Name: creation and transplantation of an adipose-derived stem cell (asc) sheet in a diabetic wound-healing model
Uploaded: 2017-08-04T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model at JoVE.com

Los autores agradecen a Dr. Yukiko Koga del Departamento de plástica y reconstructiva, Juntendo University School of Medicine, para proporcionar consejos prácticos. También agradecemos al Sr. Hidekazu Murata del centro de Tokio diabéticas de médica Facultad de Medicina Universidad excelente soporte técnico. Este estudio fue apoyado por la creación de centros de innovación de avanzada programa interdisciplinario de investigación áreas del proyecto para los sistemas de innovación en desarrollo "celda hoja de tejido ingeniería centro (CSTEC)" desde el Ministerio de educación, cultura, deportes, ciencia y tecnología (MEXT) de Japón.

All experimental protocols presented below were approved by the Animal Welfare Committee of Tokyo Women&#39;s Medical University School of Medicine and abided by all requirements of the Guidelines for Proper Conduct of Animal Experiments.
1. Preparation of Animals, Instruments, Culture Media, and Dishes
<ol>
	<li>Prepare complete culture medium using minimum essential medium alpha containing 20% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin/streptomycin. Store this for several months at 4 &#176...

<ol>
	<li>Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+diabetic+foot+disease.">The global burden of diabetic foot disease.</a> Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).</li><li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo.">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li><li>Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow,+umbilical+cord+blood,+or+adipose+tissue.">Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue.</a> Stem Cells. 24 (5), 1294-1301 (2006).</li><li>Casteilla, L., Planat-Benard, V., Laharrague, P., Cousin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stromal+cells:+Their+identity+and+uses+in+clinical+trials,+an+update.">Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update.</a> World J Stem Cells. 3 (4), 25-33 (2011).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue:+implications+for+cell-based+therapies.">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).</li><li>Zuk, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The ASC: Critical Participants in Paracrine-Mediated Tissue Health and Function. , (2013).</li><li>Nie, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locally+administered+adipose-derived+stem+cells+accelerate+wound+healing+through+differentiation+and+vasculogenesis.">Locally administered adipose-derived stem cells accelerate wound healing through differentiation and vasculogenesis.</a> Cell Transplant. 20 (2), 205-216 (2011).</li><li>Shin, L., Peterson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cell+grafts+enhance+normal+and+impaired+wound+healing+by+recruiting+existing+endogenous+tissue+stem/progenitor+cells.">Human mesenchymal stem cell grafts enhance normal and impaired wound healing by recruiting existing endogenous tissue stem/progenitor cells.</a> Stem Cells Transl Med. 2 (1), 33-42 (2013).</li><li>Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+recovery+system+for+cultured+cells+using+plasma-treated+polystyrene+dishes+grafted+with+poly(N-isopropylacrylamide).">A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly(N-isopropylacrylamide).</a> J Biomed Mater Res. 27 (10), 1243-1251 (1993).</li><li>Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermo-responsive+culture+dishes+allow+the+intact+harvest+of+multilayered+keratinocyte+sheets+without+dispase+by+reducing+temperature.">Thermo-responsive culture dishes allow the intact harvest of multilayered keratinocyte sheets without dispase by reducing temperature.</a> Tissue Eng. 7 (4), 473-480 (2001).</li><li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+sheet+transplantation+improves+damaged+heart+function+via+superior+cell+survival+in+comparison+with+dissociated+cell+injection.">Cardiac cell sheet transplantation improves damaged heart function via superior cell survival in comparison with dissociated cell injection.</a> Tissue Engineering Part A. 17 (23-24), 2973-2980 (2011).</li><li>Kuhlmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocellular+lipid+and+insulin+resistance:+a+longitudinal+in+vivo+1H-spectroscopic+study+in+Zucker+diabetic+fatty+rats.">Intramyocellular lipid and insulin resistance: a longitudinal in vivo 1H-spectroscopic study in Zucker diabetic fatty rats.</a> Diabetes. 52 (1), 138-144 (2003).</li><li>Slavkovsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zucker+diabetic+fatty+rat:+a+new+model+of+impaired+cutaneous+wound+repair+with+type+II+diabetes+mellitus+and+obesity.">Zucker diabetic fatty rat: a new model of impaired cutaneous wound repair with type II diabetes mellitus and obesity.</a> Wound Repair Regen. 19 (4), 515-525 (2011).</li><li>Oltman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+vascular+and+neural+dysfunction+in+sciatic+nerves+of+Zucker+diabetic+fatty+and+Zucker+rats.">Progression of vascular and neural dysfunction in sciatic nerves of Zucker diabetic fatty and Zucker rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (1), E113-E122 (2005).