढ़ी

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...