Name: human placental and decidual organ cultures to study infections at the maternal-fetal interface
Uploaded: 2016-07-21T15:00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface at JoVE.com

We are grateful to Cristina Faralla and David Lowe for helpful discussions. We acknowledge Mark Weinstein and San Francisco General Hospital Pathology Department for expert advice. This work was supported by National Institute of Health grants R01AI084928 and Burroughs Wellcome Fund 41259 to A.I.B; G.A.R. was supported by F32AI108195, Society for Pediatric Pathology Young Investigator Research grant, and University of California Partnerships for Faculty Diversity President's Post-doctoral Fellowship.

<ol>
	<li>Pan, X., Yang, Y., Zhang, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+host+specificity+in+human+pathogenic+bacteria.">Molecular basis of host specificity in human pathogenic bacteria.</a> Emerging microbes &amp; infections. 3, e23 (2014).</li><li>Robbins, J. R., Skrzypczynska, K. M., Zeldovich, V. B., Kapidzic, M., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+syncytiotrophoblast+constitutes+a+major+barrier+to+vertical+transmission+of+Listeria+monocytogenes.">Placental syncytiotrophoblast constitutes a major barrier to vertical transmission of Listeria monocytogenes.</a> PLoS pathogens. 6, e1000732 (2010).</li><li>Zhang, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polymeric+immunoglobulin+receptor+translocates+pneumococci+across+human+nasopharyngeal+epithelial+cells.">The polymeric immunoglobulin receptor translocates pneumococci across human nasopharyngeal epithelial cells.</a> Cell. 102, 827-837 (2000).</li><li>Ngampasutadol, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+C4b-binding+protein+selectively+interacts+with+Neisseria+gonorrhoeae+and+results+in+species-specific+infection.">Human C4b-binding protein selectively interacts with Neisseria gonorrhoeae and results in species-specific infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 17142-17147 (2005).</li><li>Pishchany, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+for+human+hemoglobin+enhances+Staphylococcus+aureus+infection.">Specificity for human hemoglobin enhances Staphylococcus aureus infection.</a> Cell host &amp; microbe. 8, 544-550 (2010).</li><li>Benirschke, K., Kaufmann, P., Baergen, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pathology of the Human Placenta. , (2012).</li><li>Robbins, J. R., Zeldovich, V. B., Poukchanski, A., Boothroyd, J. C., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+barriers+of+the+human+placenta+to+infection+with+Toxoplasma+gondii.">Tissue barriers of the human placenta to infection with Toxoplasma gondii.</a> Infection and immunity. 80, 418-428 (2012).</li><li>Shamir, E. R., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organotypic+culture:+experimental+models+of+mammalian+biology+and+disease.+Nature+reviews.">Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 15, 647-664 (2014).</li><li>Hazan, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular-leukocyte+interactions:+mechanisms+of+human+decidual+spiral+artery+remodeling+in+vitro.">Vascular-leukocyte interactions: mechanisms of human decidual spiral artery remodeling in vitro.</a> The American journal of pathology. 177, 1017-1030 (2010).</li><li>Dunk, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vitro+model+of+trophoblast-mediated+decidual+blood+vessel+remodeling.">A novel in vitro model of trophoblast-mediated decidual blood vessel remodeling.</a> Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology. 83, 1821-1828 (2003).</li><li>Hunkapiller, N. M., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+12.+Placental+remodeling+of+the+uterine+vasculature.">Chapter 12. Placental remodeling of the uterine vasculature.</a> Methods in enzymology. 445, 281-302 (2008).</li><li>Miller, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+safe+work+practices+in+human+and+animal+medical+diagnostic+laboratories.+Recommendations+of+a+CDC-convened,+Biosafety+Blue+Ribbon+Panel.">Guidelines for safe work practices in human and animal medical diagnostic laboratories. Recommendations of a CDC-convened, Biosafety Blue Ribbon Panel.</a> MMWR Surveill Summ. 61 Suppl, 1-102 (2012).</li><li>Lash, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+oxygen+concentrations+inhibit+trophoblast+cell+invasion+from+early+gestation+placental+explants+via+alterations+in+levels+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system.">Low oxygen concentrations inhibit trophoblast cell invasion from early gestation placental explants via alterations in levels of the urokinase plasminogen activator system.</a> Biol Reprod. 74, 403-409 (2006).</li><li>Wang, N., Strugnell, R., Wijburg, O., Brodnicki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+bacterial+load+and+immune+responses+in+mice+infected+with+Listeria+monocytogenes.">Measuring bacterial load and immune responses in mice infected with Listeria monocytogenes.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li><li>Palmer, M. E., Watson, A. L., Burton, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+analysis+of+degeneration+and+regeneration+of+syncytiotrophoblast+in+first+trimester+placental+villi+during+organ+culture.">Morphological analysis of degeneration and regeneration of syncytiotrophoblast in first trimester placental villi during organ culture.</a> Hum Reprod. 12, 379-382 (1997).</li><li>Elsinghorst, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+invasion+by+gentamicin+resistance.">Measurement of invasion by gentamicin resistance.</a> Methods in enzymology. 236, 405-420 (1994).</li><li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin-embedded+and+frozen+sections+of+Drosophila+adult+muscles.">Paraffin-embedded and frozen sections of Drosophila adult muscles.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li><li>Croy, B. A., Yamada, A. T., DeMayo, F. J., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Guide to Investigation of Mouse Pregnancy, 1st Edition. , (2014).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+Laboratory+Techniques.+Histological+Sample+Preparation+for+Light+Microscopy.">General Laboratory Techniques. Histological Sample Preparation for Light Microscopy.</a> JoVE. , (2016).</li><li>Troy, T. C., Arabzadeh, A., Enikanolaiye, A., Lariviere, N., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemistry+on+paraffin+sections+of+mouse+epidermis+using+fluorescent+antibodies.">Immunohistochemistry on paraffin sections of mouse epidermis using fluorescent antibodies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2008).</li><li>Chi, V., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemistry:+paraffin+sections+using+the+Vectastain+ABC+kit+from+vector+labs.">Immunohistochemistry: paraffin sections using the Vectastain ABC kit from vector labs.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e308 (2007).</li><li>Zeldovich, V. B., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defense+and+tolerance:+unique+challenges+in+the+placenta.">Host defense and tolerance: unique challenges in the placenta.</a> PLoS pathogens. 8, e1002804 (2012).</li><li>Yue, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+encyclopedia+of+DNA+elements+in+the+mouse+genome.">A comparative encyclopedia of DNA elements in the mouse genome.</a> Nature. 515, 355-364 (2014).</li><li>Robbins, J. R., Bakardjiev, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogens+and+the+placental+fortress.">Pathogens and the placental fortress.</a> Current opinion in microbiology. 15, 36-43 (2012).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> J Immunol. 172, 2731-2738 (2004).</li><li>Redline, R. W., Shea, C. M., Papaioannou, V. E., Lu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+anti-listerial+responses+in+deciduoma+of+pseudopregnant+mice.">Defective anti-listerial responses in deciduoma of pseudopregnant mice.</a> The American journal of pathology. 133, 485-497 (1988).</li><li>Redline, R. W., McKay, D. B., Vazquez, M. A., Papaioannou, V. E., Lu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+functions+are+regulated+by+the+substratum+of+murine+decidual+stromal+cells.">Macrophage functions are regulated by the substratum of murine decidual stromal cells.</a> The Journal of clinical investigation. 85, 1951-1958 (1990).</li><li>Bakardjiev, A. I., Theriot, J. A., Portnoy, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+traffics+from+maternal+organs+to+the+placenta+and+back.">Listeria monocytogenes traffics from maternal organs to the placenta and back.</a> PLoS pathogens. 2, e66 (2006).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

