Name: a murine orthotopic bladder tumor model and tumor detection system
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System at JoVE.com

This work was funded by a grant from the National Medical Research Council of Singapore (NMRC/CIRG/1335/2012) awarded to Professor Kesavan Esuvaranathan.

Tous les travaux des animaux adhéré aux directives du Comité des soins et l&#39;utilisation des animaux institutionnels (IACUC) sur l&#39;utilisation des animaux et de manutention (numéro de protocole 084/12) à l&#39;Université nationale de Singapour. 1. Croissance des cellules MB49-PSA in vitro et de mesure PSA Sécrétion <ol><li> Maintenir murine cancer de la vessie cellules MB49-PSA 15 dans complet du milieu Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) supplémenté ave...

<ol>
	<li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+(MB49).">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer.">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li><li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li><li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model.">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li><li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies.">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181 (2013).</li><li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer.">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li><li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer.">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684 (2011).</li><li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants.">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li><li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging.">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li><li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity.">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li><li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model:+a+validation+study.">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li><li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter.">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li><li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses.">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075 (2007).</li><li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+CD4+CD25+Foxp3++cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal.">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li><li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes.">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718 (2015).</li><li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470,+an+angiogenic+inhibitor.">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li><li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine.">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li><li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin.">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li><li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA.">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li><li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+(II)+metal-organic+framework.">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li><li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles/PAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy.">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models.">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice.">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li></ol>

Les étapes les plus critiques dans le protocole sont: 1) maintenir avec succès la tumorigénicité de la lignée cellulaire; 2) assurant mesurable PSA sécrétion avant l&#39;implantation des cellules tumorales chez la souris; 3) la génération d&#39;une suspension à cellule unique pour l&#39;implantation de manière à réduire la variation de la taille de la tumeur; et 4) instiller des cellules à une vitesse lente pour éviter reflux vésico-urétéral, ce qui entraîne une tumeur implantation de cellules dans le...

