Name: analysis of coronary vessels in cleared embryonic hearts
Uploaded: 2016-12-07T13:00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts at JoVE.com

Работа выполнена при финансовой поддержке British Heart Foundation&#39;and при поддержке Национального института по исследованиям в области здравоохранения научно-исследовательского центра биомедицинской в ​​Большом госпитале Ормонд-стрит для детей NHS Foundation Trust и Университетского колледжа Лондона.

<ol>
	<li>Red-Horse, K., Ueno, H., Weissman, I. L., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteries+form+by+developmental+reprogramming+of+venous+cells.">Coronary arteries form by developmental reprogramming of venous cells.</a> Nature. 464 (7288), 549-553 (2010).</li><li>Tian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subepicardial+endothelial+cells+invade+the+embryonic+ventricle+wall+to+form+coronary+arteries.">Subepicardial endothelial cells invade the embryonic ventricle wall to form coronary arteries.</a> Cell Res. 23 (9), 1075-1090 (2013).</li><li>Wu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocardial+cells+form+the+coronary+arteries+by+angiogenesis+through+myocardial-endocardial+VEGF+signaling.">Endocardial cells form the coronary arteries by angiogenesis through myocardial-endocardial VEGF signaling.</a> Cell. 151 (5), 1083-1096 (2012).</li><li>Klotz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+lymphatics+are+heterogeneous+in+origin+and+respond+to+injury.">Cardiac lymphatics are heterogeneous in origin and respond to injury.</a> Nature. 522 (7554), 62-67 (2015).</li><li>Nam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+veins+determine+the+pattern+of+sympathetic+innervation+in+the+developing+heart.">Coronary veins determine the pattern of sympathetic innervation in the developing heart.</a> Development. 140 (7), 1475-1485 (2013).</li><li>Zhu, D., Larin, K. V., Luo, Q., Tuchin, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+tissue+optical+clearing.">Recent progress in tissue optical clearing.</a> Laser Photon. Rev. 7 (5), 732-757 (2013).</li><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nat. Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Hama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neurosci. 14 (11), 1481-1488 (2011).</li><li>Ke, M. T., Fujimoto, S., Imai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SeeDB:+a+simple+and+morphology-preserving+optical+clearing+agent+for+neuronal+circuit+reconstruction.">SeeDB: a simple and morphology-preserving optical clearing agent for neuronal circuit reconstruction.</a> Nat. Neurosci. 16 (8), 1154-1161 (2013).</li><li>Dodt, H. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultramicroscopy:+three-dimensional+visualization+of+neuronal+networks+in+the+whole+mouse+brain.">Ultramicroscopy: three-dimensional visualization of neuronal networks in the whole mouse brain.</a> Nat. Methods. 4 (4), 331-336 (2007).</li><li>Zucker, R. M., Hunter, E. S., Rogers, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+laser+scanning+microscopy+of+morphology+and+apoptosis+in+organogenesis-stage+mouse+embryos.">Confocal laser scanning microscopy of morphology and apoptosis in organogenesis-stage mouse embryos.</a> Methods Mol. Biol. 135, 191-202 (2000).</li><li>Erturk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat. Protoc. 7 (11), 1983-1995 (2012).</li><li>Erturk, A., Lafkas, D., Chalouni, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+cleared+intact+biological+systems+at+a+cellular+level+by+3DISCO.">Imaging cleared intact biological systems at a cellular level by 3DISCO.</a> J. Vis.Exp : JoVE. (89), (2014).</li><li>Dyer, L. A., Wu, Y., Patterson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+isolation+from+the+developing+embryonic+mouse+heart+valve+region.">Protein isolation from the developing embryonic mouse heart valve region.</a> J. Vis.Exp s : JoVE. (91), e51911 (2014).</li><li>Wilsbacher, L. D., Coughlin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cardiomyocyte+development+using+immunofluorescence+in+embryonic+mouse+heart.">Analysis of cardiomyocyte development using immunofluorescence in embryonic mouse heart.</a> J. Vis.Exp : JoVE. (97), (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Tian, X., Pu, W. T., Zhou, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+origin+and+developmental+program+of+coronary+angiogenesis.">Cellular origin and developmental program of coronary angiogenesis.</a> Circ. Res. 116 (3), 515-530 (2015).</li><li>Ivins, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CXCL12/CXCR4+Axis+Plays+a+Critical+Role+in+Coronary+Artery+Development.">The CXCL12/CXCR4 Axis Plays a Critical Role in Coronary Artery Development.</a> Dev. Cell. 33 (4), 455-468 (2015).</li><li>Theveniau-Ruissy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+stem+development+in+wild-type+and+Tbx1+null+mouse+hearts.">Coronary stem development in wild-type and Tbx1 null mouse hearts.</a> Dev. Dyn : an official publication of the American Association of Anatomists. 245 (4), 445-459 (2016).</li><li>Tomanek, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+coronary+vasculature+during+development.">Formation of the coronary vasculature during development.</a> Angiogenesis. 8 (3), 273-284 (2005).