Name: a simple flow cytometric method to measure glucose uptake and glucose transporter expression for monocyte subpopulations in whole blood
Uploaded: 2016-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood at JoVE.com

מחקר זה מומן על ידי המרכז האוסטרלי ל- HIV וצהבת מסוג וירולוגיה מחקר (ACH 2) ומענק התפתחותיים 2010 (CNIHR) מאוניברסיטת מרכז וושינגטון לאיידס מחקר (וכפר), תוכנית הממומנות על ידו תחת AI027757 מספר הפרסים אשר נתמך על ידי NIH מוסדות ומרכזים הבאים (NIAID, NCI, NIMH, NIDA, NICHD, NHLBI, NIA). CSP הוא הנמען של מענק 2 CNIHR ו ACH. SMC הוא הנמען של מועצת המחקר הלאומית לבריאות ורפואה של אוסטרליה (NHMRC) ומנהלת מחקר המלגה. המחברים בתודה להכיר בתרומת עבודה זו של תכנית תמיכת התשתית ויקטוריאני התפעולית המתקבלת במוסד ברנט. אנו מכירים את עזרתו של גזה Paukovic ואווה אורלובסקי-אוליבר ממתקן Core cytometry זרימה AMREP עבור זרימת cytometry הדרכה וייעוץ טכני. אנו מודים אנגוס מורגן לאימון התקשורת וארגון לצלם וידאו. תודתנולג&#39;סי מאסון Jehad עבד-אלעזיז ק Alzahrani לסיוע במעבדה במהלך לצלם וידאו. אנו מודים המאמצים של ד&quot;ר דוד Simar בבית הספר למדעי הרפואה, UNSW, אוסטרליה שהציעו ייעוץ מתודולוגי קריטי. CSP רוצה להודות <a href="http://www.nice-consultants.com/">www.nice-consultants.com</a> להתייעצויות גרפיות. מחברי תרומה: CSP הגה את הפרויקט, שנועד וערך ניסויים, ניתוח ופרשנות נתונים, וכתב את כתב היד. JJA לפרש נתונים וכתב את כתב היד. TRB כתב את כתב היד. JMM לפרש נתונים, הציע הצעות רוחניות קריטיות, כותב ביקורת על כתב היד. SMC לפרש נתונים, הציע הצעות אינטלקטואליות ביקורתיות ביקורת על כתב היד.

הערה: החיים עם HIV ואיידס-נגוע בנושאים גויסו מיחידת למחלות זיהומיות אלפרד החולים במלבורן, VIC, אוסטרליה, ומן הקהילה המקומית, בהתאמה. הסכמה מדעת התקבלה כל המשתתפים, ואת המחקר אושר על ידי ועדת המחקר ואתיקת אלפרד החולה. 1. GLUT1 איתור שטח פני...

