Name: dextran enhances the lentiviral transduction efficiency of murine and human primary nk cells
Uploaded: 2018-01-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells at JoVE.com

Lucia Sammarco ve onun Lulu'nun limonata standı ilham, motivasyon ve destek için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen NIH R01 AI102893 ve ncı R01 CA179363 (S.M.) tarafından desteklenmiştir; NHLBI-HL087951 (S.R.); NIH-CA151893-K08 (M.J.R.); NCI 1R01CA164225 (L.W); Alex Lemonade Stand Vakfı (S.M.); HRHM Program MACC Fonu (S.M.; S.R.; M.S.T); Nicholas Aile Vakfı (S.M.); Gardetto ailesi (S.M.); Hyundai bilim adamları (M.S.T.) programı; Hyundai umut gezici (S.R.); MACC Fonu (M.S.T. ve S.M.); Çocuk Araştırma Enstitüsü, MCW (S.R.); ve Kathy Duffey Fogerty Ödülü (M.J.R.).

Tüm hayvan iletişim kuralları insani ve ahlaki muamele-in hayvan takip ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tıbbi College of Wisconsin (MCW), Milwaukee, WI Biyomedikal Araştırma Merkezi (BRC) içinde tarafından kabul edildi. İnsan periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) kullanımı kurumsal inceleme Kurulu (IRB) kan Merkezi Wisconsin, Milwaukee, WI kan Araştırma Enstitüsü tarafından kabul edildi.
1. fare, hücre satırları ve vektörel çizimler
<ol><li>...