Le but de cette méthode est de générer des tumeurs de la vessie murin orthotopique et de suivre les tumeurs implantées aussi précisément que possible, de sorte que les souris sans implantation de la tumeur ne sont pas pensé pour avoir été durcie à l&#39;analyse du point final. Dans l&#39;ensemble, la méthode indiquée réduira la nécessité d&#39;un grand nombre de souris pour l&#39;analyse expérimentale et assurer une plus grande précision dans la détermination des résultats thérapeutiques. Le développement d&#39;un modèle orthotopique de cancer est important, car les cellules tumorales implantation sous-cutanée ne récapitulent pas l&#39;environnement de la maladie clinique ou permettent le développement de stratégies thérapeutiques. L&#39;architecture de la vessie permet à l&#39;instillation de thérapies contre le cancer de la vessie directement dans la vessie avec des effets systémiques minimales. Ainsi, les modèles animaux qui récapitulent cet environnement, comme un modèle orthotopique, sont importantes pour évaluer de nouvelles thérapies. Les conclusions tirées de tout dispositif expérimental sont dependent sur les limites du modèle. Plusieurs techniques ont été mises au point pour la production de tumeurs de la vessie orthotopique chez la souris. Ceux-ci se fondent sur d&#39;endommager la couche de glycosaminoglycanes de la vessie, permettant aux cellules tumorales à implanter. Les techniques utilisées comprennent électrocoagulation, qui se traduit par un point de dégâts dans la paroi de la vessie unique, conduisant au développement de la tumeur sur un site dans la vessie 1,2. Cependant, le taux d&#39;implantation de la tumeur à l&#39;aide électrocoagulation de réussite est dépendante de l&#39;opérateur variant de 10 - 90% et comprend le danger que la paroi de la vessie est percé, ce qui conduit à développer des tumeurs dans la cavité péritonéale. Cautérisation chimique est effectuée en utilisant du nitrate d&#39; argent, ce qui endommage la paroi de la vessie 3. De même, l&#39; acide a été utilisé pour endommager la paroi de la vessie 4. Trypsine a également été utilisé pour endommager la vessie et 5. Ces procédés peuvent entraîner l&#39;apparition de plus d&#39;une tumeur de la vessie.En outre, il existe un risque de dommages importants à la vessie si les produits chimiques sont laissés en contact avec la paroi de la vessie pendant trop longtemps. La méthode développée par Ninalga et al. utilise la poly-L-lysine chargée positivement (PLL) 6 molécules à recouvrir la paroi de la vessie; ce qui permet les cellules tumorales chargées négativement à coller à la couche de glycosaminoglycanes de la vessie. Ce procédé conduit généralement à plus d&#39;une tumeur en développement dans la vessie, mais l&#39; implantation des tumeurs est à 80 - 100% 4,7. Techniquement, il est aussi la procédure la plus simple à réaliser. Pour garantir que les tumeurs qui se développent sont assez même taille, il est important que les cellules tumorales ne sont pas regroupés dans les grandes touffes avant l&#39;implantation. Afin d&#39;évaluer l&#39;efficacité thérapeutique, il est préférable d&#39;effectuer cette étude sur des souris avec des tumeurs assez de taille similaire. Ainsi, un système de détection qui permet de quantifier la bonne taille de la tumeur rapidement après l&#39;implantation est importante. Plusieurs stratégies ont abeillen utilisé pour évaluer les tumeurs. Ceux - ci comprennent l&#39; imagerie par résonance magnétique (IRM) 8-10, la fluorescence 11, bioluminescence 12,13, ultrasons 14, et le dosage immuno-enzymatique (ELISA) 15,16. Tandis que l&#39;IRM et les ultrasons ne nécessitent pas de modifications des cellules tumorales, il existe un besoin d&#39;un équipement et d&#39;agents de contraste pour l&#39;IRM sensibles. Les dosages par fluorescence, luminescence- et à base d&#39;ELISA nécessitent une modification des cellules tumorales pour exprimer des protéines marqueurs qui peuvent être détectés par ces méthodes. Pour la fluorescence, un substrat est nécessaire pour la détection de l&#39;activité de la luciférase; ainsi, il y a une étape supplémentaire et une augmentation des coûts. Les deux luminescence et fluorescence nécessitent un équipement spécialisé. Pour produire la fluorescence, la protéine fluorescente verte (GFP) de cyclisation qui est catalysée par l&#39;oxygène moléculaire, est nécessaire. Ainsi, l&#39;expression de la GFP peut être variable au sein d&#39;une masse tumorale en fonction de l&#39;accès à l&#39;oxygène, ce qui en fait un marqueur peu fiable <sup&gt; 17. Modification de la lignée de cellules de cancer de la vessie murin MB49 à sécréter de la prostate humaine Specific Antigen (PSA) 15,16 comme un marqueur de substitution est une autre stratégie. Ces marqueurs fournissent également un autre moyen de confirmer la présence d&#39;une tumeur à la fin de l&#39;expérience, ce qui les rend une alternative à immunohistochimie. Cette étude rapporte le procédé PLL implantation de la tumeur orthotopique et présente une comparaison des systèmes de détection d&#39;une tumeur, à savoir la méthode ELISA, la fluorescence, l&#39;imagerie par ultrasons.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="893">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:404px;">MB49-PSA cells</td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td style="width:113px;">ref (Wu QH, 2004)</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">RPMI 1640 media</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30027.01&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM) media</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS) South American</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS) South American, Premium</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S181B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30088.03&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">L-glutamine</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>X0550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Hygromycin B</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10687-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">free PSA (Human) ELISA kit</td>
			<td>Abnova</td>
			<td>KA0209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TRIzol Reagent for RNA extraction&#160;</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit with RNase Inhibitor</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4374967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Universal PCR Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4304437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Gene Expression Assay &#8211; Mouse Actb</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Mm00607939_s1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Gene Expression Assay &#8211; Human KLK3</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Hs00426859_g1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">C57BL/6J female mice</td>
			<td>In Vivos</td>
			<td></td>
			<td>4-6 wk old</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anesthesia (75mg/kg Ketamine and 1mg/kg Medetomidine)</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Reversal drug (1mg/kg Atipamezole)</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ear punch</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72893-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Hartmann&#39;s solution or Compound sodium lactate</td>
			<td>B Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ophthalmic ointment - Duratears sterile ocular lubricant ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Heat pack - HotHands handwarmers</td>
			<td>Heatmax Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Introcan Certo IV catheter</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>4251300</td>
			<td>24G x 3/4&#8243;</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Aquagel Lubricating jelly</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">&#160;Poly-L-lysine solution, 0.01%,</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">cOmplete, Mini, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Quantichrom Creatinine Assay Kit</td>
			<td>BioAssay Systems</td>
			<td>DICT-50&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fluorescent dye - VivoTrack 680</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEV12000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition Solution</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>4427575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Equipment and Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">7500 Realtime PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">7500 Software v2.3</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Metabolic Cage</td>
			<td>Tecniplast&#160;</td>
			<td>Vertical type rack for 12 cages</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">BD FACSCanto I system&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">BD FACSDiva software v7</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">IVIS SpectrumCT in vivo imaging system&#160;</td>
			<td>Caliper Life Sciences&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Living Image Software v3.1</td>
			<td>Caliper Life Sciences&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vevo 2100 imaging system&#160;</td>
			<td>VisualSonics&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine orthotopic bladder tumor model and tumor detection system

