Name: capillary electrophoresis separation of monoclonal antibody isoforms using a neutral capillary
Uploaded: 2017-01-16T14:00:00
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The authors thank Wiley for the granted permission to use the concepts of the following publication for this tutorial. Carlos E. Espinosa-de la Garza, Francisco C. Perdomo-Ab&#250;ndez, Jes&#250;s Padilla-Calder&#243;n, Jaime M. Uribe-Wiechers, N&#233;stor O. P&#233;rez, Luis F. Flores-Ortiz, Emilio Medina-Rivero: Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis. Electrophoresis. 2013. 34. 1133-1140. Copyright Wiley-VCH Verlag GmbH &amp; Co. KGaA. This work was supported by CONACyT, Mexico, grant 230551.

1. समाधान की तैयारी <ol><li> BGE समाधान तैयार है। <ol><li> 0.05% की रचना की एक समाधान के 100 मिलीलीटर की तैयारी (एम / वी) हाइड्रोक्सी propyl मिथाइल सेलुलोज (एचपीएमसी), 200 मिमी ε अमीनो एन कैप्रोइक एसिड (EACA) और 30 मिमी लिथियम एसीट...

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	<li>Bruno, V., Battaglia, G., Nicoletti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advent+of+monoclonal+antibodies+in+the+treatment+of+chronic+autoimmune+diseases.">The advent of monoclonal antibodies in the treatment of chronic autoimmune diseases.</a> Neurol. Sci. 31, 283-288 (2011).</li><li>Liu, H., Gaza-Bulseco, G., Faldu, D., Chumsae, C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+monoclonal+antibodies.">Heterogeneity of monoclonal antibodies.</a> J. Pharm. Sci. 97 (7), 2426-2447 (2008).</li><li>Creamer, J. S., Oborny, N. J., Lunte, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+analysis+of+therapeutic+proteins+by+capillary+and+microchip+electrophoresis.">Recent advances in the analysis of therapeutic proteins by capillary and microchip electrophoresis.</a> Anal. Methods. 6 (15), 5427-5449 (2014).</li><li>Fekete, S., Guillarme, D., Sandra, P., Sandra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic,+Electrophoretic,+and+Mass+Spectrometric+Methods+for+the+Analytical+Characterization+of+Protein+Biopharmaceuticals.">Chromatographic, Electrophoretic, and Mass Spectrometric Methods for the Analytical Characterization of Protein Biopharmaceuticals.</a> Anal. Chem. 88 (1), 480-507 (2016).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+identity,+charge+variants,+and+disulfide+isomers+of+monoclonal+antibodies+with+capillary+zone+electrophoresis+in+an+uncoated+capillary+column.">Analysis of identity, charge variants, and disulfide isomers of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in an uncoated capillary column.</a> Anal. Chem. 82 (8), 3222-3230 (2010).</li><li>He, Y., Isele, C., Hu, W., Ruesch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+analysis+of+charge+variants+of+monoclonal+antibodies+with+capillary+zone+electrophoresis+in+dynamically+coated+fused-silica+capillary.">Rapid analysis of charge variants of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in dynamically coated fused-silica capillary.</a> J. Sep. Sci. 34 (5), 548-555 (2011).</li><li>Zhao, S. S., Chen, D. D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+capillary+electrophoresis+in+characterizing+recombinant+protein+therapeutics.">Applications of capillary electrophoresis in characterizing recombinant protein therapeutics.</a> Electrophoresis. 35 (1), 96-108 (2014).</li><li>&#352;t&#283;p&#225;nov&#225;, S., Ka&#353;i&#269;ka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+impurities+and+counterions+of+pharmaceuticals+by+capillary+electromigration+methods.">Determination of impurities and counterions of pharmaceuticals by capillary electromigration methods.</a> J. Sep. Sci. 37 (15), 2039-2055 (2014).</li><li>&#352;t&#283;p&#225;nov&#225;, S., Ka&#353;i&#269;ka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+applications+of+capillary+electromigration+methods+to+separation+and+analysis+of+proteins.">Recent applications of capillary electromigration methods to separation and analysis of proteins.</a> Anal. Chim. Acta. 933, 23-42 (2016).</li><li>Espinosa-de la Garza, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+recombinant+monoclonal+antibodies+by+capillary+zone+electrophoresis.">Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis.</a> Electrophoresis. 34 (8), 1133-1140 (2013).</li><li>Staub, A., Guillarme, D., Schappler, J., Veuthey, J. L., Rudaz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+protein+analysis+in+the+biopharmaceutical+field.">Intact protein analysis in the biopharmaceutical field.</a> J. Pharm. Biomed. Anal. 55 (4), 810-822 (2011).</li><li>Altria, K. D., Altria, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Troubleshooting.">Troubleshooting.</a> Methods in Molecular Biology, Vol 52. Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation and Applications. , (1996).</li><li>Ma, S., Nashabeh, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+protein+therapeutics+by+capillary+electrophoresis.">Analysis of protein therapeutics by capillary electrophoresis.</a> Chromatographia. 53 (5), 75-89 (2001).</li><li>Jaccoulet, E., Smadja, C., Prognon, P., Taverna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+electrophoresis+for+rapid+identification+of+monoclonal+antibodies+for+routine+application+in+hospital.">Capillary electrophoresis for rapid identification of monoclonal antibodies for routine application in hospital.</a> Electrophoresis. 36 (17), 2050-2056 (2015).</li></ol>

