Name: how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases at JoVE.com

We thank Simon Hayward (Vanderbilt University Medical Center) for the BPH-1 cells; and Thomas Cox and Janine Erler (Biotech Research &amp; Innovation Centre, University of Copenhagen) for their assistance with rheological measurements. MR-T was funded by Worldwide Cancer Research, formerly The Association of International Cancer Research (Grant 08-0803 to JS), The British Embassy Montevideo and Agencia Nacional de Investigacion e Innovacion (UK_RH_2015_1_2 to MR-T). MC was supported by Prostate Cancer UK (Grant S14-017 to JS and GS). KW was funded by The China Scholarship Council. MAM was funded by The Saudi Arabian Cultural Bureau.

<ol>
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Comparison with amniotic and in vitro networks.</a> Am J Pathol. 132 (2), 278-291 (1988).</li><li>Halfter, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+composition+and+biomechanical+properties+of+in+vivo-derived+basement+membranes.">Protein composition and biomechanical properties of in vivo-derived basement membranes.</a> Cell Adh Migr. 7 (1), 64-71 (2013).</li><li>Candiello, J., Cole, G. 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The authors have nothing to disclose.

The basement membrane (BM) is a sheet of specialized extracellular matrix (ECM) that maintains stable tissue borders by separating layers of epithelial cells from the stroma1. Covalent crosslinking between adjacent triple helices of collagen IV in the BM stabilizes their lateral association by establishing an irregular network of super-twisted helices2. These collagen IV lattices act as a scaffold for its interaction with laminin and other BM components1. The structural arrangement of the BM provides it with the mechanical strength and rigidity necessary for the normal development of glandular epithelia3. 
During aging and disease the BM progressively thickens and stiffens3,4. For example, a 3-fold increase in the elastic modulus (E) of the ocular BM occurs between the ages of 50 and 80 in the normal population, and this stiffening is further exacerbated in metabolic disorders like diabetes5. The structural and biomechanical changes in the BM that result in its increased stiffness occur when its ECM components, collagen IV and laminin, become non-enzymatically crosslinked following their exposure to advanced glycation endproducts (AGEs).
The purpose of the method described here was to establish a model for the investigation of how BM stiffness, due to AGE exposure, promotes prostate epithelial cell (PEC) and prostate tumour cell (PTC) invasiveness in the context of the switch to metastatic prostate cancer (PCa). To do this a previous method used for generating 3D glandular acini from mammary epithelial cells (MECs) in reconstituted rBM gels6 was adapted to include an additional step where the rBM gels are pre-treated with glycolaldehyde (GLA). Several techniques for assessing GLA induced crosslinking and stiffening of pre-treated rBM gels are described, including photometric analysis, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE), confocal microscopy and rheometric analysis. The prostate cell types selected for culture on the pre-stiffened rBM include: RWPE-1, PECs derived from a normal prostate gland7; BPH-1, PECs derived from a prostate gland affected by BPH8; and PC3, metastatic PTCs derived from a secondary tumor located in the vertebral bone of a prostate cancer (PCa) patient9. 
In addition to advancing the study of prostate gland pathology, the protocol for stiffening of rBM gels by their treatment with GLA can be adapted to investigate how BM stiffness contributes to other age-related pathologies and metabolic disorders. For example, the model can be directly applied to investigate how metastatic cancer is induced by BM stiffness in organs such as the breast, colon, ovary and pancreas by the incorporation of appropriate cell types. Furthermore, the protocol can be adapted to investigate how stiff BM promotes biomechanical mechanisms of disease progression in diabetes-related microvascular disease, retinopathy, nephropathy and neuropathy.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:628px;">I - Material for monolayer culture</td>
			<td style="width:265px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:401px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BPH-1</td>
			<td>CaP Cell Line Database</td>
			<td>PCaCL-132</td>
			<td>Contact: simon.hayward@mcmail.vanderbilt.edu</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Complete keratinocyte serum-free media&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17005-075</td>
			<td>Do not warm at 37 &#186;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum&#160;</td>
			<td>First Link UK Ltd</td>
			<td>02-00-850</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PC3&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-1435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffer Saline (Dulbecco A) tablets</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R5886</td>
			<td>warm in 37 &#186;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RWPE-1&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">II - Material for 3D culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aminoguanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>396494</td>
			<td>Irritating to eyes, respiratory system and skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chamber slides, 8-well&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc Lab-Tek</td>
			<td>TKT-210-816M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture Matrix reconstituted basement membrane (rBM) reduced growth factor extract&#160;</td>
			<td>AMS Biotechnology</td>
			<td>3445-005-01</td>
			<td>Store Basement membrane (BM) at -80 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanogen bromide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C91492</td>
			<td>Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycine ethyl ester hydrochloride (GEE)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50060</td>
			<td>Irritating to eyes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycolaldehyde dimer (GLA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium cyanoborohydride&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71435</td>
			<td>Highly flammable; Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe filter 0.22 microns</td>
			<td>Appleton Woods</td>
			<td>BC680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">III - Material to quantify Maillard reaction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td>light sensitive and store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cloning cylinders</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11034</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield mounting media&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti-pentosidine clone PEN-12 mAb</td>
			<td>TransGenic Inc</td>
			<td>KH012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-human collagen IV polyclonal antibody&#160;&#160;</td>
			<td>Acris Antibodies</td>
			<td>R1041</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-laminin A/C pAb</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology Inc</td>
			<td>sc-7292</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton-X100)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol sorbitan monolaurate (Tween-20)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dialysis cassette Slide-A-Lyzer</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>66333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IV - Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ARG2 controlled strain rotational rheometer</td>
			<td>T.A. Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Axiovert S100 (20x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CO2 controlled humidified incubation chamber for Zeiss Axio S100 microscope</td>
			<td>Solent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Axiovert 200M (40x, 63x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus LH50A microscope fitted with a digital camera using phase-contrast&#160;</td>
			<td>Olympus&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PHERAstar Plus plate reader spectrophotometer</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">V - Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image J 1.47v</td>
			<td>National Institute of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MetaXpress</td>
			<td>Molecular Divices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
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how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases

यहाँ हम एक प्रोटोकॉल है कि biophysical उम्र से संबंधित विकृतियों और चयापचय विकारों (जैसे कैंसर, मधुमेह, microvascular रोग, रेटिनोपैथी, नेफ्रोपैथी और न्यूरोपैथी) के दौरान वृद्धि की मोटाई और तहखाने झिल्ली (बीएम) की कठोरता से संबंधित microenvironment अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का वर्णन । मॉडल के आधार गैर enzymatic glycolaldehyde (GLA) के साथ इलाज के द्वारा पुनर्गठित बीएम (RBM) मैट्रिक्स की crosslinking Maillard प्रतिक्रिया के माध्यम से उन्नत ग्लिकेशन endproduct (उम्र) पीढ़ी को बढ़ावा देना है। प्रयोगशाला तकनीकों के उदाहरण है कि उम्र पीढ़ी, गैर एंजाइमी crosslinking पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और जी एल ए में वृद्धि की कठोरता का इलाज किया RBM रेखांकित कर रहे हैं। भामिति विश्लेषण और immunofluorescent माइक्रोस्कोपी, सोडियम सल्फेट dodecyl polyacrylamide द्वारा अपने गैर एंजाइमी crosslinking द्वारा अपनी उम्र सामग्री: इनमें से निर्धारण के लिए मूल निवासी RBM और कठोर RBM (जीएलए के साथ इलाज) (फॉस्फेट बफर खारा, पीबीएस के साथ इलाज) की तैयारी शामिलजेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पृष्ठ) के साथ ही confocal माइक्रोस्कोपी, और इसके rheometry का उपयोग कर वृद्धि की कठोरता। प्रक्रिया यहाँ वर्णित RBM की कठोरता (लोचदार moduli, ई), 3.2 गुना तक बढ़ाने के लिए बनाम रोगग्रस्त मानव प्रोस्टेट ऊतक स्वस्थ में किए गए माप के साथ लगातार इस्तेमाल किया जा सकता है। biophysical उम्र बढ़ने और रोगग्रस्त प्रोस्टेट के साथ जुड़े microenvironment विश्राम करने के लिए ग्रंथि तीन प्रोस्टेट सेल प्रकार मूल निवासी RBM और कठोर RBM करने पर पेश किया गया: RWPE -1, प्रोस्टेट उपकला कोशिकाओं (पेक्स) एक सामान्य प्रोस्टेट ग्रंथि से निकाली गई; BPH-1, एक प्रोस्टेट ग्रंथि सौम्य prostatic hyperplasia (BPH) से प्रभावित से निकाली गई पेक्स; और PC3, मेटास्टेटिक कोशिकाओं को एक माध्यमिक हड्डी के ट्यूमर प्रोस्टेट कैंसर से होने से निकाली गई। एकाधिक मापदंडों आकार, आकृति और 3 डी ग्रंथियों बनाम कड़ी RBM देशी पर RWPE -1 और बीपीएच -1 द्वारा गठित acini की आक्रामक विशेषताओं, और औसत सेल लंबाई, प्रवासी वेग और 3 डी spher की सेल आंदोलन के हठ सहित मापा जा सकता हैएक ही परिस्थितियों में PC3 कोशिकाओं द्वारा गठित OIDs। सेल रास्ते और प्रोटीन की subcellular स्थानीयकरण संकेत भी मूल्यांकन किया जा सकता है।