<ol>
	<li>Shi, C., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+recruitment+during+infection+and+inflammation.">Monocyte recruitment during infection and inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).</li><li>Woollard, K. J., Geissmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+in+atherosclerosis:+subsets+and+functions.">Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions.</a> Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).</li><li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+and+macrophages+in+cancer:+development+and+functions.">Monocytes and macrophages in cancer: development and functions.</a> Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).</li><li>Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+as+regulators+of+inflammation+and+HIV-related+comorbidities+during+cART.">Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART.</a> J Immunol Res. 2014, 569819 (2014).</li><li>Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+Metabolism+in+T+Cells+and+Monocytes:+New+Perspectives+in+HIV+Pathogenesis.">Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis.</a> EBioMedicine. , (2016).</li><li>Cheng, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR-+and+HIF-1alpha-mediated+aerobic+glycolysis+as+metabolic+basis+for+trained+immunity.">mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity.</a> Science. 345, 1250684 (2014).</li><li>Maratou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+transporter+expression+on+the+plasma+membrane+of+resting+and+activated+white+blood+cells.">Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells.</a> Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).</li><li>Freemerman, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+reprogramming+of+macrophages:+glucose+transporter+1+(GLUT1)-mediated+glucose+metabolism+drives+a+proinflammatory+phenotype.">Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype.</a> J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).</li><li>Gonnella, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi+sarcoma+associated+herpesvirus+(KSHV)+induces+AKT+hyperphosphorylation,+bortezomib-resistance+and+GLUT-1+plasma+membrane+exposure+in+THP-1+monocytic+cell+line.">Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line.</a> J Exp Clin Cancer Res. 32, 79 (2013).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+transporter+1-expressing+proinflammatory+monocytes+are+elevated+in+combination+antiretroviral+therapy-treated+and+untreated+HIV++subjects.">Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects.</a> J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).</li><li>Wong, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+reveals+the+defining+features+of+the+classical,+intermediate,+and+nonclassical+human+monocyte+subsets.">Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets.</a> Blood. 118, e16-e31 (2011).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood.">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116, e74-e80 (2010).</li><li>Belge, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proinflammatory+CD14+CD16+DR+++monocytes+are+a+major+source+of+TNF.">The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF.</a> J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).</li><li>Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+cytokine+expression+in+human+blood+monocyte+subpopulations:+a+polymerase+chain+reaction+analysis.">Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis.</a> Blood. 87, 373-377 (1996).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD14++CD16++blood+monocytes:+their+role+in+infection+and+inflammation.">The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation.</a> J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , 3-36 (2014).</li><li>Dimitriadis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+glucose+transport+and+its+regulation+by+insulin+in+human+monocytes+using+flow+cytometry.">Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry.</a> Cytometry A. 64, 27-33 (2005).</li><li>Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitative+glucose+transporter+gene+expression+in+human+lymphocytes,+monocytes,+and+macrophages:+a+role+for+GLUT+isoforms+1,+3,+and+5+in+the+immune+response+and+foam+cell+formation.">Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation.</a> Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).</li><li>Stibenz, D., Buhrer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+L-selectin+surface+expression+by+various+leukocyte+isolation+procedures.">Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures.</a> Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).