Name: how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases at JoVE.com

We thank Simon Hayward (Vanderbilt University Medical Center) for the BPH-1 cells; and Thomas Cox and Janine Erler (Biotech Research &amp; Innovation Centre, University of Copenhagen) for their assistance with rheological measurements. MR-T was funded by Worldwide Cancer Research, formerly The Association of International Cancer Research (Grant 08-0803 to JS), The British Embassy Montevideo and Agencia Nacional de Investigacion e Innovacion (UK_RH_2015_1_2 to MR-T). MC was supported by Prostate Cancer UK (Grant S14-017 to JS and GS). KW was funded by The China Scholarship Council. MAM was funded by The Saudi Arabian Cultural Bureau.

<ol>
	<li>Timpl, R., Brown, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+assembly+of+basement+membranes.">Supramolecular assembly of basement membranes.</a> Bioessays. 18 (2), 123-132 (1996).</li><li>Yurchenco, P. D., Ruben, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+collagen+lateral+associations+in+the+EHS+tumor+matrix.+Comparison+with+amniotic+and+in+vitro+networks.">Type IV collagen lateral associations in the EHS tumor matrix. Comparison with amniotic and in vitro networks.</a> Am J Pathol. 132 (2), 278-291 (1988).</li><li>Halfter, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+composition+and+biomechanical+properties+of+in+vivo-derived+basement+membranes.">Protein composition and biomechanical properties of in vivo-derived basement membranes.</a> Cell Adh Migr. 7 (1), 64-71 (2013).</li><li>Candiello, J., Cole, G. J., Halfter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+changes+in+the+structure,+composition+and+biophysical+properties+of+a+human+basement+membrane.">Age-dependent changes in the structure, composition and biophysical properties of a human basement membrane.</a> Matrix Biol. 29 (5), 402-410 (2010).</li><li>To, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes-induced+morphological,+biomechanical,+and+compositional+changes+in+ocular+basement+membranes.">Diabetes-induced morphological, biomechanical, and compositional changes in ocular basement membranes.</a> Exp Eye Res. 116, 298-307 (2013).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li><li>Bello, D., Webber, M. M., Kleinman, H. K., Wartinger, D. D., Rhim, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+responsive+adult+human+prostatic+epithelial+cell+lines+immortalized+by+human+papillomavirus+18.">Androgen responsive adult human prostatic epithelial cell lines immortalized by human papillomavirus 18.</a> Carcinogenesis. 18 (6), 1215-1223 (1997).</li><li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+an+immortalized+but+non-transformed+human+prostate+epithelial+cell+line:+BPH-1.">Establishment and characterization of an immortalized but non-transformed human prostate epithelial cell line: BPH-1.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 31 (1), 14-24 (1995).</li><li>Kaighn, M. E., Narayan, K. S., Ohnuki, Y., Lechner, J. F., Jones, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+prostatic+carcinoma+cell+line+(PC-3).">Establishment and characterization of a human prostatic carcinoma cell line (PC-3).</a> Invest Urol. 17 (1), 16-23 (1979).</li><li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li><li>Towbin, H., Staehelin, T., Gordon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophoretic+transfer+of+proteins+from+polyacrylamide+gels+to+nitrocellulose+sheets:+procedure+and+some+applications.">Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 76 (9), 4350-4354 (1979).</li><li>Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protein+silver+staining+in+polyacrylamide+gels:+a+10-year+synthesis.">Mechanisms of protein silver staining in polyacrylamide gels: a 10-year synthesis.</a> Electrophoresis. 11 (10), 785-794 (1990).</li><li>Rodriguez-Teja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGE-modified+basement+membrane+cooperates+with+Endo180+to+promote+epithelial+cell+invasiveness+and+decrease+prostate+cancer+survival.">AGE-modified basement membrane cooperates with Endo180 to promote epithelial cell invasiveness and decrease prostate cancer survival.