Name: gap junctional intercellular communication: a functional biomarker to assess adverse effects of toxicants and toxins, and health benefits of natural products
Uploaded: 2016-12-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Supported by NIEHS grants #R01 ES013268-01A2, and the contents are solely the responsibility of the author and do not necessarily represent the official views of the NIEHS, and supported by CETOCOEN UPgrade project No. CZ.1.05/2.1.00/19.0382.

Le protocole de cette étude a été approuvée par le Comité d&#39;utilisation des National Institutes of Health Sciences du Japon, qui est l&#39; endroit où les expériences in vivo ont été réalisées, des soins et des animaux pour assurer que les rats ont été traités avec humanité et en tenant compte de la réduction de la souffrance. 1. SL-DT bioessai <ol><li> Seed 3 x 10 5 cellules épithéliales de foie de rat WB-F344 SUR DES 35 diamètre des plaques de culture mm contenant E...

<ol>
	<li>Rotroff, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+endocrine+testing+in+the+21st+century+using+in+vitro+assays+of+estrogen+receptor+signaling+responses.">Predictive endocrine testing in the 21st century using in vitro assays of estrogen receptor signaling responses.</a> Environ.Sci.Technol. 48 (15), 8706-8716 (2014).</li><li>Axelsen, L. N., Calloe, K., Holstein-Rathlou, N. H., Nielsen, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Managing+the+complexity+of+communication:+regulation+of+gap+junctions+by+post-translational+modification.">Managing the complexity of communication: regulation of gap junctions by post-translational modification.</a> Front Pharmacol. 4, 130 (2013).</li><li>Nielsen, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junctions.">Gap junctions.</a> Compr.Physiol. 2 (3), 1981-2035 (2012).</li><li>Sovadinova, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphatidylcholine+specific+PLC-induced+dysregulation+of+gap+junctions,+a+robust+cellular+response+to+environmental+toxicants,+and+prevention+by+resveratrol+in+a+rat+liver+cell+model.">Phosphatidylcholine specific PLC-induced dysregulation of gap junctions, a robust cellular response to environmental toxicants, and prevention by resveratrol in a rat liver cell model.</a> PLoS.One. 10 (5), e0124454 (2015).</li><li>Trosko, J. E., Chang, C. C., Travis, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biologically Based Methods for Cancer Risk Assessment. , 165-179 (1989).</li><li>Trosko, J. E., Mendelsohn, M. D., Peeters, J. P., Normandy, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomarkers and occupational health: progess and perspectives. , 264-274 (1995).</li><li>Upham, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+integrative+signaling+through+gap+junctions+in+toxicology.">Role of integrative signaling through gap junctions in toxicology.</a> Curr.Protoc.Toxicol. 47, 2.18:2.18.1-2.18:2.18.18 (2011).</li><li>Vinken, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexins+and+their+channels+in+cell+growth+and+cell+death.">Connexins and their channels in cell growth and cell death.</a> Cell.Signal. 18 (5), 592-600 (2006).</li><li>Browne, C. L., Wiley, H. S., Dumont, J. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junctional+intercellular+communication+as+a+biological+&amp;#34;Rosetta+stone&amp;#34;+in+understanding,+in+a+systems+biological+manner,+stem+cell+behavior,+mechanisms+of+epigenetic+toxicology,+chemoprevention+and+chemotherapy.">Gap junctional intercellular communication as a biological &amp;#34;Rosetta stone&amp;#34; in understanding, in a systems biological manner, stem cell behavior, mechanisms of epigenetic toxicology, chemoprevention and chemotherapy.</a> J. Membr. Biol. 218 (1-3), 93-100 (2007).</li><li>Upham, B. L., Weis, L. M., Trosko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulated+gap+junctional+intercellular+communication+as+a+biomarker+of+PAH+epigenetic+toxicity:+structure-function+relationship.">Modulated gap junctional intercellular communication as a biomarker of PAH epigenetic toxicity: structure-function relationship.</a> Environ.Health Perspect. 106, 975-981 (1998).