זנים טהורים, מהונדס ועכבר נוקאאוט יכולים לשרת מערכות ניסיוניות לבחון מנגנונים וחסונים. עם זאת, למרות שימור כללי של חומר גנטי ליבה, הגנום התפקודי של עכברים ובני אדם להפגין הבדלים משמעותיים גורמים רגולטוריים 23. אין זה מפתיע, אם כן, כי במחקרים פרה מבטיחים במודלים של בעלי חיים הם לפעמים לא לחזור בדיוק בחולים אנושיים. ההשליה מראה גבוה מאוד מגוון interspecies, ובכך טיוח במודלים של בעלי חיים פחות אידיאלי לחקר מחלות אנושיות 24. הכרה הוא ההבדלים הניכרים לעין באימונולוגיה אדם ועכבר 25, ואת האבולוציה מתבדר המבוטאת באנטומיה שליה, זה נבון לשקול את השימוש של תרבויות vivo לשעבר איבר של רקמות הריונית אדם לחקירה ניסיונית. התיאורים, צילומי תמונות, סרט הדרכה בפרוטוקול זה להורות חוקרים עלאיך להקים villous ותרבויות איבר decidual על מוסיף תרבות ECM מצופה רקמה transwell. היתרונות של טכניקה זו כוללים את הפשטות היחסית של מיקרו-לנתיחה ומערכת transwell תמיכה מכאנית, במיוחד בהשוואה לשיטות חלופיות כגון מטריצות-מוטבע 3D או תרבויות פרוסה איברים. השעיה של תרבות האיבר על תמיכה הממברנה מאפשרת לחילופי מזין בכלל משטחי הרקמות כדאיים נשמרה לתרבות לטווח קצר (96 שעות עבור תרבויות villous, 72 שעות עבור תרבויות decidual) טכניקת .זה מאפשרת לחקר ביולוגית שליה אנושית על הרקמות רמה, ללא ספק יותר ביולוגי רלוונטי מאשר דגמי תרבית תאי monolayer. השלב הקריטי ביותר בפרוטוקול זה הוא לנתיחה מיקרו של חתיכות villous ו decidual המתאים לתרבות איברים. חתיכות אופטימליות של רקמות מודגמות photographically (איור 2 א ו איור 3 א) כדי לעזור לחוקרים שעבורםהדמיה של דגימות הריונית היא חדשה. זה חשוב במיוחד כדי לבחור עצים villous שענפיו לסיים בעמודות EVT, כמו תאים אלה יעברו לתוך ECM ולעזור לעגן את villi הממברנה. עבור שני סוגי תרבויות איבר עוזר למזער הפרעות לרקמה במהלך שינויי תקשורת על ידי pipetting באופן זהיר חפוז. טכניקה זו מקשה מינימאלית בלבד. בהזדמנות, דגימות להראות זיהום. זיהום הוא בדרך כלל חיידקים (מדי פעם פולי-מיקרוביאלי), ורק מתברר לאחר 1-2 ימים בתרבות. לאחר הזיהום הוא ציין, אקונומיקה צריכה להיות מיושמת, התרבות מושלכת, ואת החממה בתרבית הרקמה מעוקרת כדי למנוע בעיה לטווח ארוכה. ישנן מספר דרכים אפשריות זיהום שעלול להתעורר: זיהום ברחם, במהלך ניתוח, במהלך מסיק / עיבוד דגימה, או במהלך תחזוקת התרבות איברים. שלבי הקציר ועיבוד הם הזמן הסביר ביותרומקום זיהום להיות מוצג. לכן, חשוב להפחית את כמות זמן הדגימה היא מניפולציה במהלך איסוף דיסקציה מיקרו. זה יקטין חשיפת דגימת הסביבה, בסביבה לא סטרילית. בהתאם להגדרת מעבדה, מיקרוסקופ לנתח יכול להיות ממוקם בתוך מכסה מנוע רקמת סטרילית התרבות. הניתוח histopathologic של תרבויות איברים לאחר ההדבקה עם הפתוגן רלוונטי מבחינה רפואית L. חיידקים, מוצגים כאן כיישום אפשרי אחד של הפרוטוקול. לוקליזציה immunofluorescence של שני החיידקים ותאי מארח חיסון לאחר תובנה חדשות תשואות זיהום לתוך תגובת המארח האנושית לפתוגנים. תרבויות איבר Decidual עשויות לשמש כטכניקת ניסוי vivo לשעבר משלימה לבחון נתונים שנוצרו מזיהומי עכבר vivo, לרבות דוחות מסקרן מראים פגמי תפקידי מערכת מקרופאג decidual murine 26,27. בנוסף, org אדםניתן השתמשו תרבויות אסטרטגיות מעורבת-זיהום, כגון בידוד תחרותי מורכב מכמה זני isogenic של L. חיידקים. זיהום תחרותי של תרבויות איברים הוא דרך רגישה לבדוק את הרלוונטיות של גורמים ארסיים בתוך הפונדקאי האנושי. אחת אילוץ של שיטה זו הוא כדאיות רקמות, אשר מוגבל לתרבות לטווח קצר (96 שעות עבור תרבויות villous, 72 שעות עבור תרבויות decidual). זה אידיאלי עבור זיהום עם גדל מהר חיידקים כגון L. חיידקים, אך בתרבויות עוד עשויים להיות נחוצים עבור פתוגנים כי לוקחים יותר זמן להקים ולהפיץ דרך רקמות. כדי להפחית את הנטל העולמי של סיבוכי הריון, מחקר חייב להתמקד בהבנת פתופיזיולוגיה של ממשק האם והעובר האדם. חיידקים, פטריות, ופתוגנים ויראלי החוצות מאם לעובר גורם הרסני סיבוכים של הריון וזיהום עוברי. מבוקרת זיהום vivo של Ani מעבדהיונקים בדרך כלל נחשבים תקן הזהב לטיפול איך פתוגנים ליישב ולמעבר בין איברי 28. בגלל האנטומיה השליה משתנה במידה ניכרת על פני מינים של יונקים, זה הוא בעל חשיבות עליונה לשלב רקמה אנושית לתוך אסטרטגיות מחקר. תרבויות אדם איבר villous ו decidual הן מאוד מערכות מודל רלוונטיות לחקור אינטראקציות בין מאכסן לפתוגן. כדי ללמוד עדיין חיוניים זה לא ידוע ולא מובנים איברים, חוקרים יכולים לנצל את השפע של שליה אנושית מושלכת אחר ודגימות decidual, באמצעות אסטרטגיות תרבות איבר כזה כפי שמתואר כאן.

