Name: in vitro transcription assays and their application in drug discovery
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00
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This work acknowledges a Faculty Early Career Grant from the University of Newcastle (CM).

सावधानी: प्रयोगों रेडियोधर्मी आइसोटोप 32 पी के इस्तेमाल को शामिल करने और जब तक सभी उचित सुरक्षा स्थितियों से मुलाकात की है कोई काम नहीं किया जाना चाहिए। आम तौर पर कर्मियों को एक सुरक्षा के पाठ्यक्रम में भा?...

<ol>
	<li>Mooney, R. A., Artsimovitch, I., Landick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Information+processing+by+RNA+polymerase:+recognition+of+regulatory+signals+during+RNA+chain+elongation.">Information processing by RNA polymerase: recognition of regulatory signals during RNA chain elongation.</a> J. Bacteriol. 180 (13), 3265-3275 (1998).</li><li>Burgess, R. R., Anthony, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+sigma+docks+to+RNA+polymerase+and+what+sigma+does.">How sigma docks to RNA polymerase and what sigma does.</a> Curr. Opin. Microbiol. 4 (2), 126-131 (2001).</li><li>Gusarov, I., Nudler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+intrinsic+transcription+termination+by+N+and+NusA:+the+basic+mechanisms.">Control of intrinsic transcription termination by N and NusA: the basic mechanisms.</a> Cell. 107 (4), 437-449 (2001).</li><li>Ha, K. S., Toulokhonov, I., Vassylyev, D. G., Landick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NusA+N-terminal+domain+is+necessary+and+sufficient+for+enhancement+of+transcriptional+pausing+via+interaction+with+the+RNA+exit+channel+of+RNA+polymerase.">The NusA N-terminal domain is necessary and sufficient for enhancement of transcriptional pausing via interaction with the RNA exit channel of RNA polymerase.</a> J. Mol. Biol. 401 (5), 708-725 (2010).</li><li>Yang, X., Lewis, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interaction+between+RNA+polymerase+and+the+elongation+factor+NusA.">The interaction between RNA polymerase and the elongation factor NusA.</a> RNA Biol. 7 (3), 272-275 (2010).</li><li>Artsimovitch, I., Henkin, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+approaches+to+analysis+of+transcription+termination.">In vitro approaches to analysis of transcription termination.</a> Methods. 47 (1), 37-43 (2009).</li><li>Decker, K. B., Hinton, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+regulation+at+the+core:+Similarities+among+bacterial,+archaeal,+and+eukaryotic+RNA+polymerases.">Transcription regulation at the core: Similarities among bacterial, archaeal, and eukaryotic RNA polymerases.</a> Annu. Rev. Microbiol. 67, 113-139 (2013).</li><li>Artsimovitch, I., Vassylyev, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+it+easy+to+stop+RNA+polymerase?.">Is it easy to stop RNA polymerase?.</a> Cell Cycle. 5 (4), 399-404 (2006).</li><li>Murakami, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+biology+of+bacterial+RNA+polymerase.">Structural biology of bacterial RNA polymerase.</a> Biomolecules. 5 (2), 848-864 (2015).</li><li>Ma, C., Yang, X., Lewis, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+transcription+as+a+target+for+antibacterial+drug+development.">Bacterial transcription as a target for antibacterial drug development.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 80 (1), 139-160 (2016).</li><li>Yang, X., Ma, C., Lewis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+vector+system+that+allows+simple+generation+of+mutant+Escherichia+coli+RNA+polymerase.">A vector system that allows simple generation of mutant Escherichia coli RNA polymerase.