Name: development of a multicellular three-dimensional organotypic model of the human intestinal mucosa grown under microgravity
Uploaded: 2016-07-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity at JoVE.com

This work was supported, in part, by NIAID, NIH, DHHS federal research grants R01 AI036525 and U19 AI082655 (CCHI) to MBS and by NIH grant DK048373 to AF. The content is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institute of Allergy And Infectious Diseases or the National Institutes of Health.

بيان الأخلاق: جمعت جميع عينات الدم من المتطوعين الذين شاركوا في عدد بروتوكول HP-00040025-1. وافقت جامعة ميريلاند مجلس المراجعة المؤسسية هذا البروتوكول وأذن جمع عينات الدم من المتطوعين الأصحاء للدراسات المدرجة في هذه المخطوطة. وأوضح أن الغرض من هذه الدراسة للمتطوعين، وجميع ?...

في هذا المخطوط، وصفنا تطوير نموذج الهندسة البيولوجية من الغشاء المخاطي المعوي البشري يتكون من أنواع الخلايا مضاعفات بما في ذلك الخلايا الليمفاوية الإنسان الأساسية، الخلايا الليفية، والخلايا البطانية، وكذلك الأمعاء خطوط الخلايا الظهارية 24. في هذا النموذج 3-D،...

وذكرت تقارير ان الانطلاقة الأولى في بناء نموذج 3-D في وقت مبكر من 1980s عندما بدأ العلماء للتحقيق في أنواع مختلفة من سقالة (على سبيل المثال، laminin، نوع الكولاجين الأول، الكولاجين الرابع، والفيبرونكتين) والكوكتيلات من عوامل النمو لتحسين خلية الى خلية والتفاعلات ECM من &quot;ثابت&quot; نماذج 3-D 1-7. ومنذ ذلك الحين، كانت المشكلة الرئيسية مع هذه النماذج القيود في نقل المواد المغذية والأكسجين داخل المتوسطة والأنسجة يبني 8. وعلى النقيض من الخلايا في البيئة في الجسم الحي الذي يتلقى تدفق مستمر من المواد المغذية والأكسجين من المحيط شبكات الأوعية الدموية، وطبيعة ثابتة من هذه النماذج تعيق التوزيع الفعال منهم إلى الخلايا. على سبيل المثال، سوف المجاميع خلية ولدت في في المختبر النماذج الثابتة التي تتجاوز بضعة ملليمترات في حجم تتطور دائما ميتة، النوى الميتة 9. في المفاعلات الحيوية RWV قد تحايل على هذه المشكلةمن خلال توفير ديناميات السوائل التي تسمح للنشر أكفأ من المغذيات والأكسجين 10-12. ومع ذلك، حتى الآن، العمل باستخدام المفاعلات الحيوية RWV اقتصرت على إدراج واحد أو اثنين من أنواع الخلايا 13-17. وعلاوة على ذلك، بدلا من التوجه المكاني مماثلة لأنسجة الأم، تلك الخلايا شكلت المجاميع الخلية. وكان السبب الرئيسي لهذه القيود عدم وجود سقالة قادرة على دمج الخلايا بطريقة متكاملة. السقالات المستخدمة في المفاعلات الحيوية RWV حتى الآن تتكون، مع استثناءات قليلة 16-18، وذلك أساسا من ميكروبيدات الاصطناعية، واسطوانات أنبوبي أو ورقة صغيرة 13-15،19-23. هذه هي مواد شديدة تركيبتها والمرونة لا يمكن التلاعب بها، والتي تعلق الخلايا إلى سطحها. وبالتالي، فإنه من غير المحتمل أن هذه النماذج سيوفر النظام الذي لتقييم وبطريقة متكاملة، ومختلف مكونات الخلية مثل خلايا انسجة (على سبيل المثال، الخلايا الليفية، الخلايا المناعية والبطانية) أن لياليأن تفرق hould معها داخل سقالة لتقليد بشكل وثيق الأنسجة البشرية. نحن هنا وصف تطوير نموذج عضوي النمط 3-D متعددة الخلايا في الغشاء المخاطي المعوي البشري يتكون من خط الأمعاء الظهارية الخلايا والخلايا الليمفاوية الإنسان الأساسية، والخلايا البطانية، والخلايا الليفية 24. وكانت هذه الخلايا المستزرعة تحت الجاذبية الصغرى تقدم من قبل مفاعل حيوي RWV 13،25-30. في نموذجنا 3-D، إدارة المحتوى في المؤسسة تمتلك العديد من الخصائص المتميزة، مثل الأسمولية مماثلة إلى مستنبت (على سبيل المثال، القيود الأنتشارى تذكر خلال ثقافة)، والقدرة على دمج الخلايا وغيرها من البروتينات المصفوفة خارج الخلية ذات الصلة، فضلا عن صلابة مناسبة لاستخدامها في المفاعلات الحيوية 24. النظم البيولوجية معقدة جدا، وعلى مدى السنوات القليلة الماضية، كان هناك تحول في التركيز على البحوث المخاطية نحو دراسة التفاعلات الخلية مع محيطهم بدلا من دراستها في isolatioن. على وجه الخصوص، على أهمية التفاعلات خلية خلية في التأثير على بقاء الخلية المعوية والتمايز موثق جيدا 31-34. على وجه التحديد، والاتصالات بين الخلايا الظهارية ومكانها المناسب له تأثير عميق على توسيع الخلايا الظهارية والتمايز 35. في الواقع، ومن المسلم به على نطاق واسع ليس فقط من خلية إلى خلية لكن أيضا التفاعلات الخلية الى ECM حاسمة لصيانة وتمايز الخلايا الظهارية في نماذج الثقافة 3-D. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن البروتينات الأمعاء ECM مثل الكولاجين أنا 24،36،37، laminin 38 و 39 الفيبرونكتين دور فعال في التأثير على الخلايا الظهارية في الأمعاء للحصول على التوجه المكاني على غرار الغشاء المخاطي الأصلي. وهكذا، وتطوير التكنولوجيات الجديدة، مثل لدينا نموذج 3-D 24، التي يمكن أن تحاكي مطلوب تنوع المظهري للامعاء إذا تنوي الباحثين لإعادة العمارة الخلوية والهيكلية المعقدةوظيفة المكروية القناة الهضمية. وتمثل هذه النماذج أداة هامة في تطوير وتقييم الأدوية عن طريق الفم الجديدة واللقاحات المرشحة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="845">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="70">
			<td height="70" style="height:70px;width:319px;">Quad Rotator/Independent Rotating Wall Vessel (RWV) bioreactor&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Synthecon</td>
			<td style="width:115px;">RCCs-4DQ</td>
			<td style="width:283px;">For up to 4 vessels. Models with more or less vessels are also available.</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Disposable 50 ml-vessel</td>