कड़ी RBM पर 3 डी प्रोस्टेट acini संवर्धित संस्कृति में 6 दिनों के बाद, पेक्स सामान्य प्रोस्टेट ऊतकों से निकाली गई (RWPE-1) (चित्रा 1 ए) और बीपीएच ऊतक (बीपीएच-1) (चित्रा 1 बी) के मूल निवासी (पीबीएस इलाज) RBM तरफ के फार्म का acini कि उपकला की वर्दी spheroids में आयोजित कर रहे हैं कोशिकाओं। ये acini भी शिखर करने वाली बेसल polarity और एक दृश्य ल्यूमिनल अंतरिक्ष 13,20 के साथ उच्च स्तरीय आयोजन पेक्स के लक्षण हैं। Acini सामान्य प्रोस्टेट ऊतकों से निकाली गई पेक्स द्वारा गठित (RWPE-1) (चित्रा 1 ए) और stiffened (आयु अमीर) RBM (जीएलए के साथ इलाज) पर बीपीएच ऊतक (बीपीएच-1) (चित्रा 1 बी) के एक बाधित वास्तुकला (स्थानांतरण आकार और कोशिकाओं में बहुभुज को गोलाकार से फैला हुआ / आयु अमीर RBM) (चित्रा 1 ए में acini से पलायन)। इन<html> acini भी अत्यधिक बेतरतीब पेक्स कि एक छोटे या न के बराबर ल्यूमिनल अंतरिक्ष 13 के साथ उनकी शिखर करने वाली बेसल polarity खो दिया है की विशेषता है। <img alt="आकृति 1" src="/files/ftp_upload/54230/54230fig1.jpg" /> चित्रा 1:। प्रोस्टेट उपकला कोशिकाओं मूल निवासी है और कठोर पुनर्गठन तहखाने झिल्ली (RBM) के रूप में 3 डी ग्रंथियों acini बढ़ी (ए) RWPE -1 कोशिकाओं के Brightfield छवियों पीबीएस (देशी) या के साथ इलाज किया RBM जैल पर 6 दिनों के लिए 12 घंटे तक के लिए हो 14 घंटा (; कड़ी आयु अमीर) के लिए 50 मिमी glycolaldehyde; स्केल बार 50 माइक्रोन =। (बी) बीपीएच-1 कोशिकाओं, के रूप में पैनल में वर्णित बड़े हो; स्केल सलाखों = 50 माइक्रोन; डेटा 3 स्वतंत्र प्रयोगों का प्रतिनिधि है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig1large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <html> तालिका 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54230 / 54230table1.jpg &quot;/&gt; तालिका 1:। प्रोस्टेट उपकला RWPE -1 acini के लक्षण मूल निवासी, अर्द्ध कठोर और कठोर पुनर्गठन तहखाने झिल्ली (RBM) पर हो RWPE -1 acini (GLA RBM 14 घंटा (देशी), glycolaldehyde के लिए पीबीएस के साथ पूर्व इलाज पर बड़े हो रहे थे ) 6 घंटे के लिए (अर्द्ध कठोर) या 14 घंटा (कठोर) के लिए जी एल ए। कोष्ठकी आकार के लिए, प्रतिशत (%) दौर के मानक विचलन (एसडी) ±, अर्द्ध बहुभुज और बहुभुज acini 5 स्वतंत्र प्रयोगों से गणना की गई है (50 acini शर्त के अनुसार मात्रा निर्धारित)। सापेक्ष कोष्ठकी आकार 3 स्वतंत्र प्रयोगों से (देशी RBM = 100%) की गणना की गई। invasiveness के लिए, ± एक या एक से अधिक फैला हुआ कोशिकाओं के साथ एसडी acini% 3 स्वतंत्र प्रयोगों से गणना की गई। मोड़ो परिवर्तन मूल निवासी की स्थिति के लिए संगत मान द्वारा अर्द्ध कठोर या कठोर शर्तों के तहत प्राप्त औसत मूल्य विभाजित करके गणना की है। पी मूल्यों छात्र टी-परीक्षण (α = 0.05) का उपयोग कर की गणना की। ontent &quot;fo: रख-together.within-पेज =&quot; 1 &quot;&gt; आयु निर्भर वृद्धि हुई RBM कठोरता PC3 प्रोस्टेट ट्यूमर सेल प्रवास को बढ़ावा देता है PC3 कोशिकाओं मूल निवासी RBM पर हो एक दूसरे को (2A चित्रा) से स्वतंत्र रूप से, निरंतर सेल सेल से संपर्क बनाए रखने के द्वारा विस्थापित जबकि PC3 कोशिकाओं की उम्र अमीर (कठोर) पर हो RBM चाल। बाद