Name: development of a hepatitis b virus reporter system to monitor the early stages of the replication cycle
Uploaded: 2017-02-01T13:00:00
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This work was supported in part by the Research Program on Hepatitis from Japan Agency for Medical Research and Development (AMED) and by Grants-in-Aids for Scientific Research from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT) of Japan.

1. संयोजक एचबीवी के उत्पादन रिपोर्टर प्रोटीन एन्कोडिंग <ol><li> HepG2 कोशिकाओं की तैयारी <ol><li> सेल संस्कृति के माध्यम से तैयार (Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS के साथ पूरक), 100 यू / एमएल पेनिसि?...

<ol>
	<li>Fattovich, G., Stroffolini, T., Zagni, I., Donato, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocellular+carcinoma+in+cirrhosis:+incidence+and+risk+factors.">Hepatocellular carcinoma in cirrhosis: incidence and risk factors.</a> Gastroenterology. 127 (5), 35-50 (2004).</li><li>Revill, P., Testoni, B., Locarnini, S., Zoulim, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+strategies+are+required+to+cure+and+eliminate+HBV+infection.">Global strategies are required to cure and eliminate HBV infection.</a> Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol. 13 (4), 239-248 (2016).</li><li>Wursthorn, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peginterferon+alpha-2b+plus+adefovir+induce+strong+cccDNA+decline+and+HBsAg+reduction+in+patients+with+chronic+hepatitis+B.">Peginterferon alpha-2b plus adefovir induce strong cccDNA decline and HBsAg reduction in patients with chronic hepatitis B.</a> Hepatology. 44 (3), 675-684 (2006).</li><li>Stuyver, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nomenclature+for+antiviral-resistant+human+hepatitis+B+virus+mutations+in+the+polymerase+region.">Nomenclature for antiviral-resistant human hepatitis B virus mutations in the polymerase region.</a> Hepatology. 33 (3), 751-757 (2001).</li><li>Ochiya, T., Tsurimoto, T., Ueda, K., Okubo, K., Shiozawa, M., Matsubara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+system+for+infection+with+hepatitis+B+virus+that+uses+primary+human+fetal+hepatocytes.">An in vitro system for infection with hepatitis B virus that uses primary human fetal hepatocytes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86 (6), 1875-1879 (1989).</li><li>Galle, P. R., Hagelstein, J., Kommerell, B., Volkmann, M., Schranz, P., Zentgraf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+experimental+infection+of+primary+human+hepatocytes+with+hepatitis+B+virus.">In vitro experimental infection of primary human hepatocytes with hepatitis B virus.</a> Gastroenterology. 106 (3), 664-673 (1994).</li><li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus.">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovering+novel+direct+acting+antiviral+agents+for+HBV+using+in+silico+screening.">Discovering novel direct acting antiviral agents for HBV using in silico screening.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 456 (1), 20-28 (2015).</li><li>Ladner, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+expression+of+human+hepatitis+B+virus+(HBV)+in+stably+transfected+hepatoblastoma+cells:+a+novel+system+for+screening+potential+inhibitors+of+HBV+replication.">Inducible expression of human hepatitis B virus (HBV) in stably transfected hepatoblastoma cells: a novel system for screening potential inhibitors of HBV replication.</a> Antimicrob. Agents. Chemother. 41 (8), 1715-1720 (1997).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+taurocholate+cotransporting+polypeptide+is+a+functional+receptor+for+human+hepatitis+B+and+D+virus.">Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a functional receptor for human hepatitis B and D virus.