</li><li>Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+regulation+of+glucose+transport+in+a+monocyte-macrophage+cell+line:+Glut-3+affinity+for+glucose+is+enhanced+during+the+respiratory+burst.">Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst.</a> Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).</li><li>Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+insulin-mediated+glucose+uptake+in+monocytes+of+short+children+with+intrauterine+growth+retardation).">Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation).</a> Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).</li><li>Yoshioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+derivative+of+glucose+applicable+to+the+assessment+of+glucose+uptake+activity+of+Escherichia+coli.">A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli.</a> Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).</li><li>Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+transport+of+a+fluorescent+glucose+analogue+by+human+erythrocytes.">Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes.</a> Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glucose+metabolic+activity+is+associated+with+CD4++T-cell+activation+and+depletion+during+chronic+HIV+infection.">Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection.</a> AIDS. 28, 297-309 (2014).</li><li>Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+regulates+T+cell+activation,+differentiation,+and+functions.">Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions.</a> Frontiers in immunology. 6, (2015).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+glucose+metabolism+in+CD4+and+CD8+T+cells.">Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells.</a> International reviews of immunology. , 1-12 (2015).</li><li>Palmer, C. S., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+does+monocyte+metabolism+impact+inflammation+and+aging+during+chronic+HIV+infection?.">How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection?.</a> AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).</li><li>McFadden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+stress+is+a+barrier+to+Epstein-Barr+virus-mediated+B-cell+immortalization.">Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).</li><li>Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentations+of+glucose+uptake+and+glucose+transporter-1+in+macrophages+following+thermal+injury+and+sepsis+in+mice.">Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice.</a> Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).</li><li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+Oxidation+Is+Critical+for+CD4++T+Cell+Activation+in+a+Mouse+Model+of+Systemic+Lupus+Erythematosus.">Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus.</a> Journal of immunology. , 80-90 (2016).</li><li>Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+metabolism+in+autoimmune+disease.">T-cell metabolism in autoimmune disease.</a> Arthritis research &amp; therapy. 17, 29 (2015).</li><li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+CD4++T+cell+metabolism+reverses+lupus.">Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus.</a> Science translational medicine. 7, 274ra218 (2015).</li><li>Barbera Betancourt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Phosphoinositide+3-Kinase+p110delta+Does+Not+Affect+T+Cell+Driven+Development+of+Type+1+Diabetes+Despite+Significant+Effects+on+Cytokine+Production.">Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production.</a> PloS one. 11, e0146516 (2016).</li><li>Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitative+glucose+transporters:+Implications+for+cancer+detection,+prognosis+and+treatment.">Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment.</a> Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).</li><li>Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+pathogenicity+and+virion+production+are+dependent+on+the+metabolic+phenotype+of+activated+CD4++T+cells.">HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells.</a> Retrovirology. 11, 98 (2014).</li><li>Taylor, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+D1+Couples+CD4++T+Cell+Activation+to+c-Myc-Dependent+Deoxyribonucleotide+Pool+Expansion+and+HIV-1+Replication.">Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication.</a> PLoS Pathog. 11, e1004864 (2015).</li><li>Loisel-Meyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glut1-mediated+glucose+transport+regulates+HIV+infection.">Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+Role+and+Characterization+of+Immunometabolism:+Relevance+to+HIV+Pathogenesis,+Serious+Non-AIDS+Events,+and+a+Cure.">Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure.</a> J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).</li></ol>