</a> J Pathol. 235 (4), 581-592 (2015).</li><li>Graf, B. W., Boppart, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+analysis+of+three-dimensional+cell+culture+models.">Imaging and analysis of three-dimensional cell culture models.</a> Methods Mol Biol. 591, 211-227 (2010).</li><li>Yao, N. Y., Larsen, R. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+nonlinear+rheology+with+inertio-elastic+oscillations.">Probing nonlinear rheology with inertio-elastic oscillations.</a> J Rheology. 52 (4), 1013-1025 (2008).</li><li>Baker, A. M., Bird, D., Lang, G., Cox, T. R., Erler, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysyl+oxidase+enzymatic+function+increases+stiffness+to+drive+colorectal+cancer+progression+through+FAK.">Lysyl oxidase enzymatic function increases stiffness to drive colorectal cancer progression through FAK.</a> Oncogene. 32 (14), 1863-1868 (2013).</li><li>Caley, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated+Endo180+requires+stromal-derived+LOX+to+promote+metastatic+prostate+cancer+cell+migration+on+human+ECM+surfaces.">Tumor-associated Endo180 requires stromal-derived LOX to promote metastatic prostate cancer cell migration on human ECM surfaces.</a> Clin Exp Metastasis. 3 (2), 151-165 (2016).</li><li>Sturge, J., Wienke, D., East, L., Jones, G. E., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPI-anchored+uPAR+requires+Endo180+for+rapid+directional+sensing+during+chemotaxis.">GPI-anchored uPAR requires Endo180 for rapid directional sensing during chemotaxis.</a> J Cell Biol. 162 (5), 789-794 (2003).</li><li>Sturge, J., Wienke, D., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomes+generate+localized+Rho-ROCK-MLC2-based+contractile+signals+via+Endo180+to+promote+adhesion+disassembly.">Endosomes generate localized Rho-ROCK-MLC2-based contractile signals via Endo180 to promote adhesion disassembly.</a> J Cell Biol. 175 (2), 337-347 (2006).</li><li>Rodriguez-Teja, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+Outcome+and+EMT+Suppression+Mediated+by+a+Lectin+Domain+Interaction+of+Endo180+and+CD147.">Survival Outcome and EMT Suppression Mediated by a Lectin Domain Interaction of Endo180 and CD147.</a> Mol Cancer Res. 13 (3), 538-547 (2015).</li><li>Paszek, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tensional+homeostasis+and+the+malignant+phenotype.">Tensional homeostasis and the malignant phenotype.</a> Cancer Cell. 8 (3), 241-254 (2005).</li><li>Levental, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+crosslinking+forces+tumor+progression+by+enhancing+integrin+signaling.">Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling.</a> Cell. 139 (5), 891-906 (2009).</li><li>Carson, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+characterization+of+ex+vivo+prostate+tissue+via+spherical+indentation+in+the+clinic.">Material characterization of ex vivo prostate tissue via spherical indentation in the clinic.</a> Med Eng Phys. 33 (3), 302-309 (2011).</li><li>Hoyt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+elasticity+properties+as+biomarkers+for+prostate+cancer.">Tissue elasticity properties as biomarkers for prostate cancer.</a> Cancer Biomark. 4 (4-5), 213-225 (2008).</li><li>Krouskop, T. A., Wheeler, T. M., Kallel, F., Garra, B. S., Hall, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+moduli+of+breast+and+prostate+tissues+under+compression.">Elastic moduli of breast and prostate tissues under compression.</a> Ultrason Imaging. 20 (4), 260-274 (1998).</li><li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+characterization+of+viscoelastic+properties+of+human+prostate+correlated+with+histology.">Quantitative characterization of viscoelastic properties of human prostate correlated with histology.</a> Ultrasound Med Biol. 34 (7), 1033-1042 (2008).</li><li>Corona, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benign+prostatic+hyperplasia:+a+new+metabolic+disease+of+the+aging+male+and+its+correlation+with+sexual+dysfunctions.">Benign prostatic hyperplasia: a new metabolic disease of the aging male and its correlation with sexual dysfunctions.</a> Int J Endocrinol. , (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

