Name: an in vitro model for studying cellular transformation by kaposi sarcoma herpesvirus
Uploaded: 2017-08-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus at JoVE.com

وأيد هذا العمل قبل HD068322 K12 (SCM)؛ R01 CA179921 و P51 OD011092 للمركبات؛ وجائزة 14PRE20320014 من جمعية القلب الأمريكية (س. ب).

ملاحظة: ينبغي إجراء جميع الإجراءات المبينة في هذا البروتوكول في ظروف BSL-2-
 1-"إعداد الأوراق المالية كشف" <ol><li>TNE إعداد المخزن المؤقت: حل ملغ 292.24 يدتا في ddH 2 س وتقديمهم إلى 225 مل، وضبط لدرجة الحموضة 8. حل ملغ 605.7 تريس في ddH 2 س وتقديمهم إلى 225 مل، وضبط لدرجة الحموضة 8. الجم...

أونكوجينيسيس هو عملية متعددة الخطوات التي تلتف ضمانات هامة داخل الكائن حي36. نظراً لعدم وجود آفات KS على طول طائفة التهاب مزمن الطويلا صحيح، يتطلب توضيح بعض العمليات الفيزيولوجية المرضية بكشف وساطة إجراء بعض الدراسات في نماذج الثقافة الخلية التي تدعم التحول9. تجد?...

ساركوما كابوزي (KS) هو ورم أنجيوبروليفيراتيفي تنسيق المتعددة التي تؤثر على المواقع عن طريق الجلد والأغشية المخاطية الحشوي أن يطور الأكثر شيوعاً في الإعداد لقمع المناعة المتقدم1. وقد وصف النماذج الوبائية الأربعة: الكلاسيكية، وشكل من أشكال كسول عادة ما تؤثر على كبار السن من تراث البحر الأبيض المتوسط والشرق الأوسط؛ علاجية المنشأ، الناجمة عن المعالجة بالأدوية المثبطة للمناعة بعد زرع الأعضاء؛ هذا الوباء، تعريف الإيدز مرض سرطان؛ والمتوطنة، شكلاً مستقلاً عن فيروس نقص المناعة البشرية مشتركة في الأطفال في المناطق الموبوءة في أفريقيا. ومع ظهور أنظمة العقاقير المضادة للفيروسات الرجعية تركيبة فعالة لعلاج فيروس نقص المناعة البشرية، أقل بكثير عادة يتم تشخيص KS الوباء في البلدان النامية. ومع ذلك، تظل النماذج العدوانية سريرياً المتوطنة والوبائية بين الأكثر شيوعاً تشخيص السرطان في العديد من البلدان الأفريقية2،،من34. ولذلك، يعتبر تحديد أدوية فعالة تستهدف المرضية لعلاج كانساس أولوية بحثية.
الأشيع، تتميز الآفات KS neovascularization واسعة النطاق ولكن غير طبيعية حيث تشكل المغزل خلايا المنشأ الأوروبية شبكات الأوعية الدموية متقطع5. تسمح هذه السفن غير طبيعي ("الشقوق الأوعية الدموية") التسرب من الكريات الحمراء، التي تعطي الآفات لون مميز. بالإضافة إلى ذلك، تتضمن الآفات الكريات البيضاء العديدة التي تميز الالتهاب المزمن (أي الخلايا الليمفاوية والضامة وخلايا البلازما). لقد وصف انحدار آفات كانساس بعد إعادة تشكيل المناعة، مما يوحي بأن سمات KS آفة فرط التكاثري وورم حقيقي6،،من78،9.
KS هربس (كشف)، المسبّب كانساس، حددت في عام 199410. منذ آنذاك كثيرة في المختبر خلية الثقافة-تم تطوير نماذج لتمكين الدراسات المرضية، بما في ذلك الخلايا اكسبلانتيد من المواد خزعة الورم والابتدائية أو المفوضية الأوروبية تعرب عن تيلوميراسي المصابين بكشف في المختبر11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18-أي من النماذج المتاحة حاليا ويجمل كانساس وورم المكروية تماما، ولكن جميعا أسهمت بمعرفة قيمة لفهم بل لكشف العدوى. خلافا الأخرى المعروفة ورمي الإنسان هربس فيروس ابشتاين-بار (EBV)، كشف عدم سهولة تحويل الخلايا في الثقافة عقب حيثياته العدوى19،،من2021، 22. ومع ذلك، تم التغلب على هذا القيد من ترانسدوسينج EC البشرية الأولية أما مختلطة الأصل ميكروفاسكولار أو اللمفاوية مع E6 واكتب E7 جينات من فيروس الورم الحليمي البشري 16 قبل الإصابة بكشف23،24 . التعبير عن هذه المسرطنة خارجية يزيد بشكل كبير احتمال تحويل لكشف في المختبر جزئيا بإتاحة المزيد من تثبيط الشبكية البروتين و p5323،24. أتاح هذا الأسلوب توصيل المفوضية الأوروبية مختبرات متعددة لتحديد التعديلات الرئيسية في المضيف التعبير الجيني في الخلايا التي هي الناجمة عن كشف العدوى والتي تظهر لتسهيل KS خلية البقاء على قيد الحياة وانتشار25،26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32-البروتوكولات المبينة في هذا التقرير مباشرة واستنساخه بدرجة عالية، وسوف تسفر عن توليد العمر ومرور مطابقة المفوضية الأوروبية كشف المصابين والمصابات موك عناصر التحكم التي يمكن أن يكون مثقف لأطول بكثير من الخلايا الأولية وسوف السماح بالتحقيق في آليات النمطان تستخدمهم كشف. على الرغم من أن البروتوكول يتضمن أسلوباً لإنتاج نوع المتوحش كشف من انصباب الابتدائي سرطان الغدد الليمفاوية الخلية خط BCBL-1، E6/E7-خلد الجماعة الأوروبية أيضا عرضه للعدوى مع باكميد المؤتلف المستمدة كشف BAC1630. يتم وصف بروتوكولات من أجل إعداد BAC16 في أماكن أخرى33،34.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BCBL-1 cells</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>3233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA317 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2203</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonatal dermal microvascular endothelial cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2505</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBM-2 Basal Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3156</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-KSHV LANA/ORF 73</td>
			<td>Advanced Biotechnologies</td>
			<td>13-210-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLETMExpress, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12604013</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS with calcium and magnesium</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model for studying cellular transformation by kaposi sarcoma herpesvirus

