Name: cefoperazone-treated mouse model of clinically-relevant clostridium difficile strain r20291
Uploaded: 2016-12-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291 at JoVE.com

The authors would like to thank Trevor Lawley at the Wellcome Trust Sanger Institute for C. difficile R20291 spores and James S. Guy at the North Carolina State University College of Veterinary Medicine for Vero cells, both utilized in this manuscript. Animal histopathology was performed in the LCCC Animal Histopathology Core Facility at the University of North Carolina at Chapel Hill, with special assistance from Traci Raley and Amanda Brown. The LCCC Animal Histopathology Core is supported in part by an NCI Center Core Support Grant (2P30CA016086-40) to the UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center. We would also like to thank Vincent Young, Anna Seekatz, Jhansi Leslie, and Cassie Schumacher for helpful discussions on the Vero cell cytotoxicity assay protocol. JAW is funded by the Ruth L. Kirschstein National Research Service Award Research Training grant T32OD011130 by NIH. CMT is funded by the career development award in metabolomics grant K01GM109236 by the NIGMS of the NIH.

بيان الأخلاقي: وافقت اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في ولاية كارولينا الشمالية كلية جامعة ولاية الطب البيطري (NCSU) هذه الدراسة. وNCSU رعاية الحيوان واستخدام سياسة تطبق المعايير والمبادئ التوجيهية الواردة في قانون قانون والإرشاد الصحي بحوث رعاية الحيوان ...