זיהום ודלקת בממשק האם והעובר מהווים מקור מרכזי לתחלואה ותמותה בנשים וילדים. ההבנה כיצד פתוגנים להדביק רקמות אלה היא קריטית להתפתחות של אסטרטגיות רומן למנוע ולטפל במחלות כגון צירים מוקדמים ומוות עובר. עם זאת, השתנות interspecies גבוהה של הממשק האם והעובר מסבכות חקירה ניסויית. יתר על כן, פתוגנים חיידקים ביותר להראות הספציפיות המארח, ובכך במודלים של בעלי חיים רבים אינם יכולים לשחזר מחלות זיהומיות אנושי לגמרי. אורגניזמים מסוימים (אינפלואנזה המופילוס, typhi סלמונלה, כולרה Vibrio, ועוד רבים אחרים) הם פתוגניים אך ורק בני אדם, בעוד שאחרים, כגון חיידקים ליסטריה, להראות רמה בינונית יותר של מארח סגולי 1. סגולי מארח תועד בהיבטים רבים של בפתוגנזה, כולל קולוניזציה 2, הפצה 3, התחמקות חיסונית 4 </sעד&gt;, ורכישת 5 מזין. לכן, זה הוא בעל חשיבות עליונה לבחירת מערכות מודל מארח אופטימליות. לחן של תאים העובר בדם האם, השליה היא איבר שמתפתח במהירות במהלך ההריון 6. במונחים פשוטים, השליה האנושית בנויה עובריים &quot;villous&quot; מבני עץ דמוי הטבולים בדם אימהי. גז וחילופי מזין מתרחשים על פני שכבות של תא עובריים מיוחדות הנקראות trophoblasts המרפד את השטח של עצי villous. רירית ברירית הרחם האימהי, כינה רירית הרחם אצל הנקבה שאינן בהריון, הופך מבנית והן מבחינה תפקודית לתוך decidua כדי להתאים את יחידת fetoplacental. עצים Villous מעוגנים לתוך הרחם על ידי trophoblasts extravillous (EVT) הנודדים עיגון עמודות התא לתוך decidua. ממשק האם והעובר, ולכן, מורכב decidua ואת השליה. טכניקת תרבות האיבר מתוארת כאןנעשה שימוש כדי לבחון היכן וכיצד פתוגנים אנושיים משמעות קלינית, כולל L. monocytogene s ו Toxoplasma gondii, לחצות את מחסום השליה 2,7. תרבויות איבר vivo לשעבר אלה לשכפל באדריכלות רקמות vivo, הן ללא ספק פיסיולוגי מאוד מערכות מודל רלוונטיות עבור placentation אדם. טכניקות תרבות נוספות כוללות explants איבר שלם, פרוסות איברים, רקמות או תא גזע organoids מוטבע-מטריקס 3D. לקבלת פרטים אודות אפשרויות אלה, עיין בדיקה שנערכה לאחרונה מקיפה 8. יש לציין כי פרוטוקול זה הוא עבור התרבות הנפרדת של decidua ו villi שליה. ללימוד האינטראקציה בין תאי שליה ותאי decidual, טכניקת תרבות שיתוף עשויה להיות מועדפת. אנו מפנים את הקורא המעוניין לטכניקת שיתוף התרבות villous-decidual שתוארה לעיל, בשימוש על ידי חוקרים לומדים שיפוץ כלי דם decidual בתיווך trophoblast 9-11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Sterilization pouches</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">01-812-54</td>
			<td style="width:167px;">For autoclaving individual dissecting tools</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Fine mesh strainer</td>
			<td style="width:71px;">Cuisinart (Amazon.com)</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>Wrap completely in aluminum foil and autoclave prior to tissue collection.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Carboy with spigot</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-007-647</td>
			<td>For large volume preparation of Wash buffer.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Ice packs</td>
			<td style="width:71px;">Nortech labs</td>
			<td style="width:119px;">GB8818</td>
			<td>These do not have to be purchased, rather they can be recycled/reused from any routine laboratory shipment that includes them in the packaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">V1001</td>
			<td>70% solution made by adding dH20 to 190 or 200 proof research grade alcohol.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">10% Bleach</td>
			<td style="width:71px;">Waxie Sanitary Supply</td>
			<td>CLO 30966</td>
			<td>10% solution made by adding dH20.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">Light Box</td>
			<td style="width:71px;">Litebox Lumina (dickblick.com)</td>
			<td style="width:119px;">55305-2009&#160;</td>
			<td>Note replacement bulbs also purchased on Blick (55305.0100)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Micro dissecting forceps&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting&#160;</td>
			<td style="width:119px;">52102-43</td>
			<td>4in, 1x2 0.5mm, Slight Curve</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Micro dissecting forceps</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting</td>
			<td style="width:119px;">52102-06</td>
			<td>4in, Straight Fine, Sharp</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Micro dissecting vannas spring scissors</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting&#160;</td>
			<td style="width:119px;">52130-01P</td>
			<td>McPherson-Vannas Spring Scissors, 8.5cm, 0.33 Tip, Slight Curve</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Dissecting microscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">MZ16 or M60</td>
