Name: a platform of anti-biofilm assays suited to the exploration of natural compound libraries
Uploaded: 2016-12-27T12:00:00
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著者は、彼の研究室での撮影プロセスの間に彼のサポートのための教授ポールコスとLMPH、アントワープ大学、ベルギーに感謝します。この作品は、フィンランドのプロジェクトアカデミー（272266と282981を投影）とスヴェンスカTekniska Vetenskapsakademien私フィンランドによって賄われていました。修士課程Janniクジャラの技術的な貢献が認められています。

1.細菌の成長<ol><li>一晩振とうを220rpm（16-18時間）と37℃でのトリプシン大豆ブロス（TSB）で前培養菌。 </li><li>光（新鮮なTSBに、（ここでは、1000倍の黄色ブドウ球菌のために使用された細菌の増殖速度に依存する）及び指数増殖に達するために、それは37℃、200rpmで成長させて前培養100〜1,000倍に希釈0.2と0.6）の間の595nm（OD 595）での濃度。 注：このステップは、株特異的...

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	<li>Costerton, J. W., Stewart, P. S., Greenberg, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms:+a+common+cause+of+persistent+infections.">Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections.</a> Science. 284, 1318-1322 (1999).</li><li>Dufour, D., Leung, V., L&#233;vesque, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilm:+structure,+fuction,+and+antimicrobial+resistance.">Bacterial biofilm: structure, fuction, and antimicrobial resistance.</a> Endodontic Topics. 22, 2-16 (2012).</li><li>Donne, J., Dewilde, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Challenging+World+of+Biofilm+Physiology.">The Challenging World of Biofilm Physiology.</a> Adv. 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Des. 16, 2279-2295 (2010).</li><li>Bjarnsholt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vivo+biofilm.">The in vivo biofilm.</a> Trends Microbiol. 21, 466-474 (2013).</li><li>Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persister+cells.">Persister cells.</a> Annu. Rev. Microbiol. 64, 357-372 (2010).</li><li>Mulcahy, L. R., Burns, J. L., Lory, S., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+Pseudomonas+aeruginosa+strains+producing+high+levels+of+persister+cells+in+patients+with+cystic+fibrosis.">Emergence of Pseudomonas aeruginosa strains producing high levels of persister cells in patients with cystic fibrosis.</a> J. 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Biotechnol. 82, 773-783 (2009).</li><li>Peeters, E., Nelis, H., Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+multiple+methods+for+quantification+of+microbial+biofilms+grown+in+microtiter+plates.">Comparison of multiple methods for quantification of microbial biofilms grown in microtiter plates.</a> J. Microbiol. Methods. 72, 157-165 (2008).</li><li>Pettit, R., Weber, C., Pettit, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+a+high+throughput+Alamar+blue+biofilm+susceptibility+assay+to+Staphylococcus+aureus+biofilms.">Application of a high throughput Alamar blue biofilm susceptibility assay to Staphylococcus aureus biofilms.</a> Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. 8 (28), (2009).</li><li>Stepanovic, S., Vukovic, D., Dakic, I., Savic, B., Svabic-Vlahovic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+microtiter-plate+test+for+quantification+of+staphylococcal+biofilm+formation.">A modified microtiter-plate test for quantification of staphylococcal biofilm formation.</a> J. Microbiol. Methods. 40, 175-179 (2000).</li><li>Stiefel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+biofilm+removal+properly+assessed?+Comparison+of+different+quantification+methods+in+a+96-well+plate+system.">Is biofilm removal properly assessed? Comparison of different quantification methods in a 96-well plate system.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. , (2016).</li><li>Sandberg, M., M&#228;&#228;tt&#228;nen, A., Peltonen, J., Vuorela, P. M., Fallarero, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automating+a+96-well+microtitre+plate+model+for+Staphylococcus+aureus+biofilms:+an+approach+to+screening+of+natural+antimicrobial+compounds.">Automating a 96-well microtitre plate model for Staphylococcus aureus biofilms: an approach to screening of natural antimicrobial compounds.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 32, 233-240 (2008).