संस्कृति PC3 कोशिकाओं में 72 घंटा देशी पर foci (spheroids) फार्म (पीबीएस इलाज) RBM, जबकि पर कड़ा (आयु अमीर) RBM PC3 कोशिकाओं spheroids से नहीं करते हैं और स्वतंत्र रूप से विस्थापित (चित्रा 2 बी)। कड़ी (आयु अमीर) RBM पर PC3 कोशिकाओं मूल निवासी RBM (चित्रा -2) पर हो PC3 कोशिकाओं की तुलना में अधिक लम्बी कर रहे हैं। कड़ी RBM पर PC3 कोशिकाओं मूल निवासी RBM (चित्रा 2 डी) पर हो PC3 कोशिकाओं की तुलना में तेजी से पलायन। कड़ी RBM पर PC3 कोशिकाओं दृढ़ता में कमी प्रदर्शित मूल निवासी RBM (चित्रा 2 ई) पर हो PC3 कोशिकाओं की तुलना में। <img aएलटी = &quot;चित्रा 2&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54230 / 54230fig2.jpg&quot; /&gt; चित्रा 2:। मूल निवासी है और कठोर पुनर्गठन तहखाने झिल्ली (RBM) पर प्रोस्टेट ट्यूमर सेल प्रवास (ए) 14 घंटे के लिए पीबीएस (देशी) या 50 मिमी glycolaldehyde के साथ इलाज किया RBM जैल पर हो PC3 कोशिकाओं के Brightfield छवियों (आयु अमीर, कठोर) । प्रकोष्ठों एक brightfield माइक्रोस्कोप (10X उद्देश्य) और 12 सेल प्रक्षेप पथ उत्पन्न करने के लिए ट्रैकिंग के द्वारा पीछा घंटे के लिए प्रति घंटा 1 छवि के अधिग्रहण दर का उपयोग imaged थे। दिखाया छवियाँ 0, 3, 6, 9 और 12 घंटे के बाद समय बिंदुओं के अनुरूप हैं। एकल कक्षों के trajectories 12 घंटा समय बिंदु के लिए दिखाए जाते हैं। स्केल बार = 100 माइक्रोन। (बी) PC3 कोशिकाओं 72 घंटे के लिए देशी या कड़ा RBM पर सुसंस्कृत, और imaged पैनल (ए) में वर्णित है। स्केल बार = 100 माइक्रोन। विस्तार 2X बढ़ाई चयनित क्षेत्र से पता चलता है। (सी) मतलब ± एसडी सेल लंबाई (माइक्रोन); मूल निवासी RBM और कठोर RBM के बीच महत्वपूर्ण अंतर (पी = 1.2 x 10 -23)। ( <strओंग&gt; डी) मतलब ± एसडी वेग (माइक्रोन / घंटा) की गणना सेल प्रक्षेप पथ से; मूल निवासी RBM और कठोर RBM (पी = 0.004) के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। (ई) मतलब ± एसडी सेल आंदोलन के हठ (अनुपात डी / टी, जहां डी = शुरू से ही सेल प्रक्षेपवक्र, टी = सेल प्रक्षेपवक्र की कुल लंबाई के अंत करने के लिए दूरी); मूल निवासी RBM और कठोर RBM (पी = 0.0007) के बीच महत्वपूर्ण अंतर है। पैनलों सीई&gt; 10 कोशिकाओं का विश्लेषण किया गया के लिए, डेटा 3 स्वतंत्र प्रयोगों का प्रतिनिधि है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig2large.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

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How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases

यहाँ हम biophysical microenvironment जहां crosslinking और तहखाने झिल्ली (बीएम) उन्नत ग्लिकेशन endproducts (उम्र) द्वारा प्रेरित की वृद्धि की कठोरता रोग प्रासंगिकता है मॉडलिंग के लिए एक प्रोटोकॉल समझाओ।

प्रोस्टेट कैंसर और अन्य उम्र संबंधी विकृतियों या चयापचय रोगों में एक Biophysical उत्प्रेरक के रूप में अध्ययन करने के लिए कैसे तहखाने झिल्ली अकड़न

Here we describe a protocol that can be used to study the biophysical microenvironment related to increased thickness and stiffness of the basement ...

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