Name: a simple flow cytometric method to measure glucose uptake and glucose transporter expression for monocyte subpopulations in whole blood
Uploaded: 2016-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood at JoVE.com

이 연구는 HIV와 간염 바이러스학 연구 AIDS 연구를위한 워싱턴 센터의 대학 (CFAR), 지원되는 보너스 번호 AI027757 아래 NIH 자금 지원 프로그램 (ACH 2), 2010 년 개발 보조금 (CNIHR)에 대한 호주 센터에 의해 투자되었다 다음 NIH 연구소 및 센터 (NIAID, NCI, NIMH, NIDA, NICHD, NHLBI, NIA)에 의해. CSP는 CNIHR 및 ACH 2 보조금받는 사람입니다. SMC는 호주 (NHMRC) 주요 연구 활동의 국립 보건 의료 연구위원회의받는 사람입니다. 저자는 기꺼이 버네 연구소에 의해 수신 된 빅토리아 운영 ​​인프라 지원 프로그램의이 작품에 대한 기여를 인정합니다. 우리는 교육 및 기술 자문 유동 세포 계측법에 대한 AMREP 유동 세포 계측법 핵심 시설에서 게자 Paukovic 에바 ORLOWSKI - 올리버의 도움을 인정합니다. 우리는 미디어 코칭 및 비디오 촬영 조직 앵거스 모건 감사합니다. 우리의 감사제시 메이슨과 뽑아 낸 압둘라지즈 K. Alzahrani에 비디오 촬영 중 실험실 지원. 우리는 중요한 방법론적인 조언을 제공하는 의료 과학, UNSW, 호주의 학교에서 박사 데이비드 SIMAR의 노력을 주셔서 감사합니다. CSP는 감사의 말씀을 <a href="http://www.nice-consultants.com/">www.nice-consultants.com를</a> 그래픽 협의. 저자의 기여 : CSP는 프로젝트를 구상 설계 및 실험을 실시, 분석 및 데이터를 해석하고, 원고를 썼다. JJA 데이터를 해석하고 원고를 썼다. TRB는 원고를 썼다. JMM는, 데이터를 해석 중요한 지적 제안을했고, 원고를 검토했다. SMC는, 데이터를 해석 중요한 지적 제안을했고 원고를 검토했다.

참고 : HIV 감염과 HIV-감염되지 않은 과목은 멜버른, VIC, 호주에서 알프레드 병원에서 감염증 단위에서 모집하고, 각각 지역 사회에서했다. 동의서는 모든 참가자로부터 얻은 것, 그리고 연구는 알프레드 병원 연구 윤리위원회에 의해 승인되었다. 단핵구와 단핵구 부분 집단 1. GLUT1 세포 표면 감지 <ol><li> 구연산 ACD-B 항 응고 튜브에 혈액을 수집하고 수집의 1 시간 내 생물 안?...