</li><li>Upham, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+promoting+properties+of+a+cigarette+smoke+prevalent+polycyclic+aromatic+hydrocarbon+as+indicated+by+the+inhibition+of+gap+junctional+intercellular+communication+via+phosphatidylcholine-specific+phospholipase.">Tumor promoting properties of a cigarette smoke prevalent polycyclic aromatic hydrocarbon as indicated by the inhibition of gap junctional intercellular communication via phosphatidylcholine-specific phospholipase.</a> C. Cancer Sci. 99 (4), 696-705 (2008).</li><li>Sai, K., Kanno, J., Hasegawa, R., Trosko, J. E., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+the+down-regulation+of+gap+junctional+intercellular+communication+by+green+tea+in+the+liver+of+mice+fed+pentachlorophenol.">Prevention of the down-regulation of gap junctional intercellular communication by green tea in the liver of mice fed pentachlorophenol.</a> Carcinogenesis. 21 (9), 1671-1676 (2000).</li><li>Upham, B. L., Deocampo, N. D., Wurl, B., Trosko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+gap+junctional+intercellular+communication+by+perfluorinated+fatty+acids+is+dependent+on+the+chain+length+of+the+fluorinated+tail.">Inhibition of gap junctional intercellular communication by perfluorinated fatty acids is dependent on the chain length of the fluorinated tail.</a> Int. J. Cancer. 78 (4), 491-495 (1998).</li><li>Trosko, J. E., Tai, M. H., Dittmar, T., Zaenkar, K. S., Schmidt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infections+and+inflammation:+Impacts+on+oncogenesis.+Impacts+on+Oncogenesis.">Infections and inflammation: Impacts on oncogenesis. Impacts on Oncogenesis.</a> Contrib Microbiol. , 45-65 (2006).</li><li>Trosko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cells+as+targets+for+the+aging+and+diseases+of+aging+processes.">Human stem cells as targets for the aging and diseases of aging processes.</a> Med. Hypotheses. 60 (3), 439-447 (2003).</li><li>JE, T. r. o. s. k. o., Dittmar, T., Zaenkar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Stem Cells and Cancer. , 147-188 (2008).</li><li>Osgood, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycyclic+aromatic+hydrocarbon-induced+signaling+events+relevant+to+inflammation+and+tumorigenesis+in+lung+cells+are+dependent+on+molecular+structure.">Polycyclic aromatic hydrocarbon-induced signaling events relevant to inflammation and tumorigenesis in lung cells are dependent on molecular structure.</a> PLoS. One. 8 (6), e65150 (2014).</li><li>Weis, L. M., Rummel, A. M., Masten, S. J., Trosko, J. E., Upham, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bay+or+baylike+regions+of+polycyclic+aromatic+hydrocarbons+were+potent+inhibitors+of+gap+junctional+intercellular+communication.">Bay or baylike regions of polycyclic aromatic hydrocarbons were potent inhibitors of gap junctional intercellular communication.</a> Environ.Health Perspect. 106 (1), 17-22 (1998).</li><li>Yotti, L. P., Chang, C. C., Trosko, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elimination+of+metabolic+cooperation+in+Chinese+hamster+cells+by+a+tumor+promoter.">Elimination of metabolic cooperation in Chinese hamster cells by a tumor promoter.</a> Science. 206 (4422), 1089-1091 (1979).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+caged+coumarin+fluorophores+with+extraordinary+uncaging+cross+sections+suitable+for+biological+imaging+applications.">New caged coumarin fluorophores with extraordinary uncaging cross sections suitable for biological imaging applications.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (14), 4653-4663 (2004).</li><li>Goldberg, G. S., Bechberger, J. F., Naus, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pre-loading+method+of+evaluating+gap+junctional+communication+by+fluorescent+dye+transfer.">A pre-loading method of evaluating gap junctional communication by fluorescent dye transfer.</a> Biotechniques. 18 (3), 490-497 (1995).</li><li>Ziambaras, K., Lecanda, F., Steinberg, T. H., Civitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+stretch+enhances+gap+junctional+communication+between+osteoblastic+cells.">Cyclic stretch enhances gap junctional communication between osteoblastic cells.</a> J.Bone Miner.Res. 13 (2), 218-228 (1998).</li></ol>