</li><li>Chen, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+and+aortic+cardiomyocytes+guide+coronary+artery+stem+development.">VEGF-C and aortic cardiomyocytes guide coronary artery stem development.</a> J. Clin.Iinvest. 124 (11), 4899-4914 (2014).</li><li>Tian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vessel+formation.+De+novo+formation+of+a+distinct+coronary+vascular+population+in+neonatal+heart.">Vessel formation. De novo formation of a distinct coronary vascular population in neonatal heart.</a> Science. 345 (6192), 90-94 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Коронарные сосуды в целом эмбрионального сердца были обследованы с помощью Wholemount иммунным окрашиванием с анти-PECAM1 антителом с последующим оптическим клиренса и конфокальной микроскопии. Простой метод, описанный здесь, для оформления эмбриональных сердца мыши с Бабб, увеличивает оптическое проникновение и обеспечивает захват изображений с высоким разрешением кровеносных сосудов, локализованных в аорте и желудочковой стенки. Глицерин на основе монтажа реагенты , такие как Vectashield (показатель преломления 1,45) также были использованы для визуализации коронарных сосудов 22 , однако, чем выше показатель преломления Бэбб (1,56) уменьшает рассеивание света еще дальше, позволяя проникновение более глубокие ткани. Тканевая оформление устраняет необходимость в более сложных, дорогостоящих форм микроскопии, таких как многофотонной и световой микроскопии листа, который может быть менее доступными для исследователей. Процесс клиринга очень быстро по сравнению с другими методами 6-9 и для малых выборок может быть чаrried с использованием небольших объемов реагентов непосредственно на микроскопии блюдо. Прочные окрашивание сосудистую требуется для того, чтобы достичь высокого качества изображения; анти-PECAM1 антитело было выбрано, как это отмечает все виды коронарного КЧС и ряда коммерческих антител были найдены, чтобы дать соответствующим образом высокие уровни окрашивания. Кроме того, флуоресцентный окрашивание по-видимому, чрезвычайно устойчивым в Бэбб; Образцы хранили при комнатной температуре в Бабб (защищенном от света месте) сохранили свой флуоресцентный сигнал в течение нескольких месяцев. Тот факт, что PECAM1 антитело эффективно маркирует коронарную эндокарда, а также сосудистую сеть от времени проблематично, особенно при съемке изображений peritruncal сплетении. Сильнее окрашивание просвет аорты по сравнению с peritruncal КЧС привело к риску чрезмерного насыщения в некоторых областях изображений, а это означает, что требуется тщательной корректировки параметров изображения. В идеале, окрашивание антитела сосудистая будет использоваться только КЭ; на практике,однако, поиск подходящих антител, которые дают необходимый уровень Wholemount окрашивания может быть затруднено. В последнее время , жирные кислоты , белок , связывающий 4 (FABP4) было показано, является маркером коронарного сосудистого КЭ 23 и , следовательно , может представлять собой альтернативу PECAM1. Для того, чтобы сохранить 3D морфологии аорты и камер сердца образцы не были плоскими монтажа, но вместо этого были отображены в стеклянном дном посуды. Глубина образцов быть отображены не позволяют использовать высокие цели увеличения, из-за своих коротких рабочих расстояниях. Однако изображения с высоким разрешением по-прежнему достижимы с использованием объектива 10х за счет увеличения времени задержки пикселя и используя размер массива пикселей по меньшей мере 1,024 х 1,024 для захвата изображения. Этого было достаточно для анализа структуры и распределения коронарных сосудов, однако тоньше анализ клеточной структуры может потребовать плоским монтаж образцов. Вскрытие отдельных частей сердца для монтажа,например, стенок желудочков, или аорта, также могут быть необходимы. В качестве альтернативы, передискретизации изображения с последующим деконволюции может быть осуществлено с целью увеличения разрешения и чувствительности; это, однако, значительно больше требует времени сканирования и создает очень большие файлы изображений, которые требуют много вычислительной мощности для обработки. Сердца до E15.5 были успешно визуализируют с помощью этого метода, а также можно анализировать сосудистую целых эмбрионов (по крайней мере до E11.5), используя тот же протокол. Другие типы клеток, например, клетки гладких мышц также были отображены в нашей лаборатории , используя эту технику. Для более толстых тканей, например, сердца старше E15.5, проникновение антител может быть ограничивающим фактором; больше инкубацию и / или увеличение моющего средства может потребоваться. Кроме того, при сборе большого г стопка изображений сила сигнала может быть уменьшена, поскольку лазеры проникают дальние участки ткани; однако конфÖçal параметры могут быть скорректированы, чтобы увеличить мощность лазера с увеличением расстояния г. Этот метод облегчает конфокальной микроскопический анализ как на ранних стадиях формирования коронарных сосудов и кучность коронарных артерий на более поздних стадиях развития. Более подробная информация о распределении, разветвленности и структуры кровеносных сосудов могут быть приобретены в течение короткого времени, что делает это ценным инструментом для изучения генетических мутантов мышей с определенными дефектами ангиогенеза путей.

