Name: plunge freezing: a tool for the ultrastructural and immunolocalization studies of suspension cells in transmission electron microscopy
Uploaded: 2017-05-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

ونعرب عن امتناننا لM. Bouchecareilh، E. Tétaud، S. Duvezin-Caubet، وA. ديفين لما قدموه من مساعدة والتعليقات على المخطوطة. ونحن ممتنون إلى القطب التصوير الالكتروني للمركز التصوير بوردو حيث تم التقاط الصور. وأيد هذا العمل من قبل المركز الوطني الفرنسي للبحث العلمي.

1. إعداد Formvar الشبكة السينمائي ملاحظة: إجراء التلاعب الكلوروفورم تحت غطاء الدخان باستخدام معدات الحماية الشخصية (القفازات، معطف المختبر، والنظارات). استخدام 400 يتناغم المجهر الإلكتروني شبكات النحاس. مع أنواع أخرى شبكة (أحجام شبكة ?...

<ol>
	<li>Palade, G. E., Porter, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+endoplasmic+reticulum.+I.+Its+identification+in+cells+in+situ.">Studies on the endoplasmic reticulum. I. Its identification in cells in situ.</a> J Exp Med. 100 (6), 641-656 (1954).</li><li>Kellenberger, E., Johansen, R., Maeder, M., Bohrmann, B., Stauffer, E., Villiger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artefacts+and+morphological+changes+during+chemical+fixation.">Artefacts and morphological changes during chemical fixation.</a> J Microsc. 168 (Pt 2), 181-201 (1992).</li><li>Studer, D., Humbel, B. M., Chiquet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscopy+of+high+pressure+frozen+samples:+bridging+the+gap+between+cellular+ultrastructure+and+atomic+resolution.">Electron microscopy of high pressure frozen samples: bridging the gap between cellular ultrastructure and atomic resolution.</a> Histochem Cell Biol. 130 (5), 877-889 (2008).</li><li>McDonald, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Out+with+the+old+and+in+with+the+new:+rapid+specimen+preparation+procedures+for+electron+microscopy+of+sectioned+biological+material.">Out with the old and in with the new: rapid specimen preparation procedures for electron microscopy of sectioned biological material.</a> Protoplasma. 251, 429-448 (2014).</li><li>Studer, D., Graber, W., Al-Amoudi, A., Eggli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+for+cryofixation+by+high-pressure+freezing.">A new approach for cryofixation by high-pressure freezing.</a> J Microsc. 203 (Pt 3), 285-294 (2001).</li><li>Bernales, S., McDonald, K. L., Walter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+counterbalances+endoplasmic+reticulum+expansion+during+the+unfolded+protein+response.">Autophagy counterbalances endoplasmic reticulum expansion during the unfolded protein response.</a> PLoS Biol. 4 (12), 2311-2324 (2006).</li><li>Kissov&#225;, I., Salin, B., Schaeffer, J., Bhatia, S., Manon, S., Camougrand, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+and+non-selective+autophagic+degradation+of+mitochondria+in+yeast.">Selective and non-selective autophagic degradation of mitochondria in yeast.</a> Autophagy. 3 (4), 329-336 (2007).</li><li>Gilkey, J. C., Staehling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+ultrarapid+freezing+for+the+preservation+of+cellular+ultrastructure.">Advances in ultrarapid freezing for the preservation of cellular ultrastructure.</a> Microsc Res Tech. 3 (2), 177-210 (1986).</li><li>Nogales, E., Scheres, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryo-EM:+A+Unique+Tool+for+the+Visualization+of+Macromolecular+Complexity.">Cryo-EM: A Unique Tool for the Visualization of Macromolecular Complexity.</a> Mol Cell. 58 (4), 677-689 (2015).</li><li>Baba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscopy+in+yeast.">Electron microscopy in yeast.</a> Methods Enzymol. 451, 133-149 (2008).</li><li>Leunissen, J. L. M., Yi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-pressurized+rapid+freezing+(SPRF):+a+novel+cryofixation+method+for+specimen+preparation+in+electron+microscopy.">Self-pressurized rapid freezing (SPRF): a novel cryofixation method for specimen preparation in electron microscopy.</a> J Microsc. 235 (1), 25-35 (2009).</li><li>Lefebvre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LdFlabarin+a+new+BAR+domain+membrane+protein+of+Leishmania+flagellum.">LdFlabarin a new BAR domain membrane protein of Leishmania flagellum.</a> PLoS One. 8 (9), 1-12 (2013).