<ol>
	<li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+Clostridium+difficile+Infection+in+the+United+States.">Burden of Clostridium difficile Infection in the United States.</a> New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).</li><li>Gerding, D. N., Lessa, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+Clostridium+difficile+infection+inside+and+outside+health+care+institutions.">The epidemiology of Clostridium difficile infection inside and outside health care institutions.</a> Infect Dis Clin North Am. 29, 37-50 (2015).</li><li>Dubberke, E. R., Olsen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+Clostridium+difficile+on+the+healthcare+system.">Burden of Clostridium difficile on the healthcare system.</a> Clin Infect Dis. 55, 88-92 (2012).</li><li>Kociolek, L. K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breakthroughs+in+the+treatment+and+prevention+of+Clostridium+difficile+infection.">Breakthroughs in the treatment and prevention of Clostridium difficile infection.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li><li>Kelly, C. P., LaMont, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile--more+difficult+than+ever.">Clostridium difficile--more difficult than ever.</a> N Engl J Med. 359, 1932-1940 (2008).</li><li>Louie, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fidaxomicin+versus+vancomycin+for+Clostridium+difficile+infection.">Fidaxomicin versus vancomycin for Clostridium difficile infection.</a> N Engl J Med. 364, 422-431 (2011).</li><li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L., Kasper, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clindamycin-associated+colitis+due+to+a+toxin-producing+species+of+Clostridium+in+hamsters.">Clindamycin-associated colitis due to a toxin-producing species of Clostridium in hamsters.</a> The Journal of infectious diseases. 136, 701-705 (1977).</li><li>Kelly, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+reproducibility+of+the+NAP1/B1/027+epidemic+strain+R20291+in+the+hamster+model+of+infection.">Improving the reproducibility of the NAP1/B1/027 epidemic strain R20291 in the hamster model of infection.</a> Anaerobe. , (2016).</li><li>Kuehne, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+toxin+A,+toxin+B,+and+CDT+in+virulence+of+an+epidemic+Clostridium+difficile+strain.">Importance of toxin A, toxin B, and CDT in virulence of an epidemic Clostridium difficile strain.</a> The Journal of infectious diseases. 209, 83-86 (2014).</li><li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clindamycin-associated+colitis+in+hamsters:+protection+with+vancomycin.">Clindamycin-associated colitis in hamsters: protection with vancomycin.</a> Gastroenterology. 73, 772-776 (1977).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+Clostridium+difficile-associated+disease.">A mouse model of Clostridium difficile-associated disease.</a> Gastroenterology. 135, 1984-1992 (2008).</li><li>Lawley, T. D., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+study+Clostridium+difficile+infection+and+transmission.">Murine models to study Clostridium difficile infection and transmission.</a> Anaerobe. 24, 94-97 (2013).</li><li>Best, E. L., Freeman, J., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+the+study+of+Clostridium+difficile+infection.">Models for the study of Clostridium difficile infection.</a> Gut Microbes. 3, 145-167 (2012).</li><li>Reeves, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interplay+between+microbiome+dynamics+and+pathogen+dynamics+in+a+murine+model+of+Clostridium+difficile+Infection.">The interplay between microbiome dynamics and pathogen dynamics in a murine model of Clostridium difficile Infection.</a> Gut Microbes. 2, 145-158 (2014).</li><li>Owens, R. C., Donskey, C. J., Gaynes, R. P., Loo, V. G., Muto, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial-associated+risk+factors+for+Clostridium+difficile+infection.">Antimicrobial-associated risk factors for Clostridium difficile infection.</a> Clin Infect Dis. 46, 19-31 (2008).</li><li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cefoperazone-treated+mice+as+an+experimental+platform+to+assess+differential+virulence+of+Clostridium+difficile+strains.">Cefoperazone-treated mice as an experimental platform to assess differential virulence of Clostridium difficile strains.</a> Gut Microbes. 2, 326-334 (2011).</li><li>Martin, J. S., Monaghan, T. M., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile+infection:+epidemiology,+diagnosis+and+understanding+transmission.">Clostridium difficile infection: epidemiology, diagnosis and understanding transmission.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li><li>Connor, J. R., Johnson, S., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile+infection+caused+by+the+epidemic+BI/NAP1/027+strain.">Clostridium difficile infection caused by the epidemic BI/NAP1/027 strain.</a> Gastroenterology. 136, 1913-1924 (2009).</li><li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+and+global+spread+of+epidemic+healthcare-associated+Clostridium+difficile.">Emergence and global spread of epidemic healthcare-associated Clostridium difficile.</a> Nat Genet. 45, 109-113 (2013).</li><li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clospore:+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile.">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> Journal of AOAC International. 94, 618-626 (2011).</li><li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile.">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2009).</li><li>Edwards, A. N., Suarez, J. M., McBride, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+and+maintaining+Clostridium+difficile+in+an+anaerobic+environment.">Culturing and maintaining Clostridium difficile in an anaerobic environment.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50787 (2013).</li><li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile.">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J Clin Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li><li>Knoblaugh, S., Randolph-Habecker, J., Rath, S., Dintzis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative Anatomy and Histology. , 15-40 (2012).</li><li>Ammerman, N. C., Beier-Sexton, M., Azad, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+maintenance+of+Vero+cell+lines.">Growth and maintenance of Vero cell lines.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2008).</li><li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-induced+shifts+in+the+mouse+gut+microbiome+and+metabolome+increase+susceptibility+to+Clostridium+difficile+infection.">Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection.</a> Nat Commun. 5, 3114 (2014).</li><li>Koenigsknecht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+and+establishment+of+Clostridium+difficile+infection+in+the+murine+gastrointestinal+tract.">Dynamics and establishment of Clostridium difficile infection in the murine gastrointestinal tract.</a> Infect Immun. 83, 934-941 (2015).</li><li>Theriot, C., Bowman, A., Young, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic-Induced+Alterations+of+the+Gut+Microbiota+Alter+Secondary+Bile+Acid+Production+and+Allow+for+Clostridium+difficile+Spore+Germination+and+Outgrowth+in+the+Large+Intestine.">Antibiotic-Induced Alterations of the Gut Microbiota Alter Secondary Bile Acid Production and Allow for Clostridium difficile Spore Germination and Outgrowth in the Large Intestine.</a> mSphere. 1, 00045 (2016).</li><li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome.">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature biotechnology. 33, 1103-1108 (2015).</li><li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+and+toxin+production+by+Clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function.">Persistence and toxin production by Clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li><li>Stabler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+genome+and+phenotypic+analysis+of+Clostridium+difficile+027+strains+provides+insight+into+the+evolution+of+a+hypervirulent+bacterium.">Comparative genome and phenotypic analysis of Clostridium difficile 027 strains provides insight into the evolution of a hypervirulent bacterium.</a> Genome Biol. 10, 102 (2009).</li><li>Valiente, E., Dawson, L. F., Cairns, M. D., Stabler, R. A., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+new+PCR+ribotypes+from+the+hypervirulent+Clostridium+difficile+027+lineage.">Emergence of new PCR ribotypes from the hypervirulent Clostridium difficile 027 lineage.</a> J Med Microbiol. 61, 49-56 (2012).</li></ol>

