Name: a buoyancy-based method of determining fat levels in drosophila
Uploaded: 2016-11-01T11:15:00
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K.E.H. was supported by the Training Grant in Molecular Biology NIH-T32-GM08730. This work was supported by NIH, NIDDK Grant 5K01DK095932 and AHA Award 12BGIA11930014 to T.R.

1. 관심의 유전자형과 파리에서 계란을 수집 주 : 이상적인 십자가 150 처녀 파리 적어도 75 명의 남성으로 구성되어 있습니다. 주식 컬렉션은 최소 200 파리로 구성되어야합니다. <ol><li> 포도 접시를 준비합니다. <ol><li> 4 L 플라스크에 1.5 L 증류수에 37.5 g 한천을 추가합니다. </li><li> 121 ºC (250 ºF)에서 50 분 동안 오토 클레이브 물 / 한천 혼합. </li><li> 물 / 한천 혼합 고압 증기 멸균 동안, 500 ml의...

<ol>
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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+Isotope+Labeling+Strategy+Reveals+the+Influence+of+Insulin+Signaling+on+Lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C Isotope Labeling Strategy Reveals the Influence of Insulin Signaling on Lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metab. 8, 266-274 (2008).</li></ol>

10 - 지질 수준 8을 측정하기 위해 개발 된 기술이 다수가있다. 그러나, 이러한 각각의 방법은 위에 설명 된 부력 기반 분석에 의해 해결 된 몇 가지 큰 단점이 함께 제공됩니다. 우선,이 분석은 매우 빠르다. 60 분 - 전체 농도 구배를 테스트하는 것은 더 이상 30 이상 걸립니다. 이것은 현재 사용중인 대부분의 기술에 큰 개선이다. 이를 분석하는 지질 및 다른 여러 시간 분리 ...

노랑 초파리는 유전학 및 기타 기본적인 생물학적 질문의 연구에서 한 세기에 걸쳐 사용되어왔다. 초파리는 사람의 질환에 대한 연구를 위하여 강력한 도구가 있음을 지난 수십에서는 명백 해졌다. 인간의 질병과 관련된 유전자의 80 % 식별 된 비행 ortholog 1가 - - 70으로 4, 초파리는 복잡한 질병을 연구하기에 간단 아직 번역 시스템을 제공한다. 특히 대사는 연구로부터 혜택을 받았다. 뿐만 아니라 초파리와 인간 사이에서 보존 된 대사 유전자가 있지만, 관련 기관, 세포 유형은 2,5- 매우 유사하다. 예를 들어, 포유 동물의 간 및 흰색 지방 조직 (6)에서 수행 된 것과 모두 triacylglycerides (TAG)과 글리코겐, 기능과 유사 플라이 점포의 지방이 몸. 인간의 비만의 모델로 초파리를 사용하면 훨씬 지질에 대한 우리의 이해를 개선했다신진 대사와 비만 (7)의 유전학. 개발의 애벌레 단계가 공급하기 위해 최선을 다하고 있습니다 에너지의 저장은 pupariation 동안 사용으로 저장 또는 사용에 영양소의 분리를 공부에 특히 유용합니다. 현재, 초파리 지방 저장 레벨을 결정하는 다양한 정량 방법이있다. 가장 널리 사용되는 방법은 결합 비색 분석 (CCA) -8,9-이다. CCA 인간 혈청 TAG 수준을 결정하기 위해 개발되고 궁극적으로 착색 된 생성물을 생성하는 산화 환원 커플 링 반응의 결과로 여러 반응을 겪을 것이다 트리글리세리드의 백본에서 해방 글리세롤 전제로 동작한다. 빛의 특정 파장의 흡수 후, 글리세롤의 존재의 초기 양을 측정한다. 그러나, 글리세롤은 TAG뿐만 아니라 모노 - 및 디아 실에서 해방 될 수 있으므로들에 대한 정확한 측정하지 않을 수 있습니다tored 체지방 9. 또한, 분쇄 성인 파리의 눈 안료는 약간의 흡광도 판독을 방해하고 결과 9,10을 복잡하게 할 수 있습니다. 따라서, CCA는 동반 10,11 농도계에 의해 정량화 될 수있는 대부분의 지질 군의 분리를 허용 박층 크로마토 그래피 (TLC)에 의해 검증되어야한다. 그러나, 스테롤 등 일부 지질 분류 분석 할 수 없으며, 다른 방법 (12)을 정량한다. 질량 분석 (MS)의 주요 세포 지질 12, 13의 모든 클래스를 정량 할 수있는 정확한 방법입니다. 그러나, MS에 의해 분석 할 필요 지질 추출 절차는 두 시간 소모적 (대부분 촬영 거의 전체 일) 및 비용이다. 여기서 우리는 신속하고 저렴 초파리의 L3 유충에 유기체 지방 수준을 결정하기위한 다른 방법을 제시한다. 아래에 제시된 방법은 지방 조직, 마른 조직 사이의 밀도의 차이를 이용한다. 포유 동물 FAt 조직은 1.06 g / ㎖ (15)의 밀도는 약 0.9 g / ㎖ 14 동안 골격근의 밀도를 갖는다. 이 차이는 지방의 높은 점포 동물들이 고정 농도의 용액에 더 부유 할 수 있도록 지방의 낮은 매장과 동물보다 낮은 밀도를 가질 것을 의미합니다. 이 호텔은 저렴하고 비 침습적 모두있는 동안 동물의 많은 수의 매우 빠른 스크리닝 할 수 있습니다. 부력 기반 분석은 또한 비만 16,17 새로운 유전 적 신경 레귤레이터를 식별하기 위해 같은 지방 수준의 공지 된 레귤레이터 변경의 표현형을 확인하는 데 모두 사용되어왔다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="670">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bacto Agar</td>
			<td style="width:168px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">214030</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Welch&#39;s Original 100% Grape Juice</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tegosept</td>
			<td style="width:168px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">20-259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>200 proof</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Baker&#39;s yeast</td>
			<td style="width:168px;">Fleichmann&#39;s</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Yellow Corn Meal</td>
			<td style="width:168px;">Quaker</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Enriched degerminated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Drosophila Agar Type II</td>
			<td style="width:168px;">Apex</td>
			<td style="width:119px;">66-104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Soy Flour</td>
			<td style="width:168px;">ADM Specialty Ingredients</td>
			<td style="width:119px;">062-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Malt Extract</td>
			<td style="width:168px;">Breiss</td>
			<td style="width:119px;">5748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Light Corn Syrup</td>
			<td style="width:168px;">Karo</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Propionic Acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>U330-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50147491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium phosphate anhydrous</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S3933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35 x 10mm petri plate</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50mL Conical</td>
			<td style="width:168px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">50-869-569</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a buoyancy-based method of determining fat levels in drosophila