En protokoll for generering av 3D-kjertel acini fra MECS i ren RBM gels 6 ble endret i en tidligere studie ved tilsetning av 4 mg / ml type I kollagen til RBM matrise. Tilsetningen av kollagen resulterte i elastisitetsmodulen av RBM gelen øker fra 175 ± 37 til 1589 ± 380 pascal. Denne 9,1-ganger økning i stivhet modulert vekst, overlevelse, migrasjon og differensiering av MECS 21. Protokollen ble endret på nytt ved å inkludere et behandlingstrinn med D - (-) - ribose for å fremme ikke-enzymatisk kryssbinding av type I kollagen som var blitt tilsatt til RBM gel. Den resulterende 15-dobling av stivhet ble funnet å samarbeide med onkogene transformasjon av mecs å fremme deres invasive atferd 22. Den eksperimentelle tilnærming for å legge til type I kollagen å RBM gels forenkler direkte interaksjon av mecs med kollagenfibre, som bare forekommer i menneskelig vev etter fysisk barriere mellom stromaog epitel levert av BM gjennomgår proteolytisk degradering. Ved å generere 3D kjertel acini fra PEC i ren RBM geler forbehandlet med GLA, åpnes den aktuelle protokoll den måten å studere hvordan BM stivhet i seg selv kan utløse deres invasive oppførsel (figur 3). Nivåene av BM stivhet indusert i denne protokollen har fysiologiske relevans. Inkubering med 50 mM GLA i 6 timer og 14 timer henholdsvis økt elastisitetsmodulene til den rene rbM gelen til 175 ± 90 og 322 ± 160 i forhold til 122 ± 55 Pascal i RBM geler behandlet med PBS (tabell 1). Dette 1.7 til 3.2 ganger økning i rbM stivhet rekapitulerer den 2,5 til 3,4 ganger høyere stivhet observert i ondartet forhold til normal prostata eller BPH vev 23-26. Som beskrevet i en nylig publikasjon 13 de morfologiske endringer indusert ved akkumulering av AGE og RBM stivhet i PEF acini kan kvantifiseres for en statistisk signifikant skifte fra arounded til mangekantet form, redusert luminal / total acinar området, og utstående celler migrerer fra acina inn i AGE rike rbM (figur 3). Immunoblotting kan også brukes til å vurdere markører for EMT (for eksempel tap av E-cadherin 13) og den kontraktile egenskaper (for eksempel fosforylert myosin lettkjede-2, pMLC2 13) i PEC dyrket i normal versus stiv rbM (figur 3). Ytterligere vurdering ved hjelp av immunfluorescens-fargingen og konfokal mikroskopi kan anvendes for å visualisere BM (f.eks laminin, kollagen IV og AGE akkumulering 13), cellulær apikale-til-basal polaritet (f.eks apikal lokalisering av EEA1: tidlig endosomale antigen 1; og GM130: 130 kDa cis-Golgi markør 13) og cellulære mønstre av adhesjonsmolekyler (f.eks E-cadherin lokalisering til celle-celle kryss 13) (figur 3). <img alt = &quot;Figur 3&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54230 / 54230fig3.jpg&quot; /&gt; Figur 3:. Oversikt over ulike protokoller som presenteres her Diagrammet viser hvordan å forberede og stive av rekonstituert basalmembran (rbM) med glycolaldehyde (Maillard-reaksjonen), hvordan å frø celler videre til stiv rbM, hvordan å analysere stiv rbM ( omfanget av Maillard reaksjon) og prosedyrer som kan brukes til å analysere de cellulære og molekylære endringer indusert av AGE-rik rbM. AGE, avanserte glycation sluttprodukter; BM, basalmembran; DAPI, 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenylindol; EEA1, tidlig endosomal antigen 1; GAPDH, glyseraldehyd-3-fosfat-dehydrogenase; GLA, glycolaldehyde; GEE, glycin etylester; GM130, 130 kDa cis-Golgi markør; p-MLC2 (Thr18 / Ser19), myosin lett kjede-2 fosforylert på steder treonin 18 og serin 19; rbM, rekonstituert basalmembran; SDS-PAGE, natriumdodecylsulfat polyakrylamid gelelektroforese. For RWPE1 acini Scale bar = 10 mikrometer; for PC3 tumorcellekuler Scale bar = 100 mikrometer. Dette tallet har blitt modifisert fra referanse 13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig3large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a> Feilsøkings trinn vil være nødvendig hvis D - (-) - ribose velges som tverrbindingsmiddel for rbM. Under protokollen utvikling ble det funnet at behandling med en M D - (-) - ribose i 72 timer, som tidligere beskrevet for rbM / kollagen-geler 22, resulterte i dehydrering og krymping av RBM geler. Evalueringen av lavere konsentrasjoner av D - (-) - ribose og kortere behandlingstider kan bidra til å overvinne denne begrensningen. En potensiell begrensning i fremtidige anvendelser av protokollen kunne være oppstått hvor høyere nivåer av rbM