			<td>We have had success with the listed models.&#160; External gooseneck flexible light sources are helpful but not necessary.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">50 mL conical tubes</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich (Corning)</td>
			<td style="width:119px;">CLS4558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:71px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">10010023</td>
			<td>We purchase from our university Tissue Culture Core facility, alternate options such as this are available.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">10X Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:71px;">Teknova</td>
			<td style="width:119px;">P0195</td>
			<td>For preparation of Wash buffer we use 10X PBS</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">DMEM/F-12 nutrient mixture (Ham&#39;s) with GlutaMAX</td>
			<td style="width:71px;">Gibco (Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">10565-018</td>
			<td>We purchase this specific media formulation, containing 2.438 g/L sodium bicarbonate, 55 mg/L sodium pyruvate, and 4.5 g/L glucose</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">Gentamicin</td>
			<td style="width:71px;">Thermofisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15710072</td>
			<td>1000X stock. Recommend to prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:71px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>100X stock.&#160; Recommend to prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:71px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td>500X stock.&#160; Recommend to prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">progesterone</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P8783</td>
			<td>A 1 mM stock solution is made by reconstituting 15.7 mg progesterone powder in 15.7 mL Ethanol and adding 34.3 mL PBS. Solution is sterile filtered, aliquoted, and stored at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">17&#946;-estradiol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E2758</td>
			<td>A 10 &#956;M stock solution is made by reconstituting 13.5 mg estradiol powder in 10 mL ethanol and adding 40 mL PBS. Solution is sterile filtered, aliquoted, and stored at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">Bottle-top vaccum filter (0.22 &#956;m)</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich (Corning)</td>
			<td style="width:119px;">CLS430769</td>
			<td>For sterile filtration of Collection media after preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">6-well tissue culture plate</td>
			<td style="width:71px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353224</td>
			<td>Polystyrene, Tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">6-well transwells&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">PICM03050</td>
			<td>Insert - 30mm diameter, 0.4&#956;m pore size hydrophilic PTFE membrane</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Extracellular Matrix (for example, Matrigel Matrix)</td>
			<td style="width:71px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">354234</td>
			<td>We have utilized Matrigel Matrix in our studies. It is a solid at room temperature and at -20 &#176;C. Avoid repeat freeze/thawing. Thaw bottle to viscous solution at 4 &#176;C, and prepare ~300&#956;L aliquotsin the cold room with chilled pipette tips. Store aliquots at -20 &#176;C.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Paraformaldehyde, 16% w/v aqueous solution&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:119px;">30525-89-4</td>
			<td>For tissue fixation, a fresh preparation of 4% paraformaldehyde is made by diluting this stock in PBS.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:216px;">Tissue culture incubator, maintained at 37 &#176;C, 5% CO2, 3% oxygen (optional for villous organ cultures)</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For some experiments, hypoxia may be preferred.&#160; This can be established multiple ways, including addition of exogenous nitrogen via gas cylinder, Tygon tubing, and a regulator.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Bench top centrifuge</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human placental and decidual organ cultures to study infections at the maternal-fetal interface