Создание функционирующей коронарной сети имеет решающее значение для функции сердца и эмбрионального развития, а также анализ генетических мутантов мыши может дать ценную информацию о молекулярных сигналов, лежащих в основе этого процесса развития. Способность визуализировать эмбриональные коронарных сплетение в целом, а не представлены в серии гистологических срезов, имеет важное значение для облегчения анализа кучность сосудов в генетических мутантов, и позволяет избежать возможной потери информации, которая может возникнуть в результате механического разрезание ткани. Суда суждено сформировать артерии и капилляры локализованы глубоко внутри стенок обоих желудочков и аорты 1-3. Тем не менее, в то время как флуоресцентного мечения клеток в сочетании с лазерной сканирующей конфокальной микроскопии может обеспечить изображений с высоким разрешением Wholemount меченных поверхностных вен / лимфатическими сосудами 4,5, глубина изображения ограничена оптическим проникновением. Высокое разрешение изображения колпачкаПоэтому illaries и артерии на протяжении всей глубины сердца невозможно без какой-либо форме очистки ткани. Плохое оптическое проникновение обусловлено высоким показателем преломления и множественной клеточной внеклеточного (например, коллагена и эластичных волокон) компонентов толстых тканей. Это рассеивает свет изображения, вызывая размытие и снижение контрастности. Клиринговые агенты, как правило, соответствуют высоким показателем преломления таких тканей, а это означает, что свет может проходить через образец беспрепятственное и проникают глубже в ткани. Перед очисткой, ткани, как правило, обезвоженной, как вода имеет относительно низкий показатель преломления. Множество новых методов клиринговых были разработаны в последнее время , тем не менее в зависимости от используемого метода, процесс удаления может занять несколько дней или недель , и может потребовать дорогостоящих реагентов 6-9. Бэбб (смесь 1: 2 бензилового спирта и бензилбензоата) является недорогим, обычно используемый осветлитель, который имеетПреимущество очистки образцов очень быстро. Бэбб на основе клиринга и обработки изображений методы были описаны ранее для неврологических образцов и различных органов 10-13. Здесь мы опишем надежный и простой метод для Бабб оформления иммуноокрашиванию образцов с последующим конфокальной микроскопии, с конкретной ссылкой на обследования кровеносных сосудов в мышиных сердцах из Е (эмбриональный день) 11,5 - 15,5. Однако, как также было продемонстрировано, методика может одинаково хорошо применяться для анализа целых эмбрионов, а также другие типы клеток, до тех пор, как высокие антитела качества к маркерам интерес доступны.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1544">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">PBS</td>
			<td style="width:128px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:167px;">14190-094</td>
			<td style="width:623px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Forceps</td>
			<td style="width:128px;">FST</td>
			<td style="width:167px;">11251-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">10cm Petri dishes</td>
			<td style="width:128px;">Falcon</td>
			<td align="right" style="width:167px;">351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">35mm Petri dishes</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:167px;">P5112</td>
			<td style="width:623px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Stainless steel minutien pins 0.2mm diameter</td>
			<td style="width:128px;">FST</td>
			<td style="width:167px;">26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Fine tip pastettes&#160;</td>
			<td style="width:128px;">Alpha Laboratories</td>
			<td style="width:167px;">LW4061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">1000ml pipette tips</td>
			<td style="width:128px;">Sorenson</td>
			<td align="right" style="width:167px;">34000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">48-well plate</td>
