Name: a murine orthotopic bladder tumor model and tumor detection system
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System at JoVE.com

This work was funded by a grant from the National Medical Research Council of Singapore (NMRC/CIRG/1335/2012) awarded to Professor Kesavan Esuvaranathan.

Alla djur arbete anslutit sig till Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) riktlinjer för användning djur och hantering (Protokollnummer 084/12) vid National University of Singapore. 1. Växande MB49-PSA celler in vitro och mäta PSA utsöndring <ol><li> Bibehålla murina blåscancerceller MB49-PSA 15 i fullständigt Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) kompletterat med 10% fetalt bovint serum (FBS), 2 mmol / L L-glutamin, och 0,05 mg /...

<ol>
	<li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+(MB49).">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer.">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li><li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li><li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model.">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li><li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies.">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181 (2013).</li><li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer.">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li><li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer.">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684 (2011).</li><li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants.">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li><li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging.">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li><li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+and+cancer:+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles.">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3 (2016).</li><li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology.">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li><li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo:+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic,+orthotopic,+murine+bladder+cancer+model.">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li><li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity.">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li><li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model:+a+validation+study.">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li><li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter.">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li><li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model.">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li><li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions.">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li><li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer.">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172 (2012).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses.">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075 (2007).</li><li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+CD4+CD25+Foxp3++cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal.">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li><li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes.">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718 (2015).</li><li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470,+an+angiogenic+inhibitor.">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li><li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine.">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li><li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin.">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li><li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA.">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li><li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+(II)+metal-organic+framework.">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li><li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles/PAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy.">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors &amp; bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models.">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice.">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li></ol>

De mest kritiska stegen i protokollet är en) framgångsrikt upprätthålla tumorigeniciteten av cellinje; 2) garanterar att mätbara PSA sekre före tumörcell implantering i möss; 3) alstra en enkelcellsuspension för implantering för att reducera variationen i tumörstorlek; och 4) att ingjuta celler i långsam takt för att förhindra Vesico-uretär reflux, vilket resulterar i tumörcell implantation i njuren. Efter långvarig passage in vitro, kan MB49 / MB49-PSA-celler förl...