</a> Plasmid. 75, 37-41 (2014).</li><li>Burgess, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+large+scale+purification+of+Escherichia+coli+deoxyribonucleic+acid-dependent+ribonucleic+acid+polymerase.">A new method for the large scale purification of Escherichia coli deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase.</a> J. Biol. Chem. 244, 6160-6167 (1969).</li><li>Artsimovitch, I., Svetlov, V., Murakami, K. S., Landick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-overexpression+of+Escherichia+coli+RNA+polymerase+subunits+allows+isolation+and+analysis+of+mutant+enzymes+lacking+lineage-specific+sequence+insertions.">Co-overexpression of Escherichia coli RNA polymerase subunits allows isolation and analysis of mutant enzymes lacking lineage-specific sequence insertions.</a> J. Biol. Chem. 278 (14), 12344-12355 (2003).</li><li>Ma, C., Yang, X., Lewis, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+transcription+inhibitor+of+RNA+polymerase+holoenzyme+formation+by+structure-based+drug+design:+From+in+silico+screening+to+validation.">Bacterial transcription inhibitor of RNA polymerase holoenzyme formation by structure-based drug design: From in silico screening to validation.</a> ACS Infect. Dis. 2, 39-46 (2016).</li><li>Ma, C., Mobli, M., Yang, X., Keller, A. N., King, G. F., Lewis, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+polymerase-induced+remodelling+of+NusA+produces+a+pause+enhancement+complex.">RNA polymerase-induced remodelling of NusA produces a pause enhancement complex.</a> Nucleic Acids Res. 43 (5), 2829-2840 (2015).</li><li>Lewis, P. J., Marston, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP+vectors+for+controlled+expression+and+dual+labelling+of+protein+fusions+in+Bacillus+subtilis.">GFP vectors for controlled expression and dual labelling of protein fusions in Bacillus subtilis.</a> Gene. 227 (1), 101-110 (1999).</li><li>Artsimovitch, I., Landick, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pausing+by+bacterial+RNA+polymerase+is+mediated+by+mechanistically+distinct+classes+of+signals.">Pausing by bacterial RNA polymerase is mediated by mechanistically distinct classes of signals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 97 (13), 7090-7095 (2000).</li><li>Vassylyev, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+a+bacterial+RNA+polymerase+holoenzyme+at+2.6+&#197;+resolution.">Crystal structure of a bacterial RNA polymerase holoenzyme at 2.6 &#197; resolution.</a> Nature. 417, 712-719 (2002).</li><li>Artsimovitch, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+transcription+regulation+by+alarmone+ppGpp.">Structural basis for transcription regulation by alarmone ppGpp.</a> Cell. 117 (3), 299-310 (2004).</li><li>Bordier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+rifampicin-resistant+RNA+synthesis+by+rifampicin-RNA+polymerase+complexes.">Inhibition of rifampicin-resistant RNA synthesis by rifampicin-RNA polymerase complexes.</a> FEBS lett. 45 (1-2), 259-262 (1974).</li><li>Tang, G. Q., Anand, V. S., Patel, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence-based+assay+to+measure+the+real-time+kinetics+of+nucleotide+incorporation+during+transcription+elongation.">Fluorescence-based assay to measure the real-time kinetics of nucleotide incorporation during transcription elongation.</a> J. Mol. Biol. 405 (3), 666-678 (2011).</li></ol>