השליה מראה מידה רבה של השתנות אנטומיים interspecies. כדי להבין בצורה הטובה ביותר בביולוגיה והפתופיזיולוגיה של השליה האנושית, זה הכרחי כדי לעצב ניסויים באמצעות תאים ורקמות אנושיים. יתרון של תרבות איברים הוא תחזוקה של תלת ממדי (3D) מבנה ארגוני ואת מטריקס. מטרת השיטה המתוארת כאן היא הקמה מוצלחת של תרבויות איברי רקמות vivo לשעבר אדם הריונית ותחזוקת התרבות הבריאה שלהם עבור 72-96 שעות. הפרוטוקול מפרט את העיבוד המיידי של מחקר-הסכמתי, שלית דגימות decidual הטרי מסוויטת ההפעלה. אלה הם דוגמאות בשפע כי הייתה להיות מושלכת אחרת. הוראות מפורטות על אוסף סטרילי של דגימות אלה, כוללים פרטים מורפולוגיים על איך לבחור רקמות מתאימות להקים תרבויות איבר 3D, מסופקות. רקמות villous ו decidual השליה הם microdissected לתוך 2-3 מ&quot;מ 3 חתיכותוהניח בנפרד על מסנני transwell מרופדת מטריקס ותרבותי במשך כמה ימים. Villous ותרבויות איבר decidual מתאימים גם לחקר האינטראקציה מארח הפתוגן האנושי. לעומת אורגניזמים מודל אחרים, תרבויות האנושיות אלה הן יתרון במיוחד לבחון מנגנון של זיהום עבור פתוגנים הממחישים דפוסים משתנים ספציפי מארח. כדוגמא, אנחנו מדגימים זיהום של תרבויות איבר שלית decidual עם משמעות הקלינית, החיידקים ליסטריה פתוגן חיידקי תאיים פקולטטיבי.

