Name: creation and transplantation of an adipose-derived stem cell (asc) sheet in a diabetic wound-healing model
Uploaded: 2017-08-04T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model at JoVE.com

Författarna vill tacka Dr Yukiko Koga av institutionen av plast och rekonstruktiv kirurgi, Juntendo University School of Medicine, för att ge praktiska råd. Vi tackar också Mr Hidekazu Murata diabetes Center i Tokyo Women's Medical University School of Medicine för utmärkt teknisk support. Denna studie stöddes av skapandet av Innovation Centers för avancerade tvärvetenskapliga områden forskningsprogram av projekt för utvecklingsländerna innovationssystem ”Cell ark Tissue Engineering Center (CSTEC)” från ministeriet för utbildning, kultur, sport, vetenskap och teknik (MEXT) av Japan.

All experimental protocols presented below were approved by the Animal Welfare Committee of Tokyo Women&#39;s Medical University School of Medicine and abided by all requirements of the Guidelines for Proper Conduct of Animal Experiments.
1. Preparation of Animals, Instruments, Culture Media, and Dishes
<ol>
	<li>Prepare complete culture medium using minimum essential medium alpha containing 20% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin/streptomycin. Store this for several months at 4 &#176...

<ol>
	<li>Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+diabetic+foot+disease.">The global burden of diabetic foot disease.</a> Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).</li><li>Zannettino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotential+human+adipose-derived+stromal+stem+cells+exhibit+a+perivascular+phenotype+in+vitro+and+in+vivo.">Multipotential human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo.</a> J Cell Physiol. 214 (2), 413-421 (2008).</li><li>Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow,+umbilical+cord+blood,+or+adipose+tissue.">Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue.</a> Stem Cells. 24 (5), 1294-1301 (2006).</li><li>Casteilla, L., Planat-Benard, V., Laharrague, P., Cousin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stromal+cells:+Their+identity+and+uses+in+clinical+trials,+an+update.">Adipose-derived stromal cells: Their identity and uses in clinical trials, an update.</a> World J Stem Cells. 3 (4), 25-33 (2011).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue:+implications+for+cell-based+therapies.">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Eng. 7 (2), 211-228 (2001).</li><li>Zuk, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The ASC: Critical Participants in Paracrine-Mediated Tissue Health and Function. , (2013).</li><li>Nie, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locally+administered+adipose-derived+stem+cells+accelerate+wound+healing+through+differentiation+and+vasculogenesis.">Locally administered adipose-derived stem cells accelerate wound healing through differentiation and vasculogenesis.</a> Cell Transplant. 20 (2), 205-216 (2011).</li><li>Shin, L., Peterson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cell+grafts+enhance+normal+and+impaired+wound+healing+by+recruiting+existing+endogenous+tissue+stem/progenitor+cells.">Human mesenchymal stem cell grafts enhance normal and impaired wound healing by recruiting existing endogenous tissue stem/progenitor cells.</a> Stem Cells Transl Med. 2 (1), 33-42 (2013).</li><li>Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+recovery+system+for+cultured+cells+using+plasma-treated+polystyrene+dishes+grafted+with+poly(N-isopropylacrylamide).">A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly(N-isopropylacrylamide).</a> J Biomed Mater Res. 27 (10), 1243-1251 (1993).</li><li>Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermo-responsive+culture+dishes+allow+the+intact+harvest+of+multilayered+keratinocyte+sheets+without+dispase+by+reducing+temperature.">Thermo-responsive culture dishes allow the intact harvest of multilayered keratinocyte sheets without dispase by reducing temperature.</a> Tissue Eng. 7 (4), 473-480 (2001).</li><li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+cell+sheet+transplantation+improves+damaged+heart+function+via+superior+cell+survival+in+comparison+with+dissociated+cell+injection.">Cardiac cell sheet transplantation improves damaged heart function via superior cell survival in comparison with dissociated cell injection.</a> Tissue Engineering Part A. 17 (23-24), 2973-2980 (2011).</li><li>Kuhlmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intramyocellular+lipid+and+insulin+resistance:+a+longitudinal+in+vivo+1H-spectroscopic+study+in+Zucker+diabetic+fatty+rats.">Intramyocellular lipid and insulin resistance: a longitudinal in vivo 1H-spectroscopic study in Zucker diabetic fatty rats.</a> Diabetes. 52 (1), 138-144 (2003).</li><li>Slavkovsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zucker+diabetic+fatty+rat:+a+new+model+of+impaired+cutaneous+wound+repair+with+type+II+diabetes+mellitus+and+obesity.">Zucker diabetic fatty rat: a new model of impaired cutaneous wound repair with type II diabetes mellitus and obesity.</a> Wound Repair Regen. 19 (4), 515-525 (2011).