			<td style="width:131px;">Synthecon</td>
			<td style="width:115px;">D-405</td>
			<td style="width:283px;">Box with 4 vessels</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">HCT-8 epithelial cells&#160;</td>
			<td style="width:131px;">ATCC</td>
			<td style="width:115px;">CCL-244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">CCD-18Co Fibroblasts&#160;</td>
			<td style="width:131px;">ATCC</td>
			<td style="width:115px;">CRL-1459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;">Human Umbilical Vein Endothelial Cells</td>
			<td style="width:131px;">ATCC</td>
			<td style="width:115px;">CRL-1730</td>
			<td style="width:283px;">HUVEC</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Fibroblast Growth Factor-Basic&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">F0291</td>
			<td>bFGF</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Stem Cell Factor&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">S7901</td>
			<td>SCF</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Hepatocyte Growth Factor&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">H1404</td>
			<td>HGF</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Endothelin 3</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">E9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:319px;">Laminin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">L2020</td>
			<td style="width:283px;">Isolated from mouse Engelbreth-Holm-Swarm tumor</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Vascular Endothelial Growth Factor&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">V7259</td>
			<td>VEGF</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Leukemia Inhibitory Factor&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:115px;">sc-4377</td>
			<td>(LIF</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Adenine</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">A2786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Insulin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">I-6634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">3,3&#39;,5-triiodo-L-thyronine&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">T-6397</td>
			<td>T3</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Cholera Toxin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">C-8052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:319px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:131px;">BD</td>
			<td style="width:115px;">354008</td>
			<td style="width:283px;">Isolated from human plasma</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">apo-Transferrin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">T-1147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Heparin</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:319px;">Heparan sulfate&#160; proteoglycan</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">H4777</td>
			<td style="width:283px;">Isolated from basement membrane of mouse&#160; Engelbreth-Holm-Swarm tumor</td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:319px;">Collagen IV</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">C5533</td>
			<td style="width:283px;">Isolated from human placenta</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Heat-inactivated fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">D-MEM, powder</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">12800-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">10% formalin&#8211;PBS&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:115px;">SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Bovine type I collagen&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">A1064401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:115px;">MT25-052-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Gentamicin&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">15750-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Penicillin/streptomincin&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Hepes</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Ham&#39;s F-12</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Basal Medium Eagle</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">21010-046</td>
			<td style="width:283px;">BME</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">11875-093</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Endothelial Basal Medium</td>
			<td style="width:131px;">Lonza</td>
			<td style="width:115px;">CC-3156</td>
			<td style="width:283px;">EBM-2</td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:319px;">Endothelial cell growth supplement</td>
			<td style="width:131px;">Millipore</td>
			<td style="width:115px;">02-102</td>
			<td style="width:283px;">ECGS</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a multicellular three-dimensional organotypic model of the human intestinal mucosa grown under microgravity