הפרוטוקול המתואר כאן מפרט שיטה פשוטה לבחון ביטוי נשא גלוקוז ספיג אנלוגי גלוקוז ניאון על ידי תת-אוכלוסיות מונוציטים ו מונוציטים בדם כולו. לפי הערכה ספיגה 2-NBDG בדם כולו, טכניקה זו מאפשרת בתנאים דומים לאלה in vivo. מחקר קודם בחן 6-NBDG לספיגת מונוציטים מופרדים דם כולו על י...

המונוציטים מהווים מרכיב עיקרי של המערכת האנושית המולד החיסונית כי מגויס במהירות לאתרים של זיהום ודלקת 1. הפעלת מונוציטים הוא קריטי עבור הגבלת נזק אקוטי ידי פתוגנים מרכזי גם בפתוגנזה של מחלות כרוניות שונות, כולל טרשת עורקים 2, סרטן 3, ו- HIV 4,5. המטבוליזם של מנוחה מונוציטים מופעל שונה באופן דרמטי, עם מונוציטים נח ניצול מטבוליזם חמצוני מונוציטים מופעל ניצול מטבוליזם glycolytic (כלומר, התסיסה של גלוקוז לקטט) 6. הפעלת מונוציטים גורם ביטוי של מובילי גלוקוז המאפשר ספיגת הגלוקוז מוגבר מטבוליזם glycolytic 7. טרנספורטר 1 גלוקוז מונוציטים (GLUT1) הוא טרנספורטר אחד כזה שהוגבר במהלך ההפעלה וביטויו הוכח להוביל לייצור של ציטוקינים פרו-דלקתיים נitro ו ברקמת השומן של עכברים שמנים 8. זיהום של שורת תאים monocytic ידי הרפס הקשור סרקומה קפוסי מוביל הגברת הביטוי התאי של GLUT1 9, והראינו לאחרונה כי במהלך זיהום כרוני HIV גידול באחוז מונוציטים להביע GLUT1 נוכחים במהלך ההדבקה שטופלו בטיפול תרופתי מטופל בשילוב 10. יחדיו, מחקרים אלה מראים כי ספיגת הגלוקוז וחילוף החומרים glycolytic ידי מונוציטים הם היבטים חשובים של מחלות דלקתיות רבות. לפיכך, שיטה פשוטה למדוד ביטוי GLUT1 מונוציטים ספיג הגלוקוז במהלך הומאוסטזיס ומחלות דלקתיות עשויות להועיל במגוון רחב של חוקרים. מונוציטים האדם הם הטרוגניים, להיות מורכב משלושה תת ברורים שיכולים להיבדק על ידי ביטוי ההפרש של CD14 סמנים פני התא CD16 11,12. מונוציטים קלסי להביע רמה גבוהה של CD14 אך אינו מבטא CD16 (CD14 ++ CD16 -), מונוציטים ביניים להביע רמה גבוהה של CD14 ו ברמה בסיסית של CD16 (CD14 ++ CD16 +), ומונוציטים הלא קלאסית להביע רמה נמוכה של CD14 ורמה גבוהה של CD16 (CD14 + CD16 ++). מונוציטים מבטאי CD16 מכונים CD16 + מונוציטים, אשר לעומת CD16 - יש מונוציטים ביטוי גבוה של ציטוקינים דלקתיים ויכולת אנטיגנים נוכחי בצורה יעילה יותר 13,14. כ -10% מונוציטים להביע CD16 במהלך הומאוסטזיס עם אחוזים גבוהים שנצפו במהלך דלקת 15. תת-אוכלוסיות מונוציטים המשויכות מצבי מחלה מסוימים יכולות להיות סמנים ביולוגיים שימושיים להתקדמות מחלה ומחלות 16. מטרתנו הייתה לזהות שיטה שיכולה למדוד ביטוי נשא גלוקוז ספיגת הגלוקוז על ידי מונוציטים האדם subpopulations מונוציטים בתנאים קרוב PHYתנאי siological ככל האפשר. מחקרים קודמים נמדד ביטוי נשא גלוקוז מונוציטים ספיגת הגלוקוז 17,18, אם כי שיטות אלה בחן מונוציטים מבודד שיכול שינו ביטוי חלבון לעומת מצבים פיזיולוגיים 19, ולא במחקר הקודם בחן subpopulations מונוציטים האדם. באמצעות זרימה רבת פרמטריים cytometry, אנו מתארים שיטה לבחון ביטוי נשא גלוקוז ספיג של אנלוגי גלוקוז ניאון 2-NBDG ידי מונוציטים הכוללים תת-אוכלוסיות מונוציטים (מבוסס על CD14 וביטוי CD16) בתוך דם unmanipulated כולו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="570">
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:140px;">VACUETT Tube 9 ml ACD-B anticoagulant tubes</td>
			<td style="width:147px;">Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td style="width:139px;">455094</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">5 ml sterile polypropylene tubes</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">352063</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">Albumin from Bovine Serum (BSA)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">A7906</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">16% formaldehyde solution</td>
			<td style="width:147px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:139px;">15710</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:140px;">BD FACS lysing solution (10X)</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">349202</td>
			<td style="width:147px;">Dilute BD FACS lysing solution 1/10 with deionized water for working concentration (store for up to 1 week at 4&#176;C)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-CD3-PE</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">555340</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti CD14-APC</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">555399</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-CD16-PECy7</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">557744</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-Glut1-FITC</td>
			<td style="width:147px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:139px;">FAB1418F</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">IgG2b-FITC</td>
			<td style="width:147px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:139px;">IC0041F</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="241">
			<td height="241" style="height:241px;width:140px;">2-NBDG</td>
			<td style="width:147px;">Life technologies</td>
			<td style="width:139px;">N13195</td>
			<td style="width:147px;">Suspend 5 mg of 2-NBDG into 1 ml of deionized water to make a 14.60 mM stock solution (keep for up to 6 months at 4&#176;C). To make the working 2-NBDG concentration, dilute stock 1/100 with 1X DPBS. Cover with foil. (store for up to 1 week at 4&#176;C)</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:78px;width:140px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline (1X)</td>
			<td style="width:147px;">Life technologies</td>
			<td style="width:139px;">14190-144</td>
			<td style="width:147px;">To make wash solution, add 0.5 g BSA per 100 ml DPBS (store for up to 2 weeks at 4&#176;C)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple flow cytometric method to measure glucose uptake and glucose transporter expression for monocyte subpopulations in whole blood