stivhet er ønskelig. Hvis lengre inkubasjonstider og høyere konsentrasjoner av GLA brukes for å indusere høye nivåer av rbM gel stivhet vil det være nødvendig å<html> vurdere om disse behandlingsforhold har en innvirkning på celle overlevelse og spredning, som tidligere beskrevet 13. Det bør også legges merke til at inkubering av RWPE-1-celler med serum induserer en fenotypisk EMT-lignende overgang og eksponering for serum eller serumholdige materialer bør unngås. For eksempel, hvis eksperimenter involverer transfeksjon av kort interfererende RNA (siRNA) oligonukleotider, prosedyren bør optimaliseres ved hjelp av RWPE-1 celler dyrket i KSFM, uten å skifte cellene til lav serum transfeksjon media. Denne ulempen kan kompromittere nivået av genet lyddemping oppnås ved bruk av forbigående siRNA tilnærminger i modellen. For noen protein mål ville det rådes til å ansette induserbare shRNA vektorer for fleksibel genet Slå og ønsket reduksjon i protein nivåer. Innretninger som innlemmer enzymatisk kryssbinding av stroma-celle eller tumor celleassosiert lysyl oksidase (LOX) 17 kan også bli innarbeidet i framtidige modeller. jove_content &quot;&gt; Denne protokollen vil lette fremtidige studier av pro-invasive mekanismer som utløses av aldersavhengig BM stivhet i Pecs (RWPE-en, BPH-1) og evaluering av anti-metastatiske mål i invasive PTCs (PC3). Gitt at BPH anses å være en stoffskiftesykdom 27, denne protokollen åpner også mot vår bedre forståelse av sammenhengen mellom metabolske forstyrrelser og økt prostata kreftrisiko. Gitt at BM stivhet indusert av sin eksponering mot AGEs kan være en trigger for invasivitet i andre kreft typer, vil det være av interesse å bruke protokollen for å sette opp lignende modeller som inneholder normale epitel-celler og tumorceller fra andre organer (for eksempel bryst, kolon, eggstokkene, bukspyttkjertel). Kritiske trinnene i protokollen, sammen med sine timings, er oppsummert i figur 4. Under det første trinnet er det viktig å opprettholde bestanden løsning av rbM ved 4 ° C, mens den tiner for å hindre at den polymerization. Pipettespisser bør ikke plasseres inn i RM stamløsning inntil de har blitt avkjølt til 4 ° C. For neste trinn er det også viktig å sikre kammeret lysbildene har likevekt til 4 ° C før de er belagt med RBM løsning. Så snart temperaturen i RBM oppløsningen økes til over 4 ° C, vil det gjennomgå irreversible polymerisasjon for å danne en gel. Det vesentlig at RBM ikke blir forstyrret under polymerisasjonstrinnet for å sikre at den danner en jevn overflate som passer for cellekultur og mikroskopisk analyse. Varigheten av inkubasjon med GLA med eller uten inhibitorer av Maillard-reaksjonen (natriumcyanborhydrid og amingoguanidine) vil bestemme hvor stiv RBM gelen blir. Det anbefales å bruke en 6 timers inkubasjon med GLA hvis semi-stiv vilkår kreves, og 14 timers inkubasjon hvis stive vilkår kreves (tabell 1). Alternativ inkubasjonstider eller konsentrasjoner av GLA kan anvendes dersom forskjellige nivåerav stivhet er ønskelig. I dette tilfelle reologiske analyse av de RBM gelene må innarbeides som et viktig trinn. Etter trinnet med avkjøling av Maillard-reaksjonen ved inkubasjon med GEE og de etterfølgende vasketrinn med PBS, kan RBM gelene skal brukes umiddelbart eller lagret ved 4 ° C i opptil 48 timer før deres anvendelse for cellekultur. Når cellekulturer er satt opp er det viktig å endre dyrkingsmediet (inkludert eventuelle behandlinger) annenhver dag. Det anbefales å opprettholde den 3D-cellekulturer i 3-12 dager i henhold til parameterne som skal undersøkes. For 3D PEC acini det anbefales å analysere kulturer etter 6 dager, og for 3D PTC kuler analyse anbefales etter 3 dager med kultur i første instans. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/54230/54230fig4.jpg" /> Figur 4:. Enkel Oversikt over protokollen med Kritiske trinn og Timing indikerte flow diagrammet viser hvordan du kan forberede og stive av rekonstituert basalmembran (rbM) med glycolaldehyde (Maillard reaksjon) med kritiske trinn og timings angitt. Punkter hvor protokollen kan stoppes, og RBM gels er lagret, er også indikert. rbM, rekonstituert basalmembran; GLA, glycolaldehyde; GEE, glycin etylester; ON, overnatting; PBS, fosfatbufret saltoppløsning; RT, romtemperatur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig4large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>