<ol>
	<li>Vivier, E., Tomasello, E., Baratin, M., Walzer, T., Ugolini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+natural+killer+cells.">Functions of natural killer cells.</a> Nat. Immunol. 9, 503-510 (2008).</li><li>Zitvogel, L., Tesniere, A., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+despite+immunosurveillance:+immunoselection+and+immunosubversion.">Cancer despite immunosurveillance: immunoselection and immunosubversion.</a> Nat. Rev. Immunol. 6, 715-727 (2006).</li><li>Arina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+liaisons+of+natural+killer+lymphocytes+in+immunology+and+immunotherapy+of+cancer.">Cellular liaisons of natural killer lymphocytes in immunology and immunotherapy of cancer.</a> Expert. Opin. Biol. Ther. 7, 599-615 (2007).</li><li>Manilay, J. O., Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cells+and+their+role+in+graft+rejection.">Natural killer cells and their role in graft rejection.</a> Curr. Opin. Immunol. 10, 532-538 (1998).</li><li>Raulet, D. H., Vance, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-tolerance+of+natural+killer+cells.">Self-tolerance of natural killer cells.</a> Nat. Rev. Immunol. 6, 520-531 (2006).</li><li>Chouaib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+outcome+of+leukemia+by+natural+killer+cell-based+immunotherapeutic+strategies.">Improving the outcome of leukemia by natural killer cell-based immunotherapeutic strategies.</a> Front Immunol. 5, 95 (2014).</li><li>Dulphy, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Underground+Adaptation+to+a+Hostile+Environment:+Acute+Myeloid+Leukemia+vs.+Natural+Killer+Cells.">Underground Adaptation to a Hostile Environment: Acute Myeloid Leukemia vs. Natural Killer Cells.</a> Front Immunol. 7, 94 (2016).</li><li>Tran, J., Kung, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+mediate+stable+and+efficient+gene+delivery+into+primary+murine+natural+killer+cells.">Lentiviral vectors mediate stable and efficient gene delivery into primary murine natural killer cells.</a> Mol. Ther. 15, 1331-1339 (2007).</li><li>Maasho, K., Marusina, A., Reynolds, N. M., Coligan, J. E., Borrego, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+human+natural+killer+cell+line,+NKL,+using+the+Amaxa+nucleofection+system.">Efficient gene transfer into the human natural killer cell line, NKL, using the Amaxa nucleofection system.</a> J. Immunol. Methods. 284, 133-140 (2004).</li><li>Trompeter, H. I., Weinhold, S., Thiel, C., Wernet, P., Uhrberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+highly+efficient+gene+transfer+into+natural+killer+cells+by+nucleofection.">Rapid and highly efficient gene transfer into natural killer cells by nucleofection.</a> J. Immunol. Methods. 274, 245-256 (2003).</li><li>Becknell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+infection+of+human+natural+killer+cells+with+an+EBV/retroviral+hybrid+vector.">Efficient infection of human natural killer cells with an EBV/retroviral hybrid vector.</a> J. Immunol. Methods. 296, 115-123 (2005).</li><li>Jiang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syk+regulation+of+phosphoinositide+3-kinase-dependent+NK+cell+function.">Syk regulation of phosphoinositide 3-kinase-dependent NK cell function.</a> J. Immunol. 168, 3155-3164 (2002).</li><li>Burshtyn, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+residues+amino-terminal+of+cytoplasmic+tyrosines+contribute+to+the+SHP-1-mediated+inhibitory+function+of+killer+cell+Ig-like+receptors.">Conserved residues amino-terminal of cytoplasmic tyrosines contribute to the SHP-1-mediated inhibitory function of killer cell Ig-like receptors.</a> J. Immunol. 162, 897-902 (1999).</li><li>Schroers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+human+T+lymphocytes+and+natural+killer+cells+by+Ad5/F35+chimeric+adenoviral+vectors.">Gene transfer into human T lymphocytes and natural killer cells by Ad5/F35 chimeric adenoviral vectors.</a> Exp. Hematol. 32, 536-546 (2004).</li><li>Imai, C., Iwamoto, S., Campana, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+modification+of+primary+natural+killer+cells+overcomes+inhibitory+signals+and+induces+specific+killing+of+leukemic+cells.">Genetic modification of primary natural killer cells overcomes inhibitory signals and induces specific killing of leukemic cells.