Name: transplantation into the mouse ovarian fat pad
Uploaded: 2016-09-07T14:00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad at JoVE.com

ברצוננו להודות לד&quot;ר אנדרו ק גודווין, מהמרכז הרפואי של אוניברסיטת קנזס, למתן תאים אנושיים HIO118. מחקרים אלה נתמכו על ידי תרומות של תוכנית תא גזע ניו יורק (NYSTEM; T028095) ו המכונים הלאומיים מכון בריאות / הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם (P50HD076210) כדי AFN, ועל ידי מענקי NYSTEM (C028125, C024174 ו T028095), National Institutes of מכון הסרטן בריאות / לאומי (CA182413) וקרן מחקר סרטן השחלות (327,516) כדי AYN.

<ol>
	<li>Deome, K. B., Faulkin, L. J., Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice.">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li><li>Proia, D. A., Kuperwasser, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+human+mammary+tissues+in+a+mouse+model.">Reconstruction of human mammary tissues in a mouse model.</a> Nature protocols. 1, 206-214 (2006).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439, 84-88 (2006).</li><li>Stingl, J., Caldas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+heterogeneity+of+breast+carcinomas+and+the+cancer+stem+cell+hypothesis.">Molecular heterogeneity of breast carcinomas and the cancer stem cell hypothesis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 791-799 (2007).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA(H1047R)+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA(H1047R) induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525, 114-118 (2015).</li><li>Nikitin, A. Y., Nafus, M. G., Zhou, Z., Liao, C. -. P., Roy-Burman, P., Bagley, R. G., Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostate+stem+cells+and+cancer+in+animals.">Prostate stem cells and cancer in animals.</a> Stem Cells and Cancer. , 199-216 (2009).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160, 324-338 (2015).</li><li>Lu, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+stem+cell+populations+in+sweat+glands+and+ducts+reveals+roles+in+homeostasis+and+wound+repair.">Identification of stem cell populations in sweat glands and ducts reveals roles in homeostasis and wound repair.</a> Cell. 150, 136-150 (2012).</li><li>Flesken-Nikitin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium+at+the+junction+area+contains+a+cancer-prone+stem+cell+niche.">Ovarian surface epithelium at the junction area contains a cancer-prone stem cell niche.</a> Nature. 495, 241-245 (2013).</li><li>Orsulic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ovarian+cancer+by+defined+multiple+genetic+changes+in+a+mouse+model+system.">Induction of ovarian cancer by defined multiple genetic changes in a mouse model system.</a> Cancer Cell. 1, 53-62 (2002).</li><li>Dawes, J., Liu, B., Mars, W., Michalopoulos, G., Khillan, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+ovarian+transplants+to+rescue+a+transgenic+line+of+mice.">Multiple ovarian transplants to rescue a transgenic line of mice.</a> Lab Anim (NY). 39, 191-193 (2010).</li><li>Cordero, A. B., Kwon, Y., Hua, X., Godwin, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+and+therapeutic+treatments+in+an+orthotopic+mouse+model+of+ovarian+cancer.">In vivo imaging and therapeutic treatments in an orthotopic mouse model of ovarian cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li><li>Albihn, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+capsular+material+by+equine+trophoblast+transplanted+into+immunodeficient+mice.">Production of capsular material by equine trophoblast transplanted into immunodeficient mice.</a> Reproduction. 125, 855-863 (2003).</li><li>Muthusamy, N., Vijayakumar, A., Cheng, G., Ghashghaei, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+knock-in+Foxj1(CreERT2::GFP)+mouse+for+recombination+in+epithelial+cells+with+motile+cilia.">A knock-in Foxj1(CreERT2::GFP) mouse for recombination in epithelial cells with motile cilia.</a> Genesis. 52, 350-358 (2014).</li><li>Perets, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transformation+of+the+fallopian+tube+secretory+epithelium+leads+to+high-grade+serous+ovarian+cancer+in+Brca;Tp53;Pten+models.">Transformation of the fallopian tube secretory epithelium leads to high-grade serous ovarian cancer in Brca;Tp53;Pten models.</a> Cancer Cell. 24, 751-765 (2013).</li><li>Capo-Chichi, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+alterations+of+the+extracellular+environment+of+ovarian+surface+epithelial+cells+in+premalignant+transformation,+tumorigenicity,+and+metastasis.">Dynamic alterations of the extracellular environment of ovarian surface epithelial cells in premalignant transformation, tumorigenicity, and metastasis.</a> Cancer. 95, 1802-1815 (2002).</li><li>Roland, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+surface+and+cyst+epithelial+basement+membranes+and+preneoplastic+morphologic+changes+in+prophylactic+oophorectomies.">Loss of surface and cyst epithelial basement membranes and preneoplastic morphologic changes in prophylactic oophorectomies.</a> Cancer. 98, 2607-2623 (2003).</li><li>Flesken-Nikitin, A., Odai-Afotey, A. A., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+stem+cell+niche+in+the+pathogenesis+of+epithelial+ovarian+cancers.">Role of the stem cell niche in the pathogenesis of epithelial ovarian cancers.</a> Mol Cell Oncol. 1, 963435 (2014).</li><li>Ng, A., Barker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovary+and+fimbrial+stem+cells:+biology,+niche+and+cancer+origins.">Ovary and fimbrial stem cells: biology, niche and cancer origins.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16, 625-638 (2015).</li><li>Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+of+origin+in+cancer.">Cells of origin in cancer.</a> Nature. 469, 314-322 (2011).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2015.">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).</li><li>Williams, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+high-resolution+imaging+of+epithelial+ovarian+cancer+by+laparoscopic+nonlinear+microscopy.">Strategies for high-resolution imaging of epithelial ovarian cancer by laparoscopic nonlinear microscopy.</a> Transl Oncol. 3, 181-194 (2010).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