This protocol characterizes the clinical course, including weight loss, bacterial colonization, toxin cytotoxicity, and histopathological changes in the gastrointestinal tract, of antibiotic-treated mice challenged with C. difficile R20291 spores. There are several critical steps within the protocol where attention to detail is essential. Accurate calculation of the C. difficile spore inoculum is critical. This calculation is based on the original C. difficile spore stock enumeration, which sho...

المطثية العسيرة هو اللاهوائية، إيجابية الجرام، تشكيل بوغ عصية أن يسبب تهدد الحياة الإسهال 1. ويرتبط C. عدوى العسيرة (CDI) مع زيادة معدلات الاعتلال والوفيات البشرية والنتائج في أكثر من 4.8 مليار $ في تكاليف الرعاية الصحية سنويا 1-4. في عام 2013، ومراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها تصنف C. صعب بمثابة خطر المقاومة للمضادات الحيوية عاجل، مشيرا إلى أنه يشكل تهديدا عاجلا للصحة العامة 1. حاليا، تعتبر العلاج بالمضادات الحيوية مع فانكومايسين وميترونيدازول مستوى الرعاية لCDI 5. للأسف، تكرار CDI بعد نجاح العلاج بالمضادات الحيوية عالية، وتحدث في 20-30٪ من المرضى 2،5-7. ولذلك، فإن اكتشاف علاجات جديدة ضد هذا الممرض المعوي هو ضروري. لتقييم العلاجات ضد C. صعب، نموذج حيواني تقارب الأمراض التي تصيب البشر في ميلانوهناك حاجة سلالة linically ذات الصلة. في البداية، تم إنشاء فرضيات كوخ لC. صعب في عام 1977 باستخدام نموذج الهامستر السوري المعالجة الكليندامايسين 8. لا تزال تستخدم هذا النموذج اليوم للتحقيق في آثار جيم السموم صعب على التسبب 9،10. ومع ذلك، CDI في النموذج الهامستر يؤدي إلى ارتفاع معدلات الوفيات ولا تقريب مظاهر المرض الخبيث المزمنة التي يمكن رؤيتها في البشر مع CDI 10،11. واستنادا إلى سهولة الوصول وكاشف توفر منصات الفئران في البحث، وهذا نموذج الفأر من CDI هو ذات الصلة. في عام 2008، تم إنشاء نموذج الفأر قوية من CDI عن طريق علاج الفئران بخليط من المضادات الحيوية في مياه الشرب (كانامايسين، جنتاميسين، كوليستين، ميترونيدازول، وفانكومايسين) لمدة 3 أيام تليها حقن داخل الصفاق من الكليندامايسين 12. هذه الفئران المقدمة عرضة لالتهاب القولون CDI وشديد. تعتمدجي على جرعة اللقاح تديرها مجموعة من العلامات السريرية والفتك ويمكن ملاحظة باستخدام هذا النموذج. منذ هذا الوقت، وقد تم التحقيق في مختلف الصادات التي تغير الجراثيم الأمعاء الفئران، وخفض مقاومة الاستعمار إلى النقطة التي يمكن C. صعب استعمار الجهاز الهضمي (إعادة النظر في أفضل وآخرون. وLawley ويونغ) 13،14. وفي الآونة الأخيرة، والسيفالوسبورين واسعة، سيفوبيرازون، التي وردت في مياه الشرب لمدة 5 أو 10 يوما يجعل بتكاثر الفئران عرضة للCDI 15. منذ ترتبط إدارة السيفالوسبورين الجيل الثالث مع زيادة خطر CDI في البشر، واستخدام نموذج سيفوبيرازون تعكس بشكل أدق تحدث طبيعيا ومرض 16. وقد تم الطعن الفئران عرضة للجيم صعب المعالجة سيفوبيرازون مع كل من جيم جراثيم صعب والخلايا النباتية من مجموعة متنوعة من السلالات التي تتراوح في سريريأهمية والفوعة 17. وعلى الرغم من بعض الدراسات الأصلية باستخدام جيم الخلايا النباتية صعب كما شكل المعدية، تعتبر جيم جراثيم صعب الوسيلة الرئيسية لنقل 18. في العقد الماضي، C. صعب R20291، وNAP1 / BI / 027 سلالة، ظهرت، مما تسبب أوبئة CDI 19،20. سعينا لتحديد المسار السريري للمرض عندما طعن في الفئران المعالجة سيفوبيرازون مع جيم سلالة العسيرة سريريا ذات الصلة وراثيا لين العريكة، R20291. تفاصيل هذا البروتوكول على المسار السريري، بما في ذلك فقدان الوزن، والاستعمار الجرثومي، سمية الخلايا السمية، والتغيرات التشريحية المرضية في الجهاز الهضمي من الفئران تحدى مع جراثيم جيم صعب R20291. وعموما، هذا نموذج الفأر يبرهن على أن تكون منصة تجريبية قيمة لCDI تقارب الأمراض التي تصيب البشر. هذا نموذج الفأر يتميز بالتالي يمكن استخدامها لتقييم آثارعلاجات جديدة على تحسن المرض السريري وعلى استعادة مقاومة الاستعمار ضد C. صعب.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1037">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:292px;">#62 Perisept Sporidicial Disinfectant Cleaner&#160;</td>
			<td style="width:143px;">SSS Navigator</td>
			<td style="width:119px;">48027</td>
			<td style="width:483px;">This product will require dilution as recommended by the manufacturer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td>Alternative to filter plate for indivdiual samples tested in the Vero Cell Assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>Needs to be heated in water bath at 37C prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.4% Trypan Blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1% Peniciilin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% heat inactivated FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16140-071</td>
			<td>Needs to be heated in water bath at 37C prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1ml plastic syringe&#160;</td>
			<td>BD Medical Supplies</td>