</li><li>Thomas, V. L., Sanford, B. A., Moreno, R., Ramsay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme-linked+lectinsorbent+assay+measures+N-acetyl-D-glucosamine+in+matrix+of+biofilm+produced+by+Staphylococcus+epidermidis.">Enzyme-linked lectinsorbent assay measures N-acetyl-D-glucosamine in matrix of biofilm produced by Staphylococcus epidermidis.</a> Curr. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+antibacterial+and+anti-biofilm+activities+of+cinchona+alkaloid+derivatives+against+Staphylococcus+aureus).">Evaluation of antibacterial and anti-biofilm activities of cinchona alkaloid derivatives against Staphylococcus aureus).</a> Nat. Prod. Commun. 7, 1173-1176 (2012).</li><li>Fallarero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=(+)-+Dehydroabietic+Acid,+an+Abietane-Type+Diterpene,+Inhibits+Staphylococcus+aureus+Biofilms+in+Vitro.">(+)- Dehydroabietic Acid, an Abietane-Type Diterpene, Inhibits Staphylococcus aureus Biofilms in Vitro.</a> Int J Mol Sci. 14, 12054-12072 (2013).</li><li>Manner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+derivatives+of+dehydroabietic+acid+target+planktonic+and+biofilm+bacteria+in+Staphylococcusaureus+and+effectively+disrupt+bacterial+membrane+integrity.">New derivatives of dehydroabietic acid target planktonic and biofilm bacteria in Staphylococcusaureus and effectively disrupt bacterial membrane integrity.</a> Eur. J. Med. Chem. 102, 68-79 (2015).</li><li>Muller, G., Kramer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatibility+index+of+antiseptic+agents+by+parallel+assessment+of+antimicrobial+activity+and+cellular+cytotoxicity.">Biocompatibility index of antiseptic agents by parallel assessment of antimicrobial activity and cellular cytotoxicity.</a> J. Antimicrob. Chemother. 61, 1281-1287 (2008).</li><li>Tot&#233;, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+efficacy+of+various+antibiotics+on+matrix+and+viable+mass+of+Staphylococcus+aureus+and+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Inhibitory efficacy of various antibiotics on matrix and viable mass of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 33, 525-531 (2009).</li><li>Djordjevic, D., Wiedmann, M., McLandsborough, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtiter+plate+assay+for+assessment+of+Listeria+monocytogenes+biofilm+formation.">Microtiter plate assay for assessment of Listeria monocytogenes biofilm formation.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68, 2950-2958 (2002).</li><li>Li, X., Yan, Z., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+variation+of+biofilms+among+strains+in+natural+populations+of+Candida+albicans.">Quantitative variation of biofilms among strains in natural populations of Candida albicans.</a> Microbiolog. 149, 353-362 (2003).</li><li>Barbosa, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+and+simple+micro+assay+for+sulfated+glycosaminoglycans+quantification+in+biological+extracts+and+its+use+in+skin+and+muscle+tissue+studies.">Improved and simple micro assay for sulfated glycosaminoglycans quantification in biological extracts and its use in skin and muscle tissue studies.</a> Glycobiology. 13, 647-653 (2003).</li><li>Tot&#233;, K., Vanden Berghe, D., Maes, L., Cos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+colorimetric+microtitre+model+for+the+detection+of+Staphylococcus+aureus+biofilms.">A new colorimetric microtitre model for the detection of Staphylococcus aureus biofilms.</a> Lett. Appl. Microbiol. 46, 249-254 (2008).</li><li>Arciola, C. R., Campoccia, D., Ravaioli, S., Montanaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysaccharide+intercellular+adhesin+in+biofilm:+structural+and+regulatory+aspects.">Polysaccharide intercellular adhesin in biofilm: structural and regulatory aspects.</a> Front Cell Infect Microbiol. 5 (7), (2015).</li><li>Ausbacher, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+biofilm+susceptibility+to+small+and+potent+beta(2,2)-amino+acid+derivatives.">Staphylococcus aureus biofilm susceptibility to small and potent beta(2,2)-amino acid derivatives.</a> Biofouling. 30, 81-93 (2014).</li></ol>

同時に生存力、バイオマス、およびバイオフィルムマトリックスに対する化合物の効果を測定することができる単一の方法はありません。したがって、好ましくは、一次スクリーニング段階で三のエンドポイントへの影響を検出するためのアッセイを組み合わせる必要があります。 レサズリンは、レドックスプローブの添加のみからなる非常に単純な染色プロトコルで?...