</a> Elife. 3, (2012).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+infectious+hepatitis+B+virus+vectors+carrying+substantially+sized+transgenes+by+redesigned+viral+polymerase+translation.">Replication-competent infectious hepatitis B virus vectors carrying substantially sized transgenes by redesigned viral polymerase translation.</a> PLoS. One. 8, 60306 (2013).</li><li>Chaisomchit, S., Tyrrell, D. L., Chang, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+replicative+and+nonreplicative+hepatitis+B+virus+vectors.">Development of replicative and nonreplicative hepatitis B virus vectors.</a> Gene. Ther. 4 (12), 1330-1340 (1997).</li><li>Hong, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+recombinant+hepatitis+B+virus+vectors+efficiently+deliver+protein+and+RNA+encoding+genes+into+primary+hepatocytes.">Novel recombinant hepatitis B virus vectors efficiently deliver protein and RNA encoding genes into primary hepatocytes.</a> J. Virol. 87 (12), 6615-6624 (2013).</li><li>Hall, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+luciferase+reporter+from+a+deep+sea+shrimp+utilizing+a+novel+imidazopyrazinone+substrate.">Engineered luciferase reporter from a deep sea shrimp utilizing a novel imidazopyrazinone substrate.</a> ACS. Chem. Biol. 7 (11), 1848-1857 (2012).</li><li>Nishitsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+reporter+system+to+monitor+early+stages+of+the+hepatitis+B+virus+life+cycle.">Novel reporter system to monitor early stages of the hepatitis B virus life cycle.</a> Cancer. Sci. 106 (11), 1616-1624 (2015).</li><li>Sugiyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+hepatitis+B+virus+genotypes+on+the+intra-+and+extracellular+expression+of+viral+DNA+and+antigens.">Influence of hepatitis B virus genotypes on the intra- and extracellular expression of viral DNA and antigens.</a> Hepatology. 44 (4), 915-924 (2006).</li><li>Seeger, C., Zoulim, F., Mason, W., Knipe, D., Howley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepadnaviruses.">Hepadnaviruses.</a> Field Virology. Volume 1. , 2185-2221 (2013).</li><li>Moolla, N., Kew, M., Arbuthnot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+elements+of+hepatitis+B+virus+transcription.">Regulatory elements of hepatitis B virus transcription.</a> J. Viral. Hepat. 9 (5), 323-331 (2002).</li><li>Cattaneo, R., Will, H., Schaller, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus+transcription+in+the+infected+liver.">Hepatitis B virus transcription in the infected liver.</a> EMBO. J. 3 (9), 2191-2196 (1984).</li><li>Enders, G. H., Ganem, D., Varmus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+major+transcripts+of+ground+squirrel+hepatitis+virus:+the+presumptive+template+for+reverse+transcriptase+is+terminally+redundant.">Mapping the major transcripts of ground squirrel hepatitis virus: the presumptive template for reverse transcriptase is terminally redundant.</a> Cell. 42 (1), 297-308 (1985).</li><li>Haines, K. M., Loeb, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sequence+of+the+RNA+primer+and+the+DNA+template+influence+the+initiation+of+plus-strand+DNA+synthesis+in+hepatitis+B+virus.">The sequence of the RNA primer and the DNA template influence the initiation of plus-strand DNA synthesis in hepatitis B virus.</a> J. Mol. Biol. 370 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hirsch, R. C., Lavine, J. E., Chang, L. J., Varmus, H. E., Ganem, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerase+gene+products+of+hepatitis+B+viruses+are+required+for+genomic+RNA+packaging+as+well+as+for+reverse+transcription.">Polymerase gene products of hepatitis B viruses are required for genomic RNA packaging as well as for reverse transcription.</a> Nature. 344 (6266), 552-555 (1990).</li></ol>