Le dosage SL-DT est une technique simple et polyvalent dans la mesure GJIC, mais il y a plusieurs problèmes critiques qui devraient être pris en compte dans la conception de protocoles expérimentaux appropriés. Pour des mesures robustes de GJIC utilisant le test SL-DT il doit y avoir une bonne répartition de colorant de LY à travers les jonctions lacunaires des cellules. Au minimum, un délai suffisant doit être choisie pour assurer que le colorant se propage par huit ou plusieurs rangées de cellules à partir d...

L&#39;objectif global de cette méthode est de fournir une technique simple, complète et relativement peu coûteux pour évaluer la toxicité potentielle de composés. Ceci est une méthode in vitro qui peut être utilisé dans de multiples lignées cellulaires. Standard des laboratoires de biologie cellulaire équipés de microscopes à épifluorescence peuvent effectuer des recherches en utilisant ce test. Notre connaissance de base des fonctions cellulaires a été très dépendante de tests biologiques in vitro, et est devenu un élément essentiel dans les évaluations toxicologiques des produits pharmaceutiques, des polluants de l&#39; environnement, et les contaminants alimentaires nés. Malheureusement, il n&#39;y a pas un seul système in vitro dans des essais biologiques qui peuvent globalement répondre aux demandes de toutes les évaluations toxicologiques. Beaucoup des essais in vitro sont conçus et optimisés pour évaluer ainsi que d&#39; évaluer un critère biochimique ou moléculaire spécifique. Ceux-ci sont très souvent combinés dans un haut débit mis en place afin de refléter une perturbation d&#39;uncertaine voie de transduction du signal, comme l&#39; œstrogène-récepteur de signalisation 1. Cette stratégie a eu beaucoup de succès, mais le nombre étendu de voies de signalisation impliquées dans l&#39;expression des gènes rend la tâche de choisir une voie de signalisation spécifique pour évaluer assez complexe. Hauts protocoles par-mis sont actuellement développés et utilisés pour mesurer simultanément de nombreuses voies de signalisation, qui a été une approche pour surmonter certaines des limites des analyses uniques. Cependant, toutes les voies de signalisation ont été incorporées avec succès dans des approches plus globales, ainsi que de nouvelles voies de signalisation sont constamment découvert que complique encore plus ce processus d&#39;évaluation. Utilisation des numéros de vastes approches in vitro, particulièrement élevé par-mis des systèmes, pour les évaluations toxicologiques complètes sont également très coûteux et ne sont pas propices à la plupart enquêteur unique dirigé des projets de recherche. GJIC est un tig de processushtly contrôlée par des changements dans la tension, la concentration de calcium, le pH, l&#39; équilibre d&#39;oxydoréduction, réglementées par les grandes voies de signalisation intracellulaire de transduction et les interactions avec la membrane et du cytosquelette protéines 2,3. Ainsi, l&#39;inhibition de GJIC peut refléter différents types de stress cellulaire, la perturbation des différentes fonctions cellulaires, ou perturbations de différentes voies de transduction du signal. Une autre approche pour surmonter l&#39;utilisation des limitées bioessais de transduction du signal est de tirer profit des phénomènes biologiques que beaucoup, sinon la plupart, les voies de transduction du signal sont en outre modulés par les systèmes coopératifs de signalisation intercellulaires par les canaux des jonctions lacunaires 4-8. Bien que les systèmes de signalisation intercellulaires sont aussi nombreux et sous contrôle des voies multiples, la signalisation intracellulaire par le biais des canaux de jonction de brèche est finalement fonction des canaux étant ouverts, partiellement fermés, ou complètement fermés. Ceci permet d&#39;obtenir un point d&#39;extrémité qui peut être facilement mesurée en utilisant diversesdans les systèmes d&#39;essais biologiques in vitro 7. Considérant que le point de consigne homéostatique d&#39;un tissu nécessite des canaux ouverts, déterminer l&#39;effet de composés sur les jonctions lacunaires communication intercellulaire (GJIC) est une approche plus globale pour déterminer les effets toxiques potentiels de composés 4,8. En substance, ce phénomène biologique essentiel qui joue un rôle central dans la coordination de multiples événements de transduction de signaux contrôlant l&#39;expression génique permet une évaluation générale des effets toxiques. Ainsi, des essais biologiques qui évaluent GJIC sont un excellent point de départ pour évaluer le potentiel toxique des composés. Les techniques les plus utilisées pour évaluer les étendues GJIC sont basés sur le préchargement des cellules avec une sonde fluorescente, puis de contrôler la migration du colorant à partir de la cellule ou des cellules de charge des cellules adjacentes. Techniques de préchargement le colorant ont impliqué microinjection 9, gratter chargement 10, et les esters méthyliques des sondes 11 </sup&gt;. Le transfert de colorant de chargement fluorescent scalpel méthode (SL-DT) est une modification de la charge scrape - dye test de transfert développé par El Fouly 10. Plutôt que de l&#39;éraflure plus invasive, la méthode scalpel de chargement de ce rapport implique un rouleau doux d&#39;un scalpel avec une lame ronde à travers une monocouche de cellules qui minimisent les dommages invasive (figure 1). Les avantages de cette technique sont l&#39;évaluation toxicologique d&#39;une population de cellules plutôt que des cellules individuelles de l&#39;essai de micro-injection. En outre, la simplicité de ce test permet la détection rapide de multiples plaques en un temps court alors que les méthodes utilisant des techniques et des techniques qui utilisent des esters méthyliques des sondes fluorescentes