</a> Blood. 106, 376-383 (2005).</li><li>Denning, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+transductional+efficiency+of+lentiviral+vectors:+effect+of+sera+and+polycations.">Optimization of the transductional efficiency of lentiviral vectors: effect of sera and polycations.</a> Mol. Biotechnol. 53, 308-314 (2013).</li><li>Lamers, C. H., Willemsen, R. A., Luider, B. A., Debets, R., Bolhuis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+gene+transduction+and+expansion+of+human+T+lymphocytes+for+clinical+immunogene+therapy+of+cancer.">Protocol for gene transduction and expansion of human T lymphocytes for clinical immunogene therapy of cancer.</a> Cancer Gene Ther. 9, 613-623 (2002).</li><li>Campeau, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+viral+system+for+expression+and+depletion+of+proteins+in+mammalian+cells.">A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells.</a> PLoS. ONE. 4, e6529 (2009).</li><li>Segura, M. M., Garnier, A., Durocher, Y., Ansorge, S., Kamen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+protocol+for+lentiviral+vector+mass+production.">New protocol for lentiviral vector mass production.</a> Methods Mol. Biol. 614, 39-52 (2010).</li><li>Rajasekaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+by+Fyn-ADAP+via+the+Carma1-Bcl-10-MAP3K7+signalosome+exclusively+regulates+inflammatory+cytokine+production+in+NK+cells.">Signaling by Fyn-ADAP via the Carma1-Bcl-10-MAP3K7 signalosome exclusively regulates inflammatory cytokine production in NK cells.</a> Nat. Immunol. 14, 1127-1136 (2013).</li><li>Regunathan, J., Chen, Y., Wang, D., Malarkannan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NKG2D+receptor-mediated+NK+cell+function+is+regulated+by+inhibitory+Ly49+receptors.">NKG2D receptor-mediated NK cell function is regulated by inhibitory Ly49 receptors.</a> Blood. 105, 233-240 (2005).</li><li>Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rap1b+facilitates+NK+cell+functions+via+IQGAP1-mediated+signalosomes.">Rap1b facilitates NK cell functions via IQGAP1-mediated signalosomes.</a> J. Exp. Med. 207, 1923-1938 (2010).</li><li>Rajasekaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+Growth+Factor-{beta}-activated+Kinase+1+Regulates+Natural+Killer+Cell-mediated+Cytotoxicity+and+Cytokine+Production.">Transforming Growth Factor-{beta}-activated Kinase 1 Regulates Natural Killer Cell-mediated Cytotoxicity and Cytokine Production.</a> J Biol. Chem. 286, 31213-31224 (2011).</li><li>Wolkowicz, R., Nolan, G. P., Curran, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+for+the+delivery+of+DNA+into+mammalian+cells.">Lentiviral vectors for the delivery of DNA into mammalian cells.</a> Methods Mol. Biol. 246, 391-411 (2004).</li><li>Sutlu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+intracellular+antiviral+defense+mechanisms+augments+lentiviral+transduction+of+human+natural+killer+cells:+implications+for+gene+therapy.">Inhibition of intracellular antiviral defense mechanisms augments lentiviral transduction of human natural killer cells: implications for gene therapy.</a> Hum. Gene Ther. 23, 1090-1100 (2012).</li><li>Cornetta, K., Anderson, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protamine+sulfate+as+an+effective+alternative+to+polybrene+in+retroviral-mediated+gene-transfer:+implications+for+human+gene+therapy.">Protamine sulfate as an effective alternative to polybrene in retroviral-mediated gene-transfer: implications for human gene therapy.</a> J. Virol. Methods. 23, 187-194 (1989).</li><li>Toyoshima, K., Vogt, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+and+inhibition+of+avian+sarcoma+viruses+by+polycations+and+polyanions.">Enhancement and inhibition of avian sarcoma viruses by polycations and polyanions.</a> Virology. 38, 414-426 (1969).</li><li>Jensen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bi-specific+CD3+x+NCAM+antibody:+a+model+to+preactivate+T+cells+prior+to+tumour+cell+lysis.">The bi-specific CD3 x NCAM antibody: a model to preactivate T cells prior to tumour cell lysis.</a> Clin. Exp. Immunol. 134, 253-263 (2003).</li></ol>