			<td style="width:128px;">Falcon</td>
			<td align="right" style="width:167px;">353078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Kwik-Gard</td>
			<td style="width:128px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:167px;">KWIKGARD</td>
			<td>Silicone elastomer Sylgard184 packaged in a cartridge for mixing and dispensing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Kwik-Gard refill</td>
			<td style="width:128px;">World Precision Instrument</td>
			<td style="width:167px;">KWIKGLUE</td>
			<td>Refill cartridges and dispensing tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:167px;">P6148</td>
			<td>Make up in PBS and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">100% methanol</td>
			<td style="width:128px;">VWR</td>
			<td align="right" style="width:167px;">20847307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Tween&#174;20</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:167px;">P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Goat serum</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:167px;">G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Anti-PECAM1 antibody, rat anti-mouse</td>
			<td style="width:128px;">BD Pharmingen</td>
			<td align="right" style="width:167px;">553370</td>
			<td>Primary antibody, dilute 1 in 50</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-CD31 polyclonal, rabbit polyclonal</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:167px;">ab28364</td>
			<td>Primary antibody, dilute 1 in 50</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-CD31/PECAM1 clone 2H8, armenian hamster monoclonal</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:167px;">MA3105</td>
			<td>Primary antibody, dilute 1 in 400</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Endomucin antibody (V.7C7), rat monoclonal</td>
			<td style="width:128px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:167px;">sc-65495</td>
			<td>Primary antibody, dilute 1 in 50</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Anti-SM22 alpha antibody, rabbit polyclonal</td>
			<td style="width:128px;">Abcam</td>
			<td style="width:167px;">ab14106</td>
			<td>Primary antibody, dilute 1 in 250</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Goat anti-rat IgG (H+L)Alexa Fluor 594</td>
			<td style="width:128px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:167px;">A11007</td>
			<td>Secondary antibody, dilute 1 in 500</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L)Alexa Fluor 594</td>
			<td style="width:128px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>Secondary antibody, dilute 1 in 500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Goat anti-Armenian Hamster IgG (H+L)Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:128px;">Abcam</td>
			<td style="width:167px;">ab173003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:627px;">Goat anti-rat IgG (H+L)Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:128px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:167px;">A21208</td>
			<td>Secondary antibody, dilute 1 in 500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Phenolic screw cap</td>
			<td style="width:128px;">Wheaton</td>
			<td align="right" style="width:167px;">240408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Benzyl alcohol</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:167px;">402834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Benzyl benzoate</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:167px;">B6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Imaris</td>
			<td style="width:128px;">Bitplane Imaging</td>
			<td style="width:167px;">image analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:627px;">Image J software</td>
			<td style="width:128px;">NIH</td>
			<td style="width:167px;">Freeware</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of coronary vessels in cleared embryonic hearts