הקמנו assay השתלת כרית שומן השחלות המאפשרת משלוח וזיהוי מדויק של תאים ורקמות האפיתל. הליך השתלת assay כרית שומן השחלות הוא פחות מאתגר מבחינה טכנית מאשר זריקת intrabursal 10-12 ומאפשר אחידים יותר ומיקום מדויק של תאים מושתלים לעומת הזרקת intraperitoneal 9. כמו כן הוא מתאים היטב להשתלה לטווח ארוך של איבר שלם, כגון צינור הרחם. חשוב לציין, כרית שומן השחלות מספק microenvironment מוכר epithelia של מערכת הרבייה הנשית. זה צריך להיות מתאים במיוחד עבור מחקרים של המאפיינים המולקולריים התאיים של שחלות אדם ועכבר ותאים אפיתל תובל במהלך רגנרציה, שינוי ממאיר. בניגוד לאיברים אחרים, כמה מחקרים התמקדו זיהוי ואפיון של תאי גזע האפיטל של r הנקבהeproductive בדרך 18,19. מחקרים כאלה הם בעלי חשיבות מיוחדת בגלל סרטן רבים הם האמינו מקורן בתאי גזע בוגרים 20. עם זאת מקור תאי של סרטן שחלות אפיתל להישאר מאוד במחלוקת 18. סרטן השחלות אפיתל להסביר את רוב מקרי סרטן השחלות והיא נמצאת במקום ה -5 בין כל מקרי המוות הקשורים לסרטן של נשים בארצות הברית 21. לכן פיתוח של assay orthotopic עם מספר יתרונות על פני שיטות ההשתלה קיימת 9-12 אמור להקל מאוד מחקרים בתחום זה. בהתחשב במיקום השטחי של כרית שומן שחלות, מערכות הדמית חיה קטנות שניתן להשתמש בם כדי לעקוב אחר engraftments שכותרתו עם פלורסנט החזק או כתבי bioluminescent. זה גם צריך להיות אפשרי להקים מבחני הדמיה לחיות פולשנית ברזולוציה גבוהה, כגון מיקרוסקופיה שאינו ליניארי 22. כרית שומן השחלות יכול גם להיות כל הזמן בתרבויות איברים, ובכך לאפשרing תרבות תלת מימדי של אפיתלים נורמלי נאופלסטיות בתנאים מקרוב משחזרת הארגון של תאים הבין-תאי. מחקרים עתידיים צריכים להתייחס האפשרויות המבטיחות הללו. יש שלבים קריטיים כמה שיש לקחת בחשבון. מתן כרית חימום ושמירת מכרסמים חמים במהלך הניתוח משפרת את שיעור ההישרדות מאוד. עקרות של מכשירי טיפול כרית השומן מבטיחות כי מערכות engrafted נשמרות סטרילי. מניסיוננו, תוצאות דימום משמעותי בגדילה של השתלות. חשוב לציין, חתך כרית השומן צריך להיעשות דווקא משום קורע כרית השומן או תיקבו אותו דרך גורמי דימום. יש להשתמש מקריש כדי לעצור את הדימום לפי הצורך. אם engraftments אינם מפתחים, ריכוז גבוה יותר של התאים מוזרקים צריך להיחשב. בצמחים המוצלחים הראשונים ניתן להבחין מוקדם ככל שבוע לאחר ההשתלה ורוב engraftments צריך להיות אחד גלויחודש לאחר ההליך. להשתלה, מחטים עם קוטר גדול יותר (23-25 ​​G) יכולות לשמש כדי למנוע מריחה של תאים גדולים (מעל 10 מיקרומטר קוטר). עם זאת, מחטים כאלה עשויות להיות יותר טראומטיות כרית השומן והשימוש בם צריך להיבדק מראש. בניסויים שלנו השתמשנו עכברים תורמים ומקבל ישנים 6 עד 8 בשבוע. עבור שתי המטרות עכברים צעירים או מבוגרים יכולים לשמש. עם זאת, מספר תאים המוזרקים ייתכן שיהיה צורך מותאם. הגודל הקטן יותר של רפידות שומן השחלות תורמות צעיר גם צריך להיחשב. כמו עם כל שיטות, ישנן מספר מגבלות של assay השתלת כרית שומן עכבר שחלות. למרות עכברים חיסוניים מוסמכת syngeneic יכולים לשמש תאים / רקמות עיקריות בעכברים, הטכניקה שלנו דורשת NSG או עכברי SCID להשתלה של חומר אנושי. סביר להניח שאפשר להאניש את כרית השומן כדי לתמוך בצמיחה של תאי אפיתל אנושיים. עם זאת, אנחנו עדיין לא נבחנו גישה זו עדיין. שימוש צעיר Feזכרים עשויים להוביל לעלויות גידול נמוכות; יש עם זאת, עכברות שלא הרו בוגרות (גיל 8 עד 10 שבועות) כרית שומן גדולה יותר, ובכך לאפשר השתלה של דגימות גדולות. לבסוף, אנשי מעבדה צריכים להיות מיושמים על בכירורגיה חי כדי להבטיח את ביצוע בזמן והמוצלח של ההליך.