microinjection sont beaucoup plus de temps et nécessite le niveau de compétence considérablement plus élevé. Bien qu&#39;il n&#39;y ait pas de méthode unique pour répondre à tous les besoins de l&#39;étude GJIC; le dosage SL-DT est un test simple, relativement peu coûteux et polyvalent qui peutrépondre à de nombreux besoins pour les évaluations initiales des toxicités des différents composés. Les principaux avantages comprennent: la simplicité, aucun besoin particulier de l&#39;équipement ou les compétences qui sont nécessaires pour d&#39;autres méthodes telles que la microinjection, la récupération de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) test et activation locale moléculaires essais de sonde fluorescente, une évaluation rapide et simultanée de GJIC dans un grand nombre de cellules, propice à un haut débit mis en place avec la fluorescence automatisé imagerie par microscopie et l&#39; analyse, ainsi que sa capacité d&#39; adaptation pour les études in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1238">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:312px;">WB-F344 rat liver epithelial cells</td>
			<td style="width:217px;">From Drs. J. W. Grisham and M. S. Tsao of the University of North Carolina (Chapel Hill, NC)</td>
			<td style="width:279px;">none</td>
			<td style="width:431px;">Provided by Drs. J. W. Grisham and M. S. Tsao University of North Carolina-Chapel Hill-NC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">35 mm Culture Plates</td>
			<td style="width:217px;">Corning</td>
			<td style="width:279px;">430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">25 cm2 culture flasks</td>
			<td style="width:217px;">Corning</td>
			<td style="width:279px;">430639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">75 cm2 culture flasks</td>
			<td style="width:217px;">Corning</td>
			<td style="width:279px;">430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-medium, an Eagles modified medium&#160;</td>
			<td style="width:217px;">ThermoFisher/GIBCO&#160;</td>
			<td style="width:279px;">Formula No. 78-5470EF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:217px;">ThermoFisher/GIBCO&#160;</td>
			<td style="width:279px;">10437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td style="width:217px;">ThermoFisher/GIBCO&#160;</td>
			<td style="width:279px;">15050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:312px;">phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:217px;">homemade</td>
			<td style="width:279px;">see below for ingredient cat#&#39;s</td>
			<td>137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2PO4, 2 mM KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">KCl</td>
			<td style="width:217px;">JT Baker - Mallinckrodt&#160;</td>
			<td style="width:279px;">3040-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">NaCl</td>
			<td style="width:217px;">JT Baker - Mallinckrodt&#160;</td>
			<td style="width:279px;">3624-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:217px;">JT Baker - Mallinckrodt&#160;</td>
			<td style="width:279px;">3819--01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:217px;">JT Baker - Mallinckrodt&#160;</td>
			<td style="width:279px;">3246-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Lucifer Yellow CH, lithium salt</td>
			<td style="width:217px;">Sigma-Aldrich Chemical</td>
			<td style="width:279px;">L0259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">rhodamine-dextran</td>
			<td style="width:217px;">Sigma-Aldrich Chemical</td>
			<td style="width:279px;">R9379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">1-methylanthracene</td>
			<td style="width:217px;">Sigma-Aldrich Chemical</td>
			<td style="width:279px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">phenanthrene</td>
			<td style="width:217px;">Sigma-Aldrich Chemical</td>
			<td style="width:279px;">P11409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">resveratrol</td>
			<td style="width:217px;">Sigma-Aldrich Chemical</td>
			<td style="width:279px;">R5010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">D609</td>
			<td>Tocris Bioscience&#160;</td>
			<td style="width:279px;">1437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">acetonitril</td>
			<td>EMD</td>
			<td style="width:279px;">AX0145-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">37% solution formaldehyde</td>
			<td>JT Baker - Mallinckrodt&#160;</td>
			<td style="width:279px;">2106-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">#20 surgical blade</td>
			<td>Fine Science Tools Inc.&#160;</td>
			<td>10317-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">50 mL conical sterile tubes</td>
			<td>Thermo scientific&#160;</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nikon epifluorescence microscope&#160;</td>
			<td style="width:217px;">Nikon -Mager Scientific</td>
			<td style="width:279px;">Eclipse TE300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nikon FITC dichroic cube</td>
			<td style="width:217px;">Nikon -Mager Scientific</td>
			<td style="width:279px;">96107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;CCD camera&#160;</td>
			<td style="width:217px;">Nikon -Mager Scientific</td>
			<td style="width:279px;">Nikon Cool Snap EZ CCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;imaging system.</td>
			<td style="width:217px;">Nikon -Mager Scientific</td>
			<td>Nikon NIS-Elements F2.2 imaging system.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Image J</td>
			<td style="width:217px;">National Institute of Health</td>
			<td style="width:279px;">http://imagej.nih.gov/ij/</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gap junctional intercellular communication: a functional biomarker to assess adverse effects of toxicants and toxins, and health benefits of natural products