एचबीवी जीनोम चार प्राथमिक खुला पढ़ने फ्रेम (ORFs) कोर, पोलीमर्स, सतह और एक्स ORFs (चित्रा 1) भी शामिल है। इन चार एचबीवी ORFs का प्रतिलेखन कसकर चार प्रमोटरों द्वारा नियंत्रित किया जाता है: precore / कोर प्रमोटर बढ?...

हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) के साथ पुराने संक्रमण जीर्ण जिगर की बीमारियों 1 के लिए एक प्रमुख जोखिम कारक है। हालांकि वर्तमान चिकित्सकीय रणनीति न्यूक्लियोटाइड analogs कि रोकना इंटरफेरॉन प्रेरित जीन कार्यों 2 के माध्यम से एचबीवी पोल समारोह और / या के प्रकार मैं इंटरफेरॉन कि संक्रमित व्यक्तियों में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को सक्रिय प्रशासन के साथ ही परोक्ष रूप से दबा एचबीवी प्रसार के आधार पर कर रहे हैं, इन उपचार एचबीवी खत्म नहीं कर सकते डीएनए पूरी तरह से 3। इसके अलावा, HBVs कि विरोधी नीति एजेंटों के लिए प्रतिरोधी रहे हैं के उद्भव चिंता 4 की है। संयुक्त विरोधी वायरल सीधे मानव इम्यूनो वायरस (एचआईवी) या हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी) के जीवन चक्र के विभिन्न चरणों को निशाना एजेंटों के प्रशासन सफलतापूर्वक को दबाने या वायरस (ते) उन्मूलन करने के लिए दिखाया गया था। इस विचार, विरोधी एचबीवी एजेंट (s) है कि एच के विभिन्न चरणों पर सीधे कार्रवाई के विकास के लिए भी इसी तरहबी.वी. जीवन चक्र भविष्य एचबीवी के उपचारों की स्थापना के लिए महत्वपूर्ण है। सामान्य तौर पर, लक्ष्य वायरस के इन विट्रो संस्कृति प्रणाली में एक सरल की स्थापना के विरोधी वायरस एजेंटों के विकास की सुविधा। हालांकि, वहाँ इन विट्रो संस्कृति प्रणालियों के विकास के विरोधी एचबीवी एजेंटों स्क्रीन करने के लिए कम से कम दो अवरोध कर रहे हैं। पहले एक सुविधाजनक इन विट्रो सेल संस्कृति एचबीवी संक्रमण / प्रसार के लिए इस प्रणाली का अभाव है। इस तरह के एचआईवी और एचसीवी के रूप में अन्य वायरस है, जो स्थापित सेल लाइनों में प्रचारित कर रहे हैं के विपरीत, यह क्योंकि एक संकीर्ण मेजबान रेंज सहित प्रयोगात्मक सीमाओं के इन विट्रो में एचबीवी खेती करने के लिए मुश्किल है। ऐसे मानव hepatoma सेल लाइन HepaRG, जो एचबीवी संक्रमण, 5, 6 की संभावना है के रूप में विशेष सेल संस्कृति सिस्टम के उपयोग, 7 इन समस्याओं को दूर करने के लिए विकसित किया गया है। इसके अलावा, PXB कोशिकाओं, urokinase-ty से अलग-थलगपीई plasminogen उत्प्रेरक ट्रांसजेनिक / SCID चूहों प्राथमिक मानव hepatocyte (PHH) के साथ टीका, एचबीवी संक्रमण और नकल से 8 अतिसंवेदनशील होना दिखाया गया था। हालांकि, HepaRG में एचबीवी प्रतिकृति स्तरों संस्कृति के बाद सेलुलर भेदभाव राज्य है, जो एचबीवी संक्रमण / प्रतिकृति के स्तर के असंगत और irreproducible परिणाम पैदा कर सकता है पर निर्भर हैं। PXB सामान्यतः एचबीवी संक्रमण प्रयोगों के लिए प्रयोग किया जाता है लेकिन इसकी उपलब्धता द्वारा सीमित है। एक टेट्रासाइक्लिन inducible एचबीवी अभिव्यक्ति सेल लाइन, HepAD38, भी व्यापक रूप से एचबीवी प्रतिकृति अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन इस प्रणाली केवल प्रतिलेखन के बाद और एचबीवी संक्रमण 9 के प्रवेश के कदम पर नहीं मूल्यांकन अनुमति देता है। हाल ही में, सोडियम taurocholate cotransporting पॉलीपेप्टाइड की पहचान (NTCP) एचबीवी के लिए एक कार्यात्मक रिसेप्टर के रूप में एक चर एचबीवी संस्कृति प्रणाली 10 के विकास की अनुमति दी है। दरअसल, इस तरह Huh7 के रूप में गैर अतिसंवेदनशील हिपेटोकार्सिनोमा कोशिकाओं में NTCP अभिव्यक्ति औरHepG2 एचबीवी संक्रमण 10 में सक्षम बनाता है और इस प्रकार, एचबीवी अतिसंवेदनशील सेल लाइनों की पसंद, विस्तारित किया गया है प्रयोगात्मक सीमाओं के कई हल करने। दूसरी समस्या यह एक सरल परख प्रणाली एचबीवी संक्रमण और नकल का मूल्यांकन करने की कमी है। एचबीवी संक्रमण का मूल्यांकन आम तौर पर विश्लेषण करने एचबीवी डीएनए, आरएनए और प्रोटीन द्वारा आयोजित किया जाता है। हालांकि, इन वायरस मार्कर की मात्रा का ठहराव समय लगता है, अक्सर महंगा है और हमेशा आसान नहीं है। इसलिए, एक सरल परख प्रणाली के विकास, इस तरह के एक पत्रकार जीन का उपयोग कर के रूप में, एचबीवी परख प्रणालियों के साथ जुड़े समस्याओं को दूर कर सकता है। हालांकि, जीनोम का आकार है कि एक एचबीवी capsid में पैक किया जा सकता है, क्योंकि सीमित है - कम से कम 3.7 केबी 11 - एक पत्रकार जीन के आकार जितना संभव हो कम होना चाहिए। इसके अलावा, जो वायरल प्रतिकृति के लिए आवश्यक हैं जीनोम भर में बिखरे हुए कई सीआईएस तत्वों की उपस्थिति, पदों में लिए उपलब्ध की सीमा<html> जीनोम में रिपोर्टर जीन की sertion। कई रिपोर्टों एचबीवी जीनोम 11, 12, 13 में, एचआईवी -1 गूंथना, हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन, और DsRed सहित विदेशी जीन, सम्मिलित करने का प्रयास किया है। हालांकि, इन पुनः संयोजक HBVs स्क्रीनिंग एचबीवी संक्रमण / प्रतिकृति, या एचबीवी संक्रमण / प्रतिकृति प्रभावित करने वाले कारकों के उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए के लिए उपयोगी नहीं हैं। यह मुख्य रूप से पुनः संयोजक वायरस की कम उत्पादकता और पत्रकार जीन अभिव्यक्ति की कम