</li><li>Coppey, L. J., Gellett, J. S., Davidson, E. P., Dunlap, J. A., Yorek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+endoneurial+blood+flow,+motor+nerve+conduction+velocity+and+vascular+relaxation+of+epineurial+arterioles+of+the+sciatic+nerve+in+ZDF-obese+diabetic+rats.">Changes in endoneurial blood flow, motor nerve conduction velocity and vascular relaxation of epineurial arterioles of the sciatic nerve in ZDF-obese diabetic rats.</a> Diabetes Metab Res Rev. 18 (1), 49-56 (2002).</li><li>Galiano, R. D., Michaels, V., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing.">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair Regen. 12 (4), 485-492 (2004).</li><li>Lin, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+multi-layer+adipose-derived+stem+cell+sheet+in+a+full-thickness+wound+healing+model.">Evaluation of a multi-layer adipose-derived stem cell sheet in a full-thickness wound healing model.</a> Acta Biomater. 9 (2), 5243-5250 (2013).</li><li>McLaughlin, M. M., Marra, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+adipose-derived+stem+cells+as+sheets+for+wound+healing.">The use of adipose-derived stem cells as sheets for wound healing.</a> Organogenesis. 9 (2), 79-81 (2013).</li><li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+stem+cells+cell+sheet+constructs+impact+epidermal+morphogenesis+in+full-thickness+excisional+wounds.">Human adipose stem cells cell sheet constructs impact epidermal morphogenesis in full-thickness excisional wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li><li>Koga, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+course+of+full-thickness+skin+defects+with+exposed+bone:+an+evaluation+by+a+quantitative+examination+of+new+blood+vessels.">Recovery course of full-thickness skin defects with exposed bone: an evaluation by a quantitative examination of new blood vessels.</a> J Surg Res. 137 (1), 30-37 (2007).</li><li>Cianfarani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+impairs+adipose+tissue-derived+stem+cell+function+and+efficiency+in+promoting+wound+healing.">Diabetes impairs adipose tissue-derived stem cell function and efficiency in promoting wound healing.</a> Wound Repair Regen. 21 (4), 545-553 (2013).</li><li>Matsuda, K., Suzuki, S., Isshiki, N., Ikada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-freeze+dried+bilayer+artificial+skin.">Re-freeze dried bilayer artificial skin.</a> Biomaterials. 14 (13), 1030-1035 (1993).</li><li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction.">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li><li>Iwata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering+and+its+application+for+periodontal+regeneration.">Cell sheet engineering and its application for periodontal regeneration.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2013).</li><li>Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering:+a+unique+nanotechnology+for+scaffold-free+tissue+reconstruction+with+clinical+applications+in+regenerative+medicine.">Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine.</a> J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).</li><li>Watanabe, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+adipose+tissue-derived+stem/stromal+cells,+using+simian+immunodeficiency+virus-based+lentiviral+vectors,+in+the+treatment+of+hemophilia.">Genetically modified adipose tissue-derived stem/stromal cells, using simian immunodeficiency virus-based lentiviral vectors, in the treatment of hemophilia.</a> B. Hum Gene Ther. 24 (3), 283-294 (2013).</li><li>Kim, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+effect+of+adipose-derived+stem+cells:+a+critical+role+of+secretory+factors+on+human+dermal+fibroblasts.">Wound healing effect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts.</a> J Dermatol Sci. 48 (1), 15-24 (2007).</li><li>Nakagami, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+autologous+cell+therapy+in+ischemic+limb+disease+through+growth+factor+secretion+by+cultured+adipose+tissue-derived+stromal+cells.">Novel autologous cell therapy in ischemic limb disease through growth factor secretion by cultured adipose tissue-derived stromal cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (12), 2542-2547 (2005).</li><li>Asahara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF+contributes+to+postnatal+neovascularization+by+mobilizing+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells.">VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells.</a> EMBO J. 18 (14), 3964-3972 (1999).</li><li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+transplantation+of+an+adipose-derived+stem+cell+(ASC)+sheet+combined+with+artificial+skin+accelerates+wound+healing+in+a+rat+wound+model+of+type+2+diabetes+and+obesity.">Allogeneic transplantation of an adipose-derived stem cell (ASC) sheet combined with artificial skin accelerates wound healing in a rat wound model of type 2 diabetes and obesity.</a> Diabetes. , db141133 (2015).</li></ol>

Los pasos más críticos para el cultivo con éxito de una hoja de rASC son los siguientes: 1) la temperatura debe mantenerse a unos 37 ° C durante el cultivo en los platos de la cultura sensible a la temperatura. Durante la creación de una hoja de rASC, cada procedimiento fue realizado en una placa térmica de 37 ° C, y cada reactivo fue calentado a 37 ° C para evitar que las células espontáneamente extracción desde el plato31. 2) las ratas ZDF destinatarias deben controlarse para evitar l...

