Name: aggregate size optimization in microwells for suspension-based cardiac differentiation of human pluripotent stem cells
Uploaded: 2016-09-25T15:00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aggregate Size Optimization in Microwells for Suspension-based Cardiac Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

We thank Dr. Peter Zandstra, in whose laboratory this protocol was developed, and Drs. Mark Gagliardi and Gordon Keller who provided assistance in establishing the initial methods on which this process was based. Protocol development was supported by an Ontario Graduate Scholarship in Science and Technology to C.B. and a grant from the Heart and Stroke Foundation of Ontario to Peter Zandstra.

<ol>
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Bioeng. 102, 493-507 (2009).</li></ol>

M.U. has a financial interest in the underlying microwell technology.

多能性幹細胞の効率的な心臓分化は、高度に可変なプロセスであることが観察されています。それは、異なる細胞株は、特定の細胞型への分化能のために変化する傾向を示すことは驚くべきことではないが、心臓の分化効率がレプリケート間劇的に変動することが観察された同じ細胞株6を使用して実行されます。ここで説明するプロトコルは、直接の集約あたりの入力セルの数を制御することによって、この変動の一つの大きな源に対処しています。さらに実行の間のばらつきを低減するためには、単一細胞継代のために適合HPSC線が多能性マーカーの発現頻度（ 例えば 、あるOct4、Nanogのに対して、より一貫性の多能性集団におけるHPSCの拡大とメンテナンス結果のこの形として、使用することをお勧めしますTRA-1-60、 等 。）。 ここに書かれたようなプロトコルがoのために1,000細胞の凝集体サイズを指定しますHES-2胚性幹細胞株からptimal心臓誘導。異なる細胞株にこのプロトコルを適用するためには、初期の凝集体サイズ画面は細胞株特異的な最適な凝集体サイズを決定するために実行することが重要です。それがここで直接従うべき手順には影響しませんが、我々は、凝集体サイズと全体的な細胞密度の変化は酸素供給に影響を与えることが期待されている読者を思い出させます。これは、下流のアプリケーションでは、関連する考慮なることがあります。さらに、アポトーシス細胞死は、単一細胞にhPSCsの解離時の関心事です。したがって、ROCK阻害剤は、マイクロウェルで強制細胞凝集の間に存在していることを確実にするために重要です。最後に、分化の4日目に凝集体は十分に誘導2培地で再懸濁する前に、誘導1中に存在し、トレースアクチビンAを除去するために洗浄することが重要です。分化の4日後に、アクチビンAはメソを犠牲にして内胚葉分化を促進しますダーム誘導20。 この技術の主な用途は、効率的な心臓分化を促進集計サイズをスクリーニングすることです。しかし、現在の技術の限界の一つは、マイクロウェルプレートを使用して臨床的に関連するレベルまで心筋の生産をスケールするために挑戦していることです。心臓分化のスケールアップは、典型的には、撹拌懸濁バイオリアクター21内のバルク培養条件で行われます。マイクロシステムは、効率的な心臓の誘導のための凝集体の大きさの許容範囲を決定するために使用された後、そのため、スケールアップする次のステップは、所望の細胞の凝集体のサイズを生成することができるバイオリアクターインペラー速度を決定することです。 集合ベース心臓分化のための他の方法に対するこの技術の重要な違いの1つは、それが同様に凝集体における内因性シグナルの効果を調節するに直接調査を可能にすることです集計13でhPSCsと誘導性/抑制性の組織型の共培養。調査のこれらのタイプは、大規模な心臓の製造のプロセス開発を知らせることができます。