</li><li>Oltman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+vascular+and+neural+dysfunction+in+sciatic+nerves+of+Zucker+diabetic+fatty+and+Zucker+rats.">Progression of vascular and neural dysfunction in sciatic nerves of Zucker diabetic fatty and Zucker rats.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 289 (1), E113-E122 (2005).</li><li>Coppey, L. J., Gellett, J. S., Davidson, E. P., Dunlap, J. A., Yorek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+endoneurial+blood+flow,+motor+nerve+conduction+velocity+and+vascular+relaxation+of+epineurial+arterioles+of+the+sciatic+nerve+in+ZDF-obese+diabetic+rats.">Changes in endoneurial blood flow, motor nerve conduction velocity and vascular relaxation of epineurial arterioles of the sciatic nerve in ZDF-obese diabetic rats.</a> Diabetes Metab Res Rev. 18 (1), 49-56 (2002).</li><li>Galiano, R. D., Michaels, V., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing.">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair Regen. 12 (4), 485-492 (2004).</li><li>Lin, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+multi-layer+adipose-derived+stem+cell+sheet+in+a+full-thickness+wound+healing+model.">Evaluation of a multi-layer adipose-derived stem cell sheet in a full-thickness wound healing model.</a> Acta Biomater. 9 (2), 5243-5250 (2013).</li><li>McLaughlin, M. M., Marra, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+adipose-derived+stem+cells+as+sheets+for+wound+healing.">The use of adipose-derived stem cells as sheets for wound healing.</a> Organogenesis. 9 (2), 79-81 (2013).</li><li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+stem+cells+cell+sheet+constructs+impact+epidermal+morphogenesis+in+full-thickness+excisional+wounds.">Human adipose stem cells cell sheet constructs impact epidermal morphogenesis in full-thickness excisional wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li><li>Koga, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+course+of+full-thickness+skin+defects+with+exposed+bone:+an+evaluation+by+a+quantitative+examination+of+new+blood+vessels.">Recovery course of full-thickness skin defects with exposed bone: an evaluation by a quantitative examination of new blood vessels.</a> J Surg Res. 137 (1), 30-37 (2007).</li><li>Cianfarani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+impairs+adipose+tissue-derived+stem+cell+function+and+efficiency+in+promoting+wound+healing.">Diabetes impairs adipose tissue-derived stem cell function and efficiency in promoting wound healing.</a> Wound Repair Regen. 21 (4), 545-553 (2013).</li><li>Matsuda, K., Suzuki, S., Isshiki, N., Ikada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-freeze+dried+bilayer+artificial+skin.">Re-freeze dried bilayer artificial skin.</a> Biomaterials. 14 (13), 1030-1035 (1993).</li><li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction.">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li><li>Iwata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering+and+its+application+for+periodontal+regeneration.">Cell sheet engineering and its application for periodontal regeneration.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2013).</li><li>Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering:+a+unique+nanotechnology+for+scaffold-free+tissue+reconstruction+with+clinical+applications+in+regenerative+medicine.">Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine.</a> J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).</li><li>Watanabe, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+adipose+tissue-derived+stem/stromal+cells,+using+simian+immunodeficiency+virus-based+lentiviral+vectors,+in+the+treatment+of+hemophilia.">Genetically modified adipose tissue-derived stem/stromal cells, using simian immunodeficiency virus-based lentiviral vectors, in the treatment of hemophilia.</a> B. Hum Gene Ther. 24 (3), 283-294 (2013).</li><li>Kim, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+effect+of+adipose-derived+stem+cells:+a+critical+role+of+secretory+factors+on+human+dermal+fibroblasts.">Wound healing effect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts.</a> J Dermatol Sci. 48 (1), 15-24 (2007).</li><li>Nakagami, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+autologous+cell+therapy+in+ischemic+limb+disease+through+growth+factor+secretion+by+cultured+adipose+tissue-derived+stromal+cells.">Novel autologous cell therapy in ischemic limb disease through growth factor secretion by cultured adipose tissue-derived stromal cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (12), 2542-2547 (2005).</li><li>Asahara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF+contributes+to+postnatal+neovascularization+by+mobilizing+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells.">VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells.</a> EMBO J. 18 (14), 3964-3972 (1999).</li><li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+transplantation+of+an+adipose-derived+stem+cell+(ASC)+sheet+combined+with+artificial+skin+accelerates+wound+healing+in+a+rat+wound+model+of+type+2+diabetes+and+obesity.">Allogeneic transplantation of an adipose-derived stem cell (ASC) sheet combined with artificial skin accelerates wound healing in a rat wound model of type 2 diabetes and obesity.</a> Diabetes. , db141133 (2015).</li></ol>