तीव्रता अक्षम वायरस की वजह से उत्पादन की वजह से है। इन मुद्दों पर काबू पाने के लिए, हम वायरस के उत्पादन का एक उच्च उपज के साथ एक संवाददाता एचबीवी का निर्माण किया। यह वायरस, एचबीवी प्रतिकृति चक्र के प्रारंभिक चरणों की निगरानी के प्रवेश से प्रतिलेखन करने के लिए अत्यधिक संवेदनशील है। क्योंकि यह एक छोटी सी (171 अमीनो एसिड) luminescent संवाददाता इंजीनियर इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए, NanoLuc (NL) एक मार्कर जीन के रूप में चुना गया थावर्ग = &quot;xref&quot;&gt; 14। इसके अलावा, नाथन लगभग जुगनू या Renilla luciferase की तुलना में उज्जवल 150 गुना है, और luminescent प्रतिक्रिया एटीपी स्वतंत्र है, सुझाव है कि झूठी हिट दर उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए कम हो जाएगा। पुनः संयोजक एचबीवी की उत्पादन क्षमता में माता-पिता एचबीवी के लगभग 1/5, और पिछले एचबीवी पुनः संयोजक वायरस के लिए सूचना के स्तर के लिए इसी तरह की है; हालांकि, नाथन की चमक वायरस उत्पादकता मुद्दों पर काबू तो यह विरोधी एचबीवी एजेंटों की बड़े पैमाने पर जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। विरोधी एचबीवी एजेंटों प्राथमिक hepatocytes का उपयोग करने की स्क्रीनिंग, HepaRG, HepAD38 और NTCP-transduced hepatocytes पारंपरिक विधि (ओं) द्वारा विरोधी एचबीवी एजेंटों की स्क्रीनिंग के लिए उपयोगी हो सकता है। हालांकि, इस प्रणाली यहाँ वर्णित ऐसे सरल हैंडलिंग, उच्च संवेदनशीलता, और स्क्रीनिंग के लिए कम लागत के रूप में विभिन्न फायदे हैं। ये लाभ उच्च throughput assays विकसित करने और उपचारात्मक उद्देश्यों के लिए नए एचबीवी एजेंटों की पहचान करने के लिए उपयुक्त हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="781">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:332px;">Nano-Glo Luciferase Assay Regent</td>
			<td style="width:201px;">Promega</td>
			<td style="width:160px;">N1110</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin-Streptomycin Mixed Solution</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>09367-34&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11995065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:332px;">100 mm/collagen-coated dish</td>
			<td>Iwaki</td>
			<td>4020-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>L3000001&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polyethylene glycol (PEG) 6000&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>81255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polyethylene glycol (PEG) 8000&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>89510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>31319-45&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">0.5 mol/l-EDTA Solution</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>06894-14&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tris-HCl</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>35434-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Millex-HP, 0.45 &#956;m, polyethethersulfone, filter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagen coated 96-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>NO3585</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Passive Lysis 5xBuffer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GloMax 96 Microplate Luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sucrose</td>
			<td>Nacalai tesque</td>
			<td>30403-55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer plate</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>655075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HepG2-NTCP1-myc-clone22</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Reference 15</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pUC1.2HBV delta epsilon</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Reference 15</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pUC1.2HBV/NL</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Reference 15</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">50 ml tube</td>
			<td>Violamo</td>
			<td>1-3500-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Myc antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C3956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBIG</td>
			<td>Japan Blood Products Organization</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IFN-&#946;</td>
			<td>Mochida Pharmaceutical</td>
			<td>14987224005413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heparin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a hepatitis b virus reporter system to monitor the early stages of the replication cycle