איור 1 (שונה מן זלדוביץ &amp; Bakardjiev 22) דיאגרמה של השליה רלוונטי ואנטומיה הרחם. איור 2 מראה ברוטו נציג ותמונות היסטולוגית של villi השליה, בעוד איור 3 מדגים רקמות decidual. פרוטוקול זה ראשון מתאר את האוסף של השליה טריה ורקמות decidual בבית החולים או במרפאת. הדגימה שנאספה היא תערובת של שליה עוברת (villi) ורכיבי רחם אימהיים (decidua). לאחר השטיפה עם מאגר המכיל אנטיביוטיקה רחבת טווח ו antifungals, הדגימה כולו נבדק לפי העין באמצעות תיבת אור. Villi ו decidua ממוקמים צינורות נפרדים והובלו על קרח למעבדה. במעבדה, מיקרוסקופ לנתח משמש להעריך את המאפיינים המורפולוגיים קנס של רקמה בריאה. תמונות נציגvillous (איור 2 א) ורקמות decidual (איור 3 א) אשר נרכשו באמצעות מיקרוסקופ לנתח עם שני מקורות אור מתכווננת חיצוניים מוצגים לעיון. תרבויות איבר Villous נוצרות מתוך דגימות שליש ראשונות. תרבויות מורכבות עצי villous מסוף קטנים עם 2-6 סניפים. חשוב לנתח סניפים villous, המסתיימים עמודות extravillous trophoblast והם היטב vascularized. תכונות אלה נתפסות &quot;רכים&quot; או &quot;מטושטשים&quot; קצות סניף (ראשי חץ), ואת הגוון ליניארי ורוד-אל-אדום הקלוש כי קורסים דרך הענף העץ בצד שמאל האיור 2 א. לעומת זאת, כלי הדם ואת trophoblasts extravillous אינם דמיינו בקלות על העץ בצד ימין של התמונה, אשר יהיה הכי מוצלח לתרבות. במהלך היום של התרבות הראשון, trophoblasts extravillous נודד לתוך ECM, tהוס עיגון העצים villous לתוך המטריצה ​​על transwell. תרבויות איבר Decidual נוצרות מתוך דגימות שליש שניות ראשונות ותחילה. רירית הרחם כולו הופך decidua מאוד זמן קצר לאחר ההשתלה. באופן ספציפי יותר, decidua basalis מגדיר את רירית הרחם ישירות שבבסיס אתר שליה / השתלה, capsularis decidua מגדיר ריריים המכסה את העובר, ולאחר parietalis decidua מתייחסת שארית רירית הרחם. ויזואליזציה תחת מיקרוסקופ לנתח מראה כי הדגימה הריונית מוקדם מורכב בעיקרו parietalis decidua ואת decidua capsularis (משמאל ושברי רקמות ימינה, בהתאמה, ב איור 3 א). Capsularis decidua ניתן להפריד בקלות על ידי הטבע דק, קרומי שלה. עבור תרבויות איבר, parietalis decidua חיתוך עד 3 מ&quot;מ 3 שברי במספריים לנתיחה מיקרו adheלהשכרה הדם הקרוש מוסר עם מלקחיים. לאחר דגירת הלילה, רקמות נגועות ל חיידקים. פרוטוקול הזיהום כמתואר לעיל, מתבסס על assay גינת גנטמיצין בשימוש ללמוד צמיחה תאית והתפשטות של חיידקים תאיים פקולטטיבי 16. תרבויות איברים במדיום ללא אנטיביוטיקה מודגרת עם L. חיידקים במשך 5 שעות. תרבויות נשטפות עם PBS סטרילי כדי להסיר חיידקים מן המדיום. לאחר מכן, גנטמיצין מתווסף לחסל אורגניזמים תאיים. ספרות לפני מהמעבדה שלנו בשימוש immunofluorescence מיקרוסקופיה confocal כדי לקבוע לוקליזציה רקמות חיידקים ב timepoints השונה לאחר ההדבקה 2. תרבויות איברים הם שטופים ב PBS, קבוע paraformaldehyde 4%, ואו קפוא-מוטבע בינוני אוקטובר ומאוחסנים ב -80 ° C, או פרפין מוטבע לאחסן בטמפרטורת החדר. סעיפי רקמות יכולים להיות staשאינו עומד עבור immunofluorescence (IF) או immunohistochemical (IHC) ניתוח של חיידקים ולוקליזציה התא האיקריוטים. תרשים 2B הוא נציג אם התמונה של קטע קפוא מוכן מתרבות איבר 8.3 בשבוע villous ב 72 שעות לאחר ההדבקה. הערה הנטל חיידקי כבד (פלואורסצנטי ירוק) ב ד ^ בקצות הענפים villous, וחוסר היחסי של חיידקים בתוך שכבת עץ-רירית syncytiotrophoblast (אדום פלואורסצנטי). בעבודה קודמת, השתמשנו דומה אם מכתים למקם L. חיידקים בתרבויות איברי villous ב timepoints השונה לאחר הדבקה. מעל 72 שעות, זיהום התפשטות מן EVT לתוך cytotrophoblasts תת-סינסיציאלי ו stroma villous הבסיסית. יש לציין, כי שכבת synyctiotrophoblast הייתה חסינה לזיהום 2. תמונות מיקרוסקופיות אור הנציג של H &amp; חלקי רקמות decidual פרפין מוטבע E מוכתם שהוכנו 14.3 בשבוע specime<html> ns מוצגים איורים 3B ו -3 ג. ECM מצופה זה קרום transwell ננעצה להראות התרבות איבר באתרם (איור 3B). התמונה מראה בלוטות מרופדות אפיתל (כוכבי) ואת כלי דם מרופד האנדותל (יהלום) ממוצבת הטרוגני בתוך תא תא סטרומה decidual. בנוסף, ישנם תאים אימהיים החיסונית הפזורים stroma decidual בצפיפות משתנה. IHC ואם יכול להיות מנוצל מכתים לקבוע לוקליזציה microanatomical בקטריאלי, ביחס תאים