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	<li>Shi, C., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+recruitment+during+infection+and+inflammation.">Monocyte recruitment during infection and inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).</li><li>Woollard, K. J., Geissmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+in+atherosclerosis:+subsets+and+functions.">Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions.</a> Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).</li><li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+and+macrophages+in+cancer:+development+and+functions.">Monocytes and macrophages in cancer: development and functions.</a> Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).</li><li>Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes+as+regulators+of+inflammation+and+HIV-related+comorbidities+during+cART.">Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART.</a> J Immunol Res. 2014, 569819 (2014).</li><li>Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+Metabolism+in+T+Cells+and+Monocytes:+New+Perspectives+in+HIV+Pathogenesis.">Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis.</a> EBioMedicine. , (2016).</li><li>Cheng, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR-+and+HIF-1alpha-mediated+aerobic+glycolysis+as+metabolic+basis+for+trained+immunity.">mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity.</a> Science. 345, 1250684 (2014).</li><li>Maratou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+transporter+expression+on+the+plasma+membrane+of+resting+and+activated+white+blood+cells.">Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells.</a> Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).</li><li>Freemerman, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+reprogramming+of+macrophages:+glucose+transporter+1+(GLUT1)-mediated+glucose+metabolism+drives+a+proinflammatory+phenotype.">Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype.</a> J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).</li><li>Gonnella, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi+sarcoma+associated+herpesvirus+(KSHV)+induces+AKT+hyperphosphorylation,+bortezomib-resistance+and+GLUT-1+plasma+membrane+exposure+in+THP-1+monocytic+cell+line.">Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line.</a> J Exp Clin Cancer Res. 32, 79 (2013).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+transporter+1-expressing+proinflammatory+monocytes+are+elevated+in+combination+antiretroviral+therapy-treated+and+untreated+HIV++subjects.">Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects.</a> J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).</li><li>Wong, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+reveals+the+defining+features+of+the+classical,+intermediate,+and+nonclassical+human+monocyte+subsets.">Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets.</a> Blood. 118, e16-e31 (2011).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood.">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116, e74-e80 (2010).</li><li>Belge, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proinflammatory+CD14+CD16+DR+++monocytes+are+a+major+source+of+TNF.">The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF.</a> J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).</li><li>Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+cytokine+expression+in+human+blood+monocyte+subpopulations:+a+polymerase+chain+reaction+analysis.">Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis.</a> Blood. 87, 373-377 (1996).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD14++CD16++blood+monocytes:+their+role+in+infection+and+inflammation.">The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation.</a> J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).</li><li>Ziegler-Heitbrock, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , 3-36 (2014).</li><li>Dimitriadis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+glucose+transport+and+its+regulation+by+insulin+in+human+monocytes+using+flow+cytometry.">Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry.</a> Cytometry A. 64, 27-33 (2005).</li><li>Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitative+glucose+transporter+gene+expression+in+human+lymphocytes,+monocytes,+and+macrophages:+a+role+for+GLUT+isoforms+1,+3,+and+5+in+the+immune+response+and+foam+cell+formation.">Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation.</a> Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).</li><li>Stibenz, D., Buhrer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+L-selectin+surface+expression+by+various+leukocyte+isolation+procedures.">Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures.</a> Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).