لأن الخلايا التي تنمو في (3-D) بيئة ثلاثية الأبعاد لديها القدرة على سد العديد من الثغرات في زراعة الخلايا في بيئات 2-D (على سبيل المثال، قوارير أو أطباق). في الواقع، من المسلم به على نطاق واسع أن الخلايا المزروعة في قوارير أو أطباق تميل إلى التقليل من التمييز وفقدان الميزات المتخصصة التابعة للأنسجة التي تشتق منها. حاليا، هناك أساسا نوعان من نظم الاستزراع 3-D حيث هي المصنفة الخلايا في السقالات محاكاة المصفوفة خارج الخلية الأم (ECM): (أ) نماذج ثابتة ونماذج (ب) باستخدام المفاعلات الحيوية. كان الانطلاقة الأولى للساكنة نماذج 3-D. نماذج 3-D باستخدام المفاعلات الحيوية مثل الدورية جدار الأوعية الدموية (RWV) المفاعلات الحيوية هي تطور أكثر حداثة. تم تطوير المفهوم الأصلي للالمفاعلات الحيوية RWV في مركز جونسون للفضاء التابع لناسا في 1990s في وقت مبكر، ويعتقد أن التغلب على القيود المفروضة على نماذج ثابتة مثل تطوير ميتة، النوى الميتة. في المفاعلات الحيوية RWV قد تحايل عشرهو المشكلة عن طريق توفير ديناميات السوائل التي تسمح للنشر كفاءة من المواد المغذية والأكسجين. هذه المفاعلات الحيوية تتكون من قاعدة المدورة التي تعمل على دعم وتدوير شكلين مختلفين من السفن الثقافة التي تختلف من حيث النوع مصدر التهوية: (1) بطء تحول السفن الجانبي (STLVs) مع مكساج المشارك المحوري في المركز، أو (2 ) سفن ارتفاع نسبة الارتفاع (HARVs) مع الأوكسجين عبر، سيليكون المطاط غشاء نقل الغاز مسطح. هذه السفن تسمح نقل الغاز كفاءة مع تجنب تشكيل فقاعة ويترتب على ذلك الاضطراب. هذه الظروف تؤدي إلى تدفق الصفحي والحد الأدنى من قوة القص أن النماذج خفض الثقل (الجاذبية الصغرى) داخل سفينة الثقافة. نحن هنا وصف تطوير نموذج عضوي النمط 3-D متعددة الخلايا في الغشاء المخاطي المعوي البشري يتكون من خط الأمعاء الظهارية الخلايا والخلايا الليمفاوية الإنسان الأساسية، والخلايا البطانية والخلايا الليفية مثقف تحت الجاذبية الصغرى التي تقدمها مفاعل حيوي RWV. &lt;/ P&gt;

<html> سابقا كنا المهندسة 3-D نموذج عضوي النمط متعددة الخلايا في الغشاء المخاطي المعوي البشري يتكون من خط الأمعاء الظهارية الخلايا والخلايا الليمفاوية الإنسان الأساسية، والخلايا البطانية والخلايا الليفية مثقف في ظل ظروف الجاذبية الصغرى 24 (ا...