חיסוניים תושב הספציפי. כדוגמה, מקרופאגים CD14 + (פלואורסצנטי ירוק) למקם את הציפוי הפנימי של כלי הדם ואת מפוזרים בתוך stroma (איור 3D), בעוד אגרגטים גדולים של L. חיידקי (אדום פלואורסצנטי) הם נצפו בעיקר ב stroma decidual ב 48 שעות לאחר ההדבקה (איור 3D). <table border="1" fo:keep-together.within-page="1"</html style=";text-align:right;direction:rtl">FO: keep-עם-next.within-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <tbody><tr><td> חיץ לשטוף </td><td> בינוני אוסף </td><td> בינוני Villous </td><td> בינוני Decidual </td></tr><tr><td> PBS </td><td> DMEM / F-12 עם Glutamax </td><td> DMEM / F-12 עם Glutamax </td><td> DMEM / F-12 עם Glutamax </td></tr><tr><td> פניצילין 100 IU / ml </td><td> עוברי שור סרום 2.5% </td><td> עוברי שור סרום 20% </td><td> עוברי שור סרום 2.5% </td></tr><tr><td> סטרפטומיצין 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> פניצילין 100 IU / ml </td><td> פניצילין 100 IU / ml </td><td> 17β-אסטרדיול 300 pg / ml </td></tr><tr><td> גנטמיצין 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> סטרפטומיצין 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> סטרפטומיצין 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> הפרוגסטרון 20 ng / ml </td></tr><tr><td> Amphotericin B 1.25 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td> גנטמיצין 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &lt;<html> / Td&gt; <td> Amphotericin B 1.25 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> טבלה 1:. מדיה מתכונים רכיבים ריכוזים להכנת חיץ לשטוף, בינוני אוסף, בינוני Villous, ובינוניים Decidual. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54237/54237fig1.jpg" /> באיור 1. שלית מבנה. (א) מבנה של יחידת feto-שליה ברחם אימהי, (ב) גדלה של תיבה ב (א) מדגישה כי trophoblast העוברית (T) מרופדת villi השליה שטוף דם אימהי מעוגן לתוך decidua ידי trophoblasts extravillous (EVT). מוכל בתוך villi הוא כלי עוברי (ע&quot;ע), פיברובלסטים, מקרופאגים עוברי. שונה מן זלדוביץ &amp; Bakardjiev 22.<html> &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54237/54237fig2.jpg" /> איור 2: תרבויות איבר Villous - ברוטו נציג ותמונות מיקרוסקופיות (א) שני עצי villous מסוף עם גיל הריון של 6 שבועות, כפי שמוצג תחת מיקרוסקופ לנתח.. הערת הקצוות &quot;הרכים&quot; (ראשי החץ) ו כלי הדם עוברי בולט זורמים דרך ענף העץ מהשמאל שהופך את היצירה הזאת מתאימה לתרבות איברים. (ב) מיקרוסקופיה immunofluorescence של התרבות איבר (גיל ההריון 8.3 שבועות) 72 שעות שלאחר זיהום חיידקי ליסטריה עם, הדגשת הנטל חיידקי כבד [ירוק] ב trophoblasts extravillous. DAPI מוצג בכחול, ואת βHCG + syncytiotrophoblasts באדום. ברי סולם = 1 מ&quot;מ (א), 250 מיקרומטר (ב).7 / 54237fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54237/54237fig3.jpg" /> איור 3:. תרבות איבר Decidual - ברוטו נציג ותמונות מיקרוסקופיים (א) parietalis decidua [left] ו capsularis decidua [right], בעמ &#39;הריונית גיל 6 שבועות, כפי שמוצג תחת מיקרוסקופ לנתח. (ב) H &amp; E מוכתם סעיף תרבות איבר parietalis decidua גיל הריון 14.3 בשבוע תערוכות בלוטות בכלי דם המאורגנים הטרוגני ברחבי stroma decidual. ה (יהלום, ◆) ואת (כוכבית, *) להדגיש כלי ובלוטת נציג, בהתאמה. קו בראון בקצה התחתון transwell קרום, על קצה. (ג) H &amp; E מוכתם סעיף של decidua גיל 14.3 בשבוע הריון parietalis תרבות איבר ב ד בהגדלה גבוהה יותרemonstrates arterioles ספירלה שריר דופן מוטבעת stroma decidual. תאי החיסון האמהית קטנים עם גרעינים כהים עגולים, ומופצים באופן בלתי סדיר לאורך stroma. (D) מיקרוסקופיה immunofluorescence של תרבות איבר 48 שעות שלאחר זיהום עם L. חיידקים, הדגשת אזורים גדולים של חיידקים [אדום] ב stroma decidual, ו CD14 + מקרופאגים האימהית [ירוקה] ביטון שטח וסקולרית ומפותל ויתפזר stroma. ברי סולם = 1 מ&quot;מ (א), 250 מיקרומטר (ב), 50 מיקרומטר (C ו- D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54237/54237fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface at JoVE.com