מבחני השתלה, אשר כרוך המבוא של תאים ורקמות למתחמי גוף ספציפיים בעכברים, מייצגים גישה חיונית ללימודים של התחדשות רקמות סרטן. השתלות orthotopic של תאים, כלומר, המיקום שלהם לתוך סביבה מקומית, חשובים במיוחד לאפיון של תאי גזע בוגרים. קיומו של בתאי גזע חלב הוצע לראשונה על ידי ההשתלה של שברי בלוטת חלב אפיתל לתוך רפידות שומן חלב ללא בלוטה של עכברי 1. מבחני engraftment לרפד שומן העכבר האנושי 2 שימשו לשחזר את פיתוח הפוטנציאל ונורמלי ההתחדשות של תאי אפיתל שד ראשוני האדם. יתר על כן, השתלות דילול סדרתי והגבלה של סוגי תאים מובחנים phenotypically לתוך כרית שומן חלב הפינה היו מכריעות על מנת לבחון את יכולת התחדשות העצמית והבחנת multilineage של תאי גזע חלב 3-5. מבחני השתלה ב הקומבינאטיון עם שושלת גנטית איתור ספק עדויות של התא מוצא חלב סרטן 5. השתלות כליה הקפסולה משמשות לבדיקת תכונות של תאי גזע הערמונית המשוערת 6. השתלת orthotopic של עכבר רגיל ו אנטינאופלסטיים organoids לבלב אנושיים גילה גנים ושבילים שינו בהתקדמות סרטן 7. חשיבותה של סביבת היליד גם כבר נתמכה על ידי הפגנת ההתחדשות מגוונת לאחר engraftments של בלוטות זיעה לתוך במקומות שונים, כגון רפידות שומן חלב, רפידות שומן כתף, ו -8 עור בחזרה. חלל הצפק ואת בורסת השחלות בדרך כלל משמשים כמקומות להשתלת orthotopic של תאי אפיתל של דרכי הנשית רביית 9-12. שתי שיטות אלה יש מספר מגבלות. הזרקת Intraperitoneal של תאים מובילות ההשתלות שלהם בתחומים שונים של חלל הצפק, ובכך complicating מעקב גדילה הסלולר. יתר על כן, שינויים במיקרו-סביבה, כגון היקף כלי הדם, עצבוב וייצוג תא החיסון, עשוי להיות משמעותי למדי באזורים שונים של חלל הצפק. בורסת ההשחלות יש נפח מוגבל מאוד, המאפשר הזרקה לא יותר מ -10 μl של נוזל. זה משמעותי מגביל את כמות תאים שיכולים להינתן. יתר על כן, זריקות לתוך בורסת ההשחלות יכולות להיות מאתגרות למדי מבחינה טכנית ואת ההליך דורש כמות משמעותית של זמן. כדי לטפל במגבלות אלה, נקטנו מיתרונות החומרים כרית שומן השחלות. כרית שומן עכבר השחלות יש גודל גדול, צמוד השחלה ואת צינור הרחם, והוא נגיש בקלות על ידי ניתוח. זה כבר דווח כי trophoblast סוסים ניתן להשתיל לתוך כרית שומן עכבר שחלות 13. עם זאת הפרטים של שיטה זו לא תוארו. זה גם לא דווח אם לי זהthod ניתן ליישם תאים בוגרים ורקמות. כאן, אנו מתארים גישה אמינה עבור ההשתלה של עכבר תאים אנושיים של מערכת הרבייה הנשית ולהראות כי שיטה זו תופסת גם לגבי השתלת איבר לטווח ארוכה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1170">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:339px;">BD Becton Dickinson</td>
			<td style="width:155px;">305122</td>
			<td style="width:348px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:331px;">28 gauge needle (hypodermic syringe with attached needle)</td>
			<td style="width:339px;">Kendall</td>
			<td style="width:155px;">30339</td>
			<td>Part Number: 8881500014</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">basic fibroblast growth factor-2</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">F9786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">basement membrane matrix (Geltrex)</td>
			<td style="width:339px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">A1413202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">&#946;-actin-DsRed mice</td>
			<td style="width:339px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:155px;">6051</td>
			<td>B6.Cg-Tg(CAG-DsRed*MST)1Nagy/J</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">&#946;-actin-EGFP mice</td>
			<td style="width:339px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:155px;">3291</td>
			<td>C57BL/6-Tg(CAG-eGFP)1Osb/J</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">bovine albumin</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">A3311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">chloroform</td>
			<td style="width:339px;">VWR</td>
			<td style="width:155px;">EM-CX1058-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">collagenase/hyaluronidase</td>
			<td style="width:339px;">Stem Cell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">7912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">cryogenic vials</td>
			<td style="width:339px;">Thermo Scientific Nunc</td>
			<td style="width:155px;">377267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">dispase II</td>
			<td style="width:339px;">Worthington</td>
			<td style="width:155px;">NPRO2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">DMEM F12 (HAM&#39;s)</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">10-092-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">DNaseI (Deoxyribonuclease I)</td>
			<td style="width:339px;">Stem Cell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">7900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:331px;">embedding medium for frozen tissue specimens (O. C. T.)</td>