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), that carry foreign genes such as a reporter or marker protein in their genomes. These recombinant viruses usually faithfully mimic the life cycle of the original virus in infected cells and exhibit the same host range dependence. The development of a recombinant virus enables the efficient screening of inhibitors and the identification of specific host factors. However, to date the construction of recombinant hepatitis B virus (HBV) has been difficult because of various experimental limitations. The main limitation is the compact genome size of HBV, and a fairly strict genome size that does not exceed 1.3 genome sizes, that must be packaged into virions. Thus, the size of a foreign gene to be inserted should be smaller than 0.4 kb if no deletion of the genome DNA is to be performed. Therefore, to overcome this size limitation, the deletion of some HBV DNA is required. Here, we report the construction of recombinant HBV encoding a reporter gene to monitor the early stage of the HBV replication cycle by replacing part of the HBV core-coding region with the reporter gene by deleting part of the HBV pol coding region. Detection of recombinant HBV infection, monitored by the reporter activity, was highly sensitive and less expensive than detection using the currently available conventional methods to evaluate HBV infection. This system will be useful for a number of applications including high-throughput screening for the identification of anti-HBV inhibitors, host factors and virus-susceptible cells.

चित्रा 1 एचबीवी जीनोम, लिखित RNAs, वायरस प्रोटीन और उनके कोडिंग क्षेत्र जीनोम पर की एक योजनाबद्ध दिखाता है। पत्रकार जीन और जीनोम में अपने स्थान भी संकेत कर रहे हैं। चित्रा 2 रिपोर्...

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Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

यहाँ हम एचबीवी के जीवन चक्र के प्रारंभिक चरणों की निगरानी के लिए एक नव विकसित हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) संवाददाता प्रणाली का वर्णन है। यह इन विट्रो प्रणाली में सरल विरोधी एचबीवी एजेंटों एक उच्च throughput रणनीति का उपयोग करने की स्क्रीनिंग में सहायता करेगा।

एक हेपेटाइटिस बी वायरस संवाददाता प्रणाली का विकास प्रतिकृति चक्र के प्रारंभिक दौर नजर रखने के लिए

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

एक नकारात्मक के लिए चयन मार्कर का विकास एटामोइबा हिस्टोलिटिका</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

विदारक एक मॉडल Herpesvirus की lytic प्रतिकृति में सहभागिता होस्ट वायरस

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication

हेपेटाइटिस सी वायरस नकल विश्लेषण के लिए एक प्रोटोकॉल

Hepatitis C Virus (HCV) affects 3% of the world&#8217;s population and causes serious liver ailments including&#160;chronic hepatitis, cirrhosis, and ...

Mouse Fetal Liver Culture System to Dissect Target Gene Functions at the Early and Late Stages of Terminal Erythropoiesis

माउस भ्रूण जिगर संस्कृति के लिए सिस्टम टर्मिनल एरिथ्रोपोएसिस की जल्दी और देर चरणों में लक्ष्य जीन कार्य काटना

Erythropoiesis involves a dynamic process that begins with committed erythroid burst forming units (BFU-Es) followed by rapidly dividing erythroid colony ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

वेस्ट नील वायरस उत्परिवर्ती तनाव संक्रमण को Myd88 की मध्यस्थता सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के इन विट्रो विश्लेषण में

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus

हेपेटाइटिस सी वायरस के खिलाफ मानव लैक्टोफेरिन के सेलुलर तेज और उसके एसोसिएटेड Antiviral गतिविधि पर नजर रखने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस

Immunofluorescence is a laboratory technique commonly used to study many aspects of biology. It is typically used to visualize the distribution and/or ...

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

पालन<em&gt; Ixodes scapularis,</em&gt; ब्लैक टॉग्ड टिक: चूहों पर अपरिपक्व चरणों को खिलाना

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

एक उपंयास फीडर इन विट्रो में Murine प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं के बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए मुफ्त प्रणाली

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Assembly and Purification of Prototype Foamy Virus Intasomes

विधानसभा और प्रोटोटाइप फोम वायरस Intasomes का शुद्धिकरण

A defining feature and necessary step of the retrovirus life cycle is the integration of the viral genome into the host genome. All retroviruses encode an ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

तेजी से, सुरक्षित, और सरल मैनुअल बेडसाइड न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण पूरे रक्त के नमूनों में वायरस का पता लगाने के लिए

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...