सभी जीवों में, प्रतिलेखन एक कसकर विनियमित प्रक्रिया है। इन विट्रो प्रतिलेखन assays प्रतिलेखन कारक, छोटे अणुओं और प्रतिलेखन अवरोधकों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए एक मंच प्रदान करने के लिए विकसित कि...

ट्रांसक्रिप्शन प्रक्रिया है जिसमें शाही सेना एक विशिष्ट डीएनए टेम्पलेट से संश्लेषित है। कोशिकाओं में तीन अलग RNAPs देखते हैं: RNAP मैं rRNA व्यापारियों transcribes, RNAP द्वितीय mRNA और कुछ छोटे परमाणु आरएनए के संश्लेषण के लिए जिम्मेदार है, और 5 एस rRNA और tRNA के संश्लेषण RNAP III द्वारा किया जाता है। बैक्टीरिया में, वहाँ केवल एक RNAP शाही सेना के सभी वर्गों के प्रतिलेखन के लिए जिम्मेदार है। दीक्षा, बढ़ाव और समाप्ति: वहाँ प्रतिलेखन के तीन चरण हैं। ट्रांसक्रिप्शन सेल में सबसे उच्च विनियमित प्रक्रियाओं में से एक है। प्रतिलेखन चक्र में प्रत्येक चरण में जीन अभिव्यक्ति 1 के नियमन के लिए एक जांच की चौकी का प्रतिनिधित्व करता है। दीक्षा के लिए, RNAP एक सिग्मा कारक के साथ संबद्ध करने के लिए holoenzyme फार्म के लिए है, जो विशिष्ट साइटों के लिए एंजाइम को निर्देशित करने के लिए आवश्यक है एक खुला प्रमोटर जटिल प्रपत्र प्रमोटरों 2 आह्वान किया है। बाद में, प्रतिलेखन कारक के एक बड़े सूट विनियमन ओ के लिए जिम्मेदार हैंबढ़ाव और समाप्ति चरणों के दौरान एफ RNAP गतिविधियों। प्रतिलेखन कारक यहां जांच की अत्यधिक संरक्षित और आवश्यक प्रोटीन, नुसा है। यह rRNA संश्लेषण 3-5 दौरान प्रतिलेखन रोक और समाप्ति, साथ ही विरोधी समाप्ति को विनियमित करने में शामिल है। इन विट्रो प्रतिलेखन assays प्रतिलेखन 6 दौरान जटिल विनियामक कदमों का अध्ययन करने के लिए शक्तिशाली उपकरण के रूप में विकसित किया गया है। सामान्य में, एक प्रमोटर क्षेत्र सहित डीएनए के एक रेखीय टुकड़ा प्रतिलेखन के लिए टेम्पलेट के रूप में आवश्यक है। डीएनए टेम्पलेट आमतौर पर पीसीआर द्वारा या एक प्लाज्मिड linearizing से उत्पन्न होता है। शुद्ध प्रोटीन और NTPS (पता लगाने के प्रयोजनों के लिए एक radiolabeled एनटीपी सहित) तो जोड़ रहे हैं और उत्पाद ऊष्मायन के लिए जरूरी अवधि के बाद का विश्लेषण किया। उचित टेम्पलेट्स और प्रतिक्रिया की स्थिति का उपयोग करना, प्रतिलेखन के सभी चरणों के इस दृष्टिकोण है जो transcr की विस्तृत आणविक लक्षण वर्णन के लिए सक्षम है का उपयोग कर जांच की गई हैपिछली आधी सदी से अधिक 7 iption। RNAP के 3-आयामी संरचना के बारे में जानकारी के साथ संयोजन में यह भी संभव हो गया है एंटीबायोटिक दवाओं और एंटीबायोटिक सुराग द्वारा प्रतिलेखन निषेध की आणविक तंत्र की जांच, और नए, बेहतर दवाओं 8-10 के विकास में इस जानकारी का उपयोग करने के लिए। इस काम में हम कैसे प्रतिलेखन assays प्रतिलेखन बढ़ाव / समाप्ति कारक नुसा, और कैसे एक उपन्यास प्रतिलेखन दीक्षा अवरोध नेतृत्व की कार्रवाई की व्यवस्था निर्धारित किया जा सकता द्वारा विनियमन की व्यवस्था का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का उदाहरण देते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Obtain the proteins required for transcription assay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli RNAP</td>
			<td>Epicentre</td>
			<td>S90250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparation of DEPC-treated water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diethyl pyrocarbonate (DEPC)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>D5758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free water&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambion Nuclease-Free Water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA template preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wizard&#160;Plus&#160;SV Minipreps DNA Purification System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A1330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACCUZYME Mix</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-25028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR primers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System&#160;</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 3300 fluorospectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>A6559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UTP</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>U1006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GTP</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>G3776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTP</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>C9274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Purity rNTPs</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>27-2025-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-32P UTP&#160;</td>
			<td>PerkinElmer&#160;&#160;</td>
			<td>BLU007C001MC</td>
			<td>Radioactive compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA ladder preparation&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novagen Perfect RNA Marker Template Mix 0.1&#8211;1 kb</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>69003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>H7006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>DTT-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 RNAP</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P2075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequi-Gen GT nucleic acid sequencing cell&#160;</td>
			<td>Bio-Rad&#160;&#160;</td>
			<td>165-3804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigmacote&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>SL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>urea&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>U6504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tris(hydroxymethyl)aminomethane&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>154563</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>boric acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>B7901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>ED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% Acrylamide/bis-acrylamide&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>A9926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium persulfate&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>A3678</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#697;&#8242;,N&#697;&#8242;-Tetramethylethylenediamine (TEMED)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>T9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N",N"-Tetramethylethylenediamine (TEMED) </td>
			<td>Sigma-Aldrich </td>
			<td>T9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription Assay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rifampicin&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>R3501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>F9037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bromophenol blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>B0126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene cyanol&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>X4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>84020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin Ribonuclease Inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription buffer&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris base</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>M2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>DTT-RO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>G5516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman&#160;3MM Chr Chromatography Paper</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-714-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Radioactive decontaminant</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decon 90</td>
			<td>decon</td>
			<td>decon90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Treatment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Typhoon Trio+ imager</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>63-0055-89</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro transcription assays and their application in drug discovery