Ce protocole décrit un scalpel chargement fluorescent transfert de colorant par la technique (SL-DT) qui mesure la communication intercellulaire par des canaux de jonction d&#39;intervalle, ce qui est un processus important intercellulaire par lequel l&#39;homéostasie tissulaire est maintenue. Interruption de l&#39; écart de jonction communication intercellulaire (GJIC) par des substances toxiques, des toxines, des médicaments, etc. a été liée à de nombreux effets néfastes sur la santé. De nombreuses maladies génétiques humaines basée ont été liées à des mutations dans les gènes des jonctions lacunaires. La technique SL-DT est un test fonctionnel simple pour l&#39;évaluation simultanée de GJIC dans une grande population de cellules. L&#39;essai comprend des cellules de pré-chargement avec un colorant fluorescent en perturbant brièvement la membrane cellulaire avec une lame de scalpel, dans une population de cellules. Le colorant fluorescent est alors autorisé à traverser à travers des canaux de jonction à fente des cellules voisines pendant un temps désigné. L&#39;essai est ensuite terminée par l&#39;addition de formaline aux cellules. La propagation du fluocolorant rescent par une population de cellules est évaluée avec un microscope à épifluorescence et les images sont analysées avec un certain nombre de progiciels morphométriques qui sont disponibles, y compris les logiciels libres trouvés sur le domaine public. Ce test a également été adapté pour les études in vivo en utilisant des tranches de tissu à partir de divers organes des animaux traités. Dans l&#39; ensemble, le dosage SL-DT peut servir un large éventail de besoins pharmacologiques et toxicologiques in vitro, et peut être potentiellement adapté pour haut débit de mise en place des systèmes avec fluorescence automatisé d&#39; imagerie et d&#39; analyse au microscope pour élucider plusieurs échantillons dans un temps plus court.