			<td style="width:339px;">Sakura Finetek&#160;</td>
			<td style="width:155px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">epidermal growth factor</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">E4127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">ethanol 200 proof</td>
			<td style="width:339px;">Koptec</td>
			<td style="width:155px;">V1001</td>
			<td>to prepare 70%&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:339px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">F4135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">filter tip 0.1-10/20&#181;lXL&#160;</td>
			<td style="width:339px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:155px;">1120-3810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">FOXJ1 antibody</td>
			<td style="width:339px;">eBioscience</td>
			<td style="width:155px;">E10109-1632</td>
			<td>used at concentration 1:1000 (no unmasking)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">hydrocortisone</td>
			<td style="width:339px;">Sigma</td>
			<td style="width:155px;">H0135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">laboratory film (Parafilm M)</td>
			<td style="width:339px;">American National Can</td>
			<td style="width:155px;">PM-999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">25-005-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">insulin-transferin-sodium selenite</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">I884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">isoflurane, 250 ml</td>
			<td style="width:339px;">Santa Cruz Animal Health</td>
			<td style="width:155px;">sc-363629Rx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">low attachment plate 24-well</td>
			<td style="width:339px;">Costar</td>
			<td style="width:155px;">3473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">MEM non-essential amino acids</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">25-025-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">metal histology molds</td>
			<td style="width:339px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:155px;">62527-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">microscope, inverted</td>
			<td style="width:339px;">Nikon</td>
			<td style="width:155px;">Eclipse TS 100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">microscope, stereo</td>
			<td style="width:339px;">Nikon</td>
			<td style="width:155px;">SMZ800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:331px;">Nod/SCID/gamma (NSG) mice</td>
			<td style="width:339px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:155px;">05557</td>
			<td>NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">paraformaldehyde 16% solution</td>
			<td style="width:339px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:155px;">15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">paraffin (Paraplast, X-TRA)</td>
			<td style="width:339px;">Fisher Thermo Scientific</td>
			<td style="width:155px;">23-021-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">PAX8 antibody</td>
			<td style="width:339px;">Proteintech</td>
			<td style="width:155px;">10336-1-AP</td>
			<td>used at concentration 1:1000 (no unmasking)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">PBS (Phosphate-Buffered Saline)</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">&#160;21-030-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">penicillin streptomycin</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">30-002-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:331px;">severe combined immunodeficiency (SCID/NCr) mice, BALB/C background)</td>
			<td style="width:339px;">NCI-Frederick Animal Production Program</td>
			<td style="width:155px;">01S11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">sodium pyruvate</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">25-000-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">specimen processing gel (HISTOGEL)</td>
			<td style="width:339px;">Richard-Allan Scientific</td>
			<td style="width:155px;">HG-4000-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">sucrose</td>
			<td style="width:339px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:331px;">Trypsin-EDTA, 25%</td>
			<td style="width:339px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">25-053-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation into the mouse ovarian fat pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