Målet med denna metod är att generera murina orthotopic tumörer i urinblåsan och för att övervaka de implanterade tumörerna så exakt som möjligt, så att möss utan tumör implantation inte tros ha blivit botade vid slutpunkten analys. Övergripande, den metod som visas kommer att minska behovet av ett stort antal möss för experimentell analys och säkerställer större noggrannhet vid bestämning av terapeutiska resultat. Utvecklingen av en orthotopic modell för cancer är viktigt, eftersom implanterar tumörceller subkutant inte rekapitulera miljön i klinisk sjukdom eller möjliggöra utveckling av terapeutiska strategier. Arkitekturen av blåsan tillåter instillation av blåscancerterapier direkt in i urinblåsan med minimala systemiska effekter. Således, djurmodeller som rekapitulera denna miljö, såsom en orthotopic modell är viktigt att utvärdera nya terapier. Slutsatserna från en försöksuppställningen är dependent på de begränsningar av modellen. Flera tekniker har utvecklats för produktion av orthotopic blåstumörer i möss. Dessa är beroende av att skada glykosaminoglykan skiktet i urinblåsan, vilket möjliggör tumörceller som skall implanteras. De tekniker som används inkluderar diatermi, vilket resulterar i en enda punkt av skada i blåsväggen, vilket leder till tumörutveckling vid en plats i blåsan 1,2. Dock är andelen framgångsrika tumörimplantation använder diatermi operatörsberoende varierar från 10 till 90%, och det innefattar risken att blåsväggen kommer att punkteras, vilket leder till tumörer utvecklas i bukhålan. Kemisk diatermi utförs med hjälp av silvernitrat, som skadar blåsväggen 3. På liknande sätt har syra använts för att skada blåsväggen 4. Trypsin har också använts för att skada urinblåsan samt 5. Dessa metoder kan resultera i utvecklingen av mer än en tumör i urinblåsan.Dessutom finns det en risk för allvarliga skador på urinblåsan, om kemikalierna är kvar i kontakt med blåsväggen för länge. Den metod som utvecklats av Ninalga et al. använder den positivt laddade poly-L-lysin (PLL) 6 molekyler till belägga blåsväggen; detta möjliggör de negativt laddade tumörcellerna att hålla sig till glykosaminoglykanen skiktet av blåsan. Denna metod resulterar i allmänhet i mer än en tumör utvecklas i urinblåsan, men tumörimplantation är 80-100% 4,7. Tekniskt sett är det också det enklaste förfarandet att utföra. För att säkerställa att de tumörer som utvecklar är ganska jämn i storlek, är det viktigt att tumörcellerna inte är grupperade i stora klumpar innan implantation. För att utvärdera den terapeutiska effektiviteten, är det bäst att utföra denna studie på möss med ganska liknande storlek tumörer. Således är det viktigt ett bra detekteringssystem som kan kvantifiera tumörstorlek snart efter implantation. Flera strategier har been används för att utvärdera tumörer. Dessa inkluderar magnetisk resonanstomografi (MRI) 8-10, fluorescens 11, bioluminescens 12,13, ultraljud 14, och enzymkopplad immunabsorberande analys (ELISA) 15,16. Medan MRI och ultraljud inte kräver ändringar av tumörcellerna, det finns ett behov av känslig utrustning och kontrastmedel för MRI. De fluorescence-, luminescence-, och ELISA-baserade analyser kräver modifiering av tumörcellerna för att uttrycka markörproteiner som kan detekteras med dessa metoder. För luminescens, är ett substrat som krävs för detektion av luciferas-aktivitet; således finns det en extra steg och ökad kostnad. Både luminiscens och fluorescens kräver specialutrustning. För att producera fluorescens, grönt fluorescerande protein (GFP) cyklisering, som katalyseras av molekylärt syre, som krävs. Sålunda kan GFP uttryck variera inom en tumörmassa beroende på tillgång till syre, vilket gör detta en ganska opålitlig markör <sup&gt; 17. Modifiering av den murina blåscancer-cellinjen MB49 att utsöndra humant prostataspecifikt antigen (PSA) 15,16 som en surrogatmarkör är en annan strategi. Dessa markörer ger också ett alternativt sätt att bekräfta tumör närvaro vid slutet av försöket, vilket gör dem ett alternativ till immunohistokemi. Denna studie rapporterar PLL metod för orthotopic tumör implantation och presenterar en jämförelse av tumördetektionssystem, nämligen ELISA, fluorescens och ultraljudsundersökningar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="893">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:404px;">MB49-PSA cells</td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td style="width:113px;">ref (Wu QH, 2004)</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">RPMI 1640 media</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30027.01&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM) media</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS) South American</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS) South American, Premium</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>S181B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SH30088.03&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">L-glutamine</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>X0550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Hygromycin B</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10687-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">free PSA (Human) ELISA kit</td>
			<td>Abnova</td>
			<td>KA0209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TRIzol Reagent for RNA extraction&#160;</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit with RNase Inhibitor</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4374967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Universal PCR Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4304437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Gene Expression Assay &#8211; Mouse Actb</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Mm00607939_s1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">TaqMan Gene Expression Assay &#8211; Human KLK3</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Hs00426859_g1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">C57BL/6J female mice</td>
			<td>In Vivos</td>
			<td></td>
			<td>4-6 wk old</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anesthesia (75mg/kg Ketamine and 1mg/kg Medetomidine)</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Reversal drug (1mg/kg Atipamezole)</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ear punch</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72893-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Hartmann&#39;s solution or Compound sodium lactate</td>
			<td>B Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ophthalmic ointment - Duratears sterile ocular lubricant ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Heat pack - HotHands handwarmers</td>
			<td>Heatmax Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Introcan Certo IV catheter</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>4251300</td>
			<td>24G x 3/4&#8243;</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Aquagel Lubricating jelly</td>
			<td>Local pharmacy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">&#160;Poly-L-lysine solution, 0.01%,</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">cOmplete, Mini, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Quantichrom Creatinine Assay Kit</td>
			<td>BioAssay Systems</td>
			<td>DICT-50&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fluorescent dye - VivoTrack 680</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>NEV12000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition Solution</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>4427575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Equipment and Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">7500 Realtime PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">7500 Software v2.3</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Metabolic Cage</td>
			<td>Tecniplast&#160;</td>
			<td>Vertical type rack for 12 cages</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">BD FACSCanto I system&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">BD FACSDiva software v7</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">IVIS SpectrumCT in vivo imaging system&#160;</td>
			<td>Caliper Life Sciences&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Living Image Software v3.1</td>
			<td>Caliper Life Sciences&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vevo 2100 imaging system&#160;</td>
			<td>VisualSonics&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine orthotopic bladder tumor model and tumor detection system