इस ट्यूटोरियल में, हम उचित प्रथाओं के महत्व को जब आयोजित करने CZE आदेश में सफल होने के लिए संभावना को बढ़ाने के लिए MABS का विश्लेषण करती है पर प्रकाश डाला। हालांकि, जब CZE एक नियमित आधार पर इस्तेमाल किया जाता ह...

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (MABS) अपनी क्षमता कई पुरानी और अपक्षयी रोगों 1 के खिलाफ कार्रवाई करने के कारण ब्याज में वृद्धि के साथ biotherapeutic प्रोटीन होते हैं। अन्य जैविक अणुओं की तरह, MABS (अंतिम उत्पाद के लिए यानी, जैव संश्लेषण से) उनके जीवन चक्र के सभी चरणों में कई भौतिक संशोधनों से गुजरना होने का खतरा है। इस तरह के संशोधन शामिल हैं, लेकिन तक सीमित नहीं हैं: deamidation, ग्लाइकोसिलेशन, ऑक्सीकरण, चक्रगति, isomerization, एकत्रीकरण और प्रोटिओलिटिक दरार 2। इसलिए, विश्लेषणात्मक आंतरिक isoforms को हल करने में सक्षम तकनीकों आदेश गुणवत्ता मानकों को स्थापित करने के MABS विविधता और स्थिरता पर नजर रखने की जरूरत है। केशिका वैद्युतकणसंचलन (सीई) एक उच्च प्रदर्शन जुदाई प्रौद्योगिकी एक संकीर्ण जुड़े हुए सिलिका ट्यूब (माइक्रोन रेंज) एक पृष्ठभूमि इलेक्ट्रोलाइट (BGE) के साथ भर के outinside किया है। एक बिजली के क्षेत्र के आवेदन पर आरोप लगाया अणु (30,000 वी तक)एस विपरीत प्रभारी (यानी, विद्युत चालित जुदाई) के साथ इलेक्ट्रोड की ओर पलायन। सीई में उच्च वोल्टेज का उपयोग तेजी से विश्लेषण और वृद्धि की क्षमता है, जो शास्त्रीय जेल वैद्युतकणसंचलन से बेहतर हैं अनुमति देता है। केशिका क्षेत्र वैद्युतकणसंचलन (CZE) एक सीई आधारित तकनीक नियमित रूप से उत्पाद की गुणवत्ता के आकलन के लिए 3-9 biopharmaceutical उद्योग में प्रयोग किया जाता है। सीई के अन्य साधनों (जैसे, केशिका जेल वैद्युतकणसंचलन, केशिका समविद्युतविभव ध्यान केंद्रित) या क्रोमैटोग्राफी आधारित विधियों के विपरीत, CZE उनके मूल राज्य में 10 के करीब MABS के निहित विविधता के विश्लेषण की अनुमति, denaturants या ठोस चरण इंटरफेस का उपयोग किए बिना किया जा सकता है । एमएबी isoforms की CZE जुदाई एक दूसरे से जुड़ने सिलिका केशिका एक हाइड्रोफिलिक बहुलक (तटस्थ केशिका) के साथ कवर के अंदर होता है और उनके विभिन्न electrophoretic गतिशीलता है, जो प्रभारी, जन, आकार और आकार (या hydrodynamic मात्रा) 11 से खारिज कर दिया है पर आधारित है। एमएबी moieties जब पता चला रहे हैंवे जुटाए और पता लगाने की खिड़की है, जो 214 एनएम 4 में एक पराबैंगनी (यूवी) absorbance डिटेक्टर से लगा है के माध्यम से पारित कर रहे हैं। इस विश्लेषणात्मक तकनीक के सफल कार्यान्वयन से पहले और प्रयोग के दौरान जानकारी के लिए उचित ध्यान पर निर्भर करेगा। अन्यथा अभिनय विश्लेषण का संचालन करने के लिए लागत और समय में वृद्धि होगी, अंत में लगातार असफलता और हताशा के लिए अग्रणी। यहाँ, हम समाधान और नमूने, सीई प्रणाली, साधन तरीकों की स्थापना की, डाटा अधिग्रहण की तैयारी की तैयारी के विस्तृत विवरण के माध्यम से CZE द्वारा एमएबी विविधता का एक सफल विश्लेषण का संचालन करने के लिए एक कदम दर कदम गाइड मौजूद है, और प्रसंस्करण। इस ट्यूटोरियल के प्रयोजन के लिए, एक पुनः संयोजक पूरी तरह से मानव विरोधी ट्यूमर परिगलन कारक अल्फा (विरोधी TNFα) एमएबी प्रोटीन मॉडल के रूप में प्रयोग किया जाता है; हालांकि, इस प्रोटोकॉल आसानी से संक्षिप्त संशोधनों पर विचार अन्य प्रोटीन के विश्लेषण के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। एdditionally, कई सिफारिशों को कम करने के लिए संभावित मुद्दों का प्रस्ताव है। पाठक सख्ती से प्रस्तावित प्रोटोकॉल का पालन करने, संभावना में वृद्धि होगी सफल होने के लिए के रूप में प्रोत्साहित किया जाता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td>Tecsiquim</td>
			<td>AT0035-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACS grade hydrochloric acid</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>9535-05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histamine dihydrochloride</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>53300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Hydroxypropyl) methyl cellulose&#160;</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>09963</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>517992</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Aminocaproic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2504</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eCAP Tris Buffer, 50.0 mM,&#160; pH 8</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>477427</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA 800 Plus Pharmaceutical Analysis System</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A66528</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eCAP Neutral capillary&#160;</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>477441</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, Micro, 200 &#181;l</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>144709</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Vial Caps</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A62250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Vials</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A62251</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cable, Optics, UV/Vis</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>144093</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV/Vis Detector Module</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>144733</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cartridge Assembly Kit, Blank</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>144738</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capillary electrophoresis separation of monoclonal antibody isoforms using a neutral capillary