インビトロ細胞培養でモダリティの数で行うことができるが、典型的には二次元の接着条件またはより完全にインビボ系において要約三次元懸濁状態のいずれかで行われます。その結果、三次元組織構築物を生成するための強力な方法を開発するための研究の多くの分野における成長傾向があります。細胞型およびプロセスは支持細胞外マトリックス（ECM）表面との密着性の信号を必要とするシナリオでは、三次元培養は、細胞が上又はマトリックス1を支持する外因性で培養される足場構築物を介して有効にすることができます。支持マトリックスへの付着を必要としない細胞と処理は、主にまたは排他的に2,3（その後、独自の内因性行列を生成するために進むことができる）は、細胞の構成unscaffoldedシステムとして懸濁液中で実施することができます。ここでは、心臓分化oをするためのプロトコルを提示しますFヒト多能性幹細胞（hPSCs - 身体の任意の細胞型になることができる幹細胞、胚または他のソースからも）サイズ制御、均一、unscaffolded凝集体です。 懸濁凝集体としてhPSCsの分化は、ラン内および実行間の両方の凝集サイズの大きな変動に悩まされています。この変動は、細胞コロニーを機械的に分離することを含む一般的に、これらの凝集体を生成するために使用される方法の結果です。この変動性を低減するために、多くのアプローチは、凝集体あたりの細胞数、並びに凝集体直径及び均一性を制御するために使用されています。吊り5をドロップとしては、例えば、マイクロ遠心チューブ中の凝集体の形成4、または、微細は、その後、UまたはV底マルチウェルプレート7,8に懸濁液、または細胞の遠心分離に転送することができる2次元HPSCコロニー6を定義しました9。しかし、これらすべてのAPPRoachesは集計世代の彼らの低いスループットによって制限されています。まあベースのシステムでは、V底プレートシステムに同様のアプローチ、マイクロウェルのしかし小さいサイズを採用するだけでなく、単一の培養プレートから均一な凝集体の多数の生成を可能にする（このプロトコルで各400ミクロンの幅を有します）全体のV底プレート10から生成されるよりも（〜1200マイクロウェルを含む〜15.5ミリメートルの標準直径）。まあベースの凝集体形成は、外胚葉から11 hPSCsの分化、内胚葉12、中胚葉13および胚体外14運命を含む多くの設定で使用されてきました。間葉系幹細胞15からの軟骨形成;毒物学的スクリーニング16に対して均一な基質の生成;そして、メカノ17の調査。 HPSC由来cardiomの製造のための強固な製造プロトコルを開発する上での一つの大きな課題yocytesは、実行間の心臓分化効率の再現性の欠如となっています。我々は以前、この変動が自己複製hPSCsと内胚葉および神経分化6,18に関連した遺伝子を発現する分化する細胞の両方を含む開始HPSC集団に異質に帰することができることを実証しました。これらの分化する細胞によって分泌された信号は、心臓の誘導に影響を与えます。神経前駆細胞は、心臓の誘導を阻害しながら、具体的には、胚体外内胚葉は、心臓の誘導を促進します。 HPSC集約の際、集約分化中の細胞と未分化hPSCsは、骨材表面13上で開発胚体外胚葉細胞の層に囲まれているように整理します。凝集体サイズを制御することによって、我々は、未分化hPSCs（体積比表面積）に対する心臓誘導内胚葉細胞の比率を調節し、最大心臓誘導の13のために、この比を最適化することができます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="645">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Biological safety cabinet</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pipette aid</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">&#160;Serological pipettes (5 to 25 mL)&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Aspirator</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Aspirator or Pasteur pipettes</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;15 and 50 mL conical tubes</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fume hood</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.22 &#181;m syringe filter</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:216px;">5% CO2, 5% O2, and humidity controlled cell culture incubator&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Hypoxic (low oxygen) incubator</td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:216px;">5% CO2, 20% O2, and humidity controlled cell culture incubator&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Low speed centrifuge with a swinging bucket rotor fitted with a plate holder&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">P2, P20, P200, and P1000 micropipettors and associated tips&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Inverted microscope with 4X, 10X and 20X phase objectives&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ultra-Low Attachment (ULA) 24 well plates&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Corning/Costar</td>
			<td style="width:119px;">3473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bench-top microcentrifuge</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">L-Ascorbic Acid</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A4403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sterile Ultrapure distilled water</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">W3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ice</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">-20C freezer</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Monothioglycerol</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M6145</td>
			<td>Toxic; Aliquoting of MTG is strongly recommended to minimize oxidation due to repeated opening. Aliquots can be stored at 4 &#176;C for up to 3 months, -20 &#176;C is recommended for long-term storage.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">StemPro-34 Medium</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10639-011</td>
			<td>Basal Cardiac Induction Medium; The supplement is stored at -20 &#176;C and the basal medium at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Transferrin</td>
			<td style="width:143px;">Roche</td>
			<td>10652202001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">BMP-4</td>
			<td style="width:143px;">R&#38;D Technologies</td>
			<td style="width:119px;">314-BP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">bFGF</td>
			<td style="width:143px;">R&#38;D Technologies</td>
			<td style="width:119px;">233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">VEGF</td>
			<td style="width:143px;">R&#38;D Technologies</td>
			<td style="width:119px;">293-VE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Activin A</td>
			<td style="width:143px;">R&#38;D Technologies</td>
			<td style="width:119px;">338-AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">IWP-2</td>
			<td style="width:143px;">Reagents Direct</td>
			<td style="width:119px;">57-G89</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hydrochloric acid&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>258148</td>
			<td>Corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">DMEM/F-12</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">100X Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">100X L-glutamine</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">25030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Knockout Serum Replacement</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10828010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">TrypLE Select</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12563</td>
			<td>Dissociation enzyme</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Aggrewell 400 plates</td>
			<td style="width:143px;">StemCell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">27845</td>
			<td>Microwell Plates</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Aggrewell Rinsing Solution</td>
			<td style="width:143px;">StemCell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">7010</td>
			<td>Microwell Rinsing Solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Y-27632 ROCK Inhibitor</td>
			<td style="width:143px;">Tocris</td>
			<td style="width:119px;">1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Collagenase Type II</td>
			<td style="width:143px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6885&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hank&#39;s Balanced Salt Solution</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:143px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12483</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">96 well plate (for FACS staining)</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Intraprep Permeabilization Reagent</td>
			<td style="width:143px;">Beckman Coulter</td>
			<td>IM2389</td>
			<td>Kit with 2 parts: Fixation Solution and Permeabilization Solution; Toxic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cTnT antibody</td>
			<td>Neomarkers&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MS-295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">goat anti-mouse-IgG APC antibodyThermoFisher</td>
			<td style="width:143px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">A865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">5 mL round bottom flow cytometry tubes</td>
			<td style="width:143px;">FACS machine dependent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aggregate size optimization in microwells for suspension-based cardiac differentiation of human pluripotent stem cells