</li><li>Tetaud, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TbFlabarin,+a+flagellar+protein+of+Trypanosoma+brucei,+highlights+differences+between+Leishmania+and+Trypanosoma+flagellar-targeting+signals.">TbFlabarin, a flagellar protein of Trypanosoma brucei, highlights differences between Leishmania and Trypanosoma flagellar-targeting signals.</a> Exp Parasitol. 166, 97-107 (2016).</li><li>Wasmer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-state+NMR+spectroscopy+reveals+that+E+coli+inclusion+bodies+of+HET-s(218-289)+are+amyloids.">Solid-state NMR spectroscopy reveals that E coli inclusion bodies of HET-s(218-289) are amyloids.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 48 (26), 4858-4860 (2009).</li><li>Lefebvre-Legendre, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+to+assemble+the+alpha+3+beta+3+subcomplex+of+the+ATP+synthase+leads+to+accumulation+of+the+alpha+and+beta+subunits+within+inclusion+bodies+and+the+loss+of+mitochondrial+cristae+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Failure to assemble the alpha 3 beta 3 subcomplex of the ATP synthase leads to accumulation of the alpha and beta subunits within inclusion bodies and the loss of mitochondrial cristae in Saccharomyces cerevisiae.</a> J Biol Chem. 280 (18), 18386-18389 (2005).</li><li>Paumard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ATP+synthase+is+involved+in+generating+mitochondrial+cristae+morphology.">The ATP synthase is involved in generating mitochondrial cristae morphology.</a> EMBO J. 21 (3), 221-230 (2002).</li><li>Gabriel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Fox2-dependent+fatty+acid+&#223;-oxidation+pathway+coexists+both+in+peroxisomes+and+mitochondria+of+the+ascomycete+yeast+Candida+lusitaniae.">A Fox2-dependent fatty acid &#223;-oxidation pathway coexists both in peroxisomes and mitochondria of the ascomycete yeast Candida lusitaniae.</a> PLoS One. 9 (12), 1-27 (2014).</li><li>Dubochet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physics+of+rapid+cooling+and+its+implications+for+cryoimmobilization+of+cells.">The physics of rapid cooling and its implications for cryoimmobilization of cells.</a> Methods Cell Biol. 79, 7-21 (2007).</li><li>Meryman, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+living+cells:+principles+and+practice.">Cryopreservation of living cells: principles and practice.</a> Transfusion. 47 (5), 935-945 (2007).</li><li>Vanhecke, D., Graber, W., Studer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Close-to-native+ultrastructural+preservation+by+high+pressure+freezing.">Close-to-native ultrastructural preservation by high pressure freezing.</a> Methods Cell Biol. 88, 151-164 (2008).</li><li>Bobik, K., Dunlap, J. R., Burch-Smith, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tandem+high-pressure+freezing+and+quick+freeze+substitution+of+plant+tissues+for+transmission+electron+microscopy.">Tandem high-pressure freezing and quick freeze substitution of plant tissues for transmission electron microscopy.</a> J Vis Exp. (92), e51844 (2014).</li><li>Pinan-Lucarr&#233;, B., Clav&#233;, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+autophagy+in+the+filamentous+fungus+Podospora+anserina.">Monitoring autophagy in the filamentous fungus Podospora anserina.</a> Methods Enzymol. 451, 251-270 (2008).</li><li>Follet-Gueye, M. L., Pagny, S., Faye, L., Gomord, V., Driouich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+chemical+fixation+method+suitable+for+immunogold+localization+of+green+fluorescent+protein+in+the+Golgi+apparatus+of+tobacco+Bright+Yellow+(BY-2)+cells.">An improved chemical fixation method suitable for immunogold localization of green fluorescent protein in the Golgi apparatus of tobacco Bright Yellow (BY-2) cells.</a> J Histochem Cytochem. 51 (7), 931-940 (2003).</li><li>Jesus, D. M., Moussatche, N., Condit, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+high+pressure+freezing+and+freeze+substitution+method+to+preserve+the+labile+vaccinia+virus+nucleocapsid.">An improved high pressure freezing and freeze substitution method to preserve the labile vaccinia virus nucleocapsid.</a> J Struct Biol. 195 (1), 41-48 (2016).</li></ol>

تيم هو وسيلة قوية لمراقبة التركيبية لعضيات الخلايا والأنسجة. Cryofixation / تجميد الاستبدال هو حاليا أفضل طريقة للحفاظ على حد سواء التركيب الدقيق والبروتين استضداد. المثبتات الكيميائية تخترق وتعمل ببطء شديد مما يتيح إعادة ترتيب الهيكلية قبل أن يتم تثبيت كاملة من التركيب ?...