ניתן תאים ורקמות ניסיוני המושתלים במדויק לתוך כרית שומן השחלות תחת מיקרוסקופ לנתיחה (איור 1). הדוגמאות כוללות תאים אפיתל תובל העכבר העיקרי נגזר עכברים בכל מקום בגוף להביע EGFP (איור 2 א) או DsRed (תרשים 2B) ותאי אפיתל משטח השחלות הנציח אדם HIO118 16,17 תאים שכותרתו עם lentiviruses mCherry ו EGFP (איור 2C - F). הגישה היא גם ישימה להשתלה ארוכת טווח של איברים, כגון צינור רחם עכבר (איור 3). לדברי מכתים immunohistochemical, הוא הריסים (FOXJ1 חיובי 14) פרשה (PAX8 חיובי 15) תאים נשמרים האפיתל תובל של רקמות מושתלות (איור 3D ו- E). <imgalt = &quot;איור 1&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 54,444 / 54444fig1.jpg&quot; /&gt; איור 1:. שומן שחלות Pad השתלה (A) חשוף בתחום השתלה (חץ). (ב) חתך נעשה על ידי מחט G 28 (חץ). (C) מטריקס קרום UT / מרתף engraftment תערובת ידי קצה פיפטה (חץ). (ד) UT engrafted (חץ, אדום בוהק, UT של עכברים β-אקטין DsRed). FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. סרגל קנה מידה = 2 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54444/54444fig2.jpg" /> איור 2:. זיהוי של תאי אפיתל תובל המושתלים עכבר ראשיים אדם הונצח תאי האפיתל Surface שחלות (A, B) מתוך<html> גידולים של תאי אפיתל תובל עכבר עיקרי (חיצים) של עכברים β-תקטין EGFP (A, ירוקים) β-יקטין DsRed (B, אדום) 8 ימים לאחר ההשתלה לעכבר syngeneic. (C, D) Engraftments של תאי HIO118 המעורבים (חיצים) שכותרתו עם או lenti-EGFP (ירוק) או lenti-mCherry (אדום) 10 ימים לאחר ההשתלה לעכברי NSG. (D) אזור מוגדל מ (C, חץ). (E, F) שתל שפותח 43 ימים לאחר ההשתלה של תאים באותו כמו C, D כדי העכבר SCID (חיצים). לספירה, F, קרינה; E, שדה בהיר, FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. (A, B, DF) בר סולם = 500 מיקרומטר; (C) סרגל קנה מידה = 1,600 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> המודעה / 54,444 / 54444fig3.jpg &quot;/&gt; איור 3: אפיון השתלת רחם Tube. (א) צינור רחם שלם (חץ) של β-תקטין DsRed עכבר 6 ימים לאחר ההשתלה לתוך כרית שומן שחלות (חץ, אדום בהיר). (ב) בסעיף קפוא פלורסנט של כרית השומן עם השתלה שמוצגת (א). אדום, DsRed; כחול, 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) counterstaining גרעיני. (C) הרחם צינור השתל (חץ) 40 ימים לאחר ההשתלה לעכבר הנמען NSG (חץ). סעיף פרפין. הערת שימור נכון של כל רכיבי צינור רחם העקרוניים, וחוסר סיסטיק הקשורים השתלה ודלקת. Hematoxylin והכתים eosin. (D, E) איתור של הסמנים האפיתל תובל מותאם-box גן 8 (PAX8) ותיבת forkhead J1 (FOXJ1; צבע גרעיני חום, ראשי חץ) בתאים של השתל (חיצים) שמוצגים ( <sטרונג&gt; C). מערכת אימונו. Counterstaining עם ירוק מתיל. FP, כרית