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The biological activity of these proteins depends on their physicochemical properties. The use of high-performance techniques like chromatography and capillary electrophoresis has been described for the analysis of physicochemical heterogeneity of mAbs. Nowadays, capillary zone electrophoresis (CZE) technique constitutes one of the most resolutive and sensitive assays for the analysis of biomolecules. Besides, the electro-driven separation in CZE is governed by extensive properties of matter and offers the advantage of analyzing proteins close to their native state. However, the successful implementation of this technique for routine analysis depends on the skills of the analyst at the critical steps during sample and system preparation. The purpose of this tutorial is to detail the steps to succeed in the CZE analysis of mAbs. Further, this protocol can be used for the development and improvement of skills of the personnel involved in protein analytical chemistry laboratories.

चित्रा 2 एक 200 मिमी EACA 30 मिमी लिथियम एसीटेट के ठेठ बिजली चालू प्रोफ़ाइल से पता चलता है, विरोधी TNFα एमएबी नमूना Tris बफर (50 मिमी, 8.0 पीएच) के साथ पतला साथ पीएच 4.8 BGE। मनाया जा सकता है, वर्तमान विश्लेष...

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Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Here, we present a comprehensive capillary zone electrophoresis protocol for the assessment of intrinsic physicochemical heterogeneity of monoclonal antibodies as a quality attribute.

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी isoforms की केशिका वैद्युतकणसंचलन पृथक्करण एक तटस्थ केशिका का उपयोग

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

Research

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Sheathless Capillary Electrophoresis&#8211;Mass Spectrometry for Metabolic Profiling of Biological Samples

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हाइब्रिड स्पष्ट/माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन श्रृंखला Supercomplexes के पृथक्करण और विश्लेषण के लिए प्राकृतिक इलेक्ट्रोफोरेसिस

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