Cardiac differentiation of human pluripotent stems cells (hPSCs) is typically carried out in suspension cell aggregates. Conventional aggregate formation of hPSCs involves dissociating cell colonies into smaller clumps, with size control of the clumps crudely controlled by pipetting the cell suspension until the desired clump size is achieved. One of the main challenges of conventional aggregate-based cardiac differentiation of hPSCs is that culture heterogeneity and spatial disorganization lead to variable and inefficient cardiomyocyte yield. We and others have previously reported that human embryonic stem cell (hESC) aggregate size can be modulated to optimize cardiac induction efficiency. We have addressed this challenge by employing a scalable, microwell-based approach to control physical parameters of aggregate formation, specifically aggregate size and shape. The method we describe here consists of forced aggregation of defined hPSC numbers in microwells, and the subsequent culture of these aggregates in conditions that direct cardiac induction. This protocol can be readily scaled depending on the size and number of wells used. Using this method, we can consistently achieve culture outputs with cardiomyocyte frequencies greater than 70%.

hPSCsのサイズ制御の凝集体を効果的にのみ細胞の濃度およびマイクロウェルの表面積に依存する、マイクロシステムを用いて形成することができます。短い遠心分離後、細胞（このプロトコルで千）の適切な番号が各マイクロウェル（ 図1A）にまとめられます。重要なことは、これらの細胞は、24時間以内に細胞内の接続を再確立し、もはや十分に埋めるべきではありませんが、滑らかなエッジ（ 図1B）とコンパクトな集合体として表示されます。これらの凝集体は、心臓の運命に向かってさらなる分化のための出発材料を提供します。細胞が密なクラスターを形成しない場合、これは、解離および再凝集次可能細胞死を示唆し、そして特定の細胞株のための単一細胞継代及びROCK阻害剤濃度の適合性を検討すべきです。マイクロウェルの次の3日間は、集計モルフォはほとんど変化を示していますでれっと、いくつかの成長は明らかですが。マイクロウェルから除去した場合、凝集体は、そのラウンド、密集した形態を維持し、互いに（ 図1C）と同様のサイズのものでなければなりません。 ULA 24ウェルプレートでの培養は、細胞増殖及び成長を可能にします。 8日目では、最初のアクチビンシグナリング、およびWnt阻害に暴露した後、凝集体は大きく、明るく、凝集体（ 図1D）として表示されるようになります。この期間中、かなりの細胞破片は、各ウェルの底に明らかであろうし、凝集体がメディアを削除する前に解決することを可能にすることによって除去されなければなりません。時折、多くの凝集体が互いに融合します。これらの「スーパー凝集体は「小さい凝集体および完全な分化を受ける可能性は低いと見られる形態学的変化を示さない傾向があるが、これは、十分に他の凝集体の分化を阻害しません。 大型化と組織化繊維状の領域の外観を持つ集合体に顕著な形態学的変化に= &quot;1&quot;&gt;続き分化結果-together.withinページを保つ：FO」jove_content」。日12で、収縮凝集を観察することができます。これらは常に大きな透明の細胞で構成され、多くの場合、骨材（ 図2）の外側に広範囲の細胞外マトリックスを含むことになります。集合全体の収縮が成功した分化を示し、一方、心臓マーカーの発現はまた、収縮していないようで凝集体で観察することができます。凝集体および免疫標識の解離に続いて、細胞の大部分は、フローサイトメトリーによる心筋マーカーのcTnT（ 図3）について陽性となります。このマーカーの発現は、細胞中で安定しておりとして後期分化の19日目のように、凝集体において観察されてもよいです。 1.JPG &quot;/&gt; 図1：HPSCのタイムラインは、心臓の運命に向かって分化した直後に集約した後、細胞はほぼ各マイクロウェル（A）を満たします。 1日後、凝集体が凝縮表示され、（B）を滑らかに。この形態は、凝集体がマイクロウェルから除去し、ウェルプレート（C）に播種した場合でも持続します。 8日目では、凝集体が拡大し始め、色（D）で明るく見えます。スケールバー：250μmで<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54308/54308fig1large.jpg" target="_blank">、この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54308/54308fig2.jpg" /> 図2：凝集体は、トップパネル（強制的な集合体全体の収縮が観察された、心臓誘導ステージ3培地中で6日後に分化の12日目により締約開始 ：リラックスエーション、中央のパネル：収縮）。下のパネルは、黒または白（矢じり）として表示される最も重要な違いは、上部と中央のパネルを引いから誘導されます。スケールバー：250μmで<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54308/54308fig2large.jpg" target="_blank">、この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/54308/54308fig3.jpg" /> 図3：17日目差別hPSCsにおける心筋トロポニンTのための免疫標識 、細胞のほとんどは、フローサイトメトリー（充填されたヒストグラム）によって心筋トロポニンT陽性です。また、二次抗体単独（塗りつぶされていないヒストグラム）で染色した細胞が示されている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54308/54308fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a>

