Name: comparison of tobacco host cell protein removal methods by blanching intact plants or by heat treatment of extracts
Uploaded: 2016-08-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts at JoVE.com

We would like to acknowledge Dr. Thomas Rademacher, Alexander Boes and Veronique Bei&#223; for providing the transgenic tobacco seeds, and Ibrahim Al Amedi for cultivating the tobacco plants. The authors wish to thank Dr. Richard M. Twyman for editorial assistance as well as G&#252;ven Edg&#252; for providing the MSP1-19 reference. This work was funded in part by the European Research Council Advanced Grant ''Future-Pharma'', proposal number 269110, the Fraunhofer-Zukunftsstiftung (Fraunhofer Future Foundation) and Fraunhofer-Gesellschaft Internal Programs under Grant No. Attract 125-600164.

1. Pflegen Sie die Tabakpflanzen <ol><li> Schreibt jede Mineralwolle-Block mit 1 bis 2 l entionisiertem Wasser und anschließend mit 1 l von 0,1% [w / v] Düngemittellösung. Legen Sie einen Tabaksamen in jedem Block aus Mineralwolle und sanft bündig mit 0,25 l Düngerlösung ohne den Samen 16 Waschen entfernt. </li><li> Pflegen Sie die Tabakpflanzen für 7 Wochen in einem Gewächshaus mit 70% relativer Luftfeuchtigkeit, eine 16 Stunden Photoperiode (180 &amp; mgr; mol sec - 1 m ...

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	<li>PhRMA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 2013 Report: Medicines in Development - Biologics. , (2013).</li><li>Buyel, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+development+strategies+in+plant+molecular+farming.">Process development strategies in plant molecular farming.</a> Curr. Pharm. Biotechnol. 16, 966-982 (2015).</li><li>Stoger, E., Fischer, R., Moloney, M., Ma, J. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+molecular+pharming+for+the+treatment+of+chronic+and+infectious+diseases.">Plant molecular pharming for the treatment of chronic and infectious diseases.</a> Annu. Rev. 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F., Fischer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flocculation+increases+the+efficacy+of+depth+filtration+during+the+downstream+processing+of+recombinant+pharmaceutical+proteins+produced+in+tobacco.">Flocculation increases the efficacy of depth filtration during the downstream processing of recombinant pharmaceutical proteins produced in tobacco.</a> Plant Biotechnol. J. 12, 240-252 (2014).</li><li>Buyel, J. F., Opdensteinen, P., Fischer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellulose-based+filter+aids+increase+the+capacity+of+depth+filters+during+the+downstream+processing+of+plant-derived+biopharmaceutical+proteins.">Cellulose-based filter aids increase the capacity of depth filters during the downstream processing of plant-derived biopharmaceutical proteins.</a> Biotechnol. 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F., Fischer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+complex+systems+using+the+design+of+experiments+approach:+transient+protein+expression+in+tobacco+as+a+case+study.">Characterization of complex systems using the design of experiments approach: transient protein expression in tobacco as a case study.</a> J. Vis. Exp. , e51216 (2014).</li><li>Buyel, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procedure+to+evaluate+the+efficiency+of+flocculants+for+the+removal+of+dispersed+particles+from+plant+extracts.">Procedure to evaluate the efficiency of flocculants for the removal of dispersed particles from plant extracts.</a> J. Vis. Exp. , e53940 (2016).</li><li>Simonian, M. H., Smith, J. 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Characterization of the insolubilization of the interferon-induced p68 kinase.</a> J. Biol. Chem. 266, 9707-9711 (1991).</li></ol>

Die drei Verfahren zur Hitzefällung oben beschrieben , kann effektiv Tabak HCP vor jeder chromatographischen Reinigungsschritt 16,17 entfernen. Sie ergänzen andere Strategien , die anfängliche Produktreinheit zu erhöhen zielen darauf ab , zum Beispiel Guttation 29, rhizosecretion 30 oder Zentrifugalextraktion 31,32, die alle auf sekretierte Proteine ​​beschränkt sind. Jedoch können die Wärmebasierte Verfahren nur dann sinnvoll genutzt werden, wenn das Zielp...