Ce protocole décrit la génération de tumeurs de la vessie chez des souris C57BL / 6J femelles en utilisant la lignée cellulaire de cancer de la vessie murin MB49, qui a été modifiée pour secréter de la prostate humain de l&#39;antigène spécifique (PSA) et la procédure pour la confirmation d&#39;implantation de la tumeur. En bref, les souris sont anesthésiés à l&#39;aide de drogues injectables et sont faits pour mettre en position dorsale. L&#39;urine est libérée de la vessie et de 50 pi de poly-L-lysine (PLL) est lentement instillée à un débit de 10 pl / 20 s en utilisant un cathéter 24 G IV. Il est laissé dans la vessie pendant 20 minutes en bouchant le cathéter. Le cathéter est retiré et PLL est libéré par une légère pression sur la vessie. Ceci est suivi par l&#39; instillation de la lignée cellulaire de cancer de la vessie de souris (1 x 10 5 cellules / 50 ul) à un débit de 10 pl / 20 s. Le cathéter est bouché pour empêcher l&#39;évacuation prématurée. Après 1 h, les souris sont ravivées avec un médicament d&#39;inversion, et la vessie est annulée. Le taux d&#39;instillation lente est important,car il réduit reflux vésico-urétéral, ce qui peut provoquer des tumeurs de se produire dans les voies urinaires supérieures et dans les reins. La lignée cellulaire doit être bien remis en suspension pour réduire l&#39;agglutination des cellules, car cela peut conduire à des tailles de tumeur inégale après l&#39;implantation. Cette technique induit des tumeurs avec une grande efficacité. La croissance des tumeurs est contrôlée par la sécrétion urinaire de PSA. la surveillance du marqueur PSA est plus fiable que les ultrasons ou l&#39;imagerie par fluorescence pour la détection de la présence de tumeurs de la vessie. Tumeurs chez les souris atteignent généralement une taille maximale ayant un impact négatif sur la santé d&#39;environ 3 - 4 semaines, si non traitée. En surveillant l&#39;évolution de la tumeur, il est possible de différencier les souris qui ont été guéris de ceux qui ne sont pas implantés avec succès des tumeurs. Avec seulement une analyse du point final, ce dernier peut être à tort, supposé avoir été guéri par thérapie.

PSA sécrétion à partir de cellules MB49 a varié avec le milieu de croissance. MB49-PSA est cultivé dans DMEM médias parce que cela se traduit par une sécrétion accrue de PSA (figure 1A). Afin de déterminer la sensibilité du PSA ELISA et PCR en temps réel, un nombre différent de MB49-PSA sécrétant les cellules ont été mélangées avec des cellules parentales MB49. PSA ELISA détecte un minimum de 1 x 10 5 cellules PSA sécrétant / 1 x 10 6...

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A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Ce protocole décrit la génération de tumeurs de la vessie orthotopique de souris femelles de souris C57BL / 6J et le contrôle de la croissance tumorale.

Un système de détection de tumeur modèle et tumeur murine Orthotopique vessie

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murin modèle expérimental de tumeur de développement original et péritonéale Métastase<em&gt; via</em&gt; Orthotopique Inoculation avec des cellules de l&#39;ovaire Carcinome

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Recherche

Recherche en cancérologie

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Un modèle de souris de la fatigue induite par périphérique Irradiation

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolation des cellules tumorales circulantes dans un modèle de souris orthotopique du cancer colorectal

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Greffe de la tumeur dans un modèle murin de xénogreffe de lymphome du manteau homme

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Native Chromatin Immunoprecipitation Using Murine Brain Tumor Neurospheres

Immunoprécipitation de la chromatine native à l’aide de Neurospheres de tumeur de cerveau murin

Epigenetic modifications may be involved in the development and progression of glioma. Changes in methylation and acetylation of promoters and regulatory ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for la Variation génétique chez un Patient sporadiques de la polypose adénomateuse familiale en utilisant le Format de puce-in-a-tube

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Un système de culture thymique tridimensionnel pour générer murine induite Pluripotent Stem Cell-dérivé Des émigrants thymiques spécifiques à l'antigène

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modèles de xénogreffe orthopiques dérivés du patient pour le carcinome humain de cellules urotheliales et la croissance de tumeur de cancer colorectal et la métastasie spontanée

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Détection et surveillance de l'ADN circulant associé à la tumeur dans les biofluides des patients

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Culture, Manipulation, and Orthotopic Transplantation of Mouse Bladder Tumor Organoids

Culture, Manipulation et Transplantation orthotopique d'organoïdes tumoraux de la vessie de souris

The development of advanced tumor models has long been encouraged because current cancer models have shown limitations such as lack of three-dimensional ...