Name: how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases at JoVE.com

We thank Simon Hayward (Vanderbilt University Medical Center) for the BPH-1 cells; and Thomas Cox and Janine Erler (Biotech Research &amp; Innovation Centre, University of Copenhagen) for their assistance with rheological measurements. MR-T was funded by Worldwide Cancer Research, formerly The Association of International Cancer Research (Grant 08-0803 to JS), The British Embassy Montevideo and Agencia Nacional de Investigacion e Innovacion (UK_RH_2015_1_2 to MR-T). MC was supported by Prostate Cancer UK (Grant S14-017 to JS and GS). KW was funded by The China Scholarship Council. MAM was funded by The Saudi Arabian Cultural Bureau.

<ol>
	<li>Timpl, R., Brown, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+assembly+of+basement+membranes.">Supramolecular assembly of basement membranes.</a> Bioessays. 18 (2), 123-132 (1996).</li><li>Yurchenco, P. D., Ruben, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+collagen+lateral+associations+in+the+EHS+tumor+matrix.+Comparison+with+amniotic+and+in+vitro+networks.">Type IV collagen lateral associations in the EHS tumor matrix. Comparison with amniotic and in vitro networks.</a> Am J Pathol. 132 (2), 278-291 (1988).</li><li>Halfter, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+composition+and+biomechanical+properties+of+in+vivo-derived+basement+membranes.">Protein composition and biomechanical properties of in vivo-derived basement membranes.</a> Cell Adh Migr. 7 (1), 64-71 (2013).</li><li>Candiello, J., Cole, G. J., Halfter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+changes+in+the+structure,+composition+and+biophysical+properties+of+a+human+basement+membrane.">Age-dependent changes in the structure, composition and biophysical properties of a human basement membrane.</a> Matrix Biol. 29 (5), 402-410 (2010).</li><li>To, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes-induced+morphological,+biomechanical,+and+compositional+changes+in+ocular+basement+membranes.">Diabetes-induced morphological, biomechanical, and compositional changes in ocular basement membranes.</a> Exp Eye Res. 116, 298-307 (2013).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li><li>Bello, D., Webber, M. M., Kleinman, H. K., Wartinger, D. D., Rhim, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+responsive+adult+human+prostatic+epithelial+cell+lines+immortalized+by+human+papillomavirus+18.">Androgen responsive adult human prostatic epithelial cell lines immortalized by human papillomavirus 18.</a> Carcinogenesis. 18 (6), 1215-1223 (1997).</li><li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+an+immortalized+but+non-transformed+human+prostate+epithelial+cell+line:+BPH-1.">Establishment and characterization of an immortalized but non-transformed human prostate epithelial cell line: BPH-1.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 31 (1), 14-24 (1995).</li><li>Kaighn, M. E., Narayan, K. S., Ohnuki, Y., Lechner, J. F., Jones, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+prostatic+carcinoma+cell+line+(PC-3).">Establishment and characterization of a human prostatic carcinoma cell line (PC-3).</a> Invest Urol. 17 (1), 16-23 (1979).</li><li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li><li>Towbin, H., Staehelin, T., Gordon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophoretic+transfer+of+proteins+from+polyacrylamide+gels+to+nitrocellulose+sheets:+procedure+and+some+applications.">Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 76 (9), 4350-4354 (1979).</li><li>Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protein+silver+staining+in+polyacrylamide+gels:+a+10-year+synthesis.">Mechanisms of protein silver staining in polyacrylamide gels: a 10-year synthesis.</a> Electrophoresis. 11 (10), 785-794 (1990).</li><li>Rodriguez-Teja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGE-modified+basement+membrane+cooperates+with+Endo180+to+promote+epithelial+cell+invasiveness+and+decrease+prostate+cancer+survival.">AGE-modified basement membrane cooperates with Endo180 to promote epithelial cell invasiveness and decrease prostate cancer survival.