La población de pacientes diabéticos está aumentando en todo el mundo y llegó a 400 millones en el 20151; aproximadamente 15-25% de pacientes con diabetes están en riesgo de la progresión de una úlcera diabética de extremidades inferiores2. Las úlceras diabéticas de la extremidad inferior son insuperables y podrían requerir un período terapéutico prolongado con entrenamiento de rehabilitación después de una recuperación completa. Un período largo de la terapia a menudo resulta en una reducción significativa en la paciente calidad de vida. Así, hay que desarrollar nuevas terapias que disminuirán o impedir la agravación para el tratamiento de las heridas diabéticas. Para evaluar la cicatrización de la herida diabética, hemos optimizado una úlcera diabética cicatrización modelo en ratas, que imita las condiciones clínicas prácticas, y evaluó si el transplante de células madre derivadas de adiposo (ASC) hojas utilizando ingeniería hoja de la célula acelerado la cicatrización de heridas.
Las células estromales mesenquimales (MSCs) presentan un excelente potencial para acelerar la cicatrización de heridas por su capacidad de auto renovación, por sus efectos inmunomoduladores y su capacidad de diferenciarse en varios linajes de células3. ASCs son un tipo de MSC derivada de tejido adiposo, y presentan varias ventajas sobre los MSCs derivadas de otros tejidos, incluyendo su potencial angiogénico y paracrina actividad4,5. Tejido adiposo es relativamente abundante en el cuerpo humano, y su accesibilidad permite colección mediante procedimientos mínimamente invasivos. Por lo tanto, se han utilizado experimentalmente ASCs para cicatrización aplicaciones6,7.
Informes anteriores han demostrado que la inyección directa de suspensiones MSC unicelular en áreas alrededor de las heridas puede acelerar la cicatrización en8,9. Sin embargo, a pesar de informes de la aceleración de la cicatrización de heridas en los modelos de úlcera diabética después de la inyección de suspensiones celulares solo, no está claro el tiempo de supervivencia de las células trasplantadas en el sitio de la herida.
En este estudio, aplicamos ingeniería hoja de la célula usando platos de cultura sensible a la temperatura. Estos platos tienen la temperatura sensible polímero N- isopropylacrylamide covalentemente a su superficie10. La capa de polímero injertado permite la adhesión celular con control de temperatura a o desprendimiento de la superficie de la placa de cultivo. La superficie del plato se vuelve hidrofóbica a 37 ° C, permitiendo que las células para adherirse y proliferar, mientras que las células suelte espontáneamente de la superficie cuando se vuelve hidrófilo a temperaturas por debajo de 32 ° C. Las células cultivadas se pueden cosechar como una hoja de celdas contiguas con uniones célula a célula intactas y matrices extracelulares (ECMs) simplemente mediante la reducción de la temperatura; así, las enzimas proteolíticas que dañan el ECM, como la tripsina, no son necesarios11. Por lo tanto, ingeniería hoja de la célula puede preservar las conexiones de la célula a célula y mejorar la eficacia del trasplante de la célula.
Además, trasplante de la hoja de la célula aumenta las tasas de supervivencia de la célula en comparación con la célula de inyección12. En este protocolo, Zucker ratas diabéticas de (ZDF) grasosas fueron seleccionadas como un modelo de obesidad y diabetes tipo 2 con retraso de la cicatrización de heridas. Las ratas ZDF espontáneamente desarrollan obesidad en aproximadamente 4 semanas. Luego desarrollan diabetes tipo 2 con obesidad entre 8 y 12 semanas de edad, momento en el que exhiben hiperglucemia asociada con insulina resistencia, dislipemia e hipertrigliceridemia13. Retraso herida que cura, reducción del flujo sanguíneo en los vasos sanguíneos periféricos y la nefropatía diabética también se observan14,15,16. Además, las ratas ZDF podrían ser un modelo apropiado para el estudio de la curación de las úlceras cutáneas intratables, como las úlceras diabéticas.
Las diferencias entre los seres humanos y roedores en los mecanismos de cicatrización se asocian a las diferencias anatómicas en la piel. Herida que cura en ratas normales se basa en la contracción de la herida, mientras que la cicatrización de heridas en seres humanos se basa en la formación de tejido de granulación y reepitelización. Por lo general, herida ferulización utilizado en modelos de roedores ayuda a minimizar la contracción de la herida y permite la formación gradual de tejido de granulación17, aunque las heridas en diabéticos ratas son casi completamente cerradas por contracción. Sin embargo, el diabético herida contracción en ZDF ratas se deteriora, y cicatrizantes sobre todo se produce a través de reepitelización y formación de tejido de granulación; así, este proceso es más similar a la cicatrización humana14.
Diabéticas heridas con hueso expuesto después de desbridamiento se encuentran a menudo clínicamente. Estudios previos han examinado las heridas de piel de espesor total de 12 mm de diámetro sobre las espaldas de athymic mice desnudas18,19 y heridas de la piel de espesor total de 10 mm de diámetro sobre las espaldas de los ratones normales20. Para desarrollar un modelo clínico para heridas diabéticas severas, defectos más grandes de piel de espesor total (15 x 10 mm2) con exponen hueso y sin el periostio se crearon, como se describió anteriormente21, en ratas con diabetes tipo 2 y obesidad.
Hojas ASC (rASC) rata de ASCs de ratas Lewis normales fueron creadas por el trasplante alógeno de hojas ASC. En la práctica clínica, el trasplante autólogo es inviable porque los pacientes diabéticos con úlceras a menudo exhiben graves complicaciones diabéticas, como niveles de glucosa sanguínea alta sin control, índices de masa corporal alta y estos complicaciones causa cicatrización los trastornos que aumentan la dificultad de obtención de tejido adiposo de estos pacientes. Además, ASCs de animales con exposición de diabetes alteración propiedades y deterioraron función22. Por lo tanto, el protocolo que presentamos describe el trasplante alógeno de rASC hojas de ratas normales y la aplicación de piel artificial a ratas diabéticas.
La piel artificial de dos capas usada en este protocolo evita la contracción espontánea de las heridas, promueve la síntesis de una nueva matriz de tejido conectivo y se asemeja a la verdadera dermis23. En el presente Protocolo, la piel artificial se coloca en una hoja de rASC y fijo con hilos de nylon para evitar la contracción de la herida o ampliación resultante de piel de rata suelta. Además, la piel artificial proporciona un marco tridimensional para las hojas de la ASC, mantiene un ambiente húmedo para el trasplantado hojas ASC y heridas y protege las heridas de la infección y las fuerzas externas. Finalmente, se coloca un apósito no adhesivo sobre la herida para protegerla del impacto externo, mantener un ambiente húmedo de la herida y absorber el exudado.
Una hoja de rASC es fina, flexible y deformable y puede adherir a sitios receptores, como un latido corazón24en movimiento. Ingeniería de la hoja de la célula se ha utilizado para la reconstrucción de varios tejidos y puede generar efectos curativos25,26. Hojas ASC que exhiben potencial clínico terapéutico podrían acelerar la curación de muchos tipos de heridas. Además, el trasplante alogénico de las hojas de la ASC, combinado con el uso de piel artificial, podría ser aplicable al tratamiento de las úlceras intratables o quemaduras, como los observados en la enfermedad arterial periférica o enfermedad del colágeno, o puedan ser administrados a pacientes que están desnutridos o que están usando esteroides. Este enfoque aumenta la eficacia del trasplante ASC. El modelo de rata ZDF cicatrización produce una condición de la herida grave que se asemeja el proceso de cicatrización humana y simula las condiciones clínicas en un animal experimental pequeño.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="678">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">&#945;-MEM glutamax</td>
			<td style="width:169px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">32571-036</td>
			<td style="width:167px;">Carlsbad, CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Japan Bioserum Co Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">10 103 578 001</td>
			<td>Mannheim, Germany</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">60-cm2 Primaria tissue culture dish</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>353803</td>
			<td>Franklin Lakes, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">1490-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-ascorbic acid phosphate magnesium salt n-hydrate</td>
			<td style="width:169px;">Wako</td>
			<td>013-19641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">35-mm temperature-responsive culture dish (UpcellTM)</td>
			<td>CellSeed</td>
			<td>NUNC-174904</td>
			<td>Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Microwarm plate (MP-1000)</td>
			<td style="width:169px;">Kitazato Science Co., Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">1111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rodent mechanical ventilator</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>#50206</td>
			<td>Wood Dale, IL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4% isoflurane</td>
			<td>Pfizer Japan</td>
			<td>114-13340-3</td>
			<td>Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Artificial skin (Pelnac&#174;)</td>
			<td>Smith &#38; Nephew</td>
			<td>PN-R40060</td>
			<td>&#160;Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Non-adhesive dressing (Hydrosite plus&#174;)</td>
			<td>Smith &#38; Nephew</td>
			<td align="right">66800679</td>
			<td>Known as Allevyn non-adhessing&#174; in the United State</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">5-0 nylon suture</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td style="width:119px;">EP1105NB45-KF2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 CELLSTAR TUBES</td>
			<td>greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">227 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">15mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td align="right" style="width:119px;">430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL</td>
			<td>Hu-Friedy</td>
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creation and transplantation of an adipose-derived stem cell (asc) sheet in a diabetic wound-healing model