Katyonik polimer Ajan fare ve insan birincil NK hücreleri lentiviral iletim verimliliğini artırır gibi bu çalışmada dextran o kullanımını gösterir. Ayrıca, Türkçe veya PS, gibi Katyonik diğer ajanlar insan birincil NK hücreleri viral vektörler teslimini üzerinde fark edilebilir bir etkisi olması. Daha önce Türkçe insan T hücreleri17gen iletim çoğaltmak olabilir kanıtlanmıştır. Bu sonuçlar, ancak, ne Türkçe ne de PS benzer bir verimlilik insan birincil NK hücreleri ...

Doğal öldürücü (NK) doğuştan gelen bağışıklık sistemi1büyük lenfositik nüfusu hücrelerdir. NK hücreleri karşı tümörler ve enfeksiyonlar2,3,4ana bilgisayar bağışıklık yanıtının ilk satır savunucuları olarak işlev. NK hücreleri de güçlü sitokinler ve kemokinler5salgılanmasını aracılığıyla tolerans gelişimi merkezi bir rol oynamaktadır. Hedef ve tümör hücreleri ortadan kaldırmak için güçlü yeteneklerini nedeniyle, donör elde edilen insan NK hücreleri kanser6,7için bir adoptive immünoterapi olarak değerlendirmek için birden fazla klinik çalışmalar yürütülmektedir. Aksine T hücreler, NK hücreleri gelişim biyolojisi henüz iyi karakterize8olmak zorundadır. Bu bilgi kısmen genler ilgi fare veya insan birincil NK hücreleri göndermek verimli teknikleri yokluğu nedeniyle eksikliğidir. Bu nedenlerden dolayı hücre hatları yerine Primer hücre en NK hücre çalışmaları yapılmıştır. Bu nedenle, birincil NK hücreleri genler ilgi ile transduce güvenilir ve etkin bir iletişim kuralı için ihtiyaç çok önemlidir.
Bu çalışmada genel amacı lenti - veya Retrovirüsler birincil insan veya fare NK hücreleri transduced tutarlı ve güvenilir bir yöntem formüle etmek oldu.
Büyük ölçüde birincil NK hücreleri geçici dönüşümü kullanarak bu sorunu çözmeye çalıştığınız önceki çalışmalar yapılmıştır. Bu plazmid transfection9,10, Epstein - Barr virüsü (EBV) içerir / retroviral hibrid vektör11, vaksinia vektörler12,13ve14Ad5/F35 chimeric adenoviral vektörel çizimler. Bu teknikler mütevazı verimliliğini rağmen iletim geçici doğasını onlara genetiği değiştirilmiş NK hücreleri uzun süreli kullanımı için uygun olmayan hale getirir. Bir kaç son yıllarda yapılan çalışmalarda retroviral vektörler NK hücreleri, enfeksiyon gen ifade11,15kabul edilebilir bir düzeyde sağlamak için birden fazla döngüleri gerektiren transduce için kullandık. Retroviral vektörler aksine, lentiviral vektörler konak hücre nükleer alma makine viral öncesi entegrasyonu karmaşık çekirdek translocate için kullanabilirsiniz. Bu virüs birincil NK hücreleri dahil olmayan bölme hücrelerdeki çoğaltma büyük bir sınırlayıcı faktördür.
Farklı hücre yüzey reseptörleri ve viral parçacıkların arasındaki etkileşimler viral alımını hücre içine izin verir. Viral zarf proteinleri ve onların soydaş ana bilgisayar reseptörleri arasındaki ilk nişan bu iki arasında mevcut potansiyel negatif ücretleri nedeniyle sınırlı olabilir. Polybrene (Pb), protamine sülfat (PS) veya dextran, gibi Katyonik polimerler ek hücre yüzey reseptörleri için olumlu bir ücret vermek ve böylece viral zarf bağlama çoğaltmak birçok iletim teknikleri arkasındaki mantığı olduğunu proteinler. Bu hücreler16tarafından füzyon verimlilik ve viral parçacıkların alımını artırır. Her ne kadar Türkçe veya PS gen transferi T hücreleri17artırabilir rapor edildi, bunların uygulama birincil NK hücreleri iletim verimliliği herhangi bir etkisi yoktu. Ayrıca, birincil NK hücreleri kullanarak bu Ayıraçlar arasında karşılaştırmalı bir analiz gerçekleştirilmedi. Bu çalışmada, üç Katyonik polimerler iletim verimliliği karşılaştırıldı. Bu üç Katyonik polimerler arasında sadece dextran önemli fare ve insan birincil NK hücreleri içine etkili viral iletim artırır, sonuçlar gösterir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dextran</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>90-64-91-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polybrene (Pb)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>TR-1003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protamine sulfate (PS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>p3369</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-052-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI1640</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ATALANTA</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-001-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-mercaptoethanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT25000CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interferon gamma (IFN-&#947; )</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-7311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium lodding staining solution</td>
			<td>BD</td>
			<td>51-66211E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>PHOENIX</td>
			<td>NDC 57319-559-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK cell negative selection kit</td>
			<td>Stem Cell</td>
			<td>19855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yac-1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>TIB-160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K562</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>Jakson</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>293T cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-3216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 flasks</td>
			<td>Cornnig</td>
			<td>430641U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>antibody-based negative selection kits</td>
			<td>Stem Cell</td>
			<td>19055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>51Chromium (Cr)-release assays</td>
			<td>perkin elmer&#39;s</td>
			<td>NEZ030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA kits</td>
			<td>Ebioscience</td>
			<td>00-4201-56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Butyrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>5887-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear polyethylenimine</td>
			<td>polysciences</td>
			<td>23966-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll</td>
			<td>GE Life Science</td>
			<td>17-1440-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-022-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dextran enhances the lentiviral transduction efficiency of murine and human primary nk cells

Doğal öldürücü (NK) hücreye belirli genlerin iletim verimli büyük bir mücadele vardı. Başarılı transductions geliştirme, farklılaşma ve NK hücreleri fonksiyon ilgi gen rolü tanımlamak için kritik öneme sahiptir. Kanserli hastalarda chimeric antijen reseptör (CARs) ile ilgili son gelişmeler eksojen genler efektör lenfositler için teslim etmek etkili bir yöntem ihtiyacını vurgular. Lentiviral-aracılı gen transductions birincil insan veya fare NK hücreleri içine verimliliği önemli kısıtlayıcı bir faktör olduğu önemli ölçüde düşük kalır. Son gelişmeler polybrene gibi Katyonik polimerler kullanılarak geliştirilmiş gen iletim verimliliği T hücreleri gösterir. Ancak, bu ürünlerin NK hücreleri iletim verimliliği artırmak başarısız oldu. Bu iş o dextran dallı glukan polisakkarit gösterir önemli ölçüde iletim insan ve fare birincil NK hücreleri artırır. Bu son derece tekrarlanabilir iletim yöntemi klinik gen teslim uygulamalar ve böylece NK hücre tabanlı kanserli hastalarda. büyük ölçüde artırabilirsiniz insan birincil NK hücreleri transducing için yetkili bir araç sağlar