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Aggregate Size Optimization in Microwells for Suspension-based Cardiac Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells

ヒト多能性のサスペンション集計ベースの心臓分化を開始する従来の方法は、細胞（hPSCs）は凝集体の大きさや形状に関して培養異質で悩まされている茎。ここでは、サイズ制御HPSCは心臓の促進条件下で培養された凝集体を生成するためにマイクロウェルを用いた心臓分化のための堅牢な方法を説明します。

ヒト多能性幹細胞の懸濁液ベースの心臓分化のためのマイクロウェル中の凝集体サイズの最適化

Cardiac differentiation of human pluripotent stems cells (hPSCs) is typically carried out in suspension cell aggregates.  Conventional aggregate formation ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Stencil Micropatterning of Human Pluripotent Stem Cells for Probing Spatial Organization of Differentiation Fates

分化運命の空間組織を探るためのヒト多能性幹細胞のステンシルマイクロパターニング

Human pluripotent stem cells (hPSCs), including embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells, have the intrinsic ability to differentiate into ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

再現性の高い小分子ベースの分化プロトコルを使用したヒト多能性幹細胞から心筋細胞の大規模生産

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Rapid Neuronal Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells for Measuring Network Activity on Micro-electrode Arrays

マイクロ電極アレイ上のネットワーク・アクティビティを測定するための人工多能性幹細胞の急速な神経分化

Neurons derived from human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) provide a promising new tool for studying neurological disorders. In the past decade, ...

Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Cells for Myocardial Repair

多能性幹細胞は、心筋の修復のための心臓細胞を派生します

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) must be fully differentiated into specific cell types before administration, but conventional protocols for ...

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

ひと多能性幹細胞からプリミティブかつ決定的な造血前駆細胞の分化を監督

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

ヒト多能性幹細胞のin vitro分化における絨毛細胞へ

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

人間の胚または誘導多能性幹細胞からの網膜色素上皮細胞の急速な監督の分化

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

ヒト多能性幹細胞の肝細胞への効率的な分化

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

体節誘導体誘導される人間からの体外世代多能性幹細胞します。

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Hemogenic Endothelium Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells in A Feeder- and Xeno-free Defined Condition

フィーダーとゼノフリーの定義条件におけるヒト多能性幹細胞からの血原性内皮分化

Deriving functional hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) from human pluripotent stem cells (PSCs) have been an elusive goal for autologous ...