De viktigaste stegen för framgångsrikt odla en rASC ark är följande: 1) temperatur skall hållas vid ca 37 ° C under odling på de temperatur-lyhörda kultur rätterna. Under skapandet av en rASC ark, varje förfarande utfördes på en 37 ° C thermo-tallrik, och varje reagens värmdes till 37 ° C att förhindra celler från spontant ta loss från skålen31. (2) mottagaren ZDF råttorna måste övervakas för att förhindra borttagning av icke-häftande dressing, vilket är avgörande för f...

Befolkningen av diabetiker ökar världen över och nått 400 miljoner i 20151. uppskattningsvis 15-25% av patienter med diabetes riskerar från utvecklingen av en lägre-extremitet diabetiska sår2. Nedre-extremitet diabetiska sår är svårbehandlad och kan behöva terapeutisk återkoppla med rehabiliteringsträning efter fullständig återhämtning. En lång terapi-period ofta resulterar i en betydande minskning av patientens livskvalitet. Nya terapier som minska eller förhindra försämringen måste således utvecklas för behandling av diabetiska sår. Utvärdera diabetiker sårläkning, vi optimerat en diabetiker sår sårläkning modell hos råttor som härmar praktiska kliniska tillstånd, och utvärderas om omplantering adipose-derived stamceller (ASC) blad med cellagret engineering accelererad sårläkning.
Mesenkymala stromaceller (MSCs) uppvisar en utmärkt potential för att påskynda sårläkning på grund av deras självförnyelse, deras immunmodulerande effekter, och deras förmåga att differentieras till olika cell härstamningar3. ASCs är en typ av MSC härrör från fettvävnad, och de uppvisar flera fördelar över MSCs härrör från andra vävnader, inklusive deras angiogena potentiella och parakrin verksamhet4,5. Fettvävnad är relativt rikligt i den mänskliga kroppen och dess tillgänglighet möjliggör samling med minimalt invasiva ingrepp. ASCs har därför använts experimentellt för sårläkning program6,7.
Tidigare rapporter har visat att de direkt injektionen av encelliga MSC suspensioner i områden runt sår kan påskynda sårläkning8,9. Trots rapporter om accelerationen av sårläkning i diabetiska sår modeller efter injektionen med encelliga suspensioner, är överlevnadstiden för transplanterade celler på sårområdet dock inte klart.
I denna studie tillämpat vi cellagret teknik med hjälp av temperatur-lyhörd kultur rätter. Dessa rätter har den temperatur-lyhörd polymer N- isopropylacrylamide kovalent bundna till sin yta10. Den ympade polymerskikt möjliggör temperaturreglerade celladhesion till eller lossnar från ytan av kultur skålen. Ytan av skålen blir hydrofoba vid 37 ° C, vilket gör att cellerna att följa och föröka, medan celler lossna spontant från ytan när det blir hydrofil vid temperaturer under 32 ° C. Odlade celler kan skördas som en sammanhängande cellagret med intakt cell till cell i korsningar och extracellulära matriser (ECMs) helt enkelt genom att minska temperaturen; proteolytiska enzymer som skada ECM, såsom trypsin, är således inte krävs11. Cellagret teknik kan därför bevara cell till cell-anslutningar och förbättra effekten av stamcellstransplantation.
Dessutom, ökar cellagret transplantation cell överlevnaden jämfört med cell injektionen12. I detta protokoll valdes Zucker diabetiska feta (ZDF) råttor som typ 2 diabetes och fetma modell med fördröjd sårläkning. ZDF råttor utvecklar spontant fetma på cirka 4 veckor. De sedan utveckla typ 2-diabetes med övervikt mellan 8 och 12 veckors ålder, vid vilket tillfälle de uppvisar hyperglykemi är associerad med insulin resistens, dyslipidemi och hypertriglyceridemi13. Fördröjd sårläkning, minskat blodflöde i perifera blodkärl och diabetesnefropati observeras också14,15,16. ZDF råttor kan dessutom vara en lämplig modell för att studera läkning av svårlösta kutana sår, såsom diabetiska sår.
Skillnaderna mellan människa och gnagare i sårläkning mekanismer är associerade med anatomiska skillnader i huden. Sårläkning i normala råttor är baserad på såret kontraktion, medan sårläkning hos människa är baserat på återepitelisation och granulationsvävnad bildas. Normalt såret skenor används i gnagare modeller hjälper till att minimera såret kontraktion och möjliggör gradvis bildningen av granulationsvävnad17, även om såren i korttidsstudier råttor är nästan helt stängd genom sammandragning. Dock diabetiker sår kontraktion i ZDF råttor är nedsatt och sårläkning främst sker genom återepitelisation och granulationsvävnad bildas; denna process är således mer liknar mänskliga sårläkning14.
Diabetiska sår med utsatt ben efter debridering påträffas ofta kliniskt. Tidigare studier har undersökt 12-mm diameter fullhudsskador hudsår på ryggen av atymiska naken möss18,19 och 10 mm diameter fullhudsskador hudsår på ryggen av normala möss20. För att utveckla en klinisk modell för svår diabetiska sår, större (15 x 10 mm2) fullhudsskador hud defekter med exponerade ben och utan periostet skapades, som tidigare beskrivits21, hos råttor med typ 2-diabetes och fetma.