Dextran birincil insan ve fare NK hücreleri lentiviral vektörü verimli gen transferi neden olmaktadır.
İnsan NK hücreleri izole ve PBMC (bir saflığı % 85'inden fazlası ile) saf ve gecede rIL-2 300 U/mL ile inkübe. Bu birincil NK hücreleri sonra çeşitli ilişkilendirmenin çeşitliliği enfeksiyon, GFP lentivirus ile transduced (MOI; 3, 10 ve 20 IU hücre başına) 8 µg/mL Türkçe, PS veya dextran huzurunda 24-şey t...

Watch this Scientific Journal Video about Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells at JoVE.com

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Bu çalışmanın amacı hücrelerdeki birincil doğal öldürücü (NK) başarılı gen iletim için izin teknolojileri formüle etmek oldu. İnsan lentiviral iletim dextran aracılı veya fare birincil NK hücreleri sonuçlarında yüksek gen ifade verimliliği. Bu yöntemi, gen iletim NK hücre genetik manipülasyon büyük ölçüde artıracaktır.

Dextran fare ve insan birincil NK hücreleri Lentiviral iletim verimliliğini artırır

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Expansion, Purification, and Functional Assessment of Human Peripheral Blood NK Cells

Genişleme, Saflaştırılması, ve İnsan Periferik Kan NK Hücrelerinin Fonksiyonel Değerlendirme

Natural killer (NK) cells play an important role in immune surveillance against a variety of infectious microorganisms and tumors. Limited availability of ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

İlköğretim İnsan naif ve Bellek T Hücreleri gelen İsteyerek Düzenleyici T Hücreleri Üretimi

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

Primer insan T hücrelerinin piggyBac Transposon Sistem Modifikasyon

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

İzolasyon ve Kemirgen Kemik İliği intravenöz enjeksiyon Türetilmiş Monositler

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Böbrek Bağışıklık Hücreleri Güvenilir ve Yüksek Verimlilik Ekstraksiyon

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...

Retroviral Transduction of Helper T Cells as a Genetic Approach to Study Mechanisms Controlling their Differentiation and Function

Eğitim için bir genetik Yaklaşım olarak yardımcı T hücrelerinin retroviral İletimi Mekanizmaları kendi Farklılaşma ve Kontrol Fonksiyonunun

Helper T cell development and function must be tightly regulated to induce an appropriate immune response that eliminates specific pathogens yet prevents ...

A Flow Cytometry-Based Cytotoxicity Assay for the Assessment of Human NK Cell Activity

Akış Sitometresi tabanlı sitotoksisite tahlil insan NK hücre etkinliği değerlendirilmesi için

Within the innate immune system, effector lymphocytes known as natural killer (NK) cells play an essential role in host defense against aberrant cells, ...

Assessment of the Synaptic Interface of Primary Human T Cells from Peripheral Blood and Lymphoid Tissue

Periferik kan ve lenf dokusu birincil insan T hücre sinaptik arabirimi değerlendirilmesi

The current understanding of the dynamics and structural features of T-cell synaptic interfaces has been largely determined through the use of ...

Generation of Knock-out Primary and Expanded Human NK Cells Using Cas9 Ribonucleoproteins

Cas9 Ribonucleoproteins kullanarak Knock-out birincil ve genişletilmiş insan NK hücre üretimi

CRISPR/Cas9 technology is accelerating genome engineering in many cell types, but so far, gene delivery and stable gene modification have been challenging ...

High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

Plazma zarı verimliliği memeli hücrelerinde yeniden mühürlemeden yüksek üretilen iş ölçümü

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...