</a> J Pathol. 235 (4), 581-592 (2015).</li><li>Graf, B. W., Boppart, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+analysis+of+three-dimensional+cell+culture+models.">Imaging and analysis of three-dimensional cell culture models.</a> Methods Mol Biol. 591, 211-227 (2010).</li><li>Yao, N. Y., Larsen, R. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+nonlinear+rheology+with+inertio-elastic+oscillations.">Probing nonlinear rheology with inertio-elastic oscillations.</a> J Rheology. 52 (4), 1013-1025 (2008).</li><li>Baker, A. M., Bird, D., Lang, G., Cox, T. R., Erler, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysyl+oxidase+enzymatic+function+increases+stiffness+to+drive+colorectal+cancer+progression+through+FAK.">Lysyl oxidase enzymatic function increases stiffness to drive colorectal cancer progression through FAK.</a> Oncogene. 32 (14), 1863-1868 (2013).</li><li>Caley, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated+Endo180+requires+stromal-derived+LOX+to+promote+metastatic+prostate+cancer+cell+migration+on+human+ECM+surfaces.">Tumor-associated Endo180 requires stromal-derived LOX to promote metastatic prostate cancer cell migration on human ECM surfaces.</a> Clin Exp Metastasis. 3 (2), 151-165 (2016).</li><li>Sturge, J., Wienke, D., East, L., Jones, G. E., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPI-anchored+uPAR+requires+Endo180+for+rapid+directional+sensing+during+chemotaxis.">GPI-anchored uPAR requires Endo180 for rapid directional sensing during chemotaxis.</a> J Cell Biol. 162 (5), 789-794 (2003).</li><li>Sturge, J., Wienke, D., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomes+generate+localized+Rho-ROCK-MLC2-based+contractile+signals+via+Endo180+to+promote+adhesion+disassembly.">Endosomes generate localized Rho-ROCK-MLC2-based contractile signals via Endo180 to promote adhesion disassembly.</a> J Cell Biol. 175 (2), 337-347 (2006).</li><li>Rodriguez-Teja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+Outcome+and+EMT+Suppression+Mediated+by+a+Lectin+Domain+Interaction+of+Endo180+and+CD147.">Survival Outcome and EMT Suppression Mediated by a Lectin Domain Interaction of Endo180 and CD147.</a> Mol Cancer Res. 13 (3), 538-547 (2015).</li><li>Paszek, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tensional+homeostasis+and+the+malignant+phenotype.">Tensional homeostasis and the malignant phenotype.</a> Cancer Cell. 8 (3), 241-254 (2005).</li><li>Levental, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+crosslinking+forces+tumor+progression+by+enhancing+integrin+signaling.">Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling.</a> Cell. 139 (5), 891-906 (2009).</li><li>Carson, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+characterization+of+ex+vivo+prostate+tissue+via+spherical+indentation+in+the+clinic.">Material characterization of ex vivo prostate tissue via spherical indentation in the clinic.</a> Med Eng Phys. 33 (3), 302-309 (2011).</li><li>Hoyt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+elasticity+properties+as+biomarkers+for+prostate+cancer.">Tissue elasticity properties as biomarkers for prostate cancer.</a> Cancer Biomark. 4 (4-5), 213-225 (2008).</li><li>Krouskop, T. A., Wheeler, T. M., Kallel, F., Garra, B. S., Hall, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+moduli+of+breast+and+prostate+tissues+under+compression.">Elastic moduli of breast and prostate tissues under compression.</a> Ultrason Imaging. 20 (4), 260-274 (1998).</li><li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+characterization+of+viscoelastic+properties+of+human+prostate+correlated+with+histology.">Quantitative characterization of viscoelastic properties of human prostate correlated with histology.</a> Ultrasound Med Biol. 34 (7), 1033-1042 (2008).</li><li>Corona, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benign+prostatic+hyperplasia:+a+new+metabolic+disease+of+the+aging+male+and+its+correlation+with+sexual+dysfunctions.">Benign prostatic hyperplasia: a new metabolic disease of the aging male and its correlation with sexual dysfunctions.</a> Int J Endocrinol. , (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