Rat ASC (rASC) ark från ASCs normala Lewis råttor skapades genom prövningar transplantation av ASC ark. I klinisk praxis är autolog transplantation omöjligt eftersom diabetiker med sår ofta uppvisar svåra diabeteskomplikationer, såsom okontrollerad höga blodsockernivåer och högt body mass index och dessa komplikationer orsakar sårläkning sjukdomar som ökar svårigheten att få fettvävnad från dessa patienter. Dessutom ASCs från djur med diabetes uppvisar ändrat egenskaper och nedsatt funktion22. Därför beskriver protokollet presenteras här prövningar transplantation av rASC ark från normala råttor och tillämpningen av konstgjord hud på diabetiska råttor.
Lipidens konstgjorda huden används i detta protokoll förhindrar den spontan kontraktion av såren, främjar syntesen av en ny bindväv matris och liknar den sanna dermis23. I detta protokoll, konstgjord hud placeras på en rASC blad och fast med nylontrådar att förhindra sår kontraktion eller utvidgningen som härrör från lös råtta hud. Dessutom konstgjorda huden ger en tredimensionell ram för ASC arken, upprätthåller en fuktig miljö för de transplanterade ASC ark och sår och skyddar såren från infektion och yttre krafter. Slutligen, placeras ett icke-vidhäftande förband över såret att skydda den från yttre påverkan, upprätthålla en fuktig såret miljö och absorberar exsudat.
En rASC ark är tunna, flexibla och deformerbar och kan följas till flytta mottagaren platser, såsom ett bultande hjärta24. Cellagret teknik har använts för återuppbyggnaden av olika vävnader och kan generera läkande effekter25,26. ASC-ark som uppvisar kliniska terapeutisk potential kan påskynda läkning av många typer av sår. Dessutom allogen transplantation av ASC ark, kombinerat med användningen av konstgjord hud, kan vara tillämplig på behandling av svårbehandlad sår eller brännskador, såsom de som observerades i perifer arteriell sjukdom eller kollagen sjukdom, eller de kan administreras till patienter som är undernärda eller använder steroider. Detta tillvägagångssätt ökar effektiviteten av omplantering ASCs. Sårläkning ZDF råtta modellen producerar en svår sår tillstånd som liknar mänskliga sårläkningsprocessen och härmar kliniska tillstånd i en små experimentella djur.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="678">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">&#945;-MEM glutamax</td>
			<td style="width:169px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">32571-036</td>
			<td style="width:167px;">Carlsbad, CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Japan Bioserum Co Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">S1650-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">10 103 578 001</td>
			<td>Mannheim, Germany</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">60-cm2 Primaria tissue culture dish</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>353803</td>
			<td>Franklin Lakes, NJ</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">1490-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-ascorbic acid phosphate magnesium salt n-hydrate</td>
			<td style="width:169px;">Wako</td>
			<td>013-19641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">35-mm temperature-responsive culture dish (UpcellTM)</td>
			<td>CellSeed</td>
			<td>NUNC-174904</td>
			<td>Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Microwarm plate (MP-1000)</td>
			<td style="width:169px;">Kitazato Science Co., Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">1111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rodent mechanical ventilator</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>#50206</td>
			<td>Wood Dale, IL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4% isoflurane</td>
			<td>Pfizer Japan</td>
			<td>114-13340-3</td>
			<td>Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Artificial skin (Pelnac&#174;)</td>
			<td>Smith &#38; Nephew</td>
			<td>PN-R40060</td>
			<td>&#160;Tokyo, Japan</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Non-adhesive dressing (Hydrosite plus&#174;)</td>
			<td>Smith &#38; Nephew</td>
			<td align="right">66800679</td>
			<td>Known as Allevyn non-adhessing&#174; in the United State</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">5-0 nylon suture</td>
			<td>Alfresa</td>
			<td style="width:119px;">EP1105NB45-KF2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 CELLSTAR TUBES</td>
			<td>greiner bio-one</td>
			<td style="width:119px;">227 261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">15mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td align="right" style="width:119px;">430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL</td>
			<td>Hu-Friedy</td>
			<td style="width:119px;">P14</td>
			<td>Chicago, IL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creation and transplantation of an adipose-derived stem cell (asc) sheet in a diabetic wound-healing model