ساركوما كابوزي (KS) هو ورم غير عادية تتألف من تكاثر المغزل الخلايا التي يتم تهيئتها بواسطة عدوى خلايا بطانية (EC) مع كشف، ويطور في أغلب الأحيان في الإعداد للكبت المناعي. على الرغم من عقود من البحث، لا يزال العلاج الأمثل من كانساس غير المحددة بوضوح والنتائج السريرية غير مواتية وبخاصة في الأماكن المحدودة الموارد. الآفات KS تحركها تولد الأوعية المرضية، والتهاب مزمن، وأونكوجينيسيس، وقد وضعت في المختبر خلية ثقافة نماذج مختلفة لدراسة هذه العمليات. KS ينشأ من الخلايا المصابة بكشف أصل غشائي، حيث توفر خلايا الجماعة الأوروبية-النسب في المختبر أنسب البدائل للسلائف الخلية المغزل. ومع ذلك، نظراً لأن الجماعة الأوروبية لها عمر محدود في المختبر ، واليات النمطان تستخدمهم كشف أقل كفاءة من تلك الفيروسات الورمية الأخرى، لقد كان من الصعب تقييم عمليات التحول في التعليم الابتدائي أو خلد تيلوميراسي ec. ولذلك، وضع نموذج رواية ثقافة تستند إلى المفوضية الأوروبية بسهولة يدعم التحول بعد الإصابة مع كشف. التعبير حمل خارج الرحم من جينات فيروس الورم الحليمي البشري النوع 16 E6 و E7 يسمح للثقافة الموسعة لمطابقة العمر ومرور وهمية وكشف-المصابين بالمفوضية الأوروبية ويدعم تطوير حقاً تحولت (أي، ورمي) النمط الظاهري في الثقافات الخلية المصابة . وسهلت هذا النموذج أصعب واستنساخه بدرجة عالية من كانساس اكتشاف عدة مسارات إشارات أساسية ذات الإمكانات العالية للترجمة إلى إعدادات السريرية.