פרוטוקול עבור הדור של acini הבלוטות 3D מ MECs ג&#39;ל טהור RBM 6 שונתה במחקר קודם על ידי תוספת של 4 מ&quot;ג / מ&quot;ל סוג אני קולגן מטריקס RBM. התוספת של קולגן הביאה מודולוס האלסטיות של הג&#39;ל RBM גובר מצד 175 ± 37 כדי 1589 ± 380 פסקל. 9.1 פי גידול זה נוקש מווסת את הצמיחה, הישרדות, ההגירה והבחנה של MECs 21. פרוטוקול שונה שוב על ידי לרבות הורה חורג טיפול עם D - (-) - ריבוז לקדם crosslinking אנזימטית של קולגן מסוג I כי נוספו הג&#39;ל RBM. הגידול 15 פי כתוצאה נוקשות נמצא לשתף פעולה עם השינוי בשעור של MECs לקדם התנהגות פולשנית שלהם 22. הגישה ניסיון מהסוג מוסיף לי קולגן כדי ג&#39;ל RBM מקלה על האינטראקציה הישירה של MECs עם סיבי קולגן, אשר מתרחש רק ברקמות אנושיות לאחר המכשול הפיזי בין stromaאפיתל שמספקת BM עוברת שפלה פרוטאוליטים. על ידי יצירת acini הבלוטות 3D מ פץ ג&#39;ל RBM טהור טרום שטופלו GLA, הפרוטוקול הנוכחי פותח את הדרך ללמוד כיצד קשיחות בע&quot;מ כשלעצמו יכול לעורר התנהגות פולשנית שלהם (איור 3). רמות קשיחות בע&quot;מ המושרה בפרוטוקול זה יש רלוונטי פיסיולוגי. דגירה עם 50 מ&quot;מ GLA עבור 6 שעות ו -14 שעות בהתאמה הגדילה את moduli אלסטי של הג&#39;ל RBM טהור 175 ± 90 ו 322 ± 160 לעומת 122 ± 55 פסקל ג&#39;ל RBM שטופלו PBS (טבלה 1). 1.7 ל 3.2 לקפל זו העלייה נוקשה RBM משכפלת את גידול 2.5- ל -3.4 פי נוקשות שנצפו ממאיר לעומת ערמונית נורמלית או BPH רקמות 23-26. כפי שצוין בפרסום אחרון 13 השינויים המורפולוגיים מושרה על ידי ההצטברות של AGE וקשיחות RBM ב acini PEC ניתן לכמת עבור שינוי משמעותי סטטיסטית מן arounded לצורתו מצולעים, ירד לומינל / אזור acinar הכולל, ותאי בולטות נודדות מן acina לעידן עשירי RBM (איור 3). Immunoblotting יכול לשמש גם כדי להעריך סמנים של EMT (הפסד למשל של E-cadherin 13) ואת התנהגות התכווצות (שרשרת-2 אור שרירן פוספורילציה למשל, pMLC2 13) ב פץ הגדלים רגילה לעומת RBM נוקשה (איור 3). הערכה נוספת באמצעות מכתים immunofluorescent ו מיקרוסקופיה confocal ניתן ליישם כדי להמחיש את BM (למשל laminin, קולגן IV וגיל הצטברות 13), קוטביות הפסגה אל הבסיס הסלולרית (למשל לוקליזציה הפסגה של EEA1: אנטיגן endosomal מוקדם 1; ו GM130: 130 ציס-Golgi kDa סמן 13) ודפוסי הסלולר של מולקולות הדבקה (לוקליזציה E-cadherin למשל לצמתים תאים תאים 13) (איור 3). <img aLT = &quot;איור 3&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54,230 / 54230fig3.jpg&quot; /&gt; איור 3:. סקירה של הפרוטוקולים השונים שהוצגו כאן התרשים מתאר כיצד להכין להקשיח את הקרום במרתף מחדש (RBM) עם glycolaldehyde (תגובת מייארד), איך זרע תאים אל RBM הנוקשה, כיצד לנתח את RBM הנוקשה ( היקף תגובת Maillard) ונהלים, שניתן להשתמש בם כדי לנתח את השינויים התאיים ומולקולריים המושרים על ידי RBM AGE-עשיר. גיל, endproducts גליקציה המתקדם; BM, קרום במרתף; DAPI, 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole; EEA1, אנטיגן endosomal מוקדם 1; GAPDH, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; GLA, glycolaldehyde; GEE, אתיל אסתר גליצין; GM130, 130 kDa סמן ציס-Golgi; p-MLC2 (Thr18 / Ser19), שרירן שרשרת-2 אור פוספורילציה באתרים תראונין 18 סרין 19; RBM, קרום במרתף מחדש; SDS-PAGE, ג&#39;ל אלקטרופורזה polyacrylamide סולפט dodecyl נתרן. לקבלת RWPE1 acini בר סולם = 10 מיקרומטר; עבור תאים סרטניים PC3סולם spheroids בר = 100 מיקרומטר. נתון זה יש הבדל בין התייחסות 13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> שלבים לפתרון הבעיה יהיה צורך אם D - (-) - ריבוז נבחר כסוכן crosslinking עבור RBM. במהלך פיתוח פרוטוקול נמצא כי טיפול עם 1 M D - (-) - ריבוז במשך 72 שעות, כפי שתואר לעיל עבור ג&#39;לים RBM / קולגן 22, מביא את התייבשות ההצטמקות של ג&#39;לים RBM. ההערכה של ריכוזים נמוכים של D - (-) - ריבוז ושעות טיפול קצרות עשויה לעזור להתגבר על מגבלה זו. מגבלה