Name: an in vitro model for studying cellular transformation by kaposi sarcoma herpesvirus
Uploaded: 2017-08-25T12:30:00
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यह काम K12 HD068322 (SCM) द्वारा समर्थित था; R01 CA179921 तथा P51 OD011092 (एवीएम); और अमेरिका हार्ट एसोसिएशन (एसबी) से पुरस्कार 14PRE20320014 ।

नोट: इस प्रोटोकॉल में वर्णित सभी कार्यविधियां बीएसएल-2 शर्तों के अंतर्गत निष्पादित की जानी चाहिए । 
 1. KSHV शेयर वडा <ol> <li> TNE बफर तैयार: भंग २९२.२४ मिलीग्राम EDTA ddH 2 ओ में, २२५ मिलीलीटर लाने के ल?...

Oncogenesis एक multistep प्रक्रिया है कि एक जीव के भीतर महत्वपूर्ण सुरक्षा उपायों को दरकिनार है३६। के रूप में एस घावों सच sarcomas को पुरानी सूजन के स्पेक्ट्रम के साथ मौजूद है, कुछ pathophysiological KSHV द्वारा मध्यस्थता प्रक...

Kaposi सार्कोमा (एस) एक मल्टी फोकल angioproliferative ट्यूमर को प्रभावित करने वाला अधययन, श्लैष्मिक, और आंत साइटों है कि सबसे अधिक विकसित की सेटिंग में उन्नत प्रतिरक्षा दमन1. चार महामारी विज्ञान के रूपों का वर्णन किया गया है: शास्त्रीय, एक indolent रूप है कि आम तौर पर भूमध्य और मध्य पूर्वी विरासत के पुराने लोगों को प्रभावित करता है; iatrogenic, गुर्दे दवाओं के साथ उपचार के परिणामस्वरूप अंग प्रत्यारोपण के बाद; महामारी, एक एड्स-कैंसर को परिभाषित; और स्थानिकमारी वाले, एक एचआईवी-स्वतंत्र फार्म अफ्रीका में स्थानिकमारी वाले क्षेत्रों में बच्चों में आम । एचआईवी के उपचार के लिए प्रभावी संयोजन विरोधी सिंड्रम दवा परहेजों के आगमन के साथ, महामारी KS बहुत कम सामांयतः विकासशील देशों में निदान है । हालांकि, नैदानिक आक्रामक स्थानिकमारी और महामारी रूपों कई अफ्रीकी देशों में2,3,4में सबसे अधिक निदान कैंसर के बीच रहते हैं । इसलिए, KS के उपचार के लिए प्रभावी रोगजनन-लक्षित दवाओं की पहचान एक शोध प्राथमिकता है ।
Histologically, के एस घावों व्यापक लेकिन असामांय neovascularization जिससे चुनाव आयोग मूल के धुरी कोशिकाओं सतत संवहनी नेटवर्क के रूप में विशेषता है5। ये असामान्य जहाजों ("संवहनी slits") एरिथ्रोसाइट्स के extravasation की अनुमति देते हैं, जो घावों को अपनी विशेषता रंग देते हैं । इसके अतिरिक्त, घावों में कई ल्यूकोसाइट्स है कि जीर्ण सूजन (यानी, लिम्फोसाइटों, मैक्रोफेज, और प्लाज्मा कोशिकाओं) की विशेषता हैं । के ks घावों के प्रतिगमन प्रतिरक्षा पुनर्गठन के बाद वर्णित किया गया है, सुझाव है कि KS दोनों एक हाइपर प्रफलन घाव और एक सच ट्यूमर6,7,8,9की विशेषताएं हैं ।
ks gerpevirusnoy (KSHV), एस के प्रेरणा का एजेंट, १९९४ में पहचाना गया था10। तब से इन विट्रो सेल संस्कृति मॉडल में कई रोगजनन अध्ययनों को सक्षम करने के लिए विकसित किया गया है, ट्यूमर बायोप्सी सामग्री और प्राथमिक या टेलोमिरेज-एक्सप्रेस चुनाव आयोग से explanted कोशिकाओं के साथ संक्रमित KSHV इन विट्रो11 में , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18. वर्तमान में उपलब्ध मॉडलों में से कोई भी KS ट्यूमर microenvironment पूरी तरह से recapitulates, लेकिन सभी KSHV संक्रमण के pathobiology की हमारी समझ के लिए बहुमूल्य ज्ञान योगदान दिया है । अंय ज्ञात tumorigenic मानव gerpevirusnoy Epstein-बर्र वायरस (EBV) के विपरीत, KSHV आसानी से संस्कृति में कोशिकाओं को नहीं बदल de नोवो संक्रमण19,20,21, 22. तथापि, इस सीमा या तो मिश्रित microvascular या लसीका E6 और मानव papillomavirus प्रकार से E7 जीन के साथ transducing प्राथमिक मानव चुनाव आयोग द्वारा दूर किया गया है 16 KSHV के साथ संक्रमण से पहले23,24 . इन exogenous oncogenes की अभिव्यक्ति नाटकीय रूप से retinoblastoma प्रोटीन और p5323,24के आगे निषेध प्रदान करके भाग में इन विट्रो में KSHV के बदलने की क्षमता बढ़ जाती है । इस चुनाव आयोग transduction विधि एकाधिक प्रयोगशालाओं की मेजबानी की सेल जीन अभिव्यक्ति है कि KSHV संक्रमण द्वारा प्रेरित कर रहे है में महत्वपूर्ण परिवर्तन की पहचान करने की अनुमति दी गई है और कि एस सेल के अस्तित्व और प्रसार की सुविधा के लिए दिखाई देते है25,26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , ३२. प्रोटोकॉल यहां वर्णित स्पष्ट और अत्यधिक प्रतिलिपि हैं, और उंर की पीढ़ी में परिणाम होगा-और मार्ग-मिलान KSHV-संक्रमित चुनाव आयोग और नकली संक्रमित नियंत्रण है कि अब तक प्राथमिक कोशिकाओं की तुलना में लंबे समय के लिए और संस्कृति हो सकता है होगा oncogenic KSHV द्वारा नियोजित तंत्र की जांच के लिए अनुमति देते हैं । हालांकि प्रोटोकॉल प्राथमिक बहाव लिंफोमा सेल लाइन BCBL से जंगली प्रकार KSHV के उत्पादन के लिए एक विधि शामिल है-1, E6/E7-अमर चुनाव आयोग भी अत्यधिक संयोजक BACmid व्युत्पंन KSHV-BAC16 के साथ संक्रमण की संभावना है30। BAC16 की तैयारी के लिए प्रोटोकॉल कहीं३३,३४बताए गए हैं ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BCBL-1 cells</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>3233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA317 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2203</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonatal dermal microvascular endothelial cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2505</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBM-2 Basal Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3156</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-KSHV LANA/ORF 73</td>
			<td>Advanced Biotechnologies</td>
			<td>13-210-100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLETMExpress, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12604013</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS with calcium and magnesium</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model for studying cellular transformation by kaposi sarcoma herpesvirus