</li><li>Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+regulation+of+glucose+transport+in+a+monocyte-macrophage+cell+line:+Glut-3+affinity+for+glucose+is+enhanced+during+the+respiratory+burst.">Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst.</a> Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).</li><li>Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+insulin-mediated+glucose+uptake+in+monocytes+of+short+children+with+intrauterine+growth+retardation).">Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation).</a> Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).</li><li>Yoshioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+fluorescent+derivative+of+glucose+applicable+to+the+assessment+of+glucose+uptake+activity+of+Escherichia+coli.">A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli.</a> Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).</li><li>Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+transport+of+a+fluorescent+glucose+analogue+by+human+erythrocytes.">Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes.</a> Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glucose+metabolic+activity+is+associated+with+CD4++T-cell+activation+and+depletion+during+chronic+HIV+infection.">Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection.</a> AIDS. 28, 297-309 (2014).</li><li>Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+metabolism+regulates+T+cell+activation,+differentiation,+and+functions.">Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions.</a> Frontiers in immunology. 6, (2015).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+glucose+metabolism+in+CD4+and+CD8+T+cells.">Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells.</a> International reviews of immunology. , 1-12 (2015).</li><li>Palmer, C. S., Crowe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+does+monocyte+metabolism+impact+inflammation+and+aging+during+chronic+HIV+infection?.">How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection?.</a> AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).</li><li>McFadden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+stress+is+a+barrier+to+Epstein-Barr+virus-mediated+B-cell+immortalization.">Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).</li><li>Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentations+of+glucose+uptake+and+glucose+transporter-1+in+macrophages+following+thermal+injury+and+sepsis+in+mice.">Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice.</a> Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).</li><li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+Oxidation+Is+Critical+for+CD4++T+Cell+Activation+in+a+Mouse+Model+of+Systemic+Lupus+Erythematosus.">Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus.</a> Journal of immunology. , 80-90 (2016).</li><li>Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+metabolism+in+autoimmune+disease.">T-cell metabolism in autoimmune disease.</a> Arthritis research &amp; therapy. 17, 29 (2015).</li><li>Yin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+CD4++T+cell+metabolism+reverses+lupus.">Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus.</a> Science translational medicine. 7, 274ra218 (2015).</li><li>Barbera Betancourt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Phosphoinositide+3-Kinase+p110delta+Does+Not+Affect+T+Cell+Driven+Development+of+Type+1+Diabetes+Despite+Significant+Effects+on+Cytokine+Production.">Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production.</a> PloS one. 11, e0146516 (2016).</li><li>Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitative+glucose+transporters:+Implications+for+cancer+detection,+prognosis+and+treatment.">Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment.</a> Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).</li><li>Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+pathogenicity+and+virion+production+are+dependent+on+the+metabolic+phenotype+of+activated+CD4++T+cells.">HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells.</a> Retrovirology. 11, 98 (2014).</li><li>Taylor, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+D1+Couples+CD4++T+Cell+Activation+to+c-Myc-Dependent+Deoxyribonucleotide+Pool+Expansion+and+HIV-1+Replication.">Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication.</a> PLoS Pathog. 11, e1004864 (2015).</li><li>Loisel-Meyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glut1-mediated+glucose+transport+regulates+HIV+infection.">Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).</li><li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+Role+and+Characterization+of+Immunometabolism:+Relevance+to+HIV+Pathogenesis,+Serious+Non-AIDS+Events,+and+a+Cure.">Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure.</a> J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).</li></ol>