Moderne Gesundheitssysteme zunehmend von biopharmazeutischen Proteinen 1. Herstellung dieser Proteine ​​in Pflanzen ist vorteilhaft , aufgrund der geringen pathogen Belastung und höhere Skalierbarkeit im Vergleich zu herkömmlichen Expressionssysteme 2-4. Allerdings ist die Downstream-Processing (DSP) von pflanzlichen Arzneimitteln kann eine Herausforderung sein, weil die störenden Extraktionsverfahren in einer hohen Partikelbelastung zur Folge haben, mit Trübungen von mehr als 5.000 nephelometrischen Trübungseinheiten (NTU) und Wirtszellprotein (HCP) Konzentrationen oft 95 überschreitet % [m / m] 5,6. Aufwendige Klärungsverfahren sind erforderlich , um dispergierte Teilchen zu entfernen 7-9, aber Chromatographie Ausrüstung ist weniger teuer in bind-and-eluieren Modus während der anfänglichen Produktgewinnung zu betreiben , wenn ein früherer Schritt für die effiziente Entfernung von HCPs 10,11 ist. Dies kann entweder erreicht werden, indem das Zielproteinfällungs floccul VerwendungAmeisen 12 oder niedrigen pH 13,14 sowie durch die HCPs zu aggregieren verursacht. Die selektive Aggregation von Ribulose-1,5-bisphosphat - Carboxylase / Oxygenase (RuBisCO), das am reichlichsten vorhandene HCP in grünen Pflanzen wie Tabak (Nicotiana tabacum), kann durch Zugabe von Polyethylenglykol 15 gefördert werden, dies ist jedoch teuer und nicht mit großer -Skala Fertigung. Wärmebehandlung wurde mehr als 95% des Tabaks HCPs gezeigt zu denaturieren und auszufällen, während Protein Malaria - Impfstoffkandidaten wie Vax8 stabil bleiben in Lösung 16-18. Drei verschiedene Ansätze wurden verwendet , um die wärmeinduzierte Ausfällung von Tabak HCPs zu erreichen: (i) blanchiert, das heißt das Eintauchen von intakten Blättern in heiße Flüssigkeit, (ii) ein temperaturgesteuertes Gefäß gerührt, und (iii) einen Wärmetauscher ( Abbildung 1) 16. Für intakte Blätter, Blanchieren der eine schnelle und effiziente Fällung von HCP erreicht und war auch leichtFertigungsprozesse zu skalieren und kompatibel mit bestehenden großen , die einen ersten Schritt umfassen 19 die pflanzliche Biomasse zu waschen. Im Gegensatz dazu, temperaturgeregelten Behälter sind bereits in einigen Prozessen zur Verfügung und kann für die thermische Behandlung von Pflanzen 20 extrahiert verwendet werden, aber ihre Skalierbarkeit und Energieübertragungsrate begrenzt , weil die Oberfläche-zu-Volumen - Verhältnis der Tanks schrittweise verringert wird und wird im Prozessmaßstab ungeeignet. Ein Wärmetauscher ist ein technisch gut definierte alternative Rührkessel zu erwärmenden erfordert aber eine reichliche Zufuhr von Heiz- und Kühlmedien, beispielsweise Dampf und kaltem Wasser sowie eine streng kontrollierten Volumenstrom, der zu dem Wärmetauscher Geometrie angepasst ist , und Medieneigenschaften, z. B. die spezifische Wärmekapazität. Dieser Artikel zeigt, wie alle drei Methoden können für die wärmeinduzierte Ausfällung von Tabak Vertreter des Gesundheitswesens und Pflanzen Vertreter des Gesundheitswesens im Allgemeinen verwendet werden. Die Errichtung und der Betrieb von each Methode in einer Laborumgebung kann verwendet werden, um ihre Eignung Prozesse für größere zu bewerten. Die große Herausforderung ist für jede Operation, die die Geräte und Bedingungen in angemessenem Umfang verkleinerten Modellen und Betriebsbedingungen zu identifizieren, während im Prozessmaßstab Herstellung verwendeten ähneln. Die hier präsentierten Daten beziehen sich auf Versuche mit transgenen Tabakpflanzen durchgeführt DsRed die Malaria - Impfstoffkandidaten Vax8 und fluoreszierende Protein exprimieren , 16, aber das Verfahren auch auf N. erfolgreich angewandt wurde benthamiana Pflanzen transient exprimieren andere biopharmazeutische Proteine ​​21. Ein Design-of-Experiments (DoE) Ansatz 22 kann die Prozessentwicklung zu erleichtern, und Flockungsmittel 23 in diesem Zusammenhang auch von Vorteil sein kann , wie zuvor 8 beschrieben. Der wesentliche Unterschied zwischen dem Bleichen, dem beheizten Behältern und Wärmetauscher ist, dass Abblassen auf intakte Blätter früh in den Prozess während der ot angewendet wirdihr sind Pflanzenextrakte (Abbildung 1) aufgebracht. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/54343/54343fig1.jpg" /> Abb . 1: Fließschema Prozess zeigt die Umsetzung der drei verschiedene Methoden zur Tabak HCP Wärme Precipitation Das Pflanzenmaterial wird gewaschen und homogenisiert vor Klärung und Reinigung. Die Ausrüstung für die Blanchierschritt (rot) leicht an die vorhandenen Maschinen hinzugefügt werden. Im Gegensatz dazu ist ein Rührkessel (orange) mit und insbesondere einen Wärmetauscher (blau) erfordert eine oder mehrere zusätzliche Geräte und Schläuche. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54343/54343fig1large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54343/54343fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1026">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">2100P Portable Turbidimeter</td>
			<td style="width:195px;">Hach</td>
			<td style="width:119px;">4650000</td>
			<td style="width:352px;">Turbidimeter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Amine Coupling Kit</td>
			<td style="width:195px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">BR100050&#160;</td>
			<td>SPR chip coupling kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Autoclaving basket</td>
			<td style="width:195px;">Nalgene</td>
			<td style="width:119px;">6917-0230</td>
			<td>Basket for leaf blanching</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Biacore T200</td>
			<td style="width:195px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">28-9750-01</td>
			<td>SPR device</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Bio Cell Analyser BCA 003 R&#38;D with 3D ORM</td>
			<td style="width:195px;">Sequip</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>Particle size analyzer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Blender</td>