The basement membrane (BM) is a sheet of specialized extracellular matrix (ECM) that maintains stable tissue borders by separating layers of epithelial cells from the stroma1. Covalent crosslinking between adjacent triple helices of collagen IV in the BM stabilizes their lateral association by establishing an irregular network of super-twisted helices2. These collagen IV lattices act as a scaffold for its interaction with laminin and other BM components1. The structural arrangement of the BM provides it with the mechanical strength and rigidity necessary for the normal development of glandular epithelia3. 
During aging and disease the BM progressively thickens and stiffens3,4. For example, a 3-fold increase in the elastic modulus (E) of the ocular BM occurs between the ages of 50 and 80 in the normal population, and this stiffening is further exacerbated in metabolic disorders like diabetes5. The structural and biomechanical changes in the BM that result in its increased stiffness occur when its ECM components, collagen IV and laminin, become non-enzymatically crosslinked following their exposure to advanced glycation endproducts (AGEs).
The purpose of the method described here was to establish a model for the investigation of how BM stiffness, due to AGE exposure, promotes prostate epithelial cell (PEC) and prostate tumour cell (PTC) invasiveness in the context of the switch to metastatic prostate cancer (PCa). To do this a previous method used for generating 3D glandular acini from mammary epithelial cells (MECs) in reconstituted rBM gels6 was adapted to include an additional step where the rBM gels are pre-treated with glycolaldehyde (GLA). Several techniques for assessing GLA induced crosslinking and stiffening of pre-treated rBM gels are described, including photometric analysis, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE), confocal microscopy and rheometric analysis. The prostate cell types selected for culture on the pre-stiffened rBM include: RWPE-1, PECs derived from a normal prostate gland7; BPH-1, PECs derived from a prostate gland affected by BPH8; and PC3, metastatic PTCs derived from a secondary tumor located in the vertebral bone of a prostate cancer (PCa) patient9. 
In addition to advancing the study of prostate gland pathology, the protocol for stiffening of rBM gels by their treatment with GLA can be adapted to investigate how BM stiffness contributes to other age-related pathologies and metabolic disorders. For example, the model can be directly applied to investigate how metastatic cancer is induced by BM stiffness in organs such as the breast, colon, ovary and pancreas by the incorporation of appropriate cell types. Furthermore, the protocol can be adapted to investigate how stiff BM promotes biomechanical mechanisms of disease progression in diabetes-related microvascular disease, retinopathy, nephropathy and neuropathy.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:628px;">I - Material for monolayer culture</td>
			<td style="width:265px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:401px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BPH-1</td>
			<td>CaP Cell Line Database</td>
			<td>PCaCL-132</td>
			<td>Contact: simon.hayward@mcmail.vanderbilt.edu</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Complete keratinocyte serum-free media&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17005-075</td>
			<td>Do not warm at 37 &#186;C before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum&#160;</td>
			<td>First Link UK Ltd</td>
			<td>02-00-850</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PC3&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-1435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffer Saline (Dulbecco A) tablets</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>BR0014G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R5886</td>
			<td>warm in 37 &#186;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RWPE-1&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-11609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T4049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">II - Material for 3D culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>271004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aminoguanidine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>396494</td>
			<td>Irritating to eyes, respiratory system and skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chamber slides, 8-well&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific Nunc Lab-Tek</td>
			<td>TKT-210-816M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture Matrix reconstituted basement membrane (rBM) reduced growth factor extract&#160;</td>
			<td>AMS Biotechnology</td>
			<td>3445-005-01</td>
			<td>Store Basement membrane (BM) at -80 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanogen bromide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C91492</td>
			<td>Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>695076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycine ethyl ester hydrochloride (GEE)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50060</td>
			<td>Irritating to eyes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycolaldehyde dimer (GLA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G6805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium cyanoborohydride&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71435</td>
			<td>Highly flammable; Toxic by contact skin and inhalation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe filter 0.22 microns</td>
			<td>Appleton Woods</td>
			<td>BC680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">III - Material to quantify Maillard reaction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>D3571</td>
			<td>light sensitive and store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cloning cylinders</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L) Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>A-11034</td>
			<td>light sensitive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vectashield mounting media&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti-pentosidine clone PEN-12 mAb</td>
			<td>TransGenic Inc</td>
			<td>KH012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8775</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-human collagen IV polyclonal antibody&#160;&#160;</td>
			<td>Acris Antibodies</td>
			<td>R1041</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rabbit anti-laminin A/C pAb</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology Inc</td>
			<td>sc-7292</td>
			<td>Store at -20 &#186;C in aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether (Triton-X100)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene glycol sorbitan monolaurate (Tween-20)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dialysis cassette Slide-A-Lyzer</td>
			<td>ThemoFisher Scientific</td>
			<td>66333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IV - Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ARG2 controlled strain rotational rheometer</td>
			<td>T.A. Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Axiovert S100 (20x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CO2 controlled humidified incubation chamber for Zeiss Axio S100 microscope</td>
			<td>Solent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Axiovert 200M (40x, 63x magnification) microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus LH50A microscope fitted with a digital camera using phase-contrast&#160;</td>
			<td>Olympus&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PHERAstar Plus plate reader spectrophotometer</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">V - Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image J 1.47v</td>
			<td>National Institute of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MetaXpress</td>
			<td>Molecular Divices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