इन विट्रो प्रतिलेखन assays विकसित किया गया है और व्यापक रूप से आणविक प्रतिलेखन में शामिल तंत्र का अध्ययन करने के लिए कई वर्षों के लिए इस्तेमाल किया। इस प्रक्रिया को बहु सबयूनिट डीएनए निर्भर शाही सेना पोलीमरेज़ (RNAP) और प्रतिलेखन कारक है कि जीन की अभिव्यक्ति के दौरान RNAP की गतिविधि को व्यवस्थित करने के लिए कार्य की एक श्रृंखला की आवश्यकता है। radiolabeled टेप की अनुक्रमण जेल वैद्युतकणसंचलन पैरामीटर क्या यह प्रभावित कर सकते हैं कि कैसे प्रतिलेखन आय और के बारे में विस्तृत जानकारी यंत्रवत प्रदान करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस पत्र में हम अध्ययन करने के लिए कैसे आवश्यक बढ़ाव कारक नुसा ट्रांसक्रिप्शनल रोक, साथ ही एक जीवाणुरोधी एजेंट RNAP holoenzyme गठन के निषेध के माध्यम से प्रतिलेखन दीक्षा को निशाना बनाने की पहचान करने के लिए एक विधि को नियंत्रित प्रोटोकॉल का वर्णन। इन विधियों प्रतिलेखन कारक की कार्रवाई की व्यवस्था है जो अभी भी अस्पष्ट रहते हैं, साथ ही नए जीवाणुरोधी एजेंसियों का पता लगाने के लिए अतिरिक्त दृष्टिकोण के विकास के लिए मंच के रूप में एक प्रयोग किया जा सकताटीएस को निशाना प्रतिलेखन जो एंटीबायोटिक अनुसंधान और विकास में एक underutilized दवा लक्ष्य है।

ट्रांसक्रिप्शन दक्षता अलग समय बिंदुओं पर बैंड में विकिरण के स्तर को मापने के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। रोक परख सक्षम रोकते हैं, समाप्ति के दृश्य नुसा कारक के समारोह का परीक्षण, और ?...

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एक कोशिका आनुवंशिक तकनीक का उपयोग कर बेमिसिया टैबची के अंडे निषेचन दर का निर्धारण

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...