Piel artificial ha logrado considerables resultados terapéuticos en la práctica clínica. Sin embargo, tratamientos de piel artificial para las heridas en pacientes diabéticos con flujo sanguíneo impedida o con heridas grandes podrían ser prolongados. Terapias basadas en células han aparecido como una nueva técnica para el tratamiento de las úlceras diabéticas, y hoja de la célula Ingeniería ha mejorado la eficacia del trasplante de la célula. Varios informes han sugerido que células madre procedentes de adiposo (ASCs), un tipo de células mesenquimales estromales (MSC), exhiben potencial terapéutico debido a su relativa abundancia en el tejido adiposo y su accesibilidad para la recolección en comparación con MSCs de otros tejidos. Por lo tanto, ASCs parecen ser una buena fuente de células madre para uso terapéutico. En este estudio, hojas ASC de la grasa adiposa Epididimal de las ratas de Lewis normales fueron creadas con éxito utilizando platos de cultivo temperatura sensible y normal medio de cultivo que contiene ácido ascórbico. Las hojas ASC fueron transplantadas en ratas diabéticas grasos (ZDF) de Zucker, un modelo de diabetes tipo 2 y obesidad, que muestran disminución de ratas la cicatrización de heridas. Una herida fue creada en la superficie craneal posterior, hojas ASC se trasplantaron en la herida y la piel de una bicapa artificial fue utilizada para cubrir las hojas. Las ratas ZDF que recibieron hojas ASC habían mejor cicatrización que las ratas ZDF sin el trasplante de las hojas de la ASC. Este enfoque fue limitado porque las hojas de ASC son sensibles a las condiciones secas, requiriendo el mantenimiento de un entorno húmedo de la herida. Por lo tanto, la piel artificial fue utilizada para cubrir la hoja de la ASC para evitar que se sequen. El trasplante alógeno de hojas ASC en combinación con piel artificial también podría ser aplicable a otras úlceras intratables o quemaduras, como los observados con la enfermedad arterial periférica y enfermedad del colágeno y puede ser administrado a pacientes que están desnutridos o que están usando esteroides. Así, este tratamiento podría ser el primer paso hacia la mejora de las opciones terapéuticas para el diabético herida curativo.