how to study basement membrane stiffness as a biophysical trigger in prostate cancer and other age-related pathologies or metabolic diseases

Her beskriver vi en protokoll som kan brukes til å studere de biofysiske mikromiljøet i forbindelse med øket tykkelse og stivhet i basalmembran (BM) under aldersrelaterte sykdommer og metabolske sykdommer (for eksempel kreft, diabetes, mikrovaskulær sykdom, retinopati, nefropati og neuropati) . Premisset for modellen er ikke-enzymatisk kryssbinding av rekonstituert BM (rbM) matrise ved behandling med glycolaldehyde (GLA) for å fremme avansert glycation sluttproduktet (AGE) generasjon via Maillard-reaksjonen. Eksempler på laboratorieteknikker som kan brukes for å bekrefte AGE generasjon, ikke-enzymatisk kryssbinding og økt stivhet i GLA behandlet rbM er skissert. Disse omfatter fremstilling av nativt rbM (behandlet med fosfat-bufret saltoppløsning, PBS) og stiv rbM (behandlet med GLA) for bestemmelse av: dets AGE innhold av fotometrisk analyse og immuno-mikroskopi, dens ikke-enzymatisk kryssbinding av natriumdodecylsulfat polyakrylamidgelelektroforese (SDS PAGE), så vel som konfokal mikroskopi, og dens stivhet øket ved hjelp av rheometri. Fremgangsmåten beskrevet her kan brukes til å øke stivhet (elastisitetsmoduler, E) av rbM opp til 3,2-fold, i samsvar med målinger foretatt på sunne versus sykt humant prostatavev. For å gjenskape den biofysiske mikromiljøet knyttet til aldring og syke prostatakjertelen tre prostata celletyper ble introdusert på mors rbM og stiv rbM: RWPE-en, prostata epitelceller (PEC) avledet fra en normal prostatakjertel; BPH-1, Pecs avledet fra en prostatakjertelen påvirkes av benign prostatahyperplasi (BPH); og PC3, metastatiske celler avledet fra en sekundær bein svulst stammer fra prostatakreft. Flere parametre kan måles, inkludert størrelse, form og invasive egenskaper av 3D kjertel acini dannet av RWPE-1 og BPH-1 på mors versus stiv rbM, og gjennomsnittlig cellelengde, vandringshastighet og varighet av celle bevegelse av 3D spherOIDer dannet av PC3 celler under samme forhold. Cell signalveier og subcellulære lokalisering av proteiner kan også bli vurdert.