פוטנציאלית יישומים עתידיים של הפרוטוקול יכולה להיות נתקלה בם רמות גבוהות של נוקשות RBM הן רצויות. אם פעמי דגירה ארוכות ריכוזים גבוהים יותר של GLA משמשים כדי לגרום לרמות גבוהות של נוקשות ג&#39;ל RBM זה יהיה צורך<html> להעריך אם יש תנאי טיפול אלה השפעה על הישרדות ובחלוקה של תאים, כפי שתואר לעיל 13. כמו כן יש לציין כי הדגירה של תאים RWPE-1 עם סרום גורם מעבר EMT דמוי פנוטיפי וחשיפה בסרום או חומרים המכילים בסרום יש להימנע. לדוגמא, אם ניסויים כרוכים transfection של קצר מפריעי RNA (siRNA) oligonucleotides, ההליך צריך להיות מותאם באמצעות תאי RWPE-1 גדלו ב KSFM, מבלי לכבות את תאי תקשורת transfection בסרום נמוך. חסרון זה עלול לסכן את רמת גן ההשתקה מושג כאשר באמצעות siRNA חולף גישות במודל. עבור מטרות חלבון מסוימות זה יהיה מומלץ להעסיק וקטורי shRNA מושרים עבור להשתקת גנים מתכוננת ואת הירידה ברמות חלבון. עיבודים המשלבים crosslinking האנזימטית ידי תא סטרומה או מונואמין lysyl הקשורים תאים סרטניים (לקס) 17 יכול גם להיות משולב בתוך דגמים עתידיים. jove_content &quot;&gt; פרוטוקול זה יקל על המחקר העתידי של מנגנונים פרו-פולשני מופעלים על ידי נוקשות תלויות גיל בע&quot;מ ב פץ (RWPE-1, BPH-1) והערכת המטרות אנטי-גרורתית PTCs פולשנית (PC3). בהתחשב בכך BPH נחשב הפרעה מטבולית 27, פרוטוקול זה גם סולל את הדרך לקראת ההבנה המשופרת שלנו על הקשר בין הפרעות מטבוליות וסיכון לסרטן הערמונית גדל. בהתחשב בכך נוקשות בע&quot;מ המושרה על ידי חשיפתה גילים יכולות להיות הטריגר הפולשנות בסרטן אחר סוגים, זה יהיה עניין להשתמש בפרוטוקול להקים מודלים דומים המשלבים תאים נורמלים אפיתל ותאי גידול מאיברים אחרים (למשל שד, מעי גס, שחלות, לבלב). צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול, יחד עם התזמונים שלהם, מסוכם באיור 4. במהלך השלב הראשוני זה הכרחי כדי לשמור על פתרון המניות של RBM על 4 מעלות צלזיוס בזמן שהוא מפשיר למנוע pol שלהymerization. טיפים פיפטה לא צריך להיות ממוקם לתוך התמיסה RM המניה עד שהם כבר מקורר עד 4 ° C. עבור השלב הבא חשוב גם כדי להבטיח את השקופיות הקאמריות יש equilibrated עד 4 מעלות צלזיוס לפני שהם מכוסים פתרון RBM. ברגע הטמפרטורה של פתרון RBM היא עלתה מעל 4 מעלות צלזיוס הוא יעבור פילמור בלתי הפיך כדי ליצור ג&#39;ל. זה חיוני כי RBM אינה מופרע בשלב פילמור כדי להבטיח שהיא יוצרת משטח ישר מתאים תרבית תאים וניתוח מיקרוסקופי. משך הדגירה עם GLA עם או בלי מעכבי התגובה Maillard (cyanoborohydride נתרן amingoguanidine) יקבע איך נוקשה הג&#39;ל RBM הופך. מומלץ להשתמש דגירת hr 6 עם GLA אם תנאים חצי נוקשים נדרשים, דגירת 14 שעות אם נדרשים תנאים נוקשים (טבלה 1). פעמי דגירה חלופיות או ריכוזים של GLA יכולות לשמש אם רמות שונותשל קשיחות הם רצויים. בניתוח rheological במקרה זה של הג&#39;לים RBM צריך להיות משולב כצעד הכרחי. בעקבות הצעד של מרווה התגובה Maillard ידי הדגירה עם GEE ואת השלבים כביסה הבאים עם PBS, ג&#39;לים RBM ניתן להשתמש מיד או לאחסן 4 ° C עד 48 שעות לפני השימוש בהם עבור תרבית תאים. לאחר בתרביות תאים מוגדרות חשוב לשנות את מדיום התרבות (כולל כל טיפולים) כל ימים. מומלץ לשמור על תרביות תאי 3D עבור 3-12 ימים בהתאם לפרמטרים תחת חקירה. לקבלת 3D PEC acini מומלץ לנתח התרבויות לאחר 6 ימים, לניתוח 3D PTC spheroids מומלצת לאחר 3 ימים של תרבות בערכאה הראשונה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/54230/54230fig4.jpg" /> איור 4:. סקירה פשוטה של הפרוטוקול עם שלבי תזמונים קריטיים הצביע על פלהבתרשים w מתאר כיצד להכין להקשיח את הקרום במרתף מחדש (RBM) עם glycolaldehyde (תגובת מייארד) בצעדי תזמונים קריטיים מצוינים. נקודות כאשר הפרוטוקול ניתן לעצור, וג&#39;ל RBM מאוחסן, מסומנים גם. RBM, קרום במרתף מחדש; GLA, glycolaldehyde; GEE, אתיל אסתר גליצין; ON, לילה; PBS, פוספט שנאגר מלוח; RT, בטמפרטורת החדר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