إعداد عينة أمر بالغ الأهمية لنجاح أي دراسة المجهر الإلكتروني. كان التقليدية EM تثبيت الوسيلة الرئيسية لتحديد الأنسجة أو الخلايا للانتقال المجهر الإلكتروني (TEM) 1. أولا، يتم استخدام الألدهيدات ورباعي أكسيد الأوزميوم لإصلاح كيميائيا المواد في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، يتم المجففة المواد مع المذيبات العضوية، تسلل، وجزءا لا يتجزأ من راتنجات الايبوكسي. هذا الأسلوب يعتمد على معدل تغلغل المثبتات في الخلية. وبالتالي، فإن القطع الأثرية واستخراج محتويات الخلوية وعادة ما تكون لاحظت 2. Cryofixation ومن الواضح أن البديل الأفضل للحفاظ على الهياكل الخلوية 3، وحفظ لهم سليمة. أعلى مستوى من الجودة من الصور TEM 4 في أقسام الراتنج رقيقة يمكن الحصول عليها باستخدام طريقة الاستبدال cryofixation / التجميد. والهدف من هذه التقنية هو الحصول على نصف المزججعينات ological دون تشكيل بلورات الثلج أو التي تحتوي على بلورات الثلج الصغيرة بما يكفي كي لا تلحق الضرر التركيب الدقيق للخلايا. تجميد الضغط العالي (HPF) وcryofixation فائقة سريعة، وهو ما يسمى أيضا يغرق التجمد (PF)، طريقتان لcryofix العينات. HPF يشل الجزيئات في خلية على الفور والابتعاد عن الأضرار الناجمة عن تثبيت EM التقليدية. وقد تم تطوير عدة أنواع من آلات تجميد والأجهزة الاستبدال التلقائي 5. آلات التجميد والمواد الاستهلاكية (النيتروجين السائل، عينة الناقلين، الخ) غالية الثمن، لكنها تسمح لإنتاج الميكروسكوب الإلكتروني ذات جودة عالية 6، 7. PF هو الاسلوب الذي تم استخدامه في أوائل 1950s، ويوصف في الأدبيات بسيطة ورخيصة 8. وخلال إجراء PF، يتم تجميد العينة مستعدة بمعدل سريع للحصول على بلورات الثلج حجم أقل من 3 إلى 5 نانومتر. تحقيقا لهذه الغاية، والعينةسقطت في كريوجين السائل، مثل الإيثان والبروبان، أو خليط الإيثان والبروبان. منذ 1950s، وقد تم القيام به تحسينات PF لجعل هذه التقنية متاحة لعدد أكبر من المستخدمين. ارتفاع ضغط التجميد هو حاليا السبيل الوحيد لتجميد مجموعة كبيرة ومتنوعة من نماذج سمكا من 50 ميكرون (تصل إلى سمك 200 ميكرون لعينات على شكل قرص) 5، في حين يستخدم PF على نطاق واسع لصورة الأشياء الصغيرة (&lt;100 نانومتر )، مثل المجمعات الجزيئات العالقة في طبقة رقيقة من الجليد غير متبلور 9. عينات أكبر، على سبيل المثال خلايا حقيقية النواة، يمكن cryofixed التي كتبها PF، ولكنها تتطلب عينة أصحاب، مثل الأنابيب الشعرية النحاس أو أنظمة ساندويتش 8 و 10 و 11. هنا، وسريعة وسهلة الاستخدام ومنخفضة التكلفة يغرق التكنولوجيا تجميد / تجميد الاستبدال التي يمكن استخدامها لمختلف الثقافات تعليق خلية يرد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="849">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Grids</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:171px;">T400-Cu</td>
			<td style="width:251px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Formvar</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">15800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Propane N35</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Liquid nitrogen</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Double edge dissecting needle</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">72947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cryovials</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:171px;">61802-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Osmium tetroxide</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">19130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Glass vial 8,5 ml</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">64252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Uranyl acetate</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">48851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Acetone</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">32201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol 100%</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">32221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Glass slides</td>
			<td style="width:213px;">VWR international</td>
			<td style="width:171px;">631-9439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Tweezers</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Acrylic resin</td>
			<td style="width:213px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td align="right" style="width:171px;">104371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Epoxy resin M</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">10951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Epoxy resin M hardener</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">10953</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dibutyl phtalate&#160;</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">80102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Epoxy resin M accelerateur</td>
			<td style="width:213px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:171px;">10952</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Crystallizer</td>
			<td style="width:213px;">Fischer scientific</td>
			<td style="width:171px;">08-762-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Joseph paper</td>
			<td style="width:213px;">VWR international</td>
			<td style="width:171px;">111-5009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Brass cups</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td>do it yourself shop or made by yourself</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Saccharomyces cerevisiae</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Shizosacharomyces cerevisiae</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Trypanosoma brucei</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Leishmania amazonensis</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Escherichia Coli&#160;</td>
			<td style="width:213px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Airtight box</td>
			<td style="width:213px;">Fischer scientific</td>
			<td style="width:171px;">7135-0001&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Air purifying respirator</td>
			<td style="width:213px;">Fischer scientific</td>
			<td style="width:171px;">3M 7502&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cartridge for respirator</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td style="width:171px;">3M 6001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Particulate filter</td>
			<td style="width:213px;">Fischer scientific</td>
			<td style="width:171px;">3M 5N11&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