3D Prostata acini Cultured på Stiff rbM Etter 6 dager i kultur, Pecs avledet fra normal prostata vev (RWPE-1) (figur 1A) og BPH vev (BPH-1) (figur 1B) form acini på mors (PBS behandlet) rbM som er organisert i uniform kuler av epitel celler. Disse acini har også karakteristikkene av høyt organiserte PEC med apikal-til-basal polaritet og en synlig luminal plass 13,20. Den acini dannet av PEC stammer fra normal prostata vev (RWPE-1) (figur 1A) og BPH vev (BPH-1) (figur 1B) på stivnet (AGE-rik) rbM (behandlet med GLA) har en forstyrret arkitektur (skiftende fra sfæroidal til kantet i form og celler utstående / migrere fra acini inn i AGE-rik rbM) (figur 1A). Disse<html> acini er også preget av svært uorganisert PEC som har mistet sin apikal-til-basal polaritet med en liten eller ikke-eksisterende luminal plass 13. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/54230/54230fig1.jpg" /> Figur 1:. Prostata Epitelceller vokst som 3D Glandular acini på Native og Stiff Rekonstituert basalmembran (rbM) (A) Lysfelt bilder av RWPE-1 celler dyrket i 12 timer opp til 6 dager på RBM gels behandlet med PBS (native) eller 50 mm glycolaldehyde i 14 timer (AGE-rik, stiv); Scale bar = 50 mikrometer. (B) BPH-1 celler, dyrket som beskrevet i panel A; Skala barer = 50 mikrometer; data er representativ for 3 uavhengige eksperimenter. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig1large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a> <html> Tabell 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54230 / 54230table1.jpg &quot;/&gt; Tabell 1:. Kjennetegn på prostata epithelial RWPE-en acini dyrket på Native, Semi-Stiv og Stiff Rekonstituert basalmembran (rbM) RWPE-1 acini ble dyrket på rbM forbehandles med PBS i 14 timer (native), glycolaldehyde (GLA ) i 6 timer (semi-stiv) eller GLA i 14 timer (stiv). For acinar form, prosentandel (%) ± standardavvik (SD) av runden, ble halvkantet og mangekantede acini beregnet ut fra 5 uavhengige eksperimenter (50 acini kvantifisert per tilstand). Relativ acinar størrelse ble beregnet (native rbM = 100%) fra 3 uavhengige eksperimenter. For invasivitet, ble% ± SD acini med en eller flere utstående celler beregnes fra 3 uavhengige eksperimenter. Gangers endring er beregnet ved å dividere den gjennomsnittlige verdien oppnådd under semi-stive eller stive betingelser ved den tilsvarende verdi for native betingelser. P-verdier beregnet med t-test (α = 0,05). ontent &quot;fo: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; aldersavhengig økt rbM stivhet fremmer PC3 prostata svulst celle migrasjon PC3 celler dyrket på mors rbM migrere ved å opprettholde kontinuerlig celle-celle kontakt, mens PC3 celler dyrket på AGE-rik (stiv) rbM flytte uavhengig av hverandre (figur 2A). Etter 72 timer i kultur PC3 cellene danner foci (kuler) på mors (PBS behandlet) rbM, mens PC3 celler på stiv (AGE-rik) rbM ikke fra kulene og migrere uavhengig (figur 2B). PC3 celler på stiv (AGE-rik) rbM er mer langstrakt enn PC3 celler dyrket på mors rbM (figur 2C). PC3 celler på stiv rbM migrere raskere enn PC3 celler dyrket på mors rbM (figur 2D). PC3 celler på stiv rbM vise en reduksjon i utholdenhet i forhold til PC3 celler dyrket på mors rbM (figur 2E). <img alt = &quot;Figur 2&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54230 / 54230fig2.jpg&quot; /&gt; Figur 2:. Prostata Tumor Cell Migrasjon på Native og Stiff Rekonstituert basalmembran (rbM) (A) Lysfelt bilder av PC3 celler dyrket på RBM gels behandlet med PBS (native) eller 50 mM glycolaldehyde i 14 timer (AGE-rik, stiv) . Celler ble fotografert ved hjelp av et lysfelt mikroskop (10X objektiv) og et oppkjøp rate på 1 bilde per time i 12 timer, etterfulgt av celle sporing for å generere baner. Bildene som er vist svarer til de tidspunkter etter 0, 3, 6, 9 og 12 timer. Baner av enkeltceller er vist for den 12 timers tidspunkt. Scale bar = 100 mikrometer. (B) PC3-celler dyrket på naturlige eller stiv rbM i 72 timer, og avbildes som beskrevet i panelet (A). Scale bar = 100 mikrometer. Detalj viser valgte området med 2X forstørrelse. (C) Mean ± SD cellelengden (nm); signifikant forskjell mellom innfødte rbM og stiv rbM (p = 1,2 x 10 -23). ( <strong&gt; D) Mean ± SD hastighet (im / t) beregnes ut fra celle baner; signifikant forskjell mellom innfødte rbM og stiv rbM (p = 0,004). (E) Gjennomsnitt ± SD persistens av cellebevegelse (forholdet D / T, hvor D = avstand fra start til slutt av celle bane, T = total lengde av banen celle); signifikant forskjell mellom innfødte rbM og stiv rbM (p = 0,0007). For paneler CE&gt; 10 celler ble analysert, er data som representerer 3 uavhengige eksperimenter. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54230/54230fig2large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>