여기에 설명 된 프로토콜은 전체 혈액의 단핵 세포 및 단핵 세포 개체군에 의해 글루코스 수송 식 형광 글루코오스 유사체 흡수를 조사하는 간단한 방법을 자세히. 전혈에서 2-NBDG 흡수를 평가하여,이 방법은 생체 내에서 유사한 조건을 허용한다. 이전의 연구는 밀도 원심 분리 (17)에 의해 전혈로부터 분리 된 단핵 세포에서 6 NBDG 흡수를 조사 하였다. 그러나,이 연구는 잠재적으로 ?...

단핵구는 빠르게 감염과 염증 하나의 사이트로 동원 된 인간의 선천성 면역 시스템의 주요 구성 요소입니다. 단핵 세포의 활성화는 병원체에 의한 급성 손상을 제한하기위한 중요하며 또한 죽상 동맥 경화증 2, 암 3, HIV 4,5 등 여러 가지 만성 질환의 발병 기전의 핵심입니다. 휴식 활성화 단핵 세포의 신진 대사는 당분 대사를 (즉, 포도당의 발효 락트합니다)를 이용 산화 대사를 이용하여 휴식 단핵 세포 활성화 단핵 세포와 크게 다르다 6. 단핵 세포의 활성화는 당분 대사 7 증가 포도당 흡수를 허용 포도당 수송 체의 발현을 유도한다. 단핵구 포도당 수송 1 (GLUT1)의 활성화 중에 상향 조절 하나의 수송과 그 표현은 절에서 염증성 사이토 카인의 생산으로 이어질 것으로 나타났다itro 비만 쥐 (8)의 지방 조직입니다. 카포시 육종 관련 헤르페스 바이러스에 의한 단핵구 세포 라인의 감염 GLUT1 9의 휴대 상향 조절로 연결, 우리는 최근에 만성 HIV 감염시 GLUT1 발현 단핵 세포의 증가 비율이 치료와 함께 항 레트로 바이러스 치료 처리 감염 10시 존재하는 것으로 나타났다. 함께 찍은, 이러한 연구는 포도당 흡수 및 단핵 세포에 의한 당분 대사가 많은 염증성 질환의 중요한 측면이라는 것을 보여줍니다. 따라서, 간단한 방법 항상성 동안 단핵구 GLUT1 발현 당 흡수를 측정하고 염증성 질환 연구의 광범위에 유용 할 것으로 예상된다. 인간 단핵구의 세포 표면 마커 CD14 및 CD16 발현 (11, 12)의 차동에 의해 검사 될 수있는 세 개의 서로 다른 서브 세트들로 구성되는 이종이다. 클래식 단핵 세포는 CD14 높은 수준의 표현하지만 CD를 표명하지 아니합니다16 (CD14 ++ CD16은 -), 중간 단핵구는 CD14의 높은 수준 및 CD16 (CD14 + CD16 +)의 중간 레벨 및 단핵구는 CD14의 로우 레벨과 CD16의 높은 레벨을 발현 비 고전적 (CD14을 발현 + CD16 ++). CD16을 표현 단핵구는 CD16에 비해 CD16 + 단핵 세포를 불린다 - 단핵구 높은 염증성 사이토 카인의 발현과 기능을보다 효율적으로 존재하는 항원 (13, 14)에 있습니다. 단핵 세포의 약 10 %는 염증 15 일 동안 관찰 높은 비율과 항상성 동안 CD16를 표현한다. 단핵 세포 개체군은 특정 질병 상태와 관련된 질병과 질병의 진행 (16)의 유용한 생물 마커 될 수 있습니다. 우리의 목표는 PHY에 가까운 조건에서 인간 단핵 세포와 단핵구 소집단에 의한 포도당 수송 체의 발현과 포도당 흡수를 측정 할 수있는 방법을 확인하는 것이 었습니다가능한 한 siological 조건. 이러한 방법은 생리적 조건 (19)에 비해 단백질 발현을 변경 한 수 절연 단핵구를 조사하더라도 이전의 연구는, 단구 글루코스 수송 체 발현 및 당 흡수 17,18을 측정하고, 더 이전의 연구는 인간 단핵 세포 개체군을 조사하지 않았다. 계측법 다중 파라미터의 흐름을 이용하여, 총 단핵 세포 및 단핵 세포 개체군에 의해 형광 글루코오스 유사체 2-NBDG 글루코오스 트랜스 포터의 발현 및 흡수를 검사하는 방법을 설명하는 전체 조작되지 혈액 내 (CD14 및 CD16의 발현에 기초하여).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="570">
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:140px;">VACUETT Tube 9 ml ACD-B anticoagulant tubes</td>
			<td style="width:147px;">Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td style="width:139px;">455094</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">5 ml sterile polypropylene tubes</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">352063</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">Albumin from Bovine Serum (BSA)</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:139px;">A7906</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:140px;">16% formaldehyde solution</td>
			<td style="width:147px;">Electron Microscopy Science</td>
			<td style="width:139px;">15710</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:140px;">BD FACS lysing solution (10X)</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">349202</td>
			<td style="width:147px;">Dilute BD FACS lysing solution 1/10 with deionized water for working concentration (store for up to 1 week at 4&#176;C)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-CD3-PE</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">555340</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti CD14-APC</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">555399</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-CD16-PECy7</td>
			<td style="width:147px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:139px;">557744</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">anti-Glut1-FITC</td>
			<td style="width:147px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:139px;">FAB1418F</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:140px;">IgG2b-FITC</td>
			<td style="width:147px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:139px;">IC0041F</td>
			<td style="width:147px;"></td>
		</tr>
		<tr height="241">
			<td height="241" style="height:241px;width:140px;">2-NBDG</td>
			<td style="width:147px;">Life technologies</td>
			<td style="width:139px;">N13195</td>
			<td style="width:147px;">Suspend 5 mg of 2-NBDG into 1 ml of deionized water to make a 14.60 mM stock solution (keep for up to 6 months at 4&#176;C). To make the working 2-NBDG concentration, dilute stock 1/100 with 1X DPBS. Cover with foil. (store for up to 1 week at 4&#176;C)</td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:78px;width:140px;">Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline (1X)</td>
			<td style="width:147px;">Life technologies</td>
			<td style="width:139px;">14190-144</td>
			<td style="width:147px;">To make wash solution, add 0.5 g BSA per 100 ml DPBS (store for up to 2 weeks at 4&#176;C)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple flow cytometric method to measure glucose uptake and glucose transporter expression for monocyte subpopulations in whole blood