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity at JoVE.com

Development of a Multicellular Three-dimensional Organotypic Model of the Human Intestinal Mucosa Grown Under Microgravity

خلايا تنمو في (3-D) بيئة ثلاثية الأبعاد تمثل تحسنا ملحوظا خلال زراعة الخلايا في بيئات 2-D (على سبيل المثال، قوارير أو أطباق). نحن هنا وصف تطوير نموذج عضوي النمط 3-D متعددة الخلايا في الغشاء المخاطي في الأمعاء البشرية المستزرعة في ظل انعدام الجاذبية التي تقدمها الدورية جدار الأوعية الدموية (RWV) المفاعلات الحيوية.

تطوير عضوي نموذج متعددة الخلايا ثلاثي الأبعاد من الأمعاء الغشاء المخاطي الإنسان نمت في ظل الجاذبية

Because cells growing in a three-dimensional (3-D) environment have the potential to bridge many gaps of cell cultivation in 2-D environments (e.g., ...

The overall goal of this procedure is to describe the development of a multi-cellular 3-D organotypic model of the human intestinal mucosa cultured under micro-gravity provided by rotating wall vessel bioreactors. This method has a wide range potential as a tool for discovery in both health and disease. Including interactions with pathogens, antigen trafficking and the inflammatory processes.The main advantages of this technique are the mimicking of the phenotypic diversity of the cat and the use of the D-12 vessel bioreactors that allow efficient diffusion of nutrients and oxygen. Start by unscrewing the cap from the fill port of the culture vessel and adding 50 milliliters of our PMI. Once the vessel is full, replace the cap and wipe any spilled medium with 70%ethanol.Allow the vessel to incubate for at least 15 minutes to overnight at room temperature. When ready to continue, use the fill port to discard the culture medium and add 30 milliliters of the 3-D culture medium to the vessel. Replace the cap on the fill port and again, wipe up any spilled medium with 70%ethanol.Remove near confluent flasks containing human umbilical vein endothelial cells and human colonic fibroblasts from the incubator and wash them twice with PBS. Then, detach the cells by covering them using a 0.25%trypsin solution with 0.05%trypsin EDTA. Once the cells detach, collect them in a 50 milliliter tube preloaded with 30 milliliters of DMEM containing 30%FBS.Centrifuge the tube for 10 minutes to pellet the cells. Then, re-suspend the cells in 30 milliliters of DMEM containing 30%FBS. Next, dilute 20 microliters of the re-suspended cells with 20 micro-liters of trypan blue dye.Load the hemocytometer with the cell mixture and count the concentration of viable cells. Then, re-suspend each cell type at 50 to 80 million cells per milliliter in DMEM containing 30%FBS. First, place the appropriate number of culture inserts into the wells of a six well plate.Next, prepare the collagen mixture by first adding 10x DMEM, 10x Reconstitution Media, 200 millimolar L-glutamine and heat inactivated FBS to a 50 milliliter conical tube. Then add bovine collagen type one, laminin, collagen type four, fibronectin, heparin sulfate proteoglycan and finally add sodium hydroxide to neutralize the solution's pH. If at any time the mixture develops a yellowish colored acidic appearance, add a few drops of sterile 1 normal sodium hydroxide to neutralize the mixture.Close the tube and mix the solution by inverting it several times while avoiding bubble formation. When not mixing, keep the solution on ice to prevent it from polymerizing. Once mixed, add the cell suspensions to the collagen preparation and mix the tubes by gently inverting the tubes several times to avoid bubble formation.Then place them back on the ice. Add four to five milliliters of the cell containing collagen solution into each insert and allow the collagen to gel in the hood with little or no movement for one hour. After one hour, transfer the six well plate to an incubator for one to two additional hours.Next, return the plate to the tissue culture hood and use a pair of sterile forceps and a scalpel to aseptically cut the membrane from the insert. Detach the cell containing gel from the membrane and then cut the detached gel into small squares. Add the small cell containing collagen squares into one of the pre-filled 50 milliliter vessels using the fill port.Next prepare a suspension of HCT-8 human epithelial cells as described in the accompanying text protocol. Re-suspend the cells at a concentration of 10 million cells per milliliter in DMEM containing 30%FBS. Then, add one milliliter of the HCT-8 cell suspension into the 50 milliliter vessel using its fill port.After adding the cells, add an additional 20 milliliters of 3-D culture medium into the vessel so that it is nearly full. Replace the cap and wet the lip of the fill port with 70%ethanol. Next, place a five milliliter syringe containing three to four milliliters of 3-D culture medium into one port of the vessel and an empty five milliliter syringe in the other port.Remove any visible bubbles by pulling into the empty syringe while approximately the same volume of medium is injected through the other syringe into the vessel. With all of the air now removed, place the vessels in the bioreactor, turn on the power and set the speed at 13 to 14 rotations per minute. Adjust the speed as necessary to prevent the cells from contacting the vessel walls.Culture the cells under micro-gravity and change the culture medium every three to four days. To change the media, use the dual syringe method to replace approximately 30 milliliters of the used medium with fresh 3-D culture medium. After three to five days in culture, isolate peripheral blood mononuclear cells as described in the accompanying text protocol.Then remove the vessel from the bioreactor and add approximately 20 million cells consisting of lymphocytes and monocytes to the vessels through the fill port. Place the vessels back in the bioreactor and culture for an additional four to six days. Around day nine of the culture, add an additional 20 million cells consisting of lymphocytes and monocytes into the vessel and continue the cultures for up to 12 additional days.At the end of the experiment, use a transfer pipette to harvest each small gel fragment, now called a construct, and place them into the wells of a six well plate containing 10 milliliters of 10%formalin buffer. Fix the constructs for three hours at room temperature and then proceed with standard histological embedding, sectioning and staining protocols. The methods presented in this video produce a multi-cellular 3-D organotypic model of the human intestinal mucosa.In micro-gravity culture, cells become well differentiated and form ordered, villus-like features by day 20. Once mastered, this technique can be done in six hours if it is performed properly. While attempting this procedure, it's important to remember to adhere to good cell culture guidelines.It is crucial to systematically control cells for viability, mycoplasma contamination and changes in cell growth behavior. Following this procedure, other methods like immunohistochemistry can be performed in order to identify markers of lineage and cell differentiation. After watching this video, you should have a good understanding of how to develop a multi-cellular 3-D organotypic model of the human intestinal mucosa cultured under micro-gravity.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