			<td style="width:195px;">Waring</td>
			<td style="width:119px;">800EG</td>
			<td>Blender</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">BP-410</td>
			<td style="width:195px;">Furh</td>
			<td style="width:119px;">2632410001</td>
			<td>Bag filter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Centrifuge 5415D</td>
			<td style="width:195px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5424 000.410</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Centrifuge tube 15 mL</td>
			<td style="width:195px;">Labomedic</td>
			<td style="width:119px;">2017106</td>
			<td>Reaction tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Centrifuge tube 50 mL self-standing</td>
			<td style="width:195px;">Labomedic</td>
			<td style="width:119px;">1110504</td>
			<td>Reaction tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">CM5 chip</td>
			<td style="width:195px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">BR100012&#160;</td>
			<td>Chip for SPR measurements</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Cuvette 10x10x45</td>
			<td style="width:195px;">Sarsted</td>
			<td style="width:119px;">67.754</td>
			<td>Cuvette for Zetasizer Nano ZS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Design-Expert(R) 8</td>
			<td style="width:195px;">Stat-Ease, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>DoE software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Disodium phosphate</td>
			<td style="width:195px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:119px;">&#160;4984.3&#160;</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Ferty 2 Mega</td>
			<td style="width:195px;">Kammlott</td>
			<td style="width:119px;">5.220072</td>
			<td>Fertilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Forma -86C ULT freezer</td>
			<td style="width:195px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">88400</td>
			<td>Freezer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Greenhouse</td>
			<td style="width:195px;">n.a.</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>For plant cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Grodan Rockwool Cubes 10x10cm</td>
			<td style="width:195px;">Grodan</td>
			<td style="width:119px;">102446</td>
			<td>Rockwool block</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Twentey-loop heat exchanger (4.8 m length)</td>
			<td style="width:195px;">n.a. (custom design)</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>Heat exchanger</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">HEPES</td>
			<td style="width:195px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:119px;">9105.3</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">K200P 60D</td>
			<td style="width:195px;">Pall</td>
			<td style="width:119px;">5302303</td>
			<td>Depth filter layer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">KS50P 60D</td>
			<td style="width:195px;">Pall</td>
			<td style="width:119px;">B12486</td>
			<td>Depth filter layer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Lauda E300</td>
			<td style="width:195px;">Lauda Dr Wobser GmbH</td>
			<td style="width:119px;">Z90010</td>
			<td>Water bath thermostat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">L/S 24</td>
			<td style="width:195px;">Masterflex</td>
			<td style="width:119px;">SN-06508-24</td>
			<td>Tubing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:360px;">mAb 5.2</td>
			<td style="width:195px;">American Type Culture Collection</td>
			<td style="width:119px;">HB-9148</td>
			<td>Vax8 specific antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Masterflex L/S</td>
			<td style="width:195px;">Masterflex</td>
			<td style="width:119px;">HV-77921-75</td>
			<td>Peristaltic pump</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Miracloth</td>
			<td style="width:195px;">Labomedic</td>
			<td style="width:119px;">475855-1R</td>
			<td>Filter cloth</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">MultiLine Multi 3410 IDS</td>
			<td style="width:195px;">WTW</td>
			<td style="width:119px;">WTW_2020</td>
			<td>pH meter / conductivity meter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Osram cool white 36 W</td>
			<td style="width:195px;">Osram</td>
			<td style="width:119px;">4930440</td>
			<td>Light source</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Phytotron</td>
			<td style="width:195px;">Ilka Zell</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>For plant cultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Sodium disulfit</td>
			<td style="width:195px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:119px;">8554.1</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:195px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:119px;">P029.2</td>
			<td>Media component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:360px;">Stainless-steel vessel; 0.7-kg 2.0-L; height 180 mm; diameter 120 mm</td>
			<td style="width:195px;">n.a. (custom design)</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>Container for heat precipitation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Synergy HT</td>
			<td style="width:195px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;">SIAFRT</td>
			<td>Fluorescence and spectrometric plate reader</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">VelaPad 60</td>
			<td style="width:195px;">Pall</td>
			<td style="width:119px;">VP60G03KNH4</td>
			<td>Filter housing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Zetasizer Nano ZS</td>
			<td style="width:195px;">Malvern</td>
			<td style="width:119px;">ZEN3600</td>
			<td>DLS particle size distribution measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:360px;">Zetasizer Software v7.11</td>
			<td style="width:195px;">Malvern</td>
			<td style="width:119px;">n.a.</td>
			<td>Software to operate the Zetasizer Nano ZS device</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