단핵구 특정 만성 염증성 질환과 관련된 병원균과 염증에 의해 활성화 될 수있는 선천성 면역 세포이다. 단핵구의 활성화는 이펙터 기능과 향상된 글루코오스 트랜스 포터의 발현을 수반하는 산화 당분 해 대사에서 수반하는 변화를 유도한다. 이 증가 당분 대사는 훈련 된 단핵 세포의 면역 선천성 면역 메모리의 형태로 관찰된다. 단핵 세포에 의해 글루코스 수송 체 발현 및 당 흡수 검사 관내 프로토콜을 설명 하였지만, 없음은 전혈 세포 계측법 다중 파라미터 플로우에 의해 관찰되지 않았다. (중간체 (CD14 ++ CD16 +) 및 비 - 고전 - 우리는 전체 단핵구 및 고전 (CD14 ++ CD16)에 의해 전혈 형광 글루코오스 유사체 2-NBDG 흡수의 측정을위한 다중 파라미터 유세포 프로토콜을 설명 CD14 + CD16 ++) 단핵구소집단. 이 방법은 항상성 및 염증성 질환 중 총 단핵 세포 및 단핵 세포 개체군에 대한 글루코스 수송 체 발현 및 당 흡수를 조사하는데 사용될 수 쉽게 혈액 내의 다른 백혈구 및 백혈구 개체군에 대한 당 흡수를 조사하기 위해 수정 될 수있다.

보상 형광 유출을 방지하기 위해 각각의 형광 색소에 대해 수행되어야한다. 단핵구 먼저 전방 및 측면 산란을 기반으로 게이팅에 의해 강화된다. . 인구 - 이전에 (10)는도 1a는 CD3 내 게이팅에 의해 세포 분산 및 T 세포의 배제에 의한 단핵구의 초기 게이팅을 보여줍니다보고 제시된 그래프는 6 개 이상 참가자 전체 혈액에서 수행 적어도 6 독립?...

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A Simple Flow Cytometric Method to Measure Glucose Uptake and Glucose Transporter Expression for Monocyte Subpopulations in Whole Blood

Monocytes are integral components of the human innate immune system that rely on glycolytic metabolism when activated. We describe a flow cytometry protocol to measure glucose transporter expression and glucose uptake by total monocytes and monocyte subpopulations in fresh whole blood.

간단한 유세포 방법은 전체 혈액에서 단핵구 부분 집단에 대한 당 흡수 및 포도당 운송업자 발현을 측정하는

Monocytes are innate immune cells that can be activated by pathogens and inflammation associated with certain chronic inflammatory diseases. Activation of ...

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A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb (BCG lux/M.Tb lux)

A Functional Whole Blood Assay to Measure Viability of Mycobacteria, using Reporter-Gene Tagged BCG or M.Tb BCG lux/M.Tb lux

Mycobacteria의 가능성을 측정하는 기능 전체 혈액 분석은 리포터 - 진 BCG 또는 M. TB (BCG 태그 사용 럭스 / M. TB 럭스)

Functional assays have long played a key role in measuring of immunogenicity of a given vaccine. This is conventionally expressed as serum bactericidal ...

연구

면역학 및 감염병학

A Simple and Efficient Method to Detect Nuclear Factor Activation in Human Neutrophils by Flow Cytometry

유동 세포 계측법에 의해 인간 호중구에 핵 팩터 활성화를 감지 할 간단하고 효율적인 방법

Neutrophils  are the most abundant leukocytes in peripheral blood. These cells are the first  to appear at sites of inflammation and infection, thus ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

분리 및 신경 교종-침투 말초 혈액 단핵 세포의 유세포 분석

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

인간의 혈액에서 측정 과립구와 단핵구 식균 작용 및 산화 버스트 활동

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

인간의 전체 혈액 자연 살해 세포 용 균성 활동의 유세포 분석

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

전혈로부터 인간 단핵구 유래 수지상 세포의 생성

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

단핵구 단층 분석의 사용은 Fcγ 수용체 - 매개 식균 작용을 평가하기

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

B 임파 세포 라인의 설립에 대한 간단한 적혈구 용해 방법

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

전체 혈액에 의해 인간 Monocyte 하위 집합의 Flow Cytometry 분석

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...

Simultaneous Study of the Recruitment of Monocyte Subpopulations Under Flow In Vitro

생체 외에서 흐름 아래 Monocyte 모집단의 채용의 동시 연구

The recruitment of monocytes from the blood to targeted peripheral tissues is critical to the inflammatory process during tissue injury, tumor development ...