מונוציטים הם תאי מולדת חיסון מסוגלים להיות מופעלים על ידי פתוגנים דלקת הקשורים למחלות דלקתיות כרוניות מסוימות. הפעלת מונוציטים גורמת פונקציות מפעילות ומעבר במקביל מ חמצוני מטבוליזם glycolytic המלווה ביטוי נשא גלוקוז מוגברת. מטבוליזם glycolytic מוגברת זו נצפתה גם עבור חסינות מאומן של מונוציטים, סוג של זיכרון אימונולוגי מולד. למרות פרוטוקולים במבחנה בבדיקת ביטוי גלוקוז טרנספורטר ספיגת הגלוקוז על ידי מונוציטים תוארו, אף אחד מהם לא נבדקו על ידי זרימת רב פרמטריים cytometry בדם כולו. אנו מתארים פרוטוקול התזרים cytometric רב-פרמטרים למדידת הספיגה אנלוגי גלוקוז ניאון 2-NBDG בדם כולו על ידי מונוציטים הכולל לבין (CD16 CD14 ++ -) הקלסי, ביניים (CD14 ++ CD16 +) ו הלא קלסי ( CD14 + CD16 ++) מונוציטיםתת-אוכלוסיות. שיטה זו יכולה לשמש כדי לבחון ביטוי נשא גלוקוז ספיגת הגלוקוז עבור מונוציטים הכולל תת-אוכלוסיות מונוציטים במהלך הומאוסטזיס ומחלות דלקתיות, וניתן לשנות בקלות לבחון ספיגת הגלוקוז עבור לויקוציטים אחרים תת-אוכלוסיות לויקוציטים בתוך הדם.

פיצוי חייב להתבצע עבור fluorochromes פרט למנוע זליגת קרינה. מונוציטים מועשרים לראשונה על ידי gating מבוסס על קדימה פיזור בצד. המגרשים שהוצגו הם נציגים של לפחות שישה ניסויים בלתי תלויים שנערכו על דם שלם שישה משתתפים או יותר כפי שדווח בעבר 10 איור 1A</str...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood at JoVE.com

A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

Monocytes are integral components of the human innate immune system that rely on glycolytic metabolism when activated. We describe a flow cytometry protocol to measure glucose transporter expression and glucose uptake by total monocytes and monocyte subpopulations in fresh whole blood.

Cytometric זרימה פשוט שיטה למדוד ספיגת הגלוקוז ואת ביטוי נשא גלוקוז עבור מונוציטים subpopulations ב דם מלא

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Immunology and Infection

Cellular Processes

Metabolism

SCIENTISTS IN ACTION

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb (BCG lux/M.Tb lux)

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux

Assay פונקציונלית הדם כולו כדי למדוד את הכדאיות של mycobacteria, באמצעות הכתב-Gene Tagged BCG או מ Tb (BCG לוקס / מ Tb לוקס)

Functional assays have long played a key role in measuring of immunogenicity of a given vaccine. This is conventionally expressed as serum bactericidal ...

A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry

פשוט ויעילה שיטה לגילוי הפעלת פקטור גרעינית בנויטרופילים אדם על ידי זרימת cytometry

Neutrophils  are the most abundant leukocytes in peripheral blood. These cells are the first  to appear at sites of inflammation and infection, thus ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

בידוד וניתוח תזרים cytometric של תאי הדם ההיקפיים mononuclear הסתננות-Glioma

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

מדידת פעילות פרץ גרנולוציט ו מונוציטים Phagocytosis חמצוני בדם אנושי

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

דור של תאי דנדריטים אדם נגזר מונוציטים מן הדם מלא

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

שימוש Assay מונוציטים חד שכבתי להערכת Fcγ קולטן בתיווך Phagocytosis

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

תא דם אדום פשוט שיטת תמוגה להקמת שורות תאי B Lymphoblastoid

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

אפיון של קבוצות משנה מונוציט האנושית על ידי דם לזרום Cytometry ניתוח

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...

Simultaneous Study of the Recruitment of Monocyte Subpopulations Under Flow In Vitro

מחקר בו זמנית של הגיוס של מונוציט Subpopulations תחת זרימה במבחנה

The recruitment of monocytes from the blood to targeted peripheral tissues is critical to the inflammatory process during tissue injury, tumor development ...