			<td>309628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 ml Micro Centrifuge Screw Cap</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well cell culture flat bottom plate</td>
			<td>Costar Corning</td>
			<td>CL3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well filter plate</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MSGVS2210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adhesive Seal</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>AB-0558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:292px;">Bacto Agar</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">214010</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:292px;">Bacto Proteose Peptone</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">211684</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cefoperazone</td>
			<td>MP Bioworks</td>
			<td>199695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cefoxitine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C47856</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clostridium difficile Antitoxin Kit</td>
			<td>Tech Labs</td>
			<td>T5000</td>
			<td>Used as control for Vero Cell Assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Clostridium difficile Toxin A</td>
			<td>List Biological Labs</td>
			<td>152C</td>
			<td>Positive control for Vero Cell Assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-cycloserine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6880</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Distilled Water</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM 1X Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Needs to be heated in water bath at 37C prior to use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fructose</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>L95500</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer</td>
			<td>Bright-Line, Sigma</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:292px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">P285-500</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:292px;">MgSO4 (anhydrous)</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M2643</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:292px;">Millex-GS 0.22 &#956;m filter</td>
			<td style="width:143px;">Millex-GS</td>
			<td style="width:119px;">SLGS033SS</td>
			<td style="width:483px;">Filter for TCCFA plates&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:292px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S-0876</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">S640-3</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Number 10 disposable scalpel blade</td>
			<td>Miltex, Inc</td>
			<td>4-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PCR Plates</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14230244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic petri dish</td>
			<td>Kord-Valmark Brand</td>
			<td>2900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile plastic L-shaped cell spreader</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-665-230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe Stepper</td>
			<td>Dymax Corporation</td>
			<td>T15469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taurocholate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4009</td>
			<td>Part of TCCFA plates (see below)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure distilled water</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:292px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td style="width:143px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td align="right" style="width:119px;">664</td>
			<td style="width:483px;">Mice should be 5-8 weeks of age</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Olympus BX43F light microscope</td>
			<td style="width:143px;">Olympus Life Science</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:483px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DP27 camera</td>
			<td style="width:143px;">Olympus Life Science</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:483px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">cellSens Dimension software&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Olympus Life Science</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:483px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cefoperazone-treated mouse model of clinically-relevant clostridium difficile strain r20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