The basement membrane (BM) is a sheet of specialized extracellular matrix (ECM) that maintains stable tissue borders by separating layers of epithelial cells from the stroma1. Covalent crosslinking between adjacent triple helices of collagen IV in the BM stabilizes their lateral association by establishing an irregular network of super-twisted helices2. These collagen IV lattices act as a scaffold for its interaction with laminin and other BM components1. The structural arrangement of the BM provides it with the mechanical strength and rigidity necessary for the normal development of glandular epithelia3. 
During aging and disease the BM progressively thickens and stiffens3,4. For example, a 3-fold increase in the elastic modulus (E) of the ocular BM occurs between the ages of 50 and 80 in the normal population, and this stiffening is further exacerbated in metabolic disorders like diabetes5. The structural and biomechanical changes in the BM that result in its increased stiffness occur when its ECM components, collagen IV and laminin, become non-enzymatically crosslinked following their exposure to advanced glycation endproducts (AGEs).
The purpose of the method described here was to establish a model for the investigation of how BM stiffness, due to AGE exposure, promotes prostate epithelial cell (PEC) and prostate tumour cell (PTC) invasiveness in the context of the switch to metastatic prostate cancer (PCa). To do this a previous method used for generating 3D glandular acini from mammary epithelial cells (MECs) in reconstituted rBM gels6 was adapted to include an additional step where the rBM gels are pre-treated with glycolaldehyde (GLA). Several techniques for assessing GLA induced crosslinking and stiffening of pre-treated rBM gels are described, including photometric analysis, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE), confocal microscopy and rheometric analysis. The prostate cell types selected for culture on the pre-stiffened rBM include: RWPE-1, PECs derived from a normal prostate gland7; BPH-1, PECs derived from a prostate gland affected by BPH8; and PC3, metastatic PTCs derived from a secondary tumor located in the vertebral bone of a prostate cancer (PCa) patient9. 
In addition to advancing the study of prostate gland pathology, the protocol for stiffening of rBM gels by their treatment with GLA can be adapted to investigate how BM stiffness contributes to other age-related pathologies and metabolic disorders. For example, the model can be directly applied to investigate how metastatic cancer is induced by BM stiffness in organs such as the breast, colon, ovary and pancreas by the incorporation of appropriate cell types. Furthermore, the protocol can be adapted to investigate how stiff BM promotes biomechanical mechanisms of disease progression in diabetes-related microvascular disease, retinopathy, nephropathy and neuropathy.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:628px;">I - Material for monolayer culture</td>
			<td style="width:265px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:401px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BPH-1</td>
			<td>CaP Cell Line Database</td>
			<td>PCaCL-132</td>
			<td>Contact: simon.hayward@mcmail.vanderbilt.edu</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Complete keratinocyte serum-free media&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17005-075</td>
			<td>Do not warm at 37 &#186;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum&#160;</td>
			<td>First Link UK Ltd</td>
			<td>02-00-850</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PC3&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-1435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffer Saline (Dulbecco A) tablets</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R5886</td>
			<td>warm in 37 &#186;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RWPE-1&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">II - Material for 3D culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aminoguanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>396494</td>
			<td>Irritating to eyes, respiratory system and skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chamber slides, 8-well&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc Lab-Tek</td>
			<td>TKT-210-816M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture Matrix reconstituted basement membrane (rBM) reduced growth factor extract&#160;</td>
			<td>AMS Biotechnology</td>
			<td>3445-005-01</td>
			<td>Store Basement membrane (BM) at -80 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanogen bromide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C91492</td>
			<td>Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycine ethyl ester hydrochloride (GEE)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50060</td>
			<td>Irritating to eyes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycolaldehyde dimer (GLA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium cyanoborohydride&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71435</td>
			<td>Highly flammable; Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe filter 0.22 microns</td>
			<td>Appleton Woods</td>
			<td>BC680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">III - Material to quantify Maillard reaction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td>light sensitive and store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cloning cylinders</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11034</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield mounting media&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti-pentosidine clone PEN-12 mAb</td>
			<td>TransGenic Inc</td>
			<td>KH012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-human collagen IV polyclonal antibody&#160;&#160;</td>
			<td>Acris Antibodies</td>
			<td>R1041</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-laminin A/C pAb</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology Inc</td>
			<td>sc-7292</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton-X100)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol sorbitan monolaurate (Tween-20)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dialysis cassette Slide-A-Lyzer</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>66333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IV - Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ARG2 controlled strain rotational rheometer</td>
			<td>T.A. Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Axiovert S100 (20x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CO2 controlled humidified incubation chamber for Zeiss Axio S100 microscope</td>
			<td>Solent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Axiovert 200M (40x, 63x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus LH50A microscope fitted with a digital camera using phase-contrast&#160;</td>
			<td>Olympus&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PHERAstar Plus plate reader spectrophotometer</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">V - Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image J 1.47v</td>
			<td>National Institute of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MetaXpress</td>
			<td>Molecular Divices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases

כאן אנו מתארים פרוטוקול שניתן להשתמש בהם כדי ללמוד את המיקרו-סביבה biophysical הקשורים עובי מוגבר ונוקשות של קרום במרתף (BM) במהלך פתולוגיות הקשורות לגיל והפרעות מטבוליות (סרטן למשל, סוכרת, מחלות כלי הדם, רטינופתיה, נפרופתיה ונוירופתיה) . הנחת היסוד של המודל היא crosslinking אנזימטית של מחדש BM (RBM) מטריקס על ידי טיפול עם glycolaldehyde (GLA) לקדם endproduct גליקציה מתקדמים (AGE) דור דרך התגובה Maillard. דוגמאות של טכניקות מעבדה שניתן להשתמש בהם כדי לאשר דור גיל, crosslinking אנזימטית והגדילה נוקשות GLA מטופלים RBM מתוארים. אלה כוללים הכנת יליד RBM (שטופל פוספט שנאגר מלוח, PBS) RBM הנוקשה (שטופל GLA) לקביעה: תוכן AGE שלה על ידי ניתוח photometric מיקרוסקופיה immunofluorescent, crosslinking אנזימטית על ידי polyacrylamide סולפט dodecyl נתרןג&#39;ל אלקטרופורזה (עמוד SDS) וכן במיקרוסקופ confocal, ו rheometry באמצעות קשיחות מוגברת שלה. ההליך המתואר כאן ניתן להשתמש כדי להגדיל את הקשיחות (moduli אלסטי, E) של RBM עד 3.2 פי, עולה בקנה אחד עם מדידות שנעשו בריא לעומת רקמת ערמונית אדם חולה. כדי לשחזר את המיקרו-סביבת biophysical הקשורים להזדקנות וערמונית חולה בלוטת שלושה סוגי תאי ערמונית הוכנסו על RBM יליד והנוקשה RBM: RWPE-1, תאי אפיתל ערמונית (פץ) נגזר בלוטת ערמונית נורמלית; BPH-1, פץ נגזר בלוטת הערמונית מושפעים היפרפלזיה שפירה של הערמונית (BPH); ו PC3, תאים גרורתי נגזרים סרטן עצמות משני שמקורם בסרטן הערמונית. פרמטרים מרובים ניתן למדוד, כולל הגודל, הצורה והמאפיינים פולשנית של acini 3D הבלוטות נוצר על ידי RWPE-1 ו BPH-1 בנוגע ליישום מקורי בניגוד RBM נוקשה, ואורך התא הממוצע, מהירות הנדידה והתמדה של תנועת התא של 3D spherOIDs נוצר על ידי תאי PC3 באותם תנאים. Cell מסלולי איתות ואת לוקליזציה subcellular של חלבונים ניתן להעריך גם.