مورفولوجية EC الابتدائي الكلاسيكي توصف بأنها "حجر cobble"، ولا يتم تبديل هذا التشكل بالتعبير عن فيروس الورم الحليمي E6 و E7 الجينات (الشكل 1A). تعبير الجينات E6 و E7 وحدها لا الحث النمط الظاهري تحول؛ وهكذا، الخلايا عرضه للاتصال بتثبيط ويتوقف بتقسيم عند التوصل إلى التقاء ف?...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus at JoVE.com

An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

ساركوما كابوزي (KS) ورم الناجمة عن العدوى بالفيروس النمطان الإنسان هربس-8/KS هربس (هف-8/كشف). نموذج الثقافة غشائي خلية الموصوفة هنا مناسبة فريدة لدراسة الآليات التي تحول كشف الخلايا المضيفة.

نموذج في المختبر لدراسة التحول الخلوي من هربس كابوزي ساركوما

Kaposi sarcoma (KS) is an unusual tumor composed of proliferating spindle cells that is initiated by infection of endothelial cells (EC) with KSHV, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

كريستوفر هيوز : حدث في نموذج المختبر لدراسة الأوعية الدموية (مقابلة)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

A Microfluidic Device with Groove Patterns for Studying Cellular Behavior

جهاز ميكروفلويديك مع أنماط Groove لدراسة السلوك الخليوي

We describe a microfluidic device with microgrooved patterns for studying cellular behavior.  This microfluidic platform consists of a top fluidic channel ...

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

تقنيات Microinjection لدراسة الانقسام الميتوزي في ذبابة الفاكهة السوداء البطن الأجنة المخلوي

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

أسلوب الإنتاجية العالية للحصول على الحيوانات المنوية الحفظ بالتبريد واسماك الزرد في المختبر التسميد

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

Generation of Transgenic C. elegans by Biolistic Transformation

جيل المعدلة وراثيا C. ايليجانس عن طريق تحويل Biolistic

The number of laboratories using the free living nematode C. elegans is rapidly growing. The popularity of this biological model is attributed to a rapid ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

أعربت المشبك التصحيح وتقنيات الإرواء لدراسة في قنوات ايون القيطم البويضات

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Adenofection: A Method for Studying the Role of Molecular Chaperones in Cellular Morphodynamics by Depletion-Rescue Experiments

Adenofection: منهج في دراسة دور الجزيئية الوصيفات في الخلوي Morphodynamics من التجارب استنفاد الانقاذ

Cellular processes such as mitosis and cell differentiation are governed by changes in cell shape that largely rely on proper remodeling of the cell ...

An Efficient In Vitro Transposition Method by a Transcriptionally Regulated Sleeping Beauty System Packaged into an Integration Defective Lentiviral Vector

An Efficient In Vitro Transposition Method by a Transcriptionally Regulated Sleeping Beauty System Packaged into an Integration Defective Lentiviral Vector

أسلوب نقل تتسم بكفاءة في المختبر بنظام جمال النوم ترانسكريبتيونالي الخاضعة للتنظيم في متجه تكامل لينتيفيرال معيبة وتعبئتها

The Sleeping Beauty (SB) transposon is a non-viral integrating system with proven efficacy for gene transfer and functional genomics. To optimize the SB ...

Quantitative Approaches for Studying Cellular Structures and Organelle Morphology in Caenorhabditis elegans

Quantitative Approaches for Studying Cellular Structures and Organelle Morphology in Caenorhabditis elegans

المناهج الكمية لدراسة الهياكل الخلوية ومورفولوجيا الأعضاء في الكنورهابدية

Defining the cellular mechanisms underlying disease is essential for the development of novel therapeutics. A strategy frequently used to unravel these ...