細菌はバイオフィルムは、最も一般的な例となっている2つの非常に異なる生活様式、プランクトンや固着、切り替えることができます。バイオフィルムでは、細菌はセルフプロデュースマトリックス1に埋め込まれた構造化されたコミュニティを形成します。この自己生産マトリックスは、細菌とその外部環境との間の障壁であり、それは近接してそれらを維持する、微生物細胞を保護します。バイオフィルムマトリックスの組成物は、間にあっても種内で変化するが、それは主にリポ多糖、細胞外DNA、およびタンパク質の緊密なネットワークで構成されています。マトリックスは、有害物質の進入を阻害する物理的障壁として働くが、それはまた、脱水からバイオフィルムを保護し、セル2から逃げるの栄養素を防ぐことができます。 バイオフィルムは、現代の生物医学の最も困難な課題の一つとみなされ、それらは、抗生物質耐性の感染症3の80％以上のためのうわさによれば、責任があります。彼らは、DISP湿度、浸透圧、機械的ストレス4、熱、UV照射5、殺菌剤、抗菌剤、および宿主免疫系1：外部の脅威から本質的に高い耐性を築きます。例えば、バイオフィルムを殺すために必要な必要な抗菌剤の濃度は、浮遊細菌を死滅させるために必要なものと比較して最大で1000倍高いことが示されています。この高い耐性についての説明は、多因子であると思われます。マトリックスは、バイオフィルムへの抗生物質の浸透を減少させる物理的なバリアを提供します。また、バイオフィルム内の細胞は、表現型が多様です。それらが原因のバイオフィルム6の内側と外側の部分との間の酸素、栄養素、および代謝産物の既存の勾配に異なる代謝状態間の遷移します。したがって、このようなコアのようないくつかのバイオフィルム領域において、細菌は、酸素と栄養を奪われていると代謝活性の低いまたは完全に休止状態に住んでいます<suP&gt; 7。完全に休眠細胞は存続細胞と呼ばれ、それらは、従来の抗菌治療8の影響を受けやすいものではありません。従って、バイオフィルムの回復力は、現在提案及び他の、未知の機構の組み合わせから生じる可能性があります。 ブドウ球菌属 。厳しい、多くの場合、バイオフィルム関連、感染4を引き起こし、最も問題とグラム陽性菌の中ではまだです。すべての細菌の最大99％がそれ優勢な細菌のライフスタイル3作り、バイオフィルム内に関連していることが示唆されています。しかし、現在、既存の抗生物質のすべては、単一細胞（浮遊性）細菌に対して開発されてきました。これまでのところ、分子の非常に限られたレパートリーは、それが選択的に成熟したバイオフィルムに作用することができる存在します。この状況は、抗バイオフィルムのための検索は、より目立つ場所を占めるように促しされた薬物の発見における漸進的パラダイムシフトを、推進してきました。 methodologからiCalの斜視バイオフィルム法の限られた数だけが、標準化団体、化学ライブラリーのハイスループットスクリーニングに適用特ににより開発されているように、追加の課題が存在します。 （唯一の1つの例外を除いて）すべての標準化されたアッセイは、バイオフィルムリアクターに基づいて、これらの方法は、通常、初期の治験段階9-12中は利用できません大きな作業量と試験すべき化合物を大量に必要としています。唯一の既存の標準化されたスクリーニング-適用アッセイは、市販の最小バイオフィルム排除濃度（MBEC）システムは13-15を開発された、いわゆるカルガリーバイオフィルムデバイス、です。しかし、このアッセイの制限は、バイオフィルムは、ペグ上に成長しており、すべての細菌種または同じ種内でも株はないが、この装置にバイオフィルムを形成することができるということです。また、特に、天然化合物の探索にも適用することができる方法であります必要に応じて。天然物は、前世紀16以上の抗菌薬の発見の革新のための主要な源となっています。彼らはまた、存続細胞に対して有効であることができるユニークな作用機序を有する新規抗バイオフィルム化合物を提供することができます。このように、自然と自然にインスピレーションを得たライブラリの探査は、有望な、ユニークな抗バイオフィルムリードを製造する高い可能性を持っています。 ここでは、 黄色ブドウ球菌のバイオフィルムの生存率、総バイオマス、およびマトリックスに対する効果を測定するための3つのアッセイを用いて、抗バイオフィルム化合物の化学的スクリーニングのために開発されたアッセイのプラットフォームの実験の詳細を提示します。第一のアッセイは、バイオフィルムの生存率を測定し、それはレザズリン染色に基づいています。レサズリンは、その酸化状態にある青と非蛍光であり、細菌の代謝活性によって減少するとき、ピンク、蛍光性の高いレゾルフィンになるレドックス染色です。これは非常にシンプルかつ高速メートルです一次スクリーニング17-20に適しethod。クリスタルバイオレット染色に基づく第2のアッセイは、全バイオフィルムの質量を測定します。クリスタルバイオレットは、バイオフィルム19,21-23中の細菌や細菌を研究するために広く使用されている染色です。アッセイは、安価な試薬に基づいており、単純な吸光度エンドポイント測定値を有しています。最後に、第3のアッセイは、ブドウ球菌のバイオフィルム24のマトリクス中に存在するN-アセチルグルコサミン残基（PNAG）をポリ-するために特異的に結合するコムギ胚芽凝集素（WGA）を介して細胞外高分子物質（EPS）バイオフィルムの-マトリックスを対象としています。 WGAは、蛍光強度リーダ25を用いて検出することができるフルオロフォアとコンジュゲートされています。ここでは、我々はアプリケーションの例を含め、開発プラットフォームの根拠と詳細を提示します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Resazurin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R7017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HT90132&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 488 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W11261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD BacLight&#160;</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>L7012</td>
			<td>SYTO 9 for staining viable cells green and propidium iodide for staining dead cells red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone soy agar</td>
			<td>Lab M, Neogen</td>
			<td>LAB011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptine soy broth</td>
			<td>Lab M, Neogen</td>
			<td>LAB004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F96 Well Plate Polystyrene Sterile Clear Flat bottom</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>161093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND caps, strips of 8</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>BR781413-300EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Branson CPX series ultrasonic bath</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z769428-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipipette</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multidrop dispenser</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomek 3000</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Varioskan Flash Multiplate reader</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC&#160;</td>
			<td>25923</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a platform of anti-biofilm assays suited to the exploration of natural compound libraries