Konstgjord hud har uppnått betydande terapeutiska resultat i klinisk praxis. Konstgjord hudbehandlingar för sår hos diabetespatienter med hämmas blodflödet eller med stora sår kan dock förlängas. Cellbaserade terapier har dykt upp som en ny teknik för behandling av diabetiska sår och cellagret teknik har förbättrat effekten av stamcellstransplantation. Ett antal rapporter har föreslagit att adipose-derived stamceller (ASCs), en typ av mesenkymala stromaceller celler (MSC), uppvisar terapeutisk potential på grund av deras relativa överflöd i fettväv och deras tillgänglighet för samling jämfört med MSCs från andra vävnader. Därför verkar ASCs vara en bra källa av stamceller för terapeutiska användning. I denna studie skapats ASC ark från epididymal fett fett normala Lewis råttor har med hjälp av temperatur-lyhörd kultur rätter och normalt odlingsmedium som innehåller askorbinsyra. ASC arken transplanterade i Zucker diabetiker fettsyror (ZDF) råttor, en råtta modell av typ 2-diabetes och fetma, som uppvisar minskad sårläkning. Ett sår skapades på den bakre kraniala ytan, ASC ark transplanterades in i såret och en lipidens konstgjord hud användes för att täcka arken. ZDF råttor som fick ASC ark hade bättre sårläkning än ZDF råttor utan transplantation av ASC ark. Detta tillvägagångssätt var begränsad eftersom ASC ark är känsliga för torra förhållanden, som kräver underhåll av en fuktig såret miljö. Därför användes konstgjord hud att täcka ASC plåten för att förhindra uttorkning. Allogenic transplantation av ASC ark i kombination med konstgjord hud kan också tillämpas på andra svårbehandlade sår eller brännskador, såsom dem som observerats med perifer arteriell sjukdom och kollagen sjukdom, och kan ges till patienter som är undernärda eller använder steroider. Denna behandling kan således vara ett första steg mot att förbättra de terapeutiska alternativ för diabetiker sår läkning.

Detta protokoll försökte upprätta en ny cell-baserad terapi för svårbemästrade diabetiska sår. Kort (som illustreras i figur 1), allogen rASC ark skapades från normala råttor cellagret engineering och transplanterades sedan med en lipidens av konstgjord hud på en fullhudsskador hud defekt på en diabetiker råtta. Ljusmikroskop bilder av ett bra exempel på en rASC ark (figur 2A) och ett dåligt exempel på ett rASC-ark (figur 2B</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model at JoVE.com

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Adipose-derived stamceller (ASCs) är enkelt isolerade och skördas från fettet av normala råttor. ASC lakan kan skapas med cellagret teknik och kan transplanteras till Zucker diabetiska feta råttor uppvisar fullhudsskador hud defekter med utsatt ben och sedan täckt med en lipidens av konstgjord hud.

Skapande och Transplantation av en Adipose-derived Stem Cell (ASC) blad i en diabetiker sårläkning modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic Aorta Transplantation: En Rat modell för att studera utvecklingen av kronisk vaskulopati

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

En musmodell av I livmodern Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcellstransplantation i en In vitro Simulerad ischemi / Reperfusion Modell

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Använda kvantitativ realtids-PCR för att avgöra Engraftment donatorcellen i en konkurrenskraftig Murine Bone Marrow Transplantation Modell

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Murine Model of Wound Healing

Murinmodell sårläkning

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural stamcellstransplantation i experimentell Contusive Modell av ryggmärgsskada

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplantation av fettvävnad-Derived stamceller blad att minska läckage efter partiell kolektomi i en råtta modell

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hornhinnans epitel nötning med okulär Burr som modell för hornhinnan sårläkning

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Ex Vivo sårläkning korneal orgel kultur modell för studier

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Inriktning grå Rami Communicantes i selektiv kemiska ländryggen Sympathectomy

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...