أثناء دراسة التمثيل، وسابقة التجهيز من العمر 5 أسابيع C57BL / 6 الفئران WT مع سيفوبيرازون في مياه الشرب (0.5 ملغ / مل) لمدة 5 أيام، وسمح ليوم 2 تغسل مع مياه الشرب العادية. وقد تم الطعن الفئران مع 10 5 أبواغ C. صعب R20291 خلال أنبوب تغذية عن طريق الفم في يوم...

Watch this Scientific Journal Video about Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291 at JoVE.com

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

ويحدد هذا البروتوكول نموذج الفأر سيفوبيرازون من كلوستريديوم العدوى العسيرة (CDI) باستخدام سلالة سريريا ذات الصلة وراثيا لين العريكة، R20291. وفيما يلي تفصيل التركيز على رصد السريري المرض، C. التعداد البكتيري العسيرة السمية الخلوية السم، والتغيرات التشريحية المرضية في جميع أنحاء CDI في نموذج الفأر في البروتوكول.

المعالجة سيفوبيرازون ماوس نموذج سريريا ذات صلة<em&gt; المطثية العسيرة</em&gt; سلالة R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

زراعة وصيانة<em&gt; المطثية العسيرة</em&gt; في بيئة لاهوائية

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

الوقاية من الإجهاد الحراري الآثار السلبية في الجرذان التي كتبها<emالعصوية الرقيقة&gt;</em&gt; الانفعال

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

A Protocol to Characterize the Morphological Changes of Clostridium difficile in Response to Antibiotic Treatment

A Protocol to Characterize the Morphological Changes of Clostridium difficile in Response to Antibiotic Treatment

بروتوكول لتوصيف التغيرات المورفولوجية<em&gt; كلوستريديوم ديفيسيل</em&gt; في الاستجابة للعلاج بالمضادات الحيوية

Assessment of antibiotic action with new drug development directed towards anaerobic bacteria is difficult and technically demanding. To gain insight into ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

فيروس الإنفلونزا أ الفيروس دراسات في نموذج ماوس للإصابة

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

مقايسة ميكرواري البروتين "تحديد المصلية" محددة مستضد "الضد الردود التالية" المطثيّة العسيرة الإصابة

We provide a detailed overview of a novel high-throughput protein microarray assay for the determination of anti-Clostridium difficile antibody levels in ...

A Purification and In Vitro Activity Assay for a (p)ppGpp Synthetase from Clostridium difficile

A Purification and In Vitro Activity Assay for a pppGpp Synthetase from Clostridium difficile

تنقية و في المختبر نشاط الإنزيم (ع) بجب سينثاتيز من المطثيّة العسيرة

Kinase and pyrophosphokinase enzymes transfer the gamma phosphate or the beta-gamma pyrophosphate moiety from nucleotide triphosphate precursors to ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

نموذج التحكم ماوس لأنه الانتان الوليدي

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

قياس سرعة انتشار النبض، وقابلية التشتت والسلالة في نموذج الماوس الأبهري البطني

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

Constructing Mutants in Serotype 1 Streptococcus pneumoniae strain 519/43

Constructing Mutants in Serotype 1 Streptococcus pneumoniae strain 519/43

بناء الطفرات في سلالة العقدية الرئوية من النمط المصلي 1 519/43

Streptococcus pneumoniae serotype 1 remains a huge problem in low-and-middle income countries, particularly in sub-Saharan Africa. Despite its importance, ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

التهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي: نموذج فأر التهابي داخل العين

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...