comparison of tobacco host cell protein removal methods by blanching intact plants or by heat treatment of extracts

Pflanzen bieten nicht nur Nahrung, Futter und Rohstoffen für Menschen, sondern auch als wirtschaftliche Produktionssystem für biopharmazeutischer Proteine, wie Antikörper, Impfstoffe und Enzymen entwickelt. Diese müssen von der pflanzlichen Biomasse gereinigt werden, sondern Chromatographieschritte werden durch die hohen Konzentrationen von Wirtszellproteinen (HCPs) in Pflanzenextrakten behindert. Jedoch aggregieren meisten HCPs irreversibel bei Temperaturen über 60 ° C erleichtert die anschließende Reinigung des Zielproteins. Hier werden drei Methoden vorgestellt, die Wärme Ausfällung von Tabak HCP entweder in intakten Blättern oder Extrakte zu erzielen. Das Blanchieren von intakten Blättern kann leicht in bestehende Prozesse integriert werden, aber negative Auswirkungen auf die nachfolgende Filtrationsschritte haben können. Das Gegenteil ist für die Wärme Ausfällung von Blattextrakten in einem Rührkessel wahr, der die Performance des Downstream-Aktivitäten, wenn auch mit großen Veränderungen in Prozessanlagen Design verbessern können, wie zum BeispielHomogenisator Geometrie. Schließlich wird ein Wärmetauscher-Setup auch im Hinblick auf die Wärmeübergangsbedingungen und leicht zu Skala gekennzeichnet, aber die Reinigung kann schwierig sein, und es kann einen negativen Einfluss auf die Filterkapazität sein. Das Design-of-Experimente Ansatz können die meisten relevanten Prozessparameter beeinflussen HCP Entfernung und Produktgewinnung zu identifizieren. Dies erleichtert die Anwendung der einzelnen Methoden in andere Expressionsplattformen und die Identifizierung der am besten geeignete Methode für eine gegebene Reinigungsstrategie.