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat in Drosophila, but most are expensive and/or laborious and have clear limitations. Here, we present a method to quickly and cheaply determine organismal fat levels in L3 Drosophila larvae. The technique relies on the differences in density between fat and lean tissues and allows for rapid detection of fat and lean phenotypes. We have verified the accuracy of this method by comparison to body fat percentage as determined by neutral lipid extraction and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GCMS). We furthermore outline detailed protocols for the collection and synchronization of larvae as well as relevant experimental recipes. The technique presented below overcomes the major shortcomings in the most widely used lipid quantitation methods and provides a powerful way to quickly and sensitively screen L3 larvae for fat regulation phenotypes while maintaining the integrity of the larvae. This assay has wide applications for the study of metabolism and fat regulation using Drosophila.

그림 1은 부력 기반의 분석은 유전자 조작 유충 모두 높고 낮은 지방 점포를 감지 할 수있는 방법의 예를 나타낸다. 그림 1a는 애벌레 뇌에서 신경 세포의 특정 부분 집합 (E347)의 여자 또는 침묵을 보여줍니다 유도 낮은 및 높은 지방 각각 저장한다. 동일한 유전 적 배경 제어는 두 경우 모두에서 사용 하였다. (1B)의 농도 분석에 의해 ?...

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A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

여기에서 우리는 세 번째 령 (L3) 초파리의 애벌레 단계에서 유기체 지방 수준을 측정하는 방법을 제시한다. 이 방법은 변경된 지방 저장과 애벌레를 구분하는 지방 조직의 비교적 낮은 밀도를 이용한다. 부력 기반의 분석은 신속하게 재현, 경제적 선별을위한 유용한 도구입니다.

지방 수준을 결정하는 부력 기반 방법<em&gt; 초파리</em

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Studying Aggression in Drosophila fruit flies

(과일 파리) Drosophila의 침략을 유학

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources.  This complex social behavior is influenced by ...

연구

생물학

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing : 정확한 Genotyping을위한 간단한 방법

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

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Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

에서 지방 질량의 생화학 및 높은 처리량 미세 평가<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

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An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에<em&gt; 초파리</em

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의 Permeabilization의 방법<em&gt; 초파리</em작은 분자 활동의 분석 실험을위한&gt; 태아

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정량 면역 형광 분석은 중심체에서 단백질 수준의 변화를 측정하기 위해

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