Whole mount visualization of the embryonic coronary plexus from which the capillary and arterial networks will form is rendered problematic using standard microscopy techniques, due to the scattering of imaging light by the thick heart tissue, as these vessels are localized deep within the walls of the developing heart. As optical clearing of tissues using organic solvents such as BABB (1 part benzyl alcohol to 2 parts benzyl benzoate) has been shown to greatly improve the optical penetration depth that can be achieved, we combined clearance of whole, PECAM1-immunostained hearts, with laser-scanning confocal microscopy, in order to obtain high-resolution images of vessels throughout the entire heart. BABB clearance of embryonic hearts takes place rapidly and also acts to preserve the fluorescent signal for several weeks; in addition, samples can be imaged multiple times without loss of signal. This straightforward method is also applicable to imaging other types of blood vessels in whole embryos.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts at JoVE.com

Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts

Мы представляем протокол для анализа коронарных сосудов в целом эмбриональных мышиных сердец до E15.5, с использованием стандартных иммунологических методов окрашивания с последующим оптическим клиренса и конфокальной микроскопии. Этот метод позволяет визуализировать кровеносные сосуды на протяжении всего сердца, без необходимости трудоемкого анализа серийных срезах.

Анализ коронарных сосудов сердца в Сбрасывается эмбриональных сердец

Whole mount visualization of the embryonic coronary plexus from which the capillary and arterial networks will form is rendered problematic using standard ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Large-scale Zebrafish Embryonic Heart Dissection for Transcriptional Analysis

Крупномасштабные данио рерио эмбриональных Сердце Вскрытие для транскрипционных анализа

The zebrafish embryonic heart is composed of only a few hundred cells, representing only a small fraction of the entire embryo. Therefore, to prevent the ...

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

Анализ кардиомиоцитов развития с помощью иммунофлюоресценции в эмбриональных мыши Сердце

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

Визуализация хондроцитов интеркаляции и направленного распространения через Zebrabow клонального анализа клеточной хряща в эмбриональном Меккеля

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Анализ данио рерио Личинки скелетных мышц целостности с синий краситель Эванса

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Транскриптом профилирование<em&gt; In-Vivo</em&gt; Производимые Бычьи Эмбрионы предимплантационной Использование Двухцветный Microarray платформы

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Imaging Cleared Embryonic and Postnatal Hearts at Single-cell Resolution

Очищенные визуализации эмбрионального и постнатального Сердца в одноклеточные Разрешение

Single clonal tracing and analysis at the whole-heart level can determine cardiac progenitor cell behavior and differentiation during cardiac development, ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

Анализ ретиноевой кислоты-индуцированной Neural дифференциации эмбриональных стволовых клеток мыши в двух и трех-мерных эмбриональных телец

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Визуализация и количественный анализ эмбрионального ангиогенеза у<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Capturing the Cardiac Injury Response of Targeted Cell Populations via Cleared Heart Three-Dimensional Imaging

Захват сердечной травмы ответ целевых популяций клеток через очищенное сердце трехмерных изображений

Cardiovascular disease outranks all other causes of death and is responsible for a staggering 31% of mortalities worldwide. This disease manifests in ...

Laser Capture Microdissection of Mouse Embryonic Cartilage and Bone for Gene Expression Analysis

Лазерная захват микродиссекции мыши эмбрионального хряща и кости для анализа экспрессии генов

Laser capture microdissection (LCM) is a powerful tool to isolate specific cell types or regions of interest from heterogeneous tissues. The cellular and ...