Detta protokoll beskriver generering av tumörer i urinblåsan i C57BL / 6J möss med användning av murina blåscancer cellinje MB49, som har modifierats för att utsöndra human prostataspecifikt antigen (PSA), och förfarandet för bekräftelse av tumörimplantation. I korthet, möss bedövades med användning av injicerbara läkemedel och är gjorda för att lägga i den dorsala läget. Urin utryms från urinblåsan och 50 mikroliter av poly-L-lysin (PLL) långsamt instilleras med en hastighet av 10 mikroliter / 20 s med användning av en 24 G IV kateter. Det är kvar i blåsan under 20 min genom att stoppering katetern. Katetern avlägsnas och PLL är tomt med lätt tryck på blåsan. Detta följs av instillation av den murina blåscancer-cellinjen (1 x 10 5 celler / 50 | il) vid en hastighet av 10 | il / 20 s. Katetern är tillsluten för att förhindra för tidig evakuering. Efter 1 h mössen återupplivas med en återföring drog, och urinblåsan är utrymd. Den långsamma instillahastigheten är viktig,eftersom det minskar Vesico-uretär reflux, vilket kan orsaka tumörer att förekomma i de övre urinvägarna och i njurarna. Cellinjen bör vara väl återsuspenderas för att minska hopklumpning av celler, eftersom detta kan leda till ojämna tumörstorlekar efter implantation. Denna teknik inducerar tumörer med hög effektivitet. Tumörtillväxten övervakas genom urin PSA utsöndring. PSA markör övervakning är mer tillförlitliga än ultraljud eller fluorescens avbildning för detektion av närvaron av tumörer i urinblåsan. Tumörer i möss når i allmänhet en maximal storlek som negativt påverkar hälsan med ca 3-4 veckor om de lämnas obehandlade. Genom att övervaka tumörtillväxt, är det möjligt att differentiera möss som botades från dem som inte var framgångsrikt implanteras med tumörer. Med bara slutpunkten analys kan den senare felaktigt antas ha blivit botade genom terapi.

PSA utsöndring från MB49-celler befanns variera med tillväxtmedia. MB49-PSA odlas i DMEM-medium, eftersom detta resulterar i ökad PSA sekretion (Figur 1A). För att bestämma känsligheten hos PSA ELISA och realtids-PCR, var olika antal MB49-PSA-utsöndrande celler blandades med MB49 parentala celler. PSA ELISA detekterar minst 1 x 10 5 PSA-utsöndrande celler / 1 x 10 6 celler (Figur 1B), medan realtids-PCR-analys detekterar 10...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System at JoVE.com

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Detta protokoll beskriver generering av murina orthotopic tumörer i urinblåsan i C57BL / 6J möss och övervakning av tumörtillväxt.

En Murin Orthotopic blåstumör modell och Tumör Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murina Experimentellt av ursprungliga tumören utveckling och peritonealdialys metastasering<em&gt; via</em&gt; Orthotopic Ympning med ovarialcancer celler

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musmodell av trötthet inducerad av perifera bestrålning

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolering av cirkulerande tumörceller i en ortotopisk musmodell av kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumör Engraftment i en Xenograft musmodell av mänskliga mantelcellslymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Native Chromatin Immunoprecipitation Using Murine Brain Tumor Neurospheres

Infödda kromatin Immunoprecipitation använder murina hjärnan tumören Neurospheres

Epigenetic modifications may be involved in the development and progression of glioma. Changes in methylation and acetylation of promoters and regulatory ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digitala polymeras Chain Reaction Assay för den genetiska variationen i en sporadisk familjär adenomatös polypos Patient med formatet Chip-i-ett-rör

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Ett tredimensionellt thymic kultur system för att generera murin inducerad pluripotenta stamcells härledda tumör antigen-specifika thymic emigranter

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-härledda ortotopiska xenograft-modeller för Human Urotelial cellkarcinom och kolorektal cancer tumörtillväxt och spontan metastaser

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Detektion och övervakning av tumörassocierade cirkulerande DNA i patientens Biofluider

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Culture, Manipulation, and Orthotopic Transplantation of Mouse Bladder Tumor Organoids

Kultur, manipulation och orthotopic transplantation av mus blåsa norgan organoider

The development of advanced tumor models has long been encouraged because current cancer models have shown limitations such as lack of three-dimensional ...