Watch this Scientific Journal Video about How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases at JoVE.com

How to Study Basement Membrane Stiffness as a Biophysical Trigger in Prostate Cancer and Other Age-related Pathologies or Metabolic Diseases

Her forklarer vi en protokoll for modellering av biofysiske mikromiljøet der kryssbinding og økt stivhet i basalmembran (BM) indusert av avanserte glycation sluttprodukter (aldre) har patologisk betydning.

Hvordan studere basalmembran Stivhet som Biofysikalsk Trigger i prostatakreft og andre aldersrelaterte patologi eller metabolske sykdommer

Here we describe a protocol that can be used to study the biophysical microenvironment related to increased thickness and stiffness of the basement ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Analyser å studere macrophage og Microglia Stimulering av Glioblastoma Invasion

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantifisering av genekspresjon og Tumor Invasivitet Bruke Genetic Mosaikk

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Hyperpolarized 13C Metabolic Magnetic Resonance Spectroscopy and Imaging

Hyperpolarized 13C Metabolic Magnetic Resonance Spectroscopy and Imaging

hyperpolarized<sup&gt; 13</sup&gt; C Metabolsk Magnetic Resonance spektroskopi og avbildning

In the past decades, new methods for tumor staging, restaging, treatment response monitoring, and recurrence detection of a variety of cancers have ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 karsinom Tumor-bærende mus som en modell for studier av kreft kakeksi

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Påvisning av mitokondrier membran potensial til å studere CLIC4 Knockdown-indusert HN4 celle apoptose In Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

Phosphopeptide Enrichment Coupled with Label-free Quantitative Mass Spectrometry to Investigate the Phosphoproteome in Prostate Cancer

Phosphopeptide berikelse kombinert med etikett-fri kvantitative massespektrometri å undersøke Phosphoproteome i prostatakreft

Phosphoproteomics involves the large-scale study of phosphorylated proteins. Protein phosphorylation is a critical step in many signal transduction ...

Yeast As a Chassis for Developing Functional Assays to Study Human P53

Gjær som et chassis for å utvikle funksjonelle analyser for å studere Human P53

The finding that the well-known mammalian P53 protein can act as a transcription factor (TF) in the yeast S. cerevisiae has allowed for the development of ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

In vitro-analysen for å studere tumor-macrophage interaksjon

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

Prostate Organoid Cultures as Tools to Translate Genotypes and Mutational Profiles to Pharmacological Responses

Prostata Organoid kulturer som verktøy for å oversette genotyper og mutational profiler til farmakologiske reaksjoner

Presented here is a protocol to study pharmacodynamics, stem cell potential, and cancer differentiation in prostate epithelial organoids. Prostate ...

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Bruke kylling chorioallantoic membran i Vivo modell for å studere gynekologiske og urologiske kreftformer

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...