Wärme Fällung von Tabakwirtszellproteine ​​durch blanchiert Die blanchiert Verfahren in Abschnitt 2 beschrieben, wurde erfolgreich verwendet HCP auszufällen von Tabak mit 70 ° C verlässt, um 96 ± 1% des TSP reduziert (n = 3) während der Genesung zu 51% des Vax8 Zielproteins auf, damit seine zunehmende Reinheit von 0,1% bis 1,2% vor der chromatographischen Trennung 16. Es war auch möglich, 83 ± 1% wiederherzustellen (n = 3) des fluoreszierenden Prot...

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Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts

Drei Wärmefällungsverfahren vorgestellt werden, die effektiv mehr als 90% der Wirtszellproteine ​​(HCP) von Tabak entfernen Extrakte vor jeder anderen Reinigungsschritt. Die Anlage HCPs aggregieren irreversibel bei Temperaturen über 60 ° C.

Vergleich von Tabakwirtszellprotein Abbaumethoden von Intact Pflanzen oder Blanchieren durch Wärmebehandlung von Extrakten

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Vorbereitung und Fraktionierung von Xenopus laevis Egg Auszüge

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Forschung

Biologie

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

Erkennung von Post-translationale Modifikationen auf Native Intact Nukleosomen mittels ELISA

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

Die MultiBac Protein Complex Produktion Platform am EMBL

Proteomics  research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in  unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Protein-Protein-Wechselwirkungen durch Bimolekulare Fluoreszenz-Komplementation in Tabak-Protoplasten-und Blätter-Visualisierte

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Fecal Glucocorticoid-Analyse: Nicht-invasive Monitoring-Adrenal in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

DamID-seq: Genome-wide Mapping of Protein-DNA Interactions by High Throughput Sequencing of Adenine-methylated DNA Fragments

DAMiD-seq: Genomweite Mapping von Protein-DNA-Wechselwirkungen von Hochdurchsatz-Sequenzierung von Adenin-methylierten DNA-Fragmenten

The DNA adenine methyltransferase identification (DamID) assay is a powerful method to detect protein-DNA interactions both locally and genome-wide. It is ...

Procedure to Evaluate the Efficiency of Flocculants for the Removal of Dispersed Particles from Plant Extracts

Vorgehensweise Um die Effizienz von Flockungsmittel für die Beseitigung von Dispersed Partikel aus Pflanzenextrakten zur Bewertung

Plants are important to humans not only because they provide commodities such as food, feed and raw materials, but increasingly because they can be used ...

Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines

Vergleich von drei verschiedenen Methoden zur Bestimmung Zellproliferation in Brustkrebs-Zelllinien

Measuring cell proliferation can be performed by a number of different methods, each with varying levels of sensitivity, reproducibility and compatibility ...

Xenopus Oocytes: Optimized Methods for Microinjection, Removal of Follicular Cell Layers, and Fast Solution Changes in Electrophysiological Experiments

Xenopus Oocytes: Optimized Methods for Microinjection, Removal of Follicular Cell Layers, and Fast Solution Changes in Electrophysiological Experiments

Xenopus Oozyten: Optimierte Methoden für die Mikroinjektion, Entfernen von Follicular Zellschichten und schnelle Lösung Änderungen in elektrophysiologischen Experimenten

The Xenopus oocyte as a heterologous expression system for proteins, was first described by Gurdon et al.1 and has been widely used since its discovery ...