plunge freezing: a tool for the ultrastructural and immunolocalization studies of suspension cells in transmission electron microscopy

انتقال المجهر الإلكتروني (TEM) هو أداة استثنائية لدراسة التركيب الدقيق خلية، من أجل توطين البروتينات وتصور المجمعات الجزيئات في دقة عالية جدا. ومع ذلك، للحصول على أقرب ما يمكن إلى الدولة الأم، مطلوب الكمال الحفاظ على العينة. التقليدية المجهر الإلكتروني (EM) التثبيت مع الألدهيدات، على سبيل المثال، لا يوفر الحفاظ التركيبية جيد. اختراق البطيء للمثبتات يدفع إعادة تنظيم الخلايا وفقدان مكونات الخلية المختلفة. لذلك، EM تثبيت التقليدي لا يسمح لاستقرار لحظية والحفاظ على الهياكل واستضداد. أفضل خيار لدراسة الأحداث داخل الخلية هو استخدام cryofixation تليها طريقة تثبيت تجميد الاستبدال التي تحافظ على خلايا في حالتها الأصلية. الضغط العالي تجميد / تجميد الاستبدال، الذي يحافظ على سلامة التركيب الدقيق الخلوية، هو الأسلوب الأكثر شيوعا، ولكن يتطلب expensiلقد المعدات. هنا، يتم تقديم وسيلة سهلة الاستخدام والتكلفة المنخفضة للتجمد تثبيت تليها تجميد استبدال لمزارع الخلايا تعليق.

في هذه المقالة، يتم تقديم وسيلة تجميد سهلة الاستخدام وانخفاض التكلفة المنخفضة لالتركيبية (الشكلان 1 و الشكل 2) وimmunolabeling (الشكل 3) دراسات. علينا أن نبرهن على أنه ليس من الضروري أن يكون المعدات الخاصة لهذ...

Watch this Scientific Journal Video about Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy

تصف هذه المخطوطة وسيلة سهلة الاستخدام ومنخفضة التكلفة كريوفيكساتيون لتصور خلايا تعليق عن طريق انتقال المجهر الإلكتروني.

يغرق التجميد: أداة لدراسات التركيبية وImmunolocalization من خلايا تعليق في نقل المجهر

Transmission Electron Microscopy (TEM) is an extraordinary tool for studying cell ultrastructure, in order to localize proteins and visualize ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

الطفرات والتحليل الوظيفي للقنوات ايون أعربت Heterologously في خلايا الثدييات

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

تتبع التشويهات الأنسجة التخلق في جنين الفرخ المبكر

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

جنبا إلى جنب تجميد الضغط العالي والسريع تجميد استبدال الأنسجة النباتية للنقل المجهر الإلكتروني

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

نموذج إعداد وتصوير اكسوسوميس مجهر إلكتروني

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

إعداد عينة المنمنمة مجهر إلكتروني

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

إعداد العينات البيولوجية بالتجميد ذات الضغط العالي، وتعزيز النقيض ساعدت الموجات الدقيقة، والحد الأدنى راتنج التضمين لتصوير حجم

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

إعداد الشبكة المجهرية كريو إلكترون للدراسات التي تم حلها عبر الزمن باستخدام نظام روبوتي جديد، Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...

Rapid Freezing using Sandwich Freezing Device for Good Ultrastructural Preservation of Biological Specimens in Electron Microscopy

التجميد السريع باستخدام جهاز تجميد ساندويتش للحفاظ على البنية الفائقة جيدة من العينات البيولوجية في المجهر الإلكترون

Chemical fixation has been used for observing the ultrastructure of cells and tissues. However, this method does not adequately preserve the ...

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

في سيتو استكشاف مورين ميغاكاريوبويز باستخدام المجهر الإلكتروني انتقال

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...