Kaposi सार्कोमा (एस) एक असामांय proliferating धुरी कोशिकाओं है कि KSHV के साथ endothelial कोशिकाओं (ईसी) के संक्रमण द्वारा शुरू की है से बना ट्यूमर है, और प्रतिरक्षादमन की स्थापना में सबसे अधिक बार विकसित करता है । अनुसंधान के दशकों के बावजूद, KS के इष्टतम उपचार खराब परिभाषित किया गया है और नैदानिक परिणाम संसाधन सीमित सेटिंग्स में विशेष रूप से प्रतिकूल हैं । KS घावों रोग angiogenesis, जीर्ण सूजन, और oncogenesis द्वारा संचालित कर रहे हैं, और विभिंन इन विट्रो सेल संस्कृति मॉडल इन प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है । KS KSHV से उठता है-endothelial मूल के संक्रमित कोशिकाओं, तो चुनाव आयोग-वंश कोशिकाओं धुरी कोशिका अग्रदूत के इन विट्रो किराए में सबसे उपयुक्त प्रदान करते हैं । हालांकि, क्योंकि चुनाव आयोग एक सीमित इन विट्रो उंर है, और के रूप में oncogenic KSHV द्वारा नियोजित तंत्र अंय tumorigenic वायरस की तुलना में कम कुशल हैं, यह गया है कि प्राथमिक या में परिवर्तन की प्रक्रियाओं का आकलन मुश्किल है टेलोमिरेज-अमर ईसी. इसलिए, एक उपंयास ईसी आधारित संस्कृति मॉडल है कि आसानी से KSHV के साथ संक्रमण के बाद परिवर्तन का समर्थन करता है विकसित किया गया । E6 और मानव papillomavirus प्रकार 16 के E7 जीन की अस्थानिक अभिव्यक्ति आयु की विस्तारित संस्कृति के लिए अनुमति देता है और मार्ग-मिलान नकली और KSHV-संक्रमित चुनाव आयोग और एक सही मायने में तब्दील (यानी, tumorigenic) संक्रमित कोशिका संस्कृतियों में phenotype के विकास का समर्थन करता है . KS के इस परित्याग और अत्यधिक प्रतिलिपि मॉडल नैदानिक सेटिंग्स में अनुवाद के लिए उच्च क्षमता के साथ कई आवश्यक संकेतन रास्ते की खोज में मदद की है ।

प्राथमिक चुनाव आयोग की आकृति विज्ञान क्लासिक "पक्की स्टोन" के रूप में वर्णित है, और इस आकृति विज्ञान papillomavirus E6 और E7 जीन की अभिव्यक्ति द्वारा बदल नहीं है (चित्र 1a) । E6 और E7 जीन की अभिव्यक्ति अ?...

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An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

Kaposi सार्कोमा (ks) oncogenic वायरस मानव gerpevirusnoy-8/KS gerpevirusnoy (HHV-8/KSHV) के साथ संक्रमण से प्रेरित ट्यूमर है । endothelial सेल संस्कृति मॉडल यहां वर्णित विशिष्ट तंत्र है जिसके द्वारा KSHV मेजबान कोशिकाओं को बदल अध्ययन के लिए अनुकूल है ।

Kaposi सार्कोमा gerpevirusnoy द्वारा सेलुलर परिवर्तन का अध्ययन करने के लिए एक इन विट्रो मॉडल

Kaposi sarcoma (KS) is an unusual tumor composed of proliferating spindle cells that is initiated by infection of endothelial cells (EC) with KSHV, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

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