الجلد ثلاثي الأبعاد إعادة بناء الإنسان النموذجي : أداة لدراسة بشرة العادية والتقدم الميلانوما

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

مستو وثلاثي الابعاد من أحبار الطباعة موصل

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

A Novel Three-dimensional Flow Chamber Device to Study Chemokine-directed Extravasation of Cells Circulating under Physiological Flow Conditions

رواية ثلاثي الأبعاد التدفق جهاز الدائرة لدراسة Chemokine الموجه التسرب من خلايا اعارة تحت ظروف تدفق الفسيولوجي

Extravasation of circulating cells from the bloodstream plays a central role in many physiological and pathophysiological processes, including stem cell ...

Investigating the Three-dimensional Flow Separation Induced by a Model Vocal Fold Polyp

التحقيق في فصل التدفق ثلاثي الأبعاد الناجم عن نموذج بوليب أضعاف الصوتية

The fluid-structure energy exchange process for normal speech has been studied extensively, but it is not well understood for pathological conditions. ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

الغضروف الإنسان الأنسجة التصنيع باستخدام ثلاثي الأبعاد تكنولوجيا الطباعة النافثة للحبر

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

تحليل الهجرة خلية داخل الكولاجين مصفوفة ثلاثية الأبعاد

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

جيل من سمك ثلاثي الأبعاد الجلد كامل أي ما يعادل واصابة الآلي

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

أسلوب صافي المستندة إلى القالب لإنشاء أنسجة القلب خالية من السقالة ثلاثي الأبعاد

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Lab-on-a-CD Platform for Generating Multicellular Three-dimensional Spheroids

منصة مختبر علي القرص المضغوط لتوليد خزان ثلاثي الابعاد متعدد الخلايا

A three-dimensional spheroid cell culture can obtain more useful results in cell experiments because it can better simulate cell microenvironments of the ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

تقييم الكهربائيات القلبية قبل الاحتكين بواسطة الجهد المزدوج ورسم الخرائط البصرية الكالسيوم لشرائح القلب العضوية البشرية

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...