שומן; OV, שחלה; UT, צינור הרחם. (א) בר סולם = 1,000 מיקרומטר; (ב) בר סולם = 200 מיקרומטר; (CE) סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54444/54444fig3large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> רְכִיב </td><td> בינוני 1x DMEM F12 (של Ham) </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> 2 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> נתרן pruvate </td><td> 1 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> אפידרמיס גורם גדילה </td><td> 10 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> גורם-2 צמיחה פיברובלסטים בסיסית </td><td> 10 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> הידרוקורטיזון </td><td> 500 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> אִינסוּלִין </td><td> 5 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> transferrin </td><td> 5 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> סלניט נתרן </td><td> 5 ng מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> אלבומין שור </td><td> 0.10% </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> 100 יחידות מ&quot;ל -1 / 100 מיקרוגרם מ&quot;ל -1 </td></tr><tr><td> הנשר בינוני Essential Minimum (ממ) חומצות אמינו לא חיוניות </td><td> 0.1 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> בטא mercaptoethanol </td><td> 10 -4 M </td></tr></tbody></table> טבלה 1:. עכבר תובל Epithelim צמיחה בינוני (M-TE-GM) רכיבים המפורטים בעמודה השמאלית המומסים 1x DMEM F12 (של Ham) בינוני בריכוזים המצוין, בעמודה הימנית. הרכב הבינוני הסופי הוא בסרום חינם.

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad at JoVE.com

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

אנו מתארים assay השתלת כרית תחביב השחלות מתאים מחקרים של אפיתלים נורמלי טרנספורמציה של מערכת הרבייה הנשית. כרית שומן העכבר מאפשרת השתלה של שברי רקמות גדולים, נגיש בקלות לניתוח והדמיה, ומספקת את הסביבה הטבעית הטובה ביותר עבור רקמות ממוצא Müllerian.

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

ביצוע ועיבוד FNA של Pad שומן Anterior עבור עמילואיד

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

השתלת Subretinal של MACS מטוהרים פוטורצפטור קודמן תאים לתוך הרשתית עכבר בוגר

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

מודלים DNBS / TNBS קוליטיס: מתן תובנות מחלת מעי דלקתי והשפעות של התזונה שומן

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

הערכה של יכולת הקיום של הזרקת שומן האנושי בעכברי עירום עם מיקרו-טומוגרפיה ממוחשבת

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...