Interruption de GJIC a été largement utilisé comme un biomarqueur pour identifier des composés toxiques au niveau épigénétique non génotoxique de contrôle du gène qui induit des effets néfastes sur la santé 14. Par exemple, les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) sont des contaminants omniprésents dans l&#39;environnement , mais varient dans leurs toxicités épigénétiques en fonction de leurs structures moléculaires 15. Les HAP de faible p...

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Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Ce protocole décrit un colorant technique de transfert de chargement fluorescent scalpel qui mesure la communication intercellulaire par les canaux des jonctions lacunaires. Gap communication intercellulaire jonctionnelle est un processus cellulaire majeur par lequel l&#39;homéostasie tissulaire est maintenue et la perturbation de cette signalisation cellulaire a des effets néfastes sur la santé.

Gap Junctional intercellulaire Communication: Un biomarqueur fonctionnelle pour évaluer les effets néfastes des substances toxiques et les toxines, et bienfaits pour la santé des produits naturels

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

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Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution

Utilisation non fixés, des tissus congelés pour étudier la distribution mucine naturel

Mucins are complex and heavily glycosylated O-linked glycoproteins, which contain more than 70% carbohydrate by weight1-3. Secreted mucins, produced by ...

Recherche

Biologie

A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide

Une analyse fonctionnelle pour les jonctions lacunaires examen; Électroporation des cellules adhérentes sur Indium Tin Oxide-

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. ...

Use of MALDI-TOF Mass Spectrometry and a Custom Database to Characterize Bacteria Indigenous to a Unique Cave Environment (Kartchner Caverns, AZ, USA)

Use of MALDI-TOF Mass Spectrometry and a Custom Database to Characterize Bacteria Indigenous to a Unique Cave Environment Kartchner Caverns, AZ, USA

L&#39;utilisation de MALDI-TOF spectrométrie de masse et une base de données personnalisée pour caractériser les bactéries indigènes à un environnement unique Cave (Kartchner, AZ, USA)

MALDI-TOF mass spectrometry has been shown to be a rapid and reliable tool for identification of bacteria at the genus and species, and in some cases, ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolement et analyse fonctionnelle des mitochondries de cellules cultivées et de tissus de souris

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

La quantification des cellules endothéliales adhésivité<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

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At-Risk Butterfly Captive Propagation Programs to Enhance Life History Knowledge and Effective Ex Situ Conservation Techniques

Programmes de propagation des papillons captifs à risque pour améliorer les connaissances sur l’histoire de la vie et les techniques efficaces de conservation Ex Situ

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Identification sur le terrain de Matricaria chamomilla à l’aide d’un système qPCR portable

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Profilage de la modification H3K4me3 dans les usines à l’aide du clivage sous cibles et de la marquage

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