3D הערמונית acini בתרבית על Stiff RBM לאחר 6 ימים בתרבות, פץ נגזר רקמות ערמונית נורמליות (RWPE-1) (איור 1 א) ורקמות BPH (BPH-1) (איור 1 ב) טופס acini על ילידים (PBS מטופלים) RBM כי מאורגנים spheroids האחיד של אפיתל תאים. Acini אלה יש גם את המאפיינים של פץ מאורגן עם קוטביות הפסגה אל הבסיס וכן לומינל גלוי שטח 13,20. Acini נוצר על ידי פץ נגזר רקמות ערמונית נורמליות (RWPE-1) (איור 1 א) ורקמות BPH (BPH-1) (איור 1B) על התקשחה (AGE העשירי) RBM (שטופלה GLA) יש ארכיטקטורה שבשה (הסטה מ spheroidal כדי מצולעים בכושר ותאי בולטות / נודדות מן acini לעידן עשירי RBM) (איור 1 א). אלה<html> acini מאופיינים גם על ידי פץ מאורגן מאוד כי איבדו קוטביות הפסגה אל הבסיס שלהם עם רווח לומינל קטן או אפסי 13. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54230/54230fig1.jpg" /> איור 1:. הערמונית אפיתל תאים שגודלו כמו 3D הבלוטות acini על ממברנה מרתף מחדש Native ונוקשה (RBM) (א) תמונות Brightfield של RWPE-1 תאים שגודלו במשך 12 שעות עד 6 ימים על ג&#39;ל RBM שטופלו PBS (מקורי) או 50 מ&quot;מ glycolaldehyde במשך 14 שעות (AGE עשירים; נוקשה); בר סולם = 50 מיקרומטר. (ב) BPH-1 תאים, גדל כמתואר פאנל; ברי סולם = 50 מיקרומטר; נתונים הוא נציג של 3 ניסויים בלתי תלויים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <html> טבלה 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54,230 / 54230table1.jpg &quot;/&gt; טבלה 1:. מאפייני הערמונית אפיתל RWPE-1 acini גדל על שפת אם, חצי נוקשה ו ממברנה מרתף מחדש קשה (RBM) RWPE-1 acini גדלו על RBM טרום שטופלו PBS במשך 14 שעות (מקורי), glycolaldehyde (GLA במשך 6 שעות (חצי נוקשה) או GLA) במשך 14 שעות (נוקשה). לקבלת הצורה acinar, אחוז (%) ± סטיית תקן (SD) של עגול, חצי מצולעים מצולעים acini חושבו מתוך 5 ניסויים בלתי תלויים (50 acini לכמת לכל מצב). גודל acinar יחסית חושבה (יליד RBM = 100%) מן 3 ניסויים בלתי תלויים. לקבלת הפולשנות,% ± acini SD עם תאים בולטים אחד או יותר חושבו מתוך 3 ניסויים בלתי תלויים. שינוי פולד מחושב על ידי חלוקת שווי הממוצע שהושג בתנאים חצי נוקשים או נוקשים ידי הערך המקביל תנאי ילידים. ערכי P מחושבים באמצעות מבחן t (α = 0.05). ontent &quot;FO: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; נוקשות RBM תלויות גיל גדל מקדמת נדידת תאים סרטניים בערמונית PC3 תאי PC3 גדלו על ילידי RBM להעביר על ידי קשר תאי תאים רציף, בעוד שתאי PC3 גדלו על גיל עשירי (נוקשה) RBM מהלך עצמאי מכל (איור 2 א) אחרים. לאחר 72 שעות בתאי PC3 תרבות מהוות מוקדים (spheroids) על ילידים (PBS מטופלים) RBM, ואילו תאי PC3 על RBM הנוקשה (AGE העשירי) לא מן spheroids ולהעביר באופן עצמאי (תרשים 2B). תאי PC3 על RBM הנוקשה (AGE העשירי) הם מוארכים יותר מאשר תאי PC3 גדל על RBM ילידים (איור 2 ג). תאי PC3 על RBM נוקשה להעביר מהר יותר מתאים PC3 גדל על RBM הילידים (2D איור). תאי PC3 על RBM נוקשה להציג ירידה התמדה בהשוואה לתאים PC3 גדל על RBM הילידים (איור 2E). <img aLT = &quot;איור 2&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54,230 / 54230fig2.jpg&quot; /&gt; איור 2:. נדידת תאים סרטניים הערמונית על ממברנה מרתף מחדש Native ונוקשה (RBM) (א) תמונות Brightfield של תאי PC3 גדל על ג&#39;לים RBM שטופלו PBS (מקורי) או 50 מ&quot;מ glycolaldehyde במשך 14 שעות (AGE-עשיר, נוקשה) . תאים היו צילמו באמצעות מיקרוסקופ brightfield (אובייקטיבי 10X) ושיעור רכישת 1 התמונה לכל שעה במשך 12 שעות ואחריו תא מעקב ליצור מסלולים. מהתמונות המוצגות מתאימות נקודות הזמן לאחר 0, 3, 6, 9 ו -12 שעות. מסלולים של תאים בודדים מוצגים עבור נקודת 12 שעות הזמן. סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. (ב) בתאים PC3 בתרבית על RBM יליד או נוקשה במשך 72 שעות, צילמו כמתואר בלוח (א). סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. פרטים מראים אזור נבחר בהגדלת 2X. (ג) ממוצע ± סטיית תקן אורך תא (מיקרומטר); הבדל משמעותי בין RBM יליד RBM נוקשה (p = 1.2 x 10 -23). ( <strאונג&gt; D) ממוצע ± סטיית תקן מהירות (מיקרומטר / hr) שנמדדות מסלולי התא; הבדל משמעותי בין RBM יליד RBM הנוקשה (p = 0.004). (E) ממוצע ± סטיית תקן התמדה של תנועת התא (יחס D / T, כאשר D = המרחק מתחילתו ועד סופו של מסלול התא, T = האורך הכולל של מסלול התא); הבדל משמעותי בין RBM יליד RBM הנוקשה (p = 0.0007). עבור לוחות לספירה&gt; 10 תאים נותחו, נתונים הוא נציג של 3 ניסויים בלתי תלויים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases at JoVE.com