バイオフィルムは、現代の生物医学の最も困難な課題の一つと考えられている、と彼らは、潜在的に抗生物質耐性の感染症の80％を担っています。バイオフィルムは、多因子性であると考えられている化学療法に対する非常に高い耐性を示しています。例えば、マトリックスは、バイオフィルムへの抗生物質の浸透を減少させる物理的なバリアを提供します。また、バイオフィルム内の細胞は、表現型が多様です。そう、バイオフィルムの回復力は、これらおよび他の、未知の機構の組み合わせから生じます。現在、既存の抗生物質の全ては、単一細胞（浮遊性）細菌に対して開発されてきました。そのため、これまでのところ、分子の非常に限られたレパートリーは、それが選択的に成熟したバイオフィルムに作用することができる存在します。この状況は、抗バイオフィルムのための検索は、より目立つ場所を占めるように促しされた薬物の発見における漸進的パラダイムシフトを、推進してきました。追加の課題があるということですバイオフィルム研究のための標準化された方法、化学ライブラリーの大スループットスクリーニングのために使用することができる特に、非常に限られた数。ここでは、化学物質のスクリーニングのための実験的な抗バイオフィルムのプラットフォームが提供されます。それは、（レサズリン染色）バイオフィルムの生存率を測定するための3つのアッセイを使用しています（クリスタルバイオレット染色）総バイオマス、およびバイオフィルムマトリックス（ポリN -アセチルグルコサミンのコムギ胚芽凝集素を使用して、WGA-蛍光ベースの染色、PNAG 、分数）。すべてのアッセイは、モデル菌として黄色ブドウ球菌を使って開発されました。プラットフォームは、一次スクリーニングのために、ならびに同定された抗バイオフィルムヒットの機能的特徴付けのために使用することができる方法の例が示されています。この実験的なシーケンスは、さらに測定のエンドポイントに基づいて、ヒットの分類を可能にします。また、特に短期化学療法の効果に対する長期的に、それらの作用モードの情報を提供します。したがって、それは非常にアドバです様々な生物医学的応用のための出発点として機能することができ、高品質のヒット化合物の迅速な同定のためのntageous。