Este protocolo intentó establecer una nueva terapia celular para las heridas diabéticas insuperables. Brevemente (como se ilustra en la figura 1), hojas de allogeneic rASC fueron creadas de las ratas normales utilizando ingeniería hoja de la célula y luego fueron trasplantadas con una bicapa de piel artificial a un defecto de piel de espesor total en una rata diabética. Imágenes de microscopio de luz de un buen ejemplo de una hoja de rASC (figura 2A...

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Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Células madre procedentes de adiposo (ASCs) son fácilmente aisladas y extraídas de la grasa de las ratas normales. Hojas de ASC pueden crearse utilizando ingeniería hoja de la célula y pueden ser transplantadas en Zucker ratas diabéticas grasosas exhibiendo espesor total defectos con hueso expuesto de la piel y luego se cubrieron con una bicapa de piel artificial.

Creación y el transplante de una hoja de células madre derivadas de adiposo (ASC) en un modelo de curación de herida diabética

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Trasplante ortotópico aórtica: un modelo de rata para estudiar el desarrollo de la enfermedad vascular crónica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Investigación

Medicina

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Un modelo de ratón En el útero Trasplante

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Trasplante de células madre en un In vitro Simulación de isquemia / reperfusión modelo

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Usando cuantitativa en tiempo real PCR para determinar quimerismo de células donantes en un modelo competitivo Trasplante de médula ósea murina

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Murine Model of Wound Healing

Modelo murino de Curación de Heridas

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural Trasplante de células madre en Experimental contuso Modelo de Lesión de la Médula Espinal

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Cicatrización de heridas de abrasión epitelial corneal con rebabas Ocular como un modelo de córnea

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Ex Vivo modelo de cultura órgano córneo para la curación de heridas estudios

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Targeting Communicantes grises del Rami en Sympathectomy Lumbar químico selectivo

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...