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

שיטה פשוטה להקים השליה אדם מן המעלה הראשונה (villous) ותרבויות איבר decidual מתואר. תרבויות איבר Villous ו decidual הם כלי שלא יסולא בפז ללימוד בפתוגנזה בממשק האם והעובר האדם. זיהום עם חיידקים ליסטריה חיידק תאי פקולטטיבי מודגם.

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

מודל ניסיוני לחקר המלריה שחפת-coinfection על הילוכים טבעיים של חפת Mycobacterium ו Berghei Plasmodium</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

אנושי עכבר מודל ללמוד זיהומים חיידקיים מיקוד microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Isolation of Human Monocytes by Double Gradient Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags

בידוד של אדם מונוציטים ידי זוגי Gradient צנטריפוגה והבידול שלהם להמקרופאגים בתיקי תרבית תאים מצופים טפלון

Human macrophages are involved in a plethora of pathologic processes ranging from infectious diseases to cancer. Thus they pose a valuable tool to ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

בידוד של לויקוציטים מממשק האדם-האימהי העוברי

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

שיטות לחקר ליפידים שינויים נויטרופילים ואת הגיבוש העוקב של נויטרופילים תאיים מלכוד

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

מתודולוגיה לחקר ההעברה האופקית ג&#39;ין<em&gt; Staphylococcus aureus</em

One important feature of the major opportunistic human pathogen Staphylococcus aureus is its extraordinary ability to rapidly acquire resistance to ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

מודל ה- WinCF - מיקרוסקוס הזול והבלתי נסבל של ברונכייל מחובר ריר לחקר המיקרוביולוגיה של זיהומי ריאות

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression וטיהור האדם<em&gt; Cis</em&gt; פרנליטרונפרפרז ב<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...