提案されたプラットフォームでは、生存力、バイオマス、およびバイオフィルムマトリックスへの影響を定量化しています。作業配列（ 図1）においては、一つのサンプルプレートを同時に細菌性バイオフィルムの生存率に、全バイオフィルムのバイオマスへの影響を評価するためにクリスタルバイオレットでレサズリンと、続いて染色します。それはレ...

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A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries (Video) | JoVE

Biofilm infections show high tolerance towards chemotherapy. No single assay captures the complexity of biofilms. Instead, complementary assays are needed. We present a screening platform (developed for S. aureus) that combines assays for viability, biomass, and biofilm matrix. It allows anti-biofilm drug discovery, including the assessment of long-term chemotherapeutic effects.

天然化合物ライブラリーの探査に適した抗バイオフィルムアッセイのプラットフォーム

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays (Video) | JoVE

ナチュラルキラー細胞傷害性アッセイにおけるHIV - 1感染プライマリCD4 + T細胞を標的細胞としての準備と使用

 Natural killer (NK) cells are a vital component of the innate immune response to virus-infected cells. It is important to understand the ability of NK ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries (Video) | JoVE

ファージディスプレイされた合成抗体ライブラリーから、スケーラブルな高スループットの選択

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials (Video) | JoVE

定性的および定量的検出のためのアッセイおよびタンパク質の抗菌薬のキャラクタリゼーション

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood (Video) | JoVE

ヒト全血中のナチュラルキラー細胞溶解活性のフローサイトメトリー分析

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli (Video) | JoVE

ヒトの過剰発現と精製<em&gt;シス</em&gt; - プレニルトランスフェラーゼ<em&gt;大腸菌</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Building Up a High-throughput Screening Platform to Assess the Heterogeneity of HER2 Gene Amplification in Breast Cancers

Building Up a High-throughput Screening Platform to Assess the Heterogeneity of HER2 Gene Amplification in Breast Cancers (Video) | JoVE

乳癌の HER2 遺伝子増幅の不均一性を評価する高スループット スクリーニング プラットフォームを構築

Targeted therapies against the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) have radically changed the outcome of patients with HER2-positive breast ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro (Video) | JoVE

生体外でマウスのナチュラル キラー細胞の大量生産のため新規無料の送り装置システム

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Combining Analysis of DNA in a Crude Virion Extraction with the Analysis of RNA from Infected Leaves to Discover New Virus Genomes

Combining Analysis of DNA in a Crude Virion Extraction with the Analysis of RNA from Infected Leaves to Discover New Virus Genomes (Video) | JoVE

新しいウイルスのゲノムを発見する感染葉からの RNA の解析とウイルス粒子粗抽出 DNA の結合解析

This metagenome approach is used to identify plant viruses with circular DNA genomes and their transcripts. Often plant DNA viruses that occur in low ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp. (Video) | JoVE

サルモネラ属菌のスクリーニングのための高スループット プラットフォーム/赤痢菌属

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform (Video) | JoVE

自動行動分析の大規模なc. の elegans集団による視野が広い追跡プラットフォーム

Caenorhabditis elegans is a well-established animal model in biomedical research, widely employed in functional genomics and ageing studies. To assess the ...