How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases

נסביר פרוטוקול למידול במיקרו-סביבה של biophysical שבו crosslinking וקשיחות מוגברת של קרום במרתף (BM) הנגרמת על ידי endproducts גליקציה מתקדמים (גילאי) יש רלוונטיות פתולוגי.

איך ללמוד מרתף ממברנה נוקשות כמפעיל Biophysical הערמונית סרטן ומחלות גיל הקשורות אחרים או מחלות מטבוליות

Here we describe a protocol that can be used to study the biophysical microenvironment related to increased thickness and stiffness of the basement ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

מבחני Coculture ללמוד מקרופאג Microglia גירוי של גליובלסטומה הפלישה

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Hyperpolarized 13C Metabolic Magnetic Resonance Spectroscopy and Imaging

Hyperpolarized 13C Metabolic Magnetic Resonance Spectroscopy and Imaging

Hyperpolarized<sup&gt; 13</sup&gt; ספקטרוסקופיה בתהודה מגנטית מטבולית C והדמיה

In the past decades, new methods for tumor staging, restaging, treatment response monitoring, and recurrence detection of a variety of cancers have ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

קולון-26 קרצינומה גידול נושאות עכבר כמודל לחקר סרטן תשישות

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

זיהוי של המיטוכונדריה פוטנציאל ממברנה לימודים CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס במבחנה

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

העשרה Phosphopeptide בשילוב עם ספקטרומטר מסה ללא תווית כמותיים כדי לחקור את Phosphoproteome סרטן הערמונית

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Yeast As a Chassis for Developing Functional Assays to Study Human P53

שמרים כתושבת לפיתוח Assays פונקציונלי ללמוד אנושי האדם

The finding that the well-known mammalian P53 protein can act as a transcription factor (TF) in the yeast S. cerevisiae has allowed for the development of ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

Prostate Organoid Cultures as Tools to Translate Genotypes and Mutational Profiles to Pharmacological Responses

הערמונית תרבויות אורגאיד כמו כלים לתרגם גנוטיפים ופרופילים מוטים לתגובות תרופתי

Presented here is a protocol to study pharmacodynamics